Nghiên cứu quy trình phân lập, nhân giống dạng dịch thể để nuôi trồng nấm đầu khỉ (hericium erinaceus (bull fr ) pers ) và tách chiết một số polysaccharide có hoạt tính sinh học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI =====***===== Cồ Thị Thùy Vân NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH PHÂN LẬP, NHÂN GIỐNG DẠNG DỊCH THỂ ĐỂ NUÔI TRỒNG NẤM ĐẦU KHỈ (HERICIUM ERINACEUS (BULL.: FR.) PERS.) VÀ TÁCH CHIẾT MỘT SỐ POLYSACCHARIDE CĨ HOẠT TÍNH SINH HỌC LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hà Nội - 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI =====***===== Cồ Thị Thùy Vân NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH PHÂN LẬP, NHÂN GIỐNG DẠNG DỊCH THỂ ĐỂ NUÔI TRỒNG NẤM ĐẦU KHỈ (HERICIUM ERINACEUS (BULL.: FR.) PERS.) VÀ TÁCH CHIẾT MỘT SỐ POLYSACCHARIDE CÓ HOẠT TÍNH SINH HỌC Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Mã số: 62420201 LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Lê Mai Hương PGS.TS Trần Liên Hà Hà Nội - 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu tơi; số liệu, kết quả, hình ảnh nêu Luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình tác giả khác Hà Nội, ngày TM tập thể Giáo viên hướng dẫn tháng năm 2015 Nghiên cứu sinh Giáo viên HD PGS.TS Lê Mai Hương Cồ Thị Thuỳ Vân LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Lê Mai Hương, Phòng Sinh học thực nghiệm - Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên – Viện Hàn lâm Khoa học & Công nghệ Việt Nam PGS.TS Trần Liên Hà, Bộ mơn Vi sinh – Hóa sinh – Sinh học phân tử - Viện Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm – Đại học Bách khoa Hà Nội, tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu để tơi hồn thành Luận án này; Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Viện Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm – Đại học Bách khoa Hà Nội truyền đạt cho tơi kiến thức q báu giúp đỡ động viên suốt thời gian học tập trường; Đồng thời xin gửi lời cảm ơn tới giúp đỡ, cộng tác cán phòng Nghiên cứu – Trung tâm công nghệ sinh học thực vật – Viện di truyền nơng nghiệp; cán phòng Sinh học thực nghiệm - Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên – Viện Hàn lâm Khoa học & Công nghệ Việt Nam; Tôi xin cảm ơn GS.TSKH Trịnh Tam Kiệt cho lời khuyên dẫn cho nhiều kiến thức nấm lớn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc toàn thể cán công nhân viên Trung tâm công nghệ sinh học thực vật – Viện di truyền nông nghiệp tạo điều kiện thuận lợi suốt trình học tập, nghiên cứu để tơi hồn thành nhiệm vụ học tập giao Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Cồ Thị Thùy Vân MỤC LỤC TRANG MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Tình hình nghiên cứu sản xuất sử dụng nấm dược liệu 1.1.1 Tình hình nghiên cứu sản xuất nấm dược liệu 1.1.2 Tình hình nghiên cứu sử dụng nấm dược liệu chăm sóc sức khỏe cộng đồng 10 1.1.2.1 Tình hình nghiên cứu tách chiết hợp chất có hoạt tính sinh học nấm dược liệu 15 1.1.2.2 Tình hình nghiên cứu tách chiết hợp chất có hoạt tính sinh học nấm dược liệu nước ta 16 1.2 Nấm Đầu khỉ Hericium erinaceus (Bull.: Fr.) Pers 17 1.2.1 Giới thiệu nấm Đầu khỉ Hericium erinaceus (Bull.: Fr.) Pers 17 1.2.2 Vị trí nấm Đầu khỉ phân loại nấm học 18 1.2.3 Đặc điểm hình thái thể số đặc tính sinh học nấm Đầu khỉ 18 1.2.4 Thành phần hóa học nấm Đầu khỉ H erinaceus 19 1.2.4.1 Một số thành phần dinh dưỡng nấm Đầu khỉ 1.2.4.2 Một số thành phần hóa học mang lại giá trị dược liệu cho nấm Đầu khỉ 1.2.5 Tình hình ni trồng nấm Đầu khỉ giới nước 1.2.6 Một số phương pháp sử dụng để tách polysaccharide từ thể hệ sợi nấm dược liệu 19 20 25 30 1.2.6.1 Phương pháp tách chiết cồn 30 1.2.6.2 Phương pháp tách chiết nước nóng 30 1.2.6.3 Phương pháp tách chiết kiềm nóng kết hợp với hỗ trợ lò vi sóng siêu âm 31 1.2.6.4 Phương pháp tách chiết nước nóng kết hợp với hỗ trợ lò vi sóng siêu âm 32 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 Vật liệu 34 2.2 Các loại môi trường 36 2.3 Phương pháp nghiên cứu 39 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu tuyển chọn, xây dựng QTCN phân lập giống nấm Đầu khỉ i 39 2.3.1.1 Khảo nghiệm, tuyển chọn giống nấm Đầu khỉ 39 2.3.1.2 Phân lập giống nấm Đầu khỉ 40 2.3.1.3 Nghiên cứu độ tuổi thể nấm thích hợp để phân lập giống gốc 41 2.3.1.4 Nghiên cứu điều kiện nhân giống gốc nấm Đầu khỉ 41 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu xây dựng QTCN nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể cấp 42 2.3.2.1 Nhân giống Đầu khỉ dạng dịch thể trung gian cấp (dung tích 200 ml) 42 2.3.2.2 Nhân giống Đầu khỉ dạng dịch thể trung gian cấp (dung tích 2000 - 5000 ml) 43 2.3.2.3 Nhân giống Đầu khỉ dạng dịch thể sử dụng nuôi trồng nấm Đầu khỉ nguồn chất tổng hợp (dung tích 120 lít) 44 2.3.2.4 Phương pháp kiểm tra chất lượng giống nấm dạng dịch thể 45 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu xây dựng QTCN nuôi trồng nấm Đầu khỉ nguồn chất tổng hợp sử dụng giống nấm dạng dịch thể 46 2.3.3.1 Phương pháp xử lý nguyên liệu nuôi trồng nấm Đầu Khỉ 46 2.3.3.2 Nghiên cứu điều kiện thích hợp để nuôi trồng nấm Đầu khỉ nguồn chất tổng hợp, sử dụng giống nấm dạng dịch thể 47 2.3.3.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm 47 2.3.4 Phương pháp xác định số thành phần dinh dưỡng, vitamin, axit amin nấm Đầu khỉ 49 2.3.5 Phương pháp nghiên cứu số điều kiện tách chiết thu nhận polysaccharide thể nấm Đầu khỉ 49 2.3.5.1 Phương pháp thu nhận polysaccharide mẫu thể nấm nấm Đầu khỉ 49 2.3.5.2 Lựa chọn hóa chất kiềm thích hợp 50 2.3.5.3 Nghiên cứu nồng độ dung dịch NaOH thích hợp 50 50 nấm 2.3.5.5 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 2.3.5.6 Phương pháp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư người ni cấy invitro 2.3.5.7 Phương pháp kiểm tra hoạt tính ức chế hình thành khối u chiều thạch mềm (anti-tumor promoting assay) in vivo 2.3.5.8 Phương pháp nghiên cứu động vật thực nghiệm 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 50 51 52 53 54 ii Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết tuyển chọn, phân lập lại giống nấm Đầu khỉ H erinaceus 3.1.1 Kết so sánh, đánh giá khảo nghiệm giống nấm Đầu khỉ H erinaceus diện hẹp 3.1.1.1 Một số đặc trưng hình thái giống nấm Đầu khỉ nghiên cứu tuyển chọn 3.1.1.2 Thời gian sinh trưởng giống nấm Đầu khỉ khảo nghiệm 55 50 51 51 52 3.1.1.3 Đánh giá khả chống chịu loại sâu bệnh hại giống Đầu khỉ nghiên cứu 57 3.1.1.4 Kết phân tích số thành phần dinh dưỡng nấm Đầu khỉ He1 59 3.1.2 Kết phân lập lại giống nấm Đầu khỉ 61 3.1.2.1 Ảnh hưởng phương pháp phân lập đến mọc hệ sợi nấm Đầu khỉ 61 3.1.2.2 Xác định thời điểm phân lập 63 3.1.2.3 Kết nghiên cứu môi trường dinh dưỡng phân lập giống nấm Đầu khỉ 65 a Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng hệ sợi giống gốc 65 b Ảnh hưởng nguồn nitơ đến sinh trưởng hệ sợi 66 c Ảnh hưởng thành phần môi trường dinh dưỡng đến sinh trưởng sợi nấm 68 3.1.2.4 Xác định nhiệt độ thích hợp nuôi giống gốc nấm Đầu khỉ 3.2 Kết nghiên cứu xây dựng qui trình cơng nghệ nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể 3.2.1 Nhân giống nấm Đầu khỉ trung gian cấp dạng dịch thể (dung tích 200ml) 3.2.1.1 Kết nghiên cứu chế độ khử trùng môi trường dinh dưỡng 3.2.1.2 Kết nghiên cứu môi trường nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể trung gian cấp 3.2.1.3 Ảnh hưởng pH môi trường dinh dưỡng dạng dịch thể đến 70 73 73 73 74 76 sinh trưởng hệ sợi nấm Đầu khỉ trung gian cấp dạng dịch thể 3.2.1.4 Kết xác định tỷ lệ giống cấy thích hợp cấy chuyển sang môi trường dịch thể 76 3.2.1.5 Kết nghiên cứu nhiệt độ nuôi giống nấm Đầu khỉ trung gian 77 cấp dạng dịch thể 3.2.1.6 Chế độ nuôi giống 77 a Nghiên cứu chế độ nuôi giống trung gian cấp máy lắc 80 b Nghiên cứu chế độ nuôi giống máy khuấy từ 81 3.2.1.7 Kết nghiên cứu đường cong sinh trưởng giống nấm Đầu khỉ trung gian cấp dạng dịch thể 3.2.2 Nhân giống nấm Đầu khỉ trung gian cấp dạng dịch thể (dung tích 2000ml – 5000ml) 82 85 3.2.2.1 Kết nghiên cứu chế độ khử trùng môi trường dinh dưỡng 85 3.2.2.2 Kết nghiên cứu thành phần môi trường nhân giống trung gian cấp nấm Đầu khỉ dạng dịch thể 86 3.2.2.3 Kết nghiên cứu tuổi giống trung gian cấp dạng dịch thể cấy chuyển sang giống trung gian cấp 87 3.2.2.4 Kết xác định tỷ lệ giống cấy thích hợp cấy chuyển sang mơi trường dịch thể 88 3.2.2.5 Kết nghiên cứu chế độ sục khí cho bình lên men dung tích 2-5 lít 3.2.2.6 Kết nghiên cứu chế độ sục khí cho bình lên men dung tích 2-5 lít 3.2.2.7 Kết xây dựng đường cong sinh trưởng giống trung gian cấp dạng dịch thể 89 90 92 3.2.3 Lên men nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể qui mơ 120 lít 3.2.3.1 Kết nghiên cứu thành phần mơi trường nhân giống thể tích 120 lit 3.2.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện khử trùng môi trường dinh dưỡng đến chất lượng môi trường dinh dưỡng 3.2.3.3 Kết nghiên cứu tuổi giống trung gian cấp dạng dịch thể cấy chuyển sang bình lên men nhân giống thể tích 120 lít 95 95 95 96 3.2.3.4 Kết nghiên cứu tỷ lệ giống cấy chuyển sang nồi lên men thể tích 120 lít 97 3.2.3.5 Kết xây dựng đường cong sinh trưởng ni trồng dạng dịch thể, thể tích 120lit (nghiên cứu thời gian lên men) 98 3.3 Kết nghiên cứu xây dựng qui trình cơng nghệ ni trồng nấm Đầu khỉ sử dụng giống dạng dịch thể 104 3.3.1 Ảnh hưởng độ ẩm chất phối trộn đến khả nhiễm bệnh môi trường nuôi cấy sinh trưởng, phát triển hệ sợi nấm Đầu khỉ 104 3.3.2 Ảnh hưởng thành phần dinh dưỡng phối trộn phương pháp khử trùng đến sinh trưởng hệ sợi nấm Đầu khỉ trình nuôi trồng thu thể 107 3.3.3 Ảnh hưởng tỷ lệ giống cấy vào bịch nguyên liệu đến sinh trưởng, phát triển hệ sợi nấm Đầu khỉ 111 3.3.4 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng hệ sợi nấm Đầu khỉ nuôi trồng 113 3.3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành phát triển thể 114 3.3.6 Hiệu kinh tế mang lại áp dụng qui trình cơng nghệ nuôi trồng nấm Đầu khỉ sử dụng giống dạng dịch thể 116 3.4 Kết tách chiết thử hoạt tính sinh học polysaccaride từ nấm Đầu khỉ H erinaceus 120 3.4.1 Nghiên cứu quy trình tách chiết 3.4.1.1 Lựa chọn hóa chất kiềm thích hợp 3.4.1.2 Nghiên cứu tối ưu hóa nồng độ dung dịch NaOH 3.4.2 Xác định hàm lượng polysaccharide thể nấm Đầu khỉ He1 thời điểm nuôi 120 120 120 122 3.4.3 Kết kiểm tra hàm lượng polysaccharide thể nấm Đầu khỉ khô thu hái sau thời gian bảo quản tháng 124 3.4.4 Kết thử hoạt tính polysaccharide thu nhận 125 3.4.4.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định (Antimicrobial assay) 125 3.4.4.2 Hoạt tính gây độc tế bào (Cytotoxicity assay) 126 3.4.4.3 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế hình thành khối u thạch mềm phân đoạn polisaccarid ết thử nghiệm in vivo tính an tồn hiệu lực chế 3.4.4.4 Kysaccharide tổng HT1 động vật thực nghiệm phẩm pol t nghiên cứu an toàn chế phẩm HT1 a Kế a1 Tác dụng HT1 trọng lượng thể thỏ 127 128 128 129 a2 Tác dụng HT1 điện tim thỏ dùng chế phẩm HT1 tuần 129 a3 Tác dụng HT1 đến số số huyết học thỏ dùng HT1 tuần 131 a4 Tác dụng HT1 hoạt độ enzym SGOT, SGPT thỏ 133 a5 Tác dụng HT1 hàm lượng Creatinin thỏ 134 b Kết nghiên cứu tác dụng bảo vệ phóng xạ chế phẩm HT1 134 c Tác dụng HT1 trình tạo máu 135 Chương KẾT LUẬN 138 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ TRONG PHẠM VI LUẬN ÁN 141 TÀI LIỆU THAM KHẢO 142 Phụ lục 149 Hình 3.50: Thử nghiệm HT1 chuột Lách nhóm chứng Lách nhóm thử Gan nhóm chứng Gan nhóm thử Thận nhóm chứng Thận nhóm thử Hình 3.51: Kết thử hoạt tính in vivo chiết phẩm nấm Đầu khỉ Như kết thử nghiệm in vivo Bộ môn Dược lý, Học viện Quân y, Bộ Quốc phòng cho thấy: + Polysaccharide tổng số tách chiết tử nấm Đầu khỉ an toàn nồng độ thử nghiệm thỏ, thời gian thử nghiệm tuần + Polysaccharide tổng số tách chiết tử nấm Đầu khỉ đánh giá tác dụng bảo vệ phóng xạ thực nghiệm cho kết dương tính rõ rệt Chương KẾT LUẬN Sau trình nghiên cứu nấm Đầu khỉ H erinaceus từ khâu nuôi trồng khảo nghiệm, tuyển chọn giống; Phân lập lại giống gốc; Nhân giống, sử dụng giống nấm dạng dịch thể để nuôi trồng nấm thương phẩm; Tách chiết polysaccharide từ thể nấm thử hoạt tính sinh học polysaccharide thu được, NCS xin đưa số kết luận sau: Đã nuôi trồng khảo nghiệm chủng nấm Đầu khỉ H erinaceus tuyển chọn chủng ký hiệu He1 có chất lượng tốt, thành phần dinh dưỡng thể nấm thành phẩm cân đối, suất cao, có đặc tính sinh học phù hợp với điều kiện nuôi trồng Việt Nam Đã đề xuất qui trình phân lập, khiết lại giống nấm Đầu khỉ He, chủ động việc nhân giống, trì, bảo tồn nguồn giống ổn định cung cấp cho sản xuất; Các điều kiện thích hợp để phân lập lại giống gốc nấm Đầu khỉ sau: - Quả thể chọn để phân lập lại giống gốc giai đoạn 7-9 ngày tuổi, thể nấm trưởng thành, chưa phát sinh bào tử; Quả thể có hình thái cân đối, khơng bị dị tật, không nhiễm bệnh - Phương pháp phân lập: dùng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (mô nấm) để phân lập lại giống gốc với lượng lớn phục vụ sản xuất; Dùng phương pháp nuôi cấy bào tử để phân lập giống gốc phục vụ trình lưu giữ, bảo quản nguồn giống thời gian dài - Môi trường thích hợp để phân lập giống nấm Đầu khỉ: khoai tây: 200g/l; pepton: 1,5 g/l; CNM: 1,5 g/l; MgSO4 7H2O: g/l; KH2PO4: 2,5 g/l; thiamin: 30 µg/l; nấm sò tươi: 100 g/l; cám gạo: 10 g/l; bột ngơ: 10 g/l; glucose: 20 g/l; agar: 20 g/l; pH 6,5 o - Nhiệt độ ni sợi giống gốc thích hợp: 24±2 C - Hệ sợi giống gốc nấm Đầu khỉ nuôi cấy khiết đạt cực đại ổn định từ ngày 12 đến ngày 14 sau cấy giống Đã xác định điều kiện thích hợp để nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể cấp: giống trung gian cấp dung tích 200 ml, giống trung gian cấp dung tích 2000 – 5000 lít, giống sử dụng ni trồng dung tích 120 lít; Từ đề xuất qui trình cơng nghệ nhân giống dạng dịch thể trung gian cấp dung tích 200 ml; Qui trình cơng nghệ nhân giống dạng dịch thể trung gian cấp dung tích 5000 ml; Qui trình cơng nghệ nhân giống dạng dịch thể dung tích 120 lít sử dụng ni trồng nấm Đầu khỉ nguồn chất tổng hợp Với điều kiện nhân giống sau: - Nhân giống trung gian cấp dung tích 200ml: + Thành phần mơi trường dinh dưỡng: sử dụng môi trường CT8 với thành phần: Khoai tây 200g/l; nấm sò tươi: 100g/l; Glucose: 15g; Pepton: 2,5g; CNM: 2g; MgSO4.7H2O: 1g; KH2PO4: 1g; K2HPO4: 1g; (NH4)2 HPO4: 1g; Thiamin: 20 µg; Nước: 1000 ml; o + pH môi trường dinh dưỡng 6,5; Chế độ khử trùng môi trường dinh dưỡng: 115 C 30-35 phút; + Tỉ lệ giống cấy chuyển 4% theo thể tích; + Chế độ ni lắc 150 vòng/ phút liên tục suốt q trình ni o + Nhiệt độ ni giống: 24±2 C - Nhân giống trung gian cấp dung tích 2000 – 5000 ml: + Thành phần mơi trường dinh dưỡng nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể trung gian cấp 2: Glucose: 15g; Pepton: 4g; MgSO4 7H2O: 1g; KH2PO4: 1g; K2HPO4: 1g; (NH4)2HPO4: 1g; thiamin: 20 µg; nước cất: 1000 ml, pH 6,5; dầu đậu tương 0,5 ml/1 lít mơi trường; o + Chế độ khử trùng môi trường dinh dưỡng nhân giống: 115 C/50 phút; + Tỉ lệ giống cấy chuyển: 5-7%, + Tuổi giống sử dụng để cấy chuyển: - ngày tuổi, tốt ngày tuổi; o + Nhiệt độ ni giống 24±2 C + Chế chế độ sục khí: 0,4 – 0,5 lít khí/lít mơi trường/phút + Thời gian nuôi: ngày - Nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể dung tích 120 lít phục vụ ni trồng: + Thành phần môi trường dinh dưỡng nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể trung gian cấp 2: Glucose: 10g/l; Saccarose: 10g/l; Bột dinh dưỡng cô đặc: 20g/l; MgSO4 7H2O: 1g/l; KH2PO4: 1g/l; K2HPO4: 1g/l; NaNO3: 1g/l; NH4NO3: 1g/l; B1: viên/l; pH 6,5; dầu đậu tương 0,5 ml/1 lít mơi trường; o + Chế độ khử trùng mơi trường dinh dưỡng nhân giống: 121 C/80 phút; + Tỉ lệ giống cấy chuyển: 15%, + Tuổi giống sử dụng để cấy chuyển: - ngày tuổi, tốt ngày tuổi; o + Nhiệt độ nuôi giống 24±2 C + Chế chế độ sục khí: 0,4 – 0,5 lít khí/lít mơi trường/phút + Thời gian ni: ngày Đã xác định điều kiện thích hợp để nuôi trồng nấm Đầu khỉ sử dụng giống nấm dạng dịch thể, từ đề xuất qui trình cơng nghệ ni trồng nấm Đầu khỉ nguồn chất tổng hợp sử dụng giống dạng dịch thể Các yếu tố thích hợp cho ni trồng nấm Đầu khỉ sử dụng giống nấm dạng dịch thể bao gồm: + Công thức môi trường tổng hợp sử dụng nuôi trồng: 45% mùn cưa + 40% lõi ngô + 6% cám gạo + 8% bột ngô + 1% CaCO3; + Độ ẩm nguyên liệu nuôi trồng: 65 ± 2%; o + Khử trùng nguyên liệu: 100 C/7 1,2 – 1,4 atm - 3,5 giờ; + Tỷ lệ giống dạng dịch thể cấy vào bịch nguyên liệu: 25 ml dịch/ bịch nguyên liệu 800 g; o + Nhiệt độ ươm sợi: 23 - 25 C; o + Nhiệt độ cho thể 20-22 C So sánh hiệu việc sử dụng giống nấm dạng dịch thể với giống nấm dạng rắn cho thấy so với giống chất hạt, giống dịch thể có nhiều ưu điểm hẳn như: rút ngắn tổng thời gian nhân giống cấp thời gian nuôi trồng nấm xuống nửa, qua tăng hiệu suất sử dụng nhà xưởng, tăng số vụ nuôi trồng nấm năm; Giảm tỷ lệ nhiễm bệnh, qua làm tăng suất thu hoạch; Giảm chi phí sản xuất thay chất nhân giống hạt thóc nhân giống dạng dịch thể, giảm chi phí nhân công, điện năng, khấu hao nhà xưởng Đã đề xuất qui trình chiết tách polysaccharide nước nóng dung mơi NaOH với nồng độ thích hợp 4%, hiệu suất chiết 20-25% Các phân đoạn polisaccaride tách chiết từ nấm Đầu khỉ thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định, hoạt tính kháng u thực nghiệm nuôi cấy invitro cho kết âm tính; kiểm tra khả ức chế hình thành khối u thạch mềm cho kết dương tính rõ rệt dòng tế ung thư gan Hep G2 Các phân đoạn polysaccharide tách chiết từ nấm Đầu khỉ thử nghiệm thỏ, thời gian thử nghiệm tuần cho thấy chế phẩm không làm ảnh hưởng đến tốc độ tăng trọng lượng thể thỏ; Khơng làm ảnh hưởng tới sóng điện tim số huyết học (hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu); Không làm thay đổi hoạt độ enzyme SGOT, SGPT, hàm lượng creatin máu Như vậy, polysaccharide tách chiết từ nấm Đầu khỉ He1 an toàn nồng độ thử nghiệm động vật nghiên cứu Kết kiểm tra khả bảo vệ phóng xạ động vật thử nghiệm cho thấy polysaccharide tách chiết từ nấm Đầu khỉ He1 có khả làm tăng tỷ lệ sống chuột nhắt trắng 30% sau chiếu xạ, có tác dụng tốt hệ tạo máu, phục hồi nhanh số lượng tế bào HC, BC, TC, máu ngoại vi; Polysaccharide tách chiết từ nấm Đầu khỉ He1 có khả làm giảm mức độ tổn thương quan có chức miễn dịch lách, hạch, tuyến ức DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ CỦA LUẬN ÁN Lê Mai Hương, Cồ Thị Thùy Vân, Hà Phương Thư, Nguyễn Bích Thủy, Trần Thị Hồng Hà, Trần Thị Như Hằng, Đỗ Hữu Nghị, Phạm Quốc Long, Nguyễn Xuân Phúc, (2010), “Nghiên cứu nuôi trồng số loại Nấm ăn Nấm dược liệu Việt Nam, thu nhận, chuyển hóa nghiên cứu hoạt tính kháng u thực nghiệm polysaccarit chúng ”, Hội nghị khoa học kỷ niệm 35 năm Viện Khoa học công nghệ Việt nam, tr 75-82 Nguyễn Bích Thủy, Lê Mai Hương, Trần Thị Hồng Hà, Trần Thị Như Hằng, Phạm Hồng Hải, Cồ Thị Thùy Vân, Đinh Xuân Linh, (2010), “Nghiên cứu quy trình chiết polysaccharide giàu 1,3 –β – D- glucan từ nấm Hầu thủ Hericium erinaceus Việt Nam”, Tạp chí Khoa học cơng nghệ, tr 98-104 Cồ Thị Thùy Vân, Nguyễn Thị Bích Thùy, Trịnh Tam Kiệt, (2010), “Nghiên cứu đặc điểm sinh học công nghệ nuôi trồng nấm Đầu khỉ Hericium erinaceus (Bull.: Fr.) Pers”, Tạp chí Di truyền học & ứng dụng, số 6, tr 63-66 Cồ Thị Thùy Vân, Nguyễn Thị Bích Thùy, Lê Mai Hương, Trần Liên Hà, Trịnh Tam Kiệt, (2012), “Xây dựng hoàn thiện quy trình cơng nghệ nhân giống Nấm Đầu khỉ (Hericium erinaceus) dạng dịch thể”, Tạp chí Di truyền học & ứng dụng, số 8, tr 81-87 Cồ Thị Thùy Vân cộng sự, “Quy trình kỹ thuật nhân giống nấm Đầu khỉ”; Cơng nhận Quy trình kỹ thuật theo định số 641/QĐ – TT – CTT ngày 28 tháng 12 năm 2012 Cục trồng trọt – Bộ Nông nghiệp phát triển Nông thôn Cồ Thị Thùy Vân cộng sự, “Quy trình kỹ thuật ni trồng nấm Đầu khỉ”; Cơng nhận Quy trình kỹ thuật theo định số 641/QĐ – TT – CTT ngày 28 tháng 12 năm 2012 Cục trồng trọt – Bộ Nông nghiệp phát triển Nông thôn Cồ Thị Thùy Vân cộng sự, “Quy trình cơng nghệ nhân giống nấm Đầu khỉ Hericium erinaceus dạng dịch thể cấp trung gian”; Cơng nhận Quy trình công nghệ cấp sở theo định số 80/QĐ – TT – NC ngày 25 tháng 12 năm 2013 Trung tâm công nghệ sinh học thực vật – Viện di truyền nông nghiệp Cồ Thị Thuỳ Vân, Trịnh Tam Kiệt, Trần Liên Hà, Lê Mai Hương, (2014), “Nghiên cứu xây dựng qui trình cơng nghệ ni trồng nấm Đầu khỉ Hericium erinaceus sử dụng giống nấm dạng dịch thể”, Tạp chí Di truyền học & ứng dụng, số 9, tr.19-24 Cồ Thị Thùy Vân cộng sự, “Quy trình cơng nghệ ni trồng nấm Đầu khỉ Hericium erinaceus sử dụng giống nấm dạng dịch thể”; Cơng nhận Quy trình cơng nghệ cấp sở theo định số 40/QĐ – TT – NC ngày 26 tháng năm 2014 Trung tâm công nghệ sinh học thực vật – Viện di truyền nông nghiệp 10 Lê Mai Hương, Cồ Thị Thuỳ Vân, Trần Thị Hồng Hà, Vũ Mạnh Hùng, (2014), “Đánh giá độ an tồn khả bảo vệ phóng xạ sản phẩm HT1 chiết xuất từ nấm đầu khỉ Hericium erinaceus”, Tạp chí Dược học, số 460 tháng – 2014, tr 32-36 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ Y tế - Cộng hoà Xã hội Chủ nghĩa Việt Nam (1996): Quy định nghiên cứu dược lý thuốc y học cổ truyền dân tộc, định 371/BYT-QĐ Cục Khuyến nông Khuyến lâm (2003), “Khuẩn thảo học – Dùng cỏ nuôi nấm”, Nhà xuất Nông nghiệp Đinh Xuân Linh, Thân Đức Nhã, Nguyễn Thị Sơn (2007), “Kỹ thuật trồng, chế biến nấm ăn, nấm dược liệu”, Nhà xuất Nông nghiêp Đinh Xuân Linh, (2011) “Thực trạng giải pháp phát triển sản xuất nấm tỉnh phía Bắc”, Hội nghị phát triển nấm tỉnh phía Bắc, Tại Đồ Sơn – Hải Phòng, 22/9/2011 Khuất Hữu Trung cộng (2003), “Kết bước đầu nghiên cứu đánh giá, tuyển chọn thử nghiệm nuôi trồng nấm Hầu thủ”, Hội nghị cơng nghệ sinh học tồn quốc, Hà Nội, tr 136-140 Lê Mai Hương, Lê Minh Hà, Trần Thị Hồng Hà, Trần Như Hằng, Đỗ Hữu Nghị, (2004), “Nghiên cứu tác dụng sinh học phân tích hóa học từ chủng nấm Hầu thủ Hericium erinacus (Bull.Ex Fr) Pers.”, Những vấn đề khoa học sống định hướng y sinh dược học, Nxb Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tr 501-504 Lê Mai Hương, Lê Minh Hà, Trần Thị Hồng Hà, Trần Như Hằng, Phan Văn Kiệm, (2005), “Chất có hoạt tính độc tế bào từ Hericium erinacus (Bull.Ex Fr) Pers.”, Những vấn đề khoa học sống định hướng y sinh dược học, Nxb Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tr 570-573 Lê Xuân Thám (2004), “Nấm cơng nghệ chuyển hóa mơi trường”, Nxb Khoa học kỹ thuật - Thành phố Hồ Chí Minh Lê Duy Thắng (1999), “Kỹ thuật trồng nấm”, Tập 1, Nxb Nông nghiệp 10 Nguyễn Thị Chính, (2005), “Phát triển cơng nghệ sản xuất nấm dược liệu phục vụ tăng cường sức khỏe” Dự án cấp nhà nước, Trường ĐH Khoa học tự nhiên – ĐHQG Hà Nội 11 Nguyễn Lân Dũng (2001 - 2004), “Công nghệ nuôi trồng nấm”, Tập 1, Nhà xuất Nông nghiệp 12 Nguyễn Hữu Đống, Đinh Xuân Linh, Nguyễn Thị Sơn, Ngô Xuân Nghiễn, Zani Federico, (2000), “Nấm ăn – Cơ sở khoa học công nghệ nuôi trồng”, Nhà xuất nông nghiệp 13 Nguyễn Hữu Đống, Đinh Xuân Linh, Ngô Xuân Nghiễn cộng (2001), “Kết nghiên cứu công nghệ nuôi trồng Nấm ăn nấm dược liệu bã mía”, Hội thảo quốc tế sinh học, Hà Nội - Việt Nam, tr 113-119 14 Nguyễn Hữu Đống cộng (2003), “Kết nghiên cứu khoa học, chuyển giao công nghệ sản xuất giống, nuôi trồng, chế biến tiêu thụ nấm ăn, nấm dược liệu Trung tâm Công nghệ sinh học thực vật, Viện Di truyền Nông nghiệp địa phương nước giai đoạn 1994 - 2003”, Hội nghị Cơng Nghệ Sinh học tồn quốc, Hà Nội, tr 148-164 15 Nguyên Xuân Phách CS (1995), “Toán thống kê tin học ứng dụng y - sinh -dược”, Nxb Quân đội Nhân dân 16 Trịnh Tam Kiệt (2013), “Nấm lớn Việt Nam”, Tập 3, Nxb Khoa học tự nhiên Công nghệ, Hà Nội Tài liệu tiếng Anh 17 Abrham W.B (1978), “Techniques of animal and clinical toxicology” Med Pub Chicago, pp 55 - 68 18 Ahmed Imtiaj, Chandana Jayasinghe, Geo Woo Lee, (2008), “Vegetative Growth of Four of Hericium erinacus Collected from Diferent Habitats”, Mycobilogy, the Korean Society of Mycology 19 Ahn, D.K., (1992), “Medinal fungi in Korea”, Kor J Mycol 20, pp 154–165 20 Arora, D., (1986), “Mushrooms Demystified”, Ten Speed Press, Berkeley, Calif 21 Buswell, J A & Chang, S.T., (1993), “Edible mushroom: Attributes and Applications”, In Genetics and Breeding of Edible mushroom Gorden and Breach Science publishers, pp 297-324 22 Burkhard Kirchhoff, (1996), Biotechnologycal Invetigation of Hericium erinacus (Bull.: Fr.) Pers Bag – Log cultivation to Increase Yield 23 Chang, S.T & Miles, P.G., (1993), “Edible mushroom and their cultivation” Delhi: CBS publishers 24 Chang, S.T (1993), “Mushroom biology: The impact on mushroom production and mushroom products”, In mushroom biology and mushroom products (Chang, Buswell and Chiu ads.), the Chinees press, pp 25 Chang, S.T (1993), “Mushroom and Mushroom biology”, In Genetics and Breeding of edible mushroom, (Chang, Buswell and Miles) Gorden and Breach Science publishers, pp 1-13 26 Chang, S.T (1999), “Global impact of edible and medicinal mushroom on human st welfare in the 21 century: nongreen revolution” International journal of medicinal mushroom 1, pp 1-7 27 Chang, H.Y., Roh, M.G., (1999) “Physiological characteristics of Hericium erinaceus in sawdust media” Kor J Mycol, pp 252–255 28 Chang, S.H., Miles, P.G., (1989) “Edible Mushroom and Their Cultivation” CRC Press, pp 307–312 29 Crisan, E.V and Sands, A., (1978), “Nutritional value” In The Biology and Cultivation of Edible Mushroom (Chang & Hayes eds.), Academic press, pp 137-165 30 Elaine R Carbonero cs, (2006), Bằng sáng chế số hiệu US3286399 A 31 Gonchavenko E.N, Deyev L.I., Kudryashov Yu.B (1997), “The application of preparation of natural origin under condition of radioactive pollution and in experiment Radiat Biol 37, pp 676-682 32 Grigansky, A.Ph, Solomko, E.F & B Kirchhoff (1999) “Mycelial growth of medicinal mushroom Hericium erinacus (Bull.: Fr.) Pers In pure culture International journal of medicinal mushroom, pp 81-87 33 Han Gyu Ko, Hyuk Gu Park, Sang Ho Park, Chang Won Choi, Seong Hwan Kim, Won Mok Park, (2005), “Comparative study of mycelial growth and basidiomata formation in seven different species of the edible mushroom genus Hericium”, Bioresource Technology 96, pp 1439–1444 34 Han ZH, Ye JM, Wang GF (2012), “Evaluation of in vitro antioxidant activity of Hericium erinaceus polysaccharides” Int J Biol Macromol 35 Han ZH, Ye JM, Wang GF., (2013), “Evaluation of in vivo antioxidant activity of Hericium erinaceus polysaccharides” Int J Biol Macromol; 52, pp 66–71 36 Hassan, F.R.H., (2007), “Cultivation of the Monkey Head Mushroom (Hericium erinaceus) in Egypt” Journal of Applied Sciences Research, 3(10), pp 1229-1233 37 Huiyuan Gao, Bailing Hou, Masonori Kuroyanagi, Lijun wu., (2007), Asian J of Trad Medi.,2 (3), pp 104-109 38 Ikekawa, T., Uehara, N., Maeda, Y., Nakamishi, M & Fukuoka, F (1969), “Anti tumour activity of aqueous extracts of some edible mushroom”, Cancer reseach, 92, pp 734-735 39 Ikekawa, T., (2009) “Bunashimeji, Hypsizygus marmoreus: antitumor activity of extracts and polysaccharides” Food Reviews International 11 40 Kawagishi, H., Shimada, A., Shirai, R., Okamoto, K., Ojima, F., Sakamoto, H., Ishiguro, Y., Furukawa, S., (1994), “Erinacines A, B and C, strong stimulators of nerve growth factor (NGF) - synthesis, from the mycelia of Hericium erinaceum” Tetrahedron Lett 35, pp 1569–1572 41 Kawagishi, H., Shimada, A., Hosokawa, S., Mori, H., Sakamoto, H., Ishiguro, Y., Sakemi, S., Bordner, J., Kojima, N., Furukawa, S., (1996) “Erinacines E, F and G, stimulators of nerve growth factor (NGF) - synthesis, from the mycelia of Hericium erinaceum” Tetrahedron Lett 37, pp 7399–7402 42 Kim, D.M., Pyun, C.W., Ko, H.G., Park, W.M., (2000), “Isolation of antimicrobial substances from Hericium erinaceum” Mycobiology 28, pp 33–38 43 Kim SP, Kang MY, Kim JH, Nam SH, Friedman M., (2011), “Composition and mechanism of antitumor effects of Hericium erinaceus mushroom extracts in tumorbearing mice” J Agric Food Chem; 59:986, pp 1–9 44 Kim SP, Kang MY, Choi YH, Kim JH, Nam SH, Friedman M., (2011), “Mechanism of Hericium erinaceus (Yamabushitake) mushroom-induced apoptosis of U937 human monocytic leukemia cells” Food Funct; 2:3, pp 48–56 45 Kolotushkina EV, Moldavan MG, Voronin KY, Skibo GG., (2003) “The influence of Hericium erinaceus extract on myelination process in vitro” Fiziol Zh; 49, pp 38–45 46 Jong Bin Kim, (2005), Seminar in Cancer Biology 15, pp 365-377 47 Lu, L., Li, J., Cang, Y., (2002) “PCR-based sensitive detection of medicinal fungi Hericium species from ribosomal internal transcribed spacer (ITS) sequence” Biol Pharm Bull 25, pp 975–980 48 Md Asaduzzaman Khan, Mousumi Tania, Rui Liu Mohammad Mijanur Rahman (2009), “Hericium erinaceus: an edible mushroom with medicinal values” Microbiol technology 49 Miles, P.G., (1993), “Biologycal background for mushoom breeding”, In Genetics and Breeding of Edible Mushroom, Gorden and Breach Science publishers 50 Miles, P.G and Chang, S.T., (1986), “Application of Biotechnology in strain selection and development of Edible Mushroom”, Asean food Journal 51 Mohri, K., Toyomasu, T., Nanba, H., (1987), “Antitumour activity of fruit body of Edible Mushroom orally of fruit body of edible mushroom orally administered to mice”, Mush.J Tropics, pp 121-126 52 Mori K, Kikuchi H, Obara Y, Iwashita M, Azumi Y, Kinugasa S, et al., (2010), “Inhibitory effect of hericenone B from Hericium erinaceus on collagen-induced platelet aggregation” Phytomedicine; 17:108, pp 2–5 53 Mori K, Obara Y, Moriya T, Inatomi S, Nakahata N., (2011), “Effects of Hericium erinaceus on amyloid β (25–35) peptide-induced learning and memory deficits in mice” Biomed Res; 32, pp 67–72 54 Mori K, Inatomi S, Ouchi K, Azumi Y, Tuchida T., (2009), “Improving effects of the mushroom Yamabushitake (Hericium erinaceus) on mild cognitive impairment: a doubleblind placebo-controlled clinical trial” Phytother Res; 23, pp 367–72 55 Mizuno, T., Wasa, T., Ito, H., Suzuki, C., Ukai, N., (1992), “Antitumoractive polysaccharides isolated from the fruiting body of Hericium erinaceum, an edible and medicinal mushroom called yamabushitake or houtou” Biosci Biotech Biochem 56, pp 347–348 56 Murakami S., (1993), “Genetics and Breeding of spore deficunt strain in Agrocybe cylindracea and Lentinus edodes”, In mushroom Biology and Mushroom products (Chang, Buswell and Chiu eds.), The Chinaes university, pp 63-69 57 Michel Duubois, K.A Gilles, J.K.Hamilton, P.A Reber and Fred Smith, “Colorimetric Method for Determination of Sugars and Related Substances” 58 Nagano M, Shimizu K, Kondo R, Hayashi C, Sato D, Kitagawa K, et al., (2010), “Reduction of depression and anxiety by weeks Hericium erinaceus intake” Biomed Res; 31:23, pp 1–7 59 Nicolini, L., Hunolstein, Von C & Carilli, A., (1987), “Soilid state fermentation of orange peel and grape stalks by Pleurotus ostreatus, Agrocybe aegerita and Armillariella mella”, Applied Microbiology and Biotechnology 26 60 Park, Y.S., Lee, H.S., Won, M.H., Lee, J.H., Lee, S.Y., Lee, H.Y., (2002), “Effect of an exo-polysaccharide from the culture broth of Hericium erinaceus on enhancement of growth and differentiation of rat adrenal nerve cells” Cytotechnology 39, pp 155–162 61 Park, H.K., Ko, H.G., Kim, S.H., Park, W.M., 2004 “Molecular identification of Asian isolates of medicinal mushroom Hericium erinaceum by phylogenetic analysis of nuclear ITS rDNA” J Microbiol Biotechnology 14, pp 816–821 62 Sheng - Quan Huang, Jin-Wei Li, Zhou Wang, Hua - Xin Pan, Jiang - Xu Chen and Zheng - Xiang Ning (2010), “Optimization of Alkaline Extraction of Polysaccharides from Ganoderma lucidum and Their Effect on Immune Function in Mice”, Molecules 63 Suzuki, C., Mizuno, T., 1997 “Cultivation of Yamabushitake Hericium erinaceum” Food Rev Int 13, pp 419–421 64 Stadler, M., Mayer, A., Anke, H., Sterner, O., 1994 “Fatty acids and other compounds with nematicidal activity from cultures of basidiomycetes” Planta Med 60 (2), pp 128– 132 65 Turner A (1965), “Screening methods in pharmacology”, Academic Press, NewYork and London, pp 60 - 68 66 Vasin M.V., Antipow V.V., Chemov G.A (1996), Investigation of radioprotective effect of indraline on hematopoietic system in different species of animal Radiat Biol 36, pp 168-189 67 Yang BK, Park JB, Song CH., (2003), Hypolipidemic effect of an Exobiopolymer produced from a submerged mycelial culture of Hericium erinaceus Biosci Biotechnol Biochem; 67: 129, pp 2–8 68 Young Shik Park, Hyun Soo Lee, Moo Ho Won, Jin Ha Lee, Shin Young Lee and Hyeon Yong Lee1, (2002), “Effect of an exo-polysaccharide from the culture broth of Hericium erinaceus on enhancement of growth and differentiation of rat adrenal nerve cells” 69 Yilin W., (2010), “Method for extracting Hericium erinaceus polysaccharide”, CN 103044563 A 70 Wang Zhiqiang (2009), “Rare mushroom cultivation”, Edible and Medicinal mushroom workshop, Shanghai, China, pp 53-69 71 Wong KH, Naidu M, David P, Abdulla MA, Abdullah N, Kuppusamy UR, et al., (2011), “Peripheral nerve regeneration following crush injury to rat peroneal nerve by aqueous extract of medicinal mushroom Hericium erinaceus (Bull.: Fr) Pers (Aphyllophoromycetideae)” Evid Based Complement Alternat Med; 580752 72 Wasser, S.P., Weis, A.L., (1999), Therapeutic effects of substances occurring in higher basidiomycetes mushroom: a modern perspective Crit Rev Immunol 19 (1), pp 65–96 73 Zhang Weirui (2013), Development Trend of China’s Edible Fungi Industry PHỤ LỤC Phụ lục hình Quyết định số 193/QĐ-TT-CTT ngày 9/5/2011 Cục trưởng cục Trồng trọt - Bộ Nông nghiệp phát triển Nông thôn, việc công nhận giống trồng nông nghiệp Quy trình kỹ thuật nhân giống nấm Đầu khỉ; Quyết định cơng nhận Quy trình kỹ thuật theo định số 641/QĐ – TT – CTT ngày 28 tháng 12 năm 2012 Cục trồng trọt – Bộ Nông nghiệp phát triển Nơng thơn Quy trình kỹ thuật nuôi trồng nấm Đầu khỉ; Quyết định công nhận Quy trình kỹ thuật theo định số 641/QĐ – TT – CTT ngày 28 tháng 12 năm 2012 Cục trồng trọt – Bộ Nông nghiệp phát triển Nơng thơn “Quy trình cơng nghệ nhân giống nấm Đầu khỉ Hericium erinaceus dạng dịch thể cấp trung gian”; Cơng nhận Quy trình cơng nghệ cấp sở theo định số 80/QĐ – TT – NC ngày 25 tháng 12 năm 2013 Trung tâm công nghệ sinh học thực vật – Viện di truyền nông nghiệp “Quy trình cơng nghệ ni trồng nấm Đầu khỉ Hericium erinaceus sử dụng giống nấm dạng dịch thể”; Công nhận Quy trình cơng nghệ cấp sở theo định số 40/QĐ – TT – NC ngày 26 tháng năm 2014 Trung tâm công nghệ sinh học thực vật – Viện di truyền nông nghiệp Phiếu kết phân tích thành phần dinh dưỡng, vitamim, axit amim nấm Đầu khỉ He1 Phiếu kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào dịch chiết từ nấm Đầu khỉ He1 Phiếu kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào dịch chiết từ nấm Đầu khỉ He1 10 Bản xử lý số liệu phần mềm IRRISTAT 4.0 PHỤ LỤC HÌNH ẢNH 1.2 y = 0.0021x + 0.042 R = 0.9902 OD492 nm 0.8 0.6 0.4 0.2 0 100 200 300 400 500 600 m i crogr/m L Hình: Đồ thị dùng glucose với nồng độ xác định để phản ứng tạo mầu với hỗn hợp dịch nhuộm (phenol axit sulphuric) Kết đo OD 490 nm, mẫu nấm máy ELISA Software Version 2.00.17 Plate Number Plate Date 12/7/2012 Time 12:21:17 AM Reader Type: ELx800 Reader Serial Unknown Number: Reading Type Reader Procedure Details Plate Type Read 96 WELL PLATE Absorbance Endpoint Full Plate Wavelengths: 490 Read Speed: Normal Results Chiết NaOH 5%, đo lặp lại lần Chiết nước nóng, đo lặp lai lần Mẫu H2O A 0.073 0.066 B 1.21 C 10 11 12 0.064 0.038 0.04 0.039 0.057 0.038 0.038 0.05 0.04 490 1.121 1.251 0.444 0.63 0.649 0.077 0.04 0.039 0.041 0.045 490 1.175 1.258 0.941 0.771 0.825 0.911 0.041 0.039 0.039 0.041 0.04 490 D 1.021 1.211 1.1 0.821 0.911 1.115 0.045 0.05 0.044 0.041 0.063 490 E 1.083 1.191 1.011 1.273 1.157 1.089 0.047 0.042 0.043 0.045 0.04 490 F 1.121 1.211 1.011 1.015 1.192 1.279 0.045 0.047 0.045 0.042 0.042 490 G 0.815 0.968 0.971 0.769 1.341 1.037 0.04 0.044 0.043 0.04 0.047 490 H 0.866 0.781 0.853 0.971 1.048 1.041 0.04 0.04 0.074 0.041 0.064 490 ... cộng đồng, Nghiên cứu sinh lựa chọn thực Luận án: Nghiên cứu quy trình phân lập, nhân giống dạng dịch thể để nuôi trồng nấm Đầu khỉ (Hericium erinaceus (Bull. : Fr. ) Pers .) tách chiết số polysaccharide. .. nghiên cứu tách chiết hợp chất có hoạt tính sinh học nấm dược liệu nước ta 16 1.2 Nấm Đầu khỉ Hericium erinaceus (Bull. : Fr. ) Pers 17 1.2.1 Giới thiệu nấm Đầu khỉ Hericium erinaceus (Bull. : Fr. ). .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI =====***===== Cồ Thị Thùy Vân NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH PHÂN LẬP, NHÂN GIỐNG DẠNG DỊCH THỂ ĐỂ NUÔI TRỒNG NẤM ĐẦU KHỈ (HERICIUM ERINACEUS (BULL. : FR. ) PERS. )