Nghiên cứu nhằm đánh giá khả năng diệt khuẩn và nấm của nước ép lá hẹ (Allium tuberosum). Vi khuẩn gây bệnh cho cá rô phi bao gồm Aeromonas hydrophila (3 chủng là CED04008, CED05004, CED05005), Streptococcus sp. (CEDMA05043) và nấm gây bệnh (Saprogenia sp.) được thử với dịch chiết lá hẹ ở nồng độ và thời gian khác nhau.
Khoa học Nông nghiệp Nghiên cứu khả diệt số loài vi khuẩn nấm hẹ (Allium tuberosum) Trương Thị Mỹ Hạnh1*, Nguyễn Thị Nguyện1, Trương Thị Thành Vinh2, Huỳnh Thị Mỹ Lệ3, Phan Thị Vân1 Viện Nghiên cứu nuôi trồng thủy sản I Đại học Vinh Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ngày nhận 2/4/2018; ngày chuyển phản biện 6/4/2018; ngày nhận phản biện 14/5/2018; ngày chấp nhận đăng 22/5/2018 Tóm tắt: Nghiên cứu nhằm đánh giá khả diệt khuẩn nấm nước ép hẹ (Allium tuberosum) Vi khuẩn gây bệnh cho cá rô phi bao gồm Aeromonas hydrophila (3 chủng CED04-008, CED05-004, CED05-005), Streptococcus sp (CEDMA05-043) nấm gây bệnh (Saprogenia sp.) thử với dịch chiết hẹ nồng độ thời gian khác Kết cho thấy, nước ép hẹ nồng độ 100 µl có khả diệt chủng vi khuẩn A hydrophila Streptococcus sp với đường kính vòng vô khuẩn (ĐKVVK) 27-31 30 mm Nấm Saprogenia sp bị diệt nồng độ 15.000 13.000 ppm với thời gian ngâm tương ứng 24 Kết sở khoa học quan trọng tạo tiền đề phát triển sản phẩm thuốc thảo dược có hiệu phòng trị bệnh cá rơ phi ni theo hướng an tồn sinh học thân thiện với mơi trường Từ khóa: Aeromonas hydrophila, Allium tuberosum, hẹ, rô phi, Saprogenia sp., Streptococcus sp Chỉ số phân loại: 4.5 Đặt vấn đề Với mục tiêu phát triển nuôi cá rô phi trở thành ngành sản xuất hàng hóa lớn, chủ lực, hiệu quả, bền vững với sản phẩm đa dạng, giá trị cao nhằm đáp ứng thị trường tiêu thụ nước xuất khẩu, kế hoạch đề đến năm 2030 diện tích ni đạt 400.000 1,8 triệu m3 lồng nuôi hệ thống sông hồ chứa lớn, sản lượng đạt 400.000 tấn, 45-50% phục vụ xuất [1] Để đạt kế hoạch này, hai yếu tố then chốt cần triển khai hiệu sản xuất giống có chất lượng cao kiểm sốt tốt dịch bệnh q trình ni [2] Cũng loại cá ni khác, cá rơ phi nhiễm tác nhân ký sinh trùng, nấm, vi rút, đặc biệt vi khuẩn Vi khuẩn Streptococcus sp gây dịch bệnh cá rô phi năm 2009 diện rộng hầu hết tỉnh/thành phố miền Bắc (Hải Dương, Bắc Ninh, Bắc Giang Hà Nội ), với tỷ lệ cá nuôi chết 80-100% [3] Bệnh vi khuẩn Streptococcus sp tiếp tục diễn hộ nuôi hầu hết tỉnh thành nước, đặc biệt tỉnh miền Bắc với tỷ lệ chết 50-80%, cá bị bệnh có biểu bệnh lý dễ nhận thấy lồi mắt, xuất huyết, bơi khơng định hướng [4] Bên cạnh đó, vi khuẩn A hydrophila, nấm Saprogenia sp Branchiomyces báo cáo có ảnh hưởng đến cá rơ phi suốt q trình ni, đặc biệt giai đoạn 0,5-100 g [5, 6] Trong thực tế, thiệt hại mát lớn người nuôi cá bị bệnh cá bội nhiễm đa tác nhân gây bệnh đơn lẻ tác nhân gây [7], vậy, giải pháp đưa có hiệu để kiểm soát đa tác nhân gây bệnh cho cá rơ phi, tạo sản phẩm mang tính an toàn vệ sinh thực phẩm, đồng thời thân thiện với môi trường điều cần hướng tới [8] Sản phẩm có nguồn gốc từ thảo dược quan tâm phát triển nuôi trồng thủy sản với vai trò tăng sức đề kháng, kích thích tăng trưởng, tiêu hóa [9], thay thuốc kháng sinh nhằm hạn chế rủi ro tượng kháng kháng sinh vi khuẩn, tạo an toàn vệ sinh cho sản phẩm [10, 11], tăng khả miễn dịch [12], kháng nấm [8, 13] Các nghiên cứu hiệu ứng dụng thảo dược nuôi trồng thủy sản Việt Nam nhiều hạn chế so với nước giới, đến loại thảo dược ứng dụng rộng rãi có tính hiệu diệt khuẩn, nấm cao tỏi, hẹ - loại thảo dược thuộc họ hành với tỏi Mục đích nghiên cứu nhằm xác định hiệu diệt vi khuẩn, nấm hẹ, làm sở cho việc nghiên cứu tạo sản phẩm thuốc có nguồn gốc từ thảo dược với hiệu diệt vi khuẩn nấm ứng dụng phù hợp mơ hình ni cá rơ phi Việt Nam Tác giả liên hệ: tmhanh@ria1.org * 60(7) 7.2018 48 Khoa học Nông nghiệp The anti-bacterial and anti-fungal effects of garlic chives (Allium tuberosum) Thi My Hanh Truong1*, Thi Nguyen Nguyen1, Thi Thanh Vinh Truong2, Thi My Le Huynh3, Thi Van Phan1 Research Institute for Aquaculture No Vinh University Vietnam National University of Agriculture Received April 2018; accepted 22 May 2018 Abstract: The study was conducted to evaluate the bacterial and fungal inhibitions of the leaf extract from galic chives (Allium tuberosum) The bacteria and fungi that caused the diseases on tilapia included strains of Aeromonas hydrophila (CED04-008, CED05-004, and CED05-005), strain of Streptococcus sp., and they (CEDMA05-043), and fungi of Saprogenia sp., and they were exposed to the leaf extract at different concentrations and durations The results showed that the garlic chives leaf juice (100 μl) killed A hydrophila and Streptococcus sp by the sterile round of 27-31 mm and 30 mm, respectively Saprogenia sp was killed at the concentrations of 15,000 ppm and 13,000 ppm after and 24 hours, respectively This finding is an important scientific evidence to develop herbal products for the prevention and treatment of diseases during tilapia farming towards biosafety and environmental friendliness Keywords: Aeromonas hydrophila, Allium tuberosum, garlic chives, Saprogenia sp., Streptococcus sp., Tilapia Classification number: 4.5 Vật liệu phương pháp nghiên cứu Vật liệu nghiên cứu Chủng vi khuẩn nấm phân lập từ cá rô phi bị bệnh lưu giữ Trung tâm Quan trắc môi trường bệnh thủy sản miền Bắc (CEDMA) thuộc Viện Nghiên cứu nuôi trồng thủy sản I (RIA1) Vi khuẩn bao gồm A hydrophila (với chủng có ký hiệu CED04-008, CED05004, CED05-005), Streptococcus sp (CED05-043) nấm Saprolegnia sp Lá hẹ (A tuberosum), thuốc kháng sinh Oxytetracycline 60(7) 7.2018 (30 µg), Streptomycine (500 µg) khoanh giấy chưa tẩm kháng sinh đạt tiêu chuẩn (CODE 1334-OXOID) sản xuất Công ty Nam Khoa Phương pháp nghiên cứu Chuẩn bị nước ép hẹ: Lá hẹ rửa sạch, để nước tự nhiên nhiệt độ phòng, thái nhỏ cho vào máy xay ép lấy nước bảo quản nhiệt độ 40C Sử dụng 50, 70 100 µl nước ép hẹ nhỏ lên khoanh giấy Các khoanh giấy tẩm nước ép hẹ sử dụng bước lập kháng sinh đồ nhằm xác định hiệu diệt khuẩn Chuẩn bị vi khuẩn: Vi khuẩn nuôi lắc môi trường nutrient broth nhiệt độ 290C, với tốc độ lắc 200 vòng/phút 16h Mật độ vi khuẩn đo phương pháp so màu quang điện với bước sóng l = 600 nm có giá trị OD = 1, tương ứng với mật độ vi khuẩn dao động khoảng 108-109 cfu/ml Đánh giá khả kháng khuẩn nước ép hẹ: Xác định hiệu diệt khuẩn nước ép hẹ phương pháp lập kháng sinh đồ Kirbry-Bauer Sử dụng môi trường Mueller-Hinton Agar (MHA, Merck) đổ lên đĩa lồng, hút khoảng 108-109 khuẩn lạc/ml/đĩa, trang lên bề mặt đĩa, đặt khoanh Oxytetracycline 30 µg (OX); Streptomycine 500 µg (ST) khoanh giấy tẩm nước ép hẹ tương ứng lượng 50, 70 100 µl/khoanh lên mặt đĩa thạch Sau 24h ủ nhiệt độ 28-30oC đọc kết ĐKVVK đĩa thạch MHA, kết phản ánh khả nhạy, nhạy trung bình hay kháng nước ép hẹ vi khuẩn, đồng thời so sánh hiệu diệt khuẩn thuốc kháng sinh sử dụng Đánh giá khả kháng nấm nước ép hẹ: Tác dụng diệt nấm thực sau: Nước ép hẹ pha loãng nước cất khử trùng với tỷ lệ tương ứng nước ép hẹ nước cất 5, 6,25, 12,5, 25, 50 100% Saprolegnia sp nuôi cấy môi trường tăng sinh sau 24h rửa nước cất lần, sau cho vào dung dịch nước ép hẹ với độ pha loãng % tương ứng nêu 10 phút, 30 phút, 1h, 2h, 3h, h 24h Lấy rửa qua nước cất lần, cấy lên môi trường nuôi cấy, theo dõi phát triển sợi nấm sau 24, 48, 72 168h Nghiệm thức đối chứng bố trí sau: Chủng nấm ni cấy môi trường yeastract agar (GYA) không ngâm qua dịch chiết thảo mộc mà rửa qua nước cất Xác định nồng độ ức chế tối thiểu nước ép hẹ: Nấm Saprolegnia sp ngâm nước ép hẹ pha loãng với nồng độ 5.000, 10.000, 12.000, 13.000, 14.000, 15.000, 20.000, 30.000, 35.000, 45.000 50.000 ppm thời gian 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 24 49 Khoa học Nông nghiệp thương mại KN04 -12, TD1 -Becanor, TD2 -Becanor… v [4] hydrophila, sp.,các Enterobacter B ảng 1.Cellobiococcus ĐKVVK nồng độaerogenes, nước ép E hẹ v cloacae, Klebsiella pneumoniae, Salmonella sp., Shigella phi nuôi sp., Streptobacillus sp., Streptococcus sp., Pseudomonas ĐKVVK (mm)chủng vi fluorescens, Staphylococcus aureus, Xử lý số liệu: Dùng phần mềm Microsoft Excell (2007) khuẩn đãkhu kháng vớinghiệm thuốc kháng sinh Nư ớc ép lánitrofurantoin, hẹ Ch ủng vi ẩn thử amoxycillin, bacitracin, cephalothin, erythromycin, Kết thảo luận µl µl 100 µl thương mại KN04 -12, TD1 -Becanor, TD2 -Becanor… với thành phần50chính tỏi70 novobiocin, vancomycin, amphicillin, oxacillin colistin Tác dụng diệt khuẩn nước ép hẹ vi khuẩn [15] Nghiên cứu ứng dụng nhiều a thảo dược b A hydrophila (CED04 -008) 17,2±0,10 26,4±0,11 28,7±0,09 [4] gây bệnh cá rơ phi thuộc nhóm hành tỏi (Allium), bên cạnh kết nghiên cứu b a hydrophila (CED05 -004) 19,1±0,09 25,3±0,14 31,0±0,04 ảng độ nước láA.lập hẹ đối vớisinh vi khu gâyquả bệnh cá kháng đồ cóẩn hiệu ức chế rô phát triển Nước épB hẹ 1.cóĐKVVK tính diệt khuẩncác A nồng hydrophila ép a b A hydrophila (CED05 -005) harveyi, 15,9±0,12 27,1±0,10 khuẩn gram âm (Vibrio Vibrio spp.,18,9±0,08 Vibrio phisp.nuôi Streptococcus gây bệnh cho cá rô phi nuôi thể vi a b parahaemolyticus Aeromonas spp.) gây bệnh cho động rõ bảng hình ĐKVVK tăng lên theo hàm lượng Streptococcussp (CED05 -043) 20,1±0,03 28,4±0,16 30,3±0,04 ĐKVVK (mm) nước ép hẹ sử dụng khoanh giấy từ 50, 70 100 vật thủy sản nuôi [16, 17], có sản phẩm thương mại chú: Str Streptomycin; oxy sinh oxytetracycline; a, b, ớc ép hẹ Khoanh gi tẩm kháng KN04-12, TD1-Becanor, TD2-Becanor… với thành ủng 100 vi khuµlẩnnước thử nghiệm µl Với hàm Ch lượng ép hẹ cóNưkhả diệt nhưGhi phần chínhvề tỏi nghĩa mặt thốngOxy kê(30 p