Khảo sát hoạt tính sinh học của cây nhân trần tía

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY NHÂN TRẦN TÍA Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Ngọc Hồng Sinh viên thực hiện: Lê Hoàng Khải MSSV: 1211100095 Lớp: 12DSH02 TP Hồ Chí Minh, 2016 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan toàn nội dung đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn TS Nguyễn Ngọc Hồng - giảng viên Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, Trường Đại học Công nghệ TP.HCM Tất số liệu, kết đề tài thu qua nghiên cứu thực nghiệm hoàn toàn trung thực Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày 18 tháng năm 2016 Lê Hoàng Khải LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trường Đại học Công nghệ TP.HCM tạo điều kiện cho em học tập trường Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy, cô Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, người tận tình dạy, truyền đạt kiến thức quý báu cho em, cho em thỏa sức tìm tòi học hỏi điều mới, dù có đâu làm gì, em ln tự hào đứa đại gia đình Cơng nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường Con xin cảm ơn cha, mẹ em trai, người cho ngày hơm Gia đình ln hỗ trợ tài chính, động viên tinh thần suốt thời gian qua Em xin gửi lời cảm ơn đến cô Nguyễn Ngọc Hồng, người tận tình hướng dẫn, dạy cho em kiến thức tuyệt vời, truyền đạt kinh nghiệm quý báu kỹ sống Được làm việc nhóm nghiên cứu em niềm vinh dự hạnh phúc Xin cảm ơn bạn thể lớp 12DSH giúp đỡ trình học tập, nghiên cứu động viên tinh thần thời gian qua Tp Hồ Chí Minh, ngày 18 tháng năm 2016 Lê Hồng Khải MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC ẢNH vi HÌNH MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Tình hình nghiên cứu ngồi nước Mục đích nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Các kết đạt đề tài Kết cấu ĐATN CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan chi Adenosma sp.và loài Adenosma bracteosum Bonati 1.1.1 Tổng quan chi Adenosma sp 1.1.2 Tổng quan Nhân trần tía Adenosma Bracteosum Bonati 1.1.2.1 Tên khoa học 1.1.2.2 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.2.3 Một số thành phần hóa học nghiên cứu 1.1.2.4 Hoạt tính sinh học 12 1.1.2.5 Một số thuốc từ Nhân trần 15 1.2 15 Định nghĩa gốc tự do, stress oxy hóa chất chống oxy hóa 1.2.1 Khái niệm gốc tự stress oxy hóa 15 1.2.2 Chất chống oxy hóa 17 i 1.2.3 Tác hại stress oxy hóa 18 i 1.3 1.2.3.1 Tác động lên DNA 18 1.2.3.2 Tác động lên protein 19 1.2.3.3 Tác động lên lipid 19 Hợp chất tự nhiên từ thực vật hoạt tính sinh học 20 1.3.1 Terpenoid 20 1.3.1.1 Định nghĩa, phân loại 20 1.3.1.2 Nguồn gốc ứng dụng 20 1.3.2 Steroid 22 1.3.2.1 Định nghĩa, phân loại 22 1.3.2.2 Nguồn gốc ứng dụng 23 1.3.3 Polyphenol 24 1.3.3.1 Định nghĩa, phân loại 24 1.3.3.2 Nguồn gốc, ứng dụng 25 1.3.3.3 Flavonoid 25 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 27 2.1 Địa điểm thời gian tiến hành đề tài 27 2.1.1 Địa điểm 27 2.1.2 Thời gian thực đề tài 27 2.2 Vật liệu 27 2.2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 27 2.2.2 Đối tượng thí nghiệm 27 2.2.3 Dụng cụ, hóa chất thí nghiệm 27 2.3 Phương pháp nghiên cứu 29 2.3.1 Xác định độ ẩm 30 2.3.2 Quá trình chiết thu nhận cao chiết 31 2.3.3 Phương pháp xác định hàm lượng cao thu 33 2.3.4 Phương pháp định tính thành phần hóa học Nhân trần tía 33 ii 2.3.5 Phương pháp xác định hàm lượng polyphenol tổng số 36 2.3.6 Phương pháp định lượng flavonoid tổng số 36 2.3.7 37 Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa mơ hình DPPH 2.3.8 Phương pháp xác định lực khử 38 2.3.9 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao chiết 39 2.3.10 Xác định độc tính cấp diễn 41 2.3.11 Đánh giá hoạt tính cao chiết chuột bạch ứng dụng mơ hình ổn định lượng đường máu 42 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45 3.1 Thử độ ẩm dược liệu 45 3.2 Khảo sát hàm lượng cao chiết 45 3.3 Định tính thành phần hóa học có dịch chiết Nhân trần tía 47 3.4 3.5 Định lượng polyphenol tổng số dịch chiết 54 Định lượng flavonoid tổng số 56 3.6 3.7 Xác định hoạt tính kháng gốc tự DPPH 58 Xác định lực khử 60 3.8 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn 62 3.8.1 Hoạt tính kháng khuẩn sơ cao cồn cao nước 62 3.8.2 Hoạt tính kháng khuẩn sơ cao phân đoạn 63 3.9 Kết thử độc tính cấp diễn 64 3.10 Ảnh hưởng dịch chiết Nhân trần tía lên lượng đường máu 65 3.10.1 Ảnh hưởng việc uống glucose liều cao đến nồng độ đường máu chuột 66 3.10.2 Ảnh hưởng loại cao chiết đến nồng độ đường máu 66 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 69 4.1 4.2 Kết luận 69 Kiến nghị 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 71 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT AG: Acid Gallic AQ: aqueous (nước) BU: n-butanol CH: chloroform db: gam dược liệu khô DMSO: Dimethyl sulfoxyde DPPH: 2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl EA: Ethyl acetate ET: ethanol (cồn) GE: Gallic acid equivalent HCTN: hợp chất tự nhiên IC50: half maximal inhibitory concentration RE: Rutin equivalent RNS: Reactive Nitrogen Species ROS: Reactive Oxygen Species TFC: Total Flavonoids Content (Hàm lượng flavonoid tổng số) TPC: Total Polyphenols Content (Hàm lượng polyphenol tổng số) TPHH: thành phần hóa học TSA: tryptone soya agar TSB: tryptone soya broth DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các thành phần hóa học có tinh dầu Adenosma bracteosum Bonati 10 Bảng 1.2 Các ROS RNS thể sinh học 16 Bảng 1.3 Các bệnh liên quan đến oxy hóa DNA 18 Bảng 1.4 Các bệnh liên quan đến oxy hóa protein 19 Bảng 1.5 Các bệnh liên quan đến oxy hóa lipid 20 Bảng 2.1 Nồng độ khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết 41 Bảng 2.2 Bảng tra nồng độ đường huyết 44 Bảng 3.1 Độ ẩm dược liệu 45 Bảng 3.2 Khảo sát hàm lượng cao chiết theo dung môi 45 Bảng 3.3 Khảo sát hàm lượng thu hồi sau chiết lỏng-lỏng cao cồn 46 Bảng 3.4 Kết phân tích sơ thành phần hóa học 47 Bảng 3.5 Hình ảnh định tính thành phần hóa học 48 Bảng 3.5 Kết đường chuẩn acid gallic 54 Bảng 3.6 Kết hàm lượng polyphenol tổng số cao chiết 55 Bảng 3.7 Bảng kết đường chuẩn Rutin 56 Bảng 3.8 Kết hàm lượng Flavonoid tổng số 57 Bảng 3.9 Độ hấp thụ quang bước sóng 700 nm nồng độ 25 g/ml 61 73,16 Bảng 5.5 Cao phân đoạn Ethyl acetate N K N ồ h T r n n ả u g g 2 C a o p h â n 8 đ o n 7 E t 29 27 28 37 36 36 45 43 45 59 60 59 84 84 84 2 , , 4 , , 8 , Bảng 5.6 Cao phân đoạn n-butanol N K N ồ h T ẫu n r n ả u g g 15 2 C a o p 8 h â n đ o 6 4 6 5 7 , , 4 , 5 , 9 , Bảng 5.7 Cao phân đoạn nước N K N ồ h T ẫu n r n ả u g Cg a 16 o 13 p 15 , h 31 â n 27 đ 29 , o 16 Cao phân đoạn nước 7 , 43 41 44 68 66 65 85 85 85 4 , 6 , , 17 PHỤ LỤC 6: KẾT QUẢ KHẢO SÁT NĂNG LỰC KHỬ N Mồ ẫn ug T r u ,0 ,0 V it a m in C ,0 ,0 ,0 ,0 ,0 E T ,0 ,0 ,0 ,0 ,0 ,0 A Q ,0 ,0 ,0 ,0 ,0 C H ,0 ,0 ,0 , 18 ,0 ,0 ,0 E A ,0 ,0 ,0 ,0 0, ,0 ,0 B U ,0 ,0 ,0 ,0 ,0 ,0 W ,0 ,0 ,0 ,0 , 19 PHỤ LỤC 7: KẾT QUẢ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN Bảng 7.1 Hoạt tính kháng khuẩn cao tổng C ao cồ nC a CL hầ E E T E T C h ao SB U C H E EA TB EU W C EC H cE oA E sc E nt Li st S al P se St a L ầ 1 L ầ 1 T r 10 116 513 , Bảng 7.2 Hoạt tính kháng khuẩn cao phân đoạn L L LTr ầ ầ ầun ,7 7 ,7 ,7 ,7 8, 7 ,8 Bảng ,6.3 Hoạt tính kháng khuẩn ciprofloxacin 500 g/ml L L LT ầ ầ ru14 ầ 14 53 30 830 03 333 133 33 33 131 01 21 14 41 1451 14 5 20 PHỤ LỤC 8: KẾT QUẢ XỬ LÝ THỐNG KÊ BẰNG SAS 9.4 Hàm lượng polyphenol tổng (TPC) ‘TPC’ The ANOVA Procedure Dependent Variable: HAMLUONG Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 353908.9331 Error 12 217.0913 Corrected Total 17 354126.0244 70781.7866 3912.55 F 353908.9331 70781.7866 3912.55 F Model 34930.62964 Error 12 65.03827 Corrected Total 17 34995.66791 6986.12593 1288.99 F 34930.62964 6986.12593 1288.99