BÀI 1. KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN 1. Mục đích: Quy trình này hướng dẫn cách làm tiêu bản để chuẩn bị cho các phương pháp nhuộm phát hiện hình thể, cách sắp xếp, tính chất bắt màu của vi sinh vật cũng như các thành phần khác trong bệnh phẩm (nếu có). 2. Phạm vi áp dụng Quy trình này được áp dụng ở KhoaPhòngBộ phận vi sinh của các Bệnh viện. 3. Trách nhiệm Người thực hiện: Đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh y học. Người nhận định, giám sát và phê duyệt kết quả: Có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh y học. 4. Nguyên tắc: Không áp dụng 5. Trang thiết bị, vật tư a. Trang thiết bị Tủ an toàn sinh học (ATSH) cấp 2 Kính hiển vi quang học. Máy ly tâm Máy trộn, lắc. Ống vô trùng có nắp đậy. Đèn cồn, que cấy, lam kính, lá kính mỏng, bút viết kính, dầu soi kính, giấy thấm dầu. Pipet Pasteur vô trùng. b. Sinh phẩm hóa chất Bộ thuốc nhuộm: Tùy vào kỹ thuật nhuộm mà sử dụng bộ thuốc nhuộm phù hợp Dung dịch nước muối sinh lý vô trùng 0,9%. 6. Kiểm tra chất lượng Các hóa chất dùng để nhuộm soi phải được kiểm tra theo Quy trình kiểm tra chất lượng hóa chất và lưu lại kết quả sau khi kiểm tra. Cần có Chứng âm, Chứng dương tùy vào mỗi kỹ thuật nhuộm. 7. An toàn Thực hiện thao tác với mẫu bệnh phẩm trong tủ ATSH Sử dụng các thiết bị bảo hộ cá nhân. 8. Nội dung thực hiện Chuẩn bị lam kính sạch, không xước, vỡ, nhúng vào dung dịch ethanol 95%. Sử dụng kẹp gắp lam kính, để ráo cồn, hơ lam kính trên ngọn lửa đèn cồn. Dán nhãn hoặc ghi thông tin mẫu bệnh phẩm. Dùng bút viết kính khoanh tròn, đánh dấu vị trí phết bệnh phẩm ở mặt dưới lam kính. Dàn tiêu bản theo hình xoáy trôn ốc từ trong ra ngoài hoặc hình zích zắc. Đối với bệnh phẩm dịch não tủy, dịch rửa phế quản và các dịch khác: + Ly tâm bệnh phẩm 3000 4000 rpm trong 10 phút, chắt bỏ nước nổi. + Dùng pipet Pasteur nhỏ 1 2 giọt bệnh phẩm lên lam kính, không dàn tiêu bản. Với bệnh phẩm nước tiểu: Lắc đều ống nước tiểu, lấy 10 µl bệnh phẩm phết lên lam kính, không dàn tiêu bản. Với bệnh phẩm từ tăm bông (que gòn): + Yêu cầu lấy 2 tăm bông (que gòn) riêng. + Trường hợp chỉ có một tăm bông (que gòn) bệnh phẩm, rũ tăm bông (que gòn) trong nước muối sinh lý hoặc canh thang vô trùng, lăn tăm bông (que gòn) trên vùng đã đánh dấu trên lam kính. Những bệnh phẩm mủ đặc: Làm mỏng tiêu bản bằng một lam kính khác. + Đặt một lam kính thứ 2 sạch lên lam kính đã phết tiêu bản. + Kéo nhẹ nhàng lam kính thứ hai trên lam kính ban đầu. + Nếu tiêu bản chưa đủ mỏng, tiếp tục lặp lại với một lam kính sạch khác. Trường hợp ít bệnh phẩm, bệnh phẩm khô: Hòa loãng trong nước muối sinh lý, dàn tiêu bản. Bệnh phẩm mô, mảnh sinh thiết: Nghiền, cắt nhỏ bệnh phẩm, dàn tiêu bản. Bệnh phẩm từ môi trường nuôi cấy lỏng, nhỏ 1 2 giọt lên lam kính, dàn tiêu bản. Bệnh phẩm từ khuẩn lạc (khóm): Pha huyền dịch vi khuẩn, dàn tiêu bản. 9. Diễn giải kết quả và báo cáo: Tùy từng loại đồ phiến cho các phương pháp nhuộm khác nhau sẽ có yêu cầu riêng. 10. Lưu ý (cảnh báo) Tiêu bản không quá dày, không quá mỏng. 11. Lưu trữ hồ sơ Ghi chép rõ ràng kết quả và các thông tin quy định vào phiếu trả lời kết quả và sổ kết quả xét nghiệm. Lưu trữ các biểu mẫu phiếu kiểm tra chất lượng theo đúng quy định của khoa
TR NG I H C KHOA H C KHOA CỌNG NGH SINH H C TẨI LI U H NG D N TH C HẨNH H C PH N: TH C T P CHUYểN NGẨNH N I DUNG: TH C T P K THU T XÉT NGHI M VI SINH LỂM SẨNG (Trích tài li u h ng d n th c hành k thu t xét nghi m vi sinh lâm sàng Ban hành kèm theo Quy t đ nh s 1539/Q -BYT) Cán b h ng d n: Ths Th Tuy n Ch c v : Gi ng viên n v : Khoa Công ngh Sinh h c Thái nguyên, 2018 Ch ng I K THU T XÉT NGHI M C B N BÀI K THU T LẨM TIểU B N M c đích: Quy trình h ng d n cách làm tiêu b n đ chu n b cho ph ng pháp nhu m phát hi n hình th , cách s p x p, tính ch t b t màu c a vi sinh v t c ng nh thành ph n khác b nh ph m (n u có) Ph m vi áp d ng Quy trình đ c áp d ng Khoa/Phòng/B ph n vi sinh c a B nh vi n Trách nhi m - Ng i th c hi n: đ c đào t o có ch ng ch ho c ch ng nh n v chuyên ngành Vi sinh y h c - Ng i nh n đ nh, giám sát phê t k t qu : Có trình đ đ i h c ho c sau đ i h c v chuyên ngành Vi sinh y h c Nguyên t c: Không áp d ng Trang thi t b , v t t a Trang thi t b - T an toàn sinh h c (ATSH) c p - Kính hi n vi quang h c - Máy ly tâm - Máy tr n, l c - ng vơ trùng có n p đ y - èn c n, que c y, lam kính, kính m ng, bút vi t kính, d u soi kính, gi y th m d u - Pipet Pasteur vơ trùng b Sinh ph m hóa ch t - B thu c nhu m: Tùy vào k thu t nhu m mà s d ng b thu c nhu m phù h p - Dung d ch n c mu i sinh lỦ vô trùng 0,9% Ki m tra ch t l ng - Các hóa ch t dùng đ nhu m soi ph i đ c ki m tra theo Quy trình ki m tra ch t l l u l i k t qu sau ki m tra - C n có Ch ng âm, Ch ng d ng tùy vào m i k thu t nhu m An toàn - Th c hi n thao tác v i m u b nh ph m t ATSH - S d ng thi t b b o h cá nhân N i dung th c hi n - Chu n b lam kính s ch, khơng x c, v , nhúng vào dung d ch ethanol 95% - S d ng k p g p lam kính, đ c n, h lam kính ng n l a đèn c n - Dán nhưn ho c ghi thông tin m u b nh ph m ng hóa ch t - Dùng bút vi t kính khoanh tròn, đánh d u v trí ph t b nh ph m m td i lam kính - Dàn tiêu b n theo hình xốy trơn c t ngồi ho c hình zích z c - i v i b nh ph m d ch nưo t y, d ch r a ph qu n d ch khác: + Ly tâm b nh ph m 3000 - 4000 rpm 10 phút, ch t b n c n i + Dùng pipet Pasteur nh - gi t b nh ph m lên lam kính, khơng dàn tiêu b n - V i b nh ph m n - L c đ u ng n c ti u: c ti u, l y 10 µl b nh ph m ph t lên lam kính, khơng dàn tiêu b n - V i b nh ph m t t m bơng (que gòn): + u c u l y t m bơng (que gòn) riêng + Tr ng h p ch có m t t m bơng (que gòn) b nh ph m, r t m bơng (que gòn) n c mu i sinh lỦ ho c canh thang vô trùng, l n t m (que gòn) vùng đư đánh d u lam kính - Nh ng b nh ph m m đ c: Làm m ng tiêu b n b ng m t lam kính khác + t m t lam kính th s ch lên lam kính đư ph t tiêu b n + Kéo nh nhàng lam kính th hai lam kính ban đ u + N u tiêu b n ch a đ m ng, ti p t c l p l i v i m t lam kính s ch khác - Tr ng h p b nh ph m, b nh ph m khô: Hòa loưng n c mu i sinh lỦ, dàn tiêu b n - B nh ph m mô, m nh sinh thi t: Nghi n, c t nh b nh ph m, dàn tiêu b n - B nh ph m t môi tr ng nuôi c y l ng, nh - gi t lên lam kính, dàn tiêu b n - B nh ph m t khu n l c (khóm): Pha huy n d ch vi khu n, dàn tiêu b n Di n gi i k t qu vƠ báo cáo: Tùy t ng lo i đ phi n cho ph ng pháp nhu m khác s có yêu c u riêng 10 L u Ủ (c nh báo) Tiêu b n không dày, không m ng 11 L u tr h s - Ghi chép rõ ràng k t qu thông tin quy đ nh vào phi u tr l i k t qu s k t qu xét nghi m - L u tr bi u m u phi u ki m tra ch t l ng theo quy đ nh c a khoa BÀI K THU T NHU M GRAM M c đích Quy trình h ng d n nhu m tiêu b n b ng ph ng pháp nhu m Gram đ phân lo i vi khu n d a vào hình th , cách s p x p, tính ch t b t màu c a vi sinh v t Ph m vi áp d ng Quy trình đ c áp d ng Khoa/Phòng/B ph n vi sinh c a B nh vi n Trách nhi m - Ng i th c hi n: đ c đào t o có ch ng ch ho c ch ng nh n v chuyên ngành Vi sinh y h c - Ng i nh n đ nh, giám sát phê t k t qu : Có trình đ đ i h c ho c sau đ i h c v chuyên ngành Vi sinh y h c Nguyên t c Vi khu n b t màu Gram âm hay Gram d vách t bào c a vi khu n Vi khu n Gram d không b nh h không b nh h ng s khác v thành ph n, c u trúc ng có l p peptidoglycan d y, nhi u acid teichoic, chúng ng b i s t y màu b ng c n, v n gi nguyên đ c màu tím ban đ u n u vách t bào ng b i y u t nh tu i, tác d ng c a kháng sinh Vi khu n Gram âm có m t l p peptidoglycan g n v i l p phospholipid kép, xen k protein màng ngoài, l p màng d b phá h y b i c n t y màu, ph c h p tinh th tím gentian - iod khơng b n, b t y màu màu đ thay b i thu c nhu m khác Trang thi t b , v t t a Trang thi t b - T an toàn sinh h c (ATSH) c p - Kính hi n vi quang h c - Máy ly tâm - Máy tr n, l c - ng vơ trùng có n p đ y - èn c n, que c y, lam kính, kính m ng, bút vi t kính, d u soi kính, gi y th m d u - Pipet Pasteur vô trùng b Sinh ph m hóa ch t - B thu c nhu m Gram: + Methanol + Tinh th tím: Hucker c i ti n, tinh th tím c a Kopeloff + Dung d ch t y màu Nh nh t: Ethanol 95%, Trung bình: C n acid M nh nh t: Aceton + Hóa ch t nhu m l n Safranin c Carbon Fuschin - Fuschin c b n - Safranin c a Kopeloff - Dung d ch n c mu i sinh lỦ vô trùng 0,9% Ki m tra ch t l ng c - Các hóa ch t dùng đ nhu m soi ph i đ c ki m tra theo quy trình ki m tra ch t l ng, hóa ch t, l u l i k t qu sau ki m tra - C n có ch ng chu n làm ch ng: + Staphylococcus aureus ATCC 25923: c u khu n Gram d ng s b t màu tím đ m + Escherichia coli ATCC 25922: tr c khu n Gram âm s b t màu h ng An toàn - Th c hi n thao tác v i m u b nh ph m t ATSH - S d ng thi t b b o h cá nhân N i dung th c hi n a Làm tiêu b n - Chu n b lam kính s ch, khơng x c v , nhúng vào dung d ch ethanol 95% - S d ng k p g p lam kính, đ c n, h lam kính ng n l a đèn c n - Dán nhưn ho c ghi thông tin m u b nh ph m - Dùng bút vi t kính khoanh tròn, đánh d u v trí ph t b nh ph m, m t d i lam kính - Dàn tiêu b n theo hình xốy trơn c t ngồi ho c hình zích z c - i v i b nh ph m d ch nưo t y, d ch r a ph qu n d ch khác: + Ly tâm b nh ph m 3000 - 4000 rpm 10 phút, ch t b n c n i + Dùng pipet Pasteur nh - gi t b nh ph m lên lam kính, khơng dàn tiêu b n - V i b nh ph m n c ti u: L c đ u ng n c ti u, l y 10 µl b nh ph m ph t lên lam kính, khơng dàn tiêu b n - V i b nh ph m t t m bơng (que gòn): + Yêu c u l y t m (que gòn) riêng + Tr ng h p ch có m t t m bơng (que gòn) b nh ph m, r t m bơng (que gòn) n c mu i sinh lỦ ho c canh thang vô trùng, l n t m bơng (que gòn) vùng đư đánh d u lam kính - Nh ng b nh ph m m đ c: Làm m ng tiêu b n b ng m t lam kính khác + t m t lam kính th hai s ch lên lam kính đư ph t tiêu b n + Kéo nh nhàng lam kính th hai lam kính ban đ u + N u tiêu b n ch a đ m ng, ti p t c l p l i v i m t lam kính s ch khác - Tr ng h p b nh ph m, b nh ph m khơ, hòa loưng n c mu i sinh lỦ, dàn tiêu b n - B nh ph m mô, m nh sinh thi t: Nghi n, c t nh b nh ph m, dàn tiêu b n - B nh ph m t môi tr ng nuôi c y l ng, nh - gi t lên lam kính, dàn tiêu b n - B nh ph m t khu n l c (khóm): Pha huy n d ch vi khu n, dàn tiêu b n a C đ nh tiêu b n - tiêu b n khô t nhiên t ATSH ho c làm khô 60C - C đ nh tiêu b n: + lam kính lên máy s y lam 60C đ n tiêu b n khô + C đ nh b ng nhi t: + a tiêu b n ngang qua ng n l a đèn c n - l n, m i l n - 10 giây tiêu b n ngu i + C đ nh b ng hóa ch t: Nh methanol ph kín n i dàn tiêu b n, đ khơ phút, không h l a b Ph thu c nhu m - Ph ng pháp Hucker c i ti n: + Nh dung d ch tím Gentian, ph kín n i dàn đ phi n, trì phút tiêu b n d i vòi n dung d ch tím gentian, r a c ch y nh + Nh dung d ch lugol, trì 30 giây dung d ch lugol, r a tiêu b n d i vòi n c ch y nh + T y màu: Nh c n 90 lên tiêu b n, nghiêng nghiêng l i đ cho c n ch y t c nh n sang c nh kia, màu tím lam kính v a phai h t r a n c ngay, lo i b h t c n d i vòi n c ch y nh + Nh dung d ch đ fuchsin ho c safranin ho c carbon fuchsin lên tiêu b n, trì kho ng 30 giây đ n phút - Ph dung d ch, r a d i vòi n c ch y nh ng pháp Kopeloff c i ti n: + Nh dung d ch tím Gentian ph kín n i dàn đ phi n, sau thêm kho ng gi t Na2CO3, nghiêng nghiêng l i tiêu b n đ tr n dung d ch, trì 15 - 20 giây, có th đ đ n phút + Nh dung d ch I- t Kopeloff trì nh t phút + Nghiêng tiêu b n, t y màu tiêu b n b ng hóa ch t t y màu, r a tiêu b n l p t c d n i vòi c ch y - Làm khơ tiêu b n tr c soi kính Di n gi i k t qu vƠ báo cáo a Quan sát tiêu b n v t kính x10 x40 - ánh giá tiêu b n đư đ c t y màu ch a - Tùy theo m u b nh ph m mà màu n n c a tiêu b n ho c không màu ho c có màu Gram âm N u có m t c a BC N, BC N ph i b t màu Gram âm hoàn toàn - N u quan sát th y hình nh t bào, xác đ nh s l 20 - 40 vi tr ng B qua vi tr trung bình cho vi tr ng trung bình t bào BC N t bào bi u mơ ng khơng có t bào ho c vi khu n khơng tính s l ng ng b qua b Chuy n sang v t kính d u quan sát hình nh vi khu n t bào - V i lam nhu m tr c ti p t b nh ph m quan sát nh t 10 vi tr vi tr ng v i b nh ph m n c ti u, 20 - 40 ng v i b nh ph m khác - Quan sát hình th vi khu n v t kính d u (x100) + Hình th : C u khu n, tr c khu n, xo n khu n, c u tr c khu n, + Kích th c: To/nh , đ ng đ u/đa hình thái,… + Tính ch t b t màu: Gram âm (b t màu đ ), Gram d + Cách s p x p: + ms l ng (b t màu tím) ng đ n l , x p thành t ng c p, x p thành chu i, x p thành t ng đám,… ng mô t lo i t bào vi khu n sau: + Gram d ng: C u khu n x p đôi (và chu i) C u khu n x p đám Tr c khu n l n Tr c khu n nh Tr c khu n chia nhánh Tr c kh n Coryneform + Gram âm: Song c u Tr c khu n Tr c khu n chia nhánh (ho c đa hình thái) Tr c kh n Coryneform Hình th trung gian: C u tr c khu n, ph y khu n + T bào n m n y ch i + S i gi + Bán đ nh l *S l ng đ ng k t qu nhu m soi đ c đánh giá d a b ng sau c đánh giá d a trung bình s l ng t bào/vi khu n/n m t 20 - 40 vi tr ng, không áp d ng đ i v i tiêu b n nhu m t khu n l c (khóm) 10 L u Ủ (c nh báo) - Tiêu b n không dày, không m ng - B t màu rõ ràng 11 L u tr h s - Ghi chép rõ ràng k t qu thông tin quy đ nh vào phi u tr l i k t qu s k t qu xét nghi m - L u tr bi u m u phi u ki m tra ch t l ng theo quy đ nh c a khoa BÀI K THU T NHU M XANH METHYLEN M c đích Quy trình h ng d n nhu m tiêu b n b ng ph ng pháp nhu m xanh Methylen đ phát hi n hình th t bào, vi khu n Ph m vi áp d ng Quy trình đ c áp d ng Khoa/Phòng/B ph n vi sinh c a B nh vi n Trách nhi m - Nhân viên th c hi n: ưđ c đào t o có ch ng ch ho c ch ng nh n v chuyên ngành Vi sinh y h c - Nhân viên nh n đ nh, giám sát phê t k t qu : Có trình đ đ i h c ho c sau đ i h c v chuyên ngành Vi sinh y h c Nguyên t c Thu c nhu m xanh Methylen thu c nhu m cation, màng t bào mang n tích âm nên cho thu c nhu m gây hi n t ph ng b t màu s k t h p c a hai lo i n tích trái d u ng pháp nhu m đ n gi n đ quan sát hình d ng c a t bào, vi khu n, đ ây c s d ng ph n ng phình v , đ nh danh Corynebacterium diphtheriae 5.Trang thi t b , v t t a Trang thi t b - T an toàn sinh h c (ATSH) c p - Kính hi n vi quang h c - Máy ly tâm, Máy tr n, l c - ng vơ trùng có n p đ y - èn c n, que c y, lam kính, kính m ng, bút vi t kính, d u soi kính, gi y th m d u - Pipet Pasteur vơ trùng b Sinh ph m hóa ch t: thu c nhu m Xanh methylen Ki m tra ch t l ng - Các hóa ch t dùng đ nhu m soi ph i đ c ki m tra theo quy trình ki m tra ch t l ng, hóa ch t, l u l i k t qu sau ki m tra - C n có ch ng chu n làm ch ng: Escherichia coli ATCC® 25922: Màu xanh Staphylococcus aureus ATCC® 25923: Màu xanh Corynebacterium diphtheriae ATCC® 8028: T bào xu t hi n t ng đám, d i, có h t nh n n t bào ch t màu xanh An toàn - Th c hi n thao tác v i m u b nh ph m t ATSH - S d ng thi t b b o h cá nhân N i dung th c hi n a Nhu m đ n gi n - Làm tiêu b n: + Chu n b lam kính s ch, khơng x c v , nhúng vào dung d ch ethanol 95% + S d ng k p g p lam kính, đ c n, h lam kính ng n l a đèn c n + Dán nhưn thông tin m u b nh ph m + Dùng bút vi t kính khoanh tròn, đánh d u v trí ph t b nh ph m m td i lam kính + Dàn tiêu b n theo hình xốy trơn c ho c hình zích z c + tiêu b n khô t nhiên t ATSH ho c làm khô 60C - C đ nh tiêu b n: + lam kính lên máy s y lam + C đ nh b ng nhi t: 60C đ n tiêu b n khô a tiêu b n ngang qua ng n l a đèn c n - l n, m i l n - 10 giây tiêu b n ngu i + C đ nh b ng hóa ch t: Nh methanol ph kín n i dàn tiêu b n, đ khô phút, không h l a - Ph thu c nhu m Xanh methylen trì - phút, r a d - Làm khơ tiêu b n tr i vòi n c ch y nh c soi kính - S d ng v t kính d u, quan sát hình th vi khu n b Nhu m t bào - Nh m t gi t b nh ph m lên lam kính - Nh gi t thu c nhu m xanh methylen, tr n đ u - t lamen lên v trí đư tr n b nh ph m thu c nhu m - tiêu b n - phút - Quan sát v t kính x10 x40 Di n gi i k t qu vƠ báo cáo - Quan sát hình th c a vi khu n, t bào - T bào vi khu n b t màu xanh trung tính n n xanh nh t - T bào b ch c u xanh sáng, có nhân màu xanh đ m tr ms l ng t bào, tính trung bình vi ng - V i C diphtheriae xu t hi n t ng đám, d i, có h t nh n n t bào ch t màu xanh đ m 10 L u Ủ (c nh báo) Khi t bào, vi khu n C diphtheria b t màu đ m không phân bi t đ khác bi t gi a vi khu n thành ph n khác cs khó phân bi t Propionibacterium, Actinomyces v i C diphtheria 11 L u tr h s - Ghi chép rõ ràng k t qu thông tin quy đ nh vào phi u tr l i k t qu s k t qu xét nghi m - L u tr bi u m u phi u ki m tra ch t l ng theo quy đ nh c a khoa BÀI K THU T C Y PHỂN VỐNG, C Y M c đích Quy trình h M ng d n cách c y phân vùng, c y đ m đ i v i vi khu n Ph m vi áp d ng Quy trình đ c áp d ng t i Khoa/Phòng/B ph n xét nghi m Vi sinh c a b nh vi n Trách nhi m - Nhân viên th c hi n: ưđ c đào t o có ch ng ch ho c ch ng nh n v chuyên ngành Vi sinh y h c - Nhân viên nh n đ nh, giám sát phê t k t qu : Có trình đ đ i h c ho c sau đ i h c v chuyên ngành Vi sinh y h c Nguyên t c - C y vi khu n k thu t đ a b nh ph m ho c vi khu n vào mơi tr nh m m c đích t ng s l ng nuôi c y đ chúng phát tri n ng đ phân l p, xác đ nh tính ch t c a vi khu n - C y phân vùng k thu t nuôi c y b nh ph m ho c h n h p vi khu n nh m t o khu n l c (khóm) riêng r - C y đ m k thu t nuôi c y nh m xác đ nh s l ng vi khu n có kh n ng phát tri n t b nh ph m ho c m t huy n d ch vi khu n Trang thi t b , v t t a Trang thi t b - T an toàn sinh h c (ATSH) c p - Máy ly tâm - Máy tr n, l c - ng vơ trùng có n p đ y - èn c n, que c y - Pipet Pasteur vô trùng b Sinh ph m hóa ch t - a mơi tr ng nuôi c y - Dung d ch n c mu i sinh lỦ vô trùng 0,9% Ki m tra ch t l ng - Các lo i hóa ch t, mơi tr hành ki m tra ch t l ng ni c y ph i h n s d ng tr ng đ đ m b o ch t l - Các lo i d ng c , hóa ch t, mơi tr - Các môi tr ng nuôi c y c n đ c s d ng ph i đ c ti n ng ng nuôi c y ph i đ c ki m tra đ đ m b o không b nhi m b n c ki m tra hàng tu n, m i lô m i l u l i k t qu sau ki m tra - Ki m tra ch ng chu n ATCC An toàn - Th c hi n thao tác v i m u b nh ph m t ATSH + Báo cáo k t qu đ nh danh vi khu n/ vi n m gây b nh đ n m c đ chi và/ho c loài theo qui đ nh + Báo cáo s l ng vi khu n/vi n m nuôi c y bán đ nh l ng 1+; ho c 2+; ho c 3+; ho c 4+ - Báo cáo Âm tính n u t t c đ a môi tr ng không m c khu n l c (khóm): Báo cáo “Khơng m c vi khu n/ vi n m gây b nh” Ho c báo cáo “Vi h đ 10 Di n gi i k t qu Vi sinh v t m c v i s l ng đ ng hô h p trên” c coi gây b nh khi: - Khu n l c (khóm) c a vi khu n/vi n m gây b nh m c t ho c vùng th 3, và/ ho c vùng th ng đ i nhi u r t nhi u vùng th 2, và/ - Khu n l c (khóm) c a vi khu n/ vi n m gây b nh m c vùng nh ng phù h p v i hình nh tiêu b n nhu m Gram có b ch c u đa nhân trung tính Ho c tiêu b n nhu m Gram có r t ho c khơng có vi h c a đ ng hơ h p nh ng có r t nhi u t bào m 11 H n ch - M t s vi sinh v t gây viêm ph i không m c môi tr ng nuôi c y thơng th ng (ví d : Legionella, virus, vi n m, Mycoplasma, Mycobacteria) - Âm tính gi có th l y, b o qu n v n chuy n b nh ph m không qui đ nh ho c b nh nhân đư u tr kháng sinh t tr -D c ng tính gi có th b nh ph m b vi h c trú đ ng hô h p m c l n át vi khu n gây b nh ho c b nh ph m b nhi m b n t d ng c ch a b n t v 12 L u Ủ (c nh báo) - Quy trình ch áp d ng đ ni c y vi khu n hi u k khí tùy ti n d m c, không áp d ng cho vi khu n k khí b t bu c K t qu âm tính khơng có ngh a khơng có vi khu n gây b nh b nh ph m mà khơng tìm th y c n ngun vi khu n gây b nh có th phân l p đ c b ng quy trình ni c y - N u bác s lâm sàng có yêu c u tìm vi khu n gây b nh hi m g p, vi n m gây b nh ph i ghi c th đ tránh b sót - B nh ph m l y, v n chuy n b o qu n khơng u c u có th đ a đ n k t qu âm tính ho c d ng tính gi 13 L u tr h s T t c h s đ c a t ng b nh vi n c l u tr theo qui đ nh phù h p v i Khoa/Phòng/B ph n vi sinh M c đích Quy trình c y n s vi sinh v t th BÀI 14 QUY TRỊNH C Y N C TI U c ti u h ng d n cách th c hi n nuôi c y, đ nh l ng gây nhi m trùng đ ng đ nh danh m t ng ti t ni u Ph m vi áp d ng - Quy trình áp d ng cho Khoa/Phòng/B ph n xét nghi m Vi sinh ti n hành nuôi c y, phân l p đ nh danh vi khu n gây b nh th - Áp d ng cho b nh ph m n ng g p b nh ph m n c ti u đ c ti u c thu th p t b nh nhân có tri u ch ng nhi m trùng đ ti t ni u hay t b nh nhân có y u t nguy c nhi m trùng đ - B nh ph m n c ti u bao g m lo i sau: n ch c hút x ng mu, n ng ng ti t ni u c ti u gi a dòng, n c ti u l y qua ng d n l u, c ti u l y t th n, ni u qu n, bàng quang qua can thi p ph u thu t, th thu t Trách nhi m - Khoa lâm sàng thu th p m u n c ti u theo h ng d n v n chuy n m u đ có đ c b nh ph m t t nh t cho nuôi c y Thông tin lo i m u thu th p c n ph i th hi n phi u xét nghi m kèm đ phòng xét nghi m có c n c bi n lu n k t qu ni c y - Phòng xét nghi m có nhi m v nh n, ki m tra ti n hành xét nghi m m u theo quy trình chun mơn an tồn sinh h c - Nhân viên th c hi n: đ c đào t o có ch ng ch ho c ch ng nh n v chuyên ngành Vi sinh - Nhân viên nh n đ nh, giám sát phê t k t qu : Có trình đ đ i h c ho c sau đ i h c v chuyên ngành Vi sinh y h c Nguyên lý S d ng ph ng pháp c y đ nh l hi n vi khu n hi n di n n n c ti u thu th p đ c ti u S l ng môi tr ng th ch dinh d ng nh m phát ng vi khu n gây b nh tùy theo t ng lo i b nh ph m c Trang thi t b vƠ v t t a Trang thi t b - T an toàn sinh h c c p - Kính hi n vi quang h c -T m th ng - T m CO2 - Máy ly tâm t bào (n u có) b D ng c - Pipette vơ trùng - Que c y µL - èn c n - Lam kính - D u soi c V t li u Môi tr ng nuôi c y: - Th ch máu - Th ch MacConkey - Th ch ch n l c cho nuôi c y n c ti u (Uriselect, Chromogenic agar…) n u có Hóa ch t: B thu c nhu m Gram Ki m tra ch t l ng - Các lo i sinh ph m, môi tr hành ki m tra ch t l ng ni c y ph i h n s d ng tr ng đ đ m b o ch t l - Các lo i d ng c , hóa ch t, mơi tr c s d ng ph i đ ng ng nuôi c y ph i đ c ki m tra đ đ m b o khơng b nhi m b n An tồn - An toàn sinh h c c p II - Áp d ng bi n pháp an toàn chung x lỦ b nh ph m th c hi n xét nghi m - T t c b nh ph m đ c ti n c xem nh ngu n nhi m N i dung th c hi n a Chu n b L y, b o qu n v n chuy n b nh ph m: Cách thu th p m u n dòng: ây lo i n c ti u th c ti u: N c ti u gi a ng thu th p g i đ n phòng xét nghi m nh t Th i m l y t t nh t vào bu i sáng, lúc vi khu n đư có th i gian sinh sôi đêm t i bàng quang L u Ủ c n ph i lo i b (kho ng 30 ml) ph n n c ti u đ u dòng ph n th trú t i vùng ni u-sinh d c L kho ng 50ml) d nl un c l y vào l vô trùng mi ng r ng (th tích y ch t n p l sau l y xong L y n c ti u qua ng d n l u: B nh nhân có ng ng có nguy c cao m c nhi m trùng đ c n sát trùng vùng catheter rút n Ủ: không thu th p n th c ti u b ng alcohol 900 , rút n c ti u túi ch a n ng có nhi u vi khu n th ng ti t ni u tránh ngo i nhi m, c ti u b ng kim tiêm vô trùng L u c ti u đ u catheter ng d n l u n ng trú t ng sinh L y n c ti u qua ch c hút x ni u qu n, bàng quang qua can thi p ph u thu t, th thu t: ây ph th p n ng c ti u 30 ml sau đ c ti u đ i t ng n ng b ngo i nhi m vi khu n th c ti u đ nuôi c y ng mu, t th n, ng pháp xâm l n đ thu c ti u mà không b ngo i nhi m K t qu nuôi c y t b nh ph m ph n ánh xác tình tr ng nhi m trùng ti u V n chuy n b o qu n m u -M un c ti u c n đ c đ a xu ng phòng xét nghi m vòng gi đ ni c y - N u không th v n chuy n đ c đ n phòng xét nghi m gi ng n mát t l nh 40 C vòng 18 gi Tiêu chu n t ch i m u: - B nh ph m dán nhưn thơng tin - B nh ph m rò r , ch y kh i d ng c ch a b nh ph m - B nh ph m đ u catheter ng d n l u n c ti u -N c ti u đ ng môi tr ng t ng sinh -N c ti u 48 gi (n u không b o qu n môi tr ng acid boric) b Quy trình x lí m u - Phòng vi sinh ti p nh n x lí m u n c n gi t l nh 4C - Quá trình xét nghi m m u n B c ti u N u không th ti n hành xét nghi m c ti u bao g m b c sau: c 1: Th c hi n m t m u nhu m Gram - ây b c ban đ u đ xét nghi m m u n c ti u, phòng xét nghi m có th quy t đ nh th c hi n đ kh o sát s hi n di n c a vi khu n t bào m u hay b qua n u khơng có u ki n Dùng pipette Pasteur tr n đ u m u n c ti u hút gi t nh lên lame kính, khơng dàn đ u Làm khơ m u b ng nhi t nhu m Gram Soi m u d i kính hi n vi d u có đ phóng đ i 100x, tìm s hi n di n c a vi khu n, b ch c u đa nhân t bào bi u mô - N u th y > 10 vi khu n/vi tr ng, s l ng vi khu n m u n c ti u t ng đ ng > 105 /ml - N u th y > 10 t bào b ch c u đa nhân/vi tr ng: d u hi u ch ng t tình tr ng nhi m trùng ti t ni u - N u có nhi u t bào bi u mơ m u n d u hi u m u n c ti u c a b nh nhân n , b t k s l c ti u b nhi m vi khu n th ng vi khu n: ng trú vùng âm h , âm đ o - N u có yêu c u k t qu kh n c p, k t qu nhu m Gram c n g i cho bác s u tr kèm ghi “K t qu nuôi c y s đ B c tr sau” c 2: Sàng l c Cách 1: Sàng l c d a k t qu soi lame: n u soi nhu m Gram khơng có vi khu n b ch c u: m u n c ti u đ c đánh giá khơng nhi m trùng, v y khơng c n ph i ti n hành nuôi c y Cách 2: Dùng que nhúng phát hi n nhanh leukocyte esterase hay nitrate (que nhúng test nhanh T ng phân tích n c ti u) N u k t qu test nhanh phát hi n có men leukocyte esterase hay nitrate + có vi khu n tiêu b n nhu m > 105 /ml: c n nuôi c y m u n c ti u đ tránh vi khu n ngo i nhi m t ng sinh N u k t qu test nhanh không phát hi n men leukocyte esterase hay nitrate + khơng có vi khu n tiêu b n nhu m: tr k t qu test sàng l c nhi m trùng ti u âm tính, khơng c n thi t ph i ni c y *L u Ủ: test nhúng n d i 105 /ml Có th b qua b trang b đ B l c ti u có th khơng đ nh y đ phát hi n n u m u n c th c hi n que nhúng phân tích n ng môi tr - L c nh m u n c ti u đ nh l ng Dùng que c y 1µl đ l y n c ti u n u phòng xét nghi m ch a c ti u cho đ u, cho que c y µl ch m vào m u n - Dùng que c y đư l y n c ti u v ch đ c ti u theo chi u th ng đ ng c ti u ng gi a đ a th ch (hình 1), ria đ ngang qua đ ng gi a (hình 2), v ch nh ng đ - Ti n hành t ng t c y th ch MacConkey đ a c y c ti u th c hi n nuôi c y đ nh ng Blood agar MacConkey agar L u Ủ không nhúng c que c y vào sâu m u n ng song song v i đ ng zig-zag g n c t ng zig-zag (hình 3) 35C qua đêm - L u Ủ: Có th thay th mơi tr n ng vi khu n c c 3: Nuôi c y n - c ti u có l ng ni c y blood agar MacConkey b ng môi tr ng ch n l c cho c ti u (ví d nh CLED agar, …) Di n gi i k t qu vƠ báo cáo - N u khu n l c (khóm) m c môi tr ng th ch: Tr k t qu Nuôi c y n c ti u âm tính - N u có vi khu n m c th ch, bi n lu n k t qu nh sau: a Bi n lu n k t qu c y n - Tr c ti u đ nh l ng ng h p 1: + Vi khu n nuôi c y < 10 CFU/đ a: l phát hi n vi khu n gây nhi m trùng ti u ng vi khu n t ng đ ng < 104 CFU/ml: Tr k t qu Không + Ngo i l : Th c hi n đ nh danh kháng sinh đ cho vi khu n < 104 CFU/ml sau: m u n c ti u l y t bàng quang qua sinh thi t x nhân n có tri u ch ng nhi m trùng ti u rõ, m u n - Tr nh ng tr ng h p ng mu, qua n i soi bàng quang, b nh c ti u có t bào m ng h p 2: + Vi khu n ni c y có l ng t 10-100 khu n l c (khóm) /đ a t ng đ ng v i 104 -105 CFU/ml Bi n lu n nh sau: + N u b nh nhân khơng có tri u ch ng nhi m trùng ti t ni u: đ ngh l y m u n hành nuôi c y đ nh l c ti u n a ti n ng l i + N u b nh nhân có tri u ch ng nhi m trùng ti t ni u + m u c y có hay lo i vi khu n: ti n hành đ nh danh làm kháng sinh đ + N u b nh nhân khơng có tri u ch ng nhi m trùng ti t ni u, hay tri u ch ng không rõ ràng, k t qu soi đ m b ch c u, vi khu n ít: tr k t qu s l l y1m un c ti u n a ti n hành nuôi c y đ nh l ng l i - Ti n hành t ng t c y th ch MacConkey - đ a c y - L u Ủ: Có th thay th mơi tr cho n ng CFU + đ ngh 35C qua đêm ng nuôi c y blood agar MacConkey b ng môi tr ng ch n l c c ti u (ví d nh CLED agar, …) Di n gi i k t qu vƠ báo cáo - N u khơng có khu n l c (khóm) m c môi tr ng th ch: Tr k t qu Ni c y n c ti u âm tính - N u có vi khu n m c th ch, bi n lu n k t qu nh sau: a Bi n lu n k t qu c y n l c ti u đ nh ng - Tr ng h p 1: + Vi khu n nuôi c y < 10 CFU/đ a: l ng vi khu n t ng đ ng < 104 CFU/ml: Tr k t qu Không phát hi n vi khu n gây nhi m trùng ti u + Ngo i l : Th c hi n đ nh danh kháng sinh đ cho vi khu n < 104 CFU/ml sau: m u n c ti u l y t bàng quang qua sinh thi t x nhân n có tri u ch ng nhi m trùng ti u rõ, m u n - Tr ng h p 2: nh ng tr ng h p ng mu, qua n i soi bàng quang, b nh c ti u có t bào m + Vi khu n nuôi c y có l ng t 10-100 khu n l c (khóm) /đ a t ng đ ng v i 104 -105 CFU/ml Bi n lu n nh sau: + N u b nh nhân khơng có tri u ch ng nhi m trùng ti t ni u: đ ngh l y m u n hành nuôi c y đ nh l c ti u n a ti n ng l i + N u b nh nhân có tri u ch ng nhi m trùng ti t ni u + m u c y có hay lo i vi khu n: ti n hành đ nh danh làm kháng sinh đ + N u b nh nhân khơng có tri u ch ng nhi m trùng ti t ni u, hay tri u ch ng không rõ ràng, k t qu soi đ m b ch c u, vi khu n ít: tr k t qu s l hành nuôi c y đ nh l Thông báo s l ng CFU + đ ngh l y m u n c ti u n a ti n ng l i ng h i ch n v i bác s u tr , t có th ti n hành đ nh danh làm kháng sinh đ có yêu c u - Tr ng h p 4: N u m u c y có có lo i vi khu n t p nhi m, yêu c u l y l i m u n b tr ng h p 3: báo cáo k t qu : “M u c ti u cách.” nh danh th c hi n kháng sinh đ v i ch ng nuôi c y đ t s l ng gây b nh (hay có kh n ng tác nhân gây nhi m trùng ti t ni u lâm sàng) c Các vi khu n gây b nh th ng g p nhi m trùng ti t ni u Enterobactericeace, Pseudomonas, Streptococcus, Enterococcus, Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus (ph n tr ) 10 L u Ủ (c nh báo) - Luôn tr k t qu đ nh danh kháng sinh đ Burkholderia pseudomallei Streptococcus group B b tc s l ng - N m h t men phân l p t n c ti u l y qua catheter: th c hi n xét nghi m sinh ng m m tr k t qu đ nh danh, đ ngh cân nh c rút catheter 11 L u tr h s L u tr theo quy đ nh BÀI 15 QUY TRỊNH C Y PHỂN M c đích Quy trình h ng d n cách thu th p b nh ph m, v n chuy n nuôi c y m u phân phòng xét nghi m vi sinh Ph m vi áp d ng - Quy trình áp d ng cho khoa/phòng xét nghi m Vi sinh ti n hành nuôi c y, phân l p đ nh danh vi khu n gây b nh th - Nuôi c y vi khu n th tr ng g p b nh ph m ng gây b nh phân: Salmonella, Shigella, Vibrio cholerae Các đ a môi ng nuôi c y s d ng cho vi khu n đ ng th i c ng có tính n ng ni c y ln m t s vi khu n gây b nh nhi m trùng tiêu hóa nh ng g p nh : Aeromonas hydrophila Plesiomonas shigelloides… - Tài li u không đ c p nuôi c y phân l p vi khu n k khí nh Clostridium difficile Campylobacter sp Trách nhi m - Khoa lâm sàng thu th p m u phân theo h ng d n v n chuy n m u đ có đ c b nh ph m t t nh t cho nuôi c y Thông tin lo i m u thu th p c n ph i th hi n phi u xét nghi m kèm đ phòng xét nghi m có c n c bi n lu n k t qu ni c y - Phòng xét nghi m có nhi m v nh n, ki m tra ti n hành xét nghi m m u theo quy trình chun mơn an tồn sinh h c - Nhân viên th c hi n: ưđ c đào t o có ch ng ch ho c ch ng nh n v chuyên ngành Vi sinh y h c - Nhân viên nh n đ nh, giám sát phê t k t qu : Có trình đ đ i h c ho c sau đ i h c v chuyên ngành Vi sinh y h c Nguyên lý S d ng môi tr ng chuyên bi t, ch n l c đ nuôi c y, t ng sinh, phân l p đ nh danh vi khu n gây b nh phân Trang thi t b vƠ v t t a Trang thi t b - T an toàn sinh h c c p - Kính hi n vi quang h c - T m th ng - T m CO2/ho c thi t b t o CO2 b D ng c - Pipette vô trùng - Que c y - èn c n - Lam kính - D u soi c V t li u Môi tr Môi tr ng nuôi c y: - Th ch máu - Th ch MacConkey - Th ch TCBS, MEA, SS, XLD, - ng t ng sinh: Alkaline pepton, Selenite F Hóa ch t: - B thu c nhu m Gram - Các b ph n ng sinh hóa, đ nh danh:KIA, API 20E, API 20NE, VITEK ID card - Các b ng ng k t serogroup, antigen c a vi khu n gây b nh đ Ki m tra ch t l ng - Các lo i sinh ph m, môi tr hành ki m tra ch t l ng ru t ng ni c y ph i h n s d ng tr ng đ đ m b o ch t l - Các lo i d ng c , hóa ch t, mơi tr c s d ng ph i đ c ti n ng ng nuôi c y ph i đ c ki m tra đ đ m b o không b nhi m b n An toàn - An toàn sinh h c c p II - Áp d ng bi n pháp an toàn chung x lỦ b nh ph m th c hi n xét nghi m - T t c b nh ph m đ c xem nh ngu n nhi m N i dung th c hi n a Chu n b L y, b o qu n v n chuy n b nh ph m: Cách thu th p m u phân: - Thu th p m u phân (đ c, nh y, n c) vào l vô trùng 40ml có n p đ y ch t, Ủ l y ph n phân nh y máu có kh n ng ch a nhi u vi khu n gây b nh - Không khuy n cáo l y m u phân b ng que ph t tr c tràng khơng đ l phân l p vi khu n gây b nh Tuy nhiên tr tr c tràng có th đ ng h p b nh nhân không t tiêu đ c, que ph t c s d ng đ l y m u phân nuôi c y - Nên l y phân c y tr - B nh ph m ph i đ l ng b nh ph n đ nuôi c y c dùng kháng sinh V n chuy n b o qu n m u: c v n chuy n đ n phòng xét nghi m khơng q gi N u đ lâu, s ng vi khu n phân l p m u phân s gi m đ pH c a m u phân gi m d n theo th i gian N u m u phân c n soi c y vi khu n t ph i chuy n đ n phòng xét nghi m vòng 30 phút - N u khơng chuy n m u đ n phòng xét nghi m th i gian quy đ nh ph i gi m u phân mơi tr ng chuyên ch Các môi tr gi môi tr ng th ng đ c dùng là: Stuart’s, Cary-Blair… M u phân t c n ng alkaline pepton b Tiêu chu n t ch i m u - B nh ph m khơng có dán nhưn thơng tin - B nh ph m rò r , ch y bao đ ng - M u phân đ ng mơi tr ng ch a F2AM, barium, có l n n c ti u - Không khuy n cáo gi phân t l nh m t s vi khu n (ví d nh Shigella) s ch t nhi t đ th p c Quy trình x lí m u Quan sát đ i th : Ghi nh n tính ch t phân Phân nh y máu th nhân tiêu ch y xâm l n nh Salmonella, Shigella… Phân n c tr ng đ c nh n ng tác c vo g o g i Ủ nhi m vi khu n t (Vibrio cholerae) Nuôi c y: - Nên ch n ph n phân nh y, máu đ nuôi c y Dùng que c y l y m t kh i l nên ch n ph n có nh y, máu đ ria c y mơi tr ng - Tùy vào m c đích c n phân l p tác nhân mà ch n môi tr h - Môi tr ng phân, Ủ ng ni c y cho phù h p Quy trình ng d n cách nuôi c y Salmonella, Shigella,Vibrio cholerae, Plesiomonas Aeromonas ng th ng s d ng: + Nuôi c y Vibrio cholerae: Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose agar (TCBS), Meat-extract agar (MEA), t ng sinh dung d ch Alkaline pepton + Nuôi c y vi khu n khác: Blood agar (BA), MacConkey agar (MC), Salmonella-Shigella agar (SS) hay Xylose lysine deoxycholate agar (XLD), t ng sinh dung d ch Selenite broth + Các môi tr + Môi tr ng th ch đ c 37C, đ c ki m tra sau 18-24 gi , 48 gi ng t ng sinh (alkaline pepton, selenite broth) đ chuy n môi tr c c y chuy n th ch sau 18-24 gi C y ng pepton ki m đ a TCBS hay MEA, c y chuy n Selenite broth đ a Salmonella- Shigella (SS) hay đ a XLD Bi n lu n đ c môi tr ng nuôi c y: nh danh Salmonella Shigella: - Sau m i 24 gi nuôi c y, ki m tra đ a MacConkey Salmonella-Shigella đ tìm khu n l c (khóm) khơng lên men lactose khu n l c (khóm) sinh H2S ây khu n l c (khóm) nghi ng thu c chi Salmonella sp Shigella sp Tuy nhiên, c ng có th vi khu n h đ đ ng tiêu hóa Vì v y, c n ph i ti n hành m t s ph ng ru t th ng trú ng pháp tr c nghi m sinh hóa hay đ nh danh cho khu n l c (khóm) Khu n l c (khóm) nghi ng Salmonella, Shigella c n làm m t s th nghi m xác đ nh tính ch t sinh v t hóa h c - nh danh kh ng đ nh b ng kit: API 20E, VITEK, MALDI-TOF L u Ủ: MALDI-TOF không th đ nh danh Shigella sp ph protein c a Shigella t ng đ ng v i E coli - Phân type huy t c a Salmonella sp Shigella sp b ng xét nghi m ng ng k t huy t h c: + Shigella sp.: th nghi m ng ng k t v i lo i kháng nguyên O: Ng ng k t v i Antiserum A=Shigella dysenteriae Ng ng k t v i Antiserum B=Shigella flexneri Ng ng k t v i Antiserum C = Shigella boydii Ng ng k t v i Antiserum D=Shigella sonnei + Salmonella sp.: Th nghi m ng ng k t v i lo i kháng nguyên b m t O, H đ đ nh danh theo h th ng phân lo i Kauffman-White Vi c đ nh danh th nghi m tham chi u c th c hi n phòng xét nh danh Vibrio cholerae: - Sau m i 24 gi men sucrose) ng đ , ki m tra TCBS xem có khu n l c (khóm) màu vàng m c (vi khu n lên ây khu n l c (khóm) nghi ng chi Vibrio, c n ki m tra tính ch t sinh hóa đ nh danh vi khu n - C y chuy n môi tr ng alkaline pepton sau tra khu n l c (khóm) có tính ch t nh 8-24 gi đ a TCBS, sau TCBS 24 gi , ki m - nh danh kh ng đ nh b ng API, VITEK, MALDI-TOF - Xác đ nh serogroup Vibrio cholera b ng th nghi m ng ng k t tìm kháng nguyên O1, O139 - Serogroup O1 có biotype: Classic El tor đ c phân bi t nh sau: nh danh Aeromonas Plesiomonas: - Ki m tra môi tr kích th ng Blood agar, MacConkey sau 24 gi c to, màu xám, l (khóm) mơi tr đ tìm khu n l c (khóm) Gram âm có ng khu n l c (khóm) lo i ph i chi m 70% t ng l ng khu n l c ng nuôi c y - Th c hi n test oxidase cho khu n l c (khóm) này, n u d ng tính nghi ng thu c chi Aeromonas sp, hay Plesiomonas sp - nh danh kh ng đ nh b ng API, VITEK hay MALDI-TOF - nh danh E coli gây b nh tiêu ch y: Vi khu n E coli có m t s l gây b nh tiêu ch y nh Shiga-toxin-producing E coli (STEC), enterotoxigenic E coli (ETEC), enteropathogenic E coli (EPEC) enteroinvasive E coli (EIEC) Các E coli gây b nh đ y u t đ c l c: Toxin, y u t bám dính xâm l n Ph g m nuôi c y, mi n d ch, PCR đ c th c hi n c đ nh danh phân l d a ng pháp xác đ nh y u t đ c l c bao phòng xét nghi m tham chi u STEC serotype O157: H7 có th gây b nh c nh tán huy t-ure huy t Vi c nuôi c y vi khu n c n mơi tr ng ch n l c (ví d nh CHROMAGAR O157 hay CTSMAC) Khi phát hi n khóm khu n nghi ng có th làm ng ng k t latex v i b ng ng k t latex E coli O157 đ n phòng xét nghi m tham chi u đ ch n đoán b ng ph nh danh kh ng đ nh c n ph i g i vi khu n ng pháp sinh h c phân t Kháng sinh đ : Th c hi n kháng sinh đ cho lo i vi khu n gây b nh phân l p đ c phân báo cáo k t qu kháng sinh đ chung v i k t qu đ nh danh Di n gi i k t qu vƠ báo cáo - N u không phát hi n vi khu n gây b nh: tr k t qu “Không phân l p đ c vi khu n gây b nh m u nuôi c y” - Phát hi n vi khu n gây b nh: tr k t qu “Phát hi n vi khu n “ tên vi khu n” m u nuôi c y”, tr kháng sinh đ kèm theo 10 L u Ủ (c nh báo) Khi nuôi c y đ nh danh đ c vi khu n t Vibrio cholerae c n ph i báo cáo v i c p thu c danh sách d ch b nh c n thông báo 11 L u tr h s L u tr theo quy đ nh ... vi áp d ng Quy trình áp d ng cho Khoa/ Phòng/ B ph n xét nghi m Vi sinh lâm sàng t i b nh vi n Trách nhi m - Nhân vi n th c hi n: đ c đào t o có ch ng ch ho c ch ng nh n c a chuyên ngành Vi sinh. .. bào, vi khu n Ph m vi áp d ng Quy trình đ c áp d ng Khoa/Phòng/B ph n vi sinh c a B nh vi n Trách nhi m - Nhân vi n th c hi n: ưđ c đào t o có ch ng ch ho c ch ng nh n v chuyên ngành Vi sinh. .. ng t i Khoa/Phòng/B ph n xét nghi m Vi sinh c a b nh vi n Trách nhi m - Nhân vi n th c hi n: ưđ c đào t o có ch ng ch ho c ch ng nh n v chuyên ngành Vi sinh y h c - Nhân vi n nh n đ nh, giám sát