TÀI LIỆU tập HUẤN kỹ THUẬT PCR CHẨN đoán BỆNH TRÊN tôm cá

Hóa chất sử dụng trong phòng thí nghiệm sinh học phân tử phần lớn là những chất độc hại vì thế, luôn xem kỹ tên hóa chất trước khi sử dụng và cần ghi chú rõ ràng bên ngoài bao bì mỗi loại hóa chất. Trước khi sử dụng một loại hóa chất mới, cần phải tham khảo thông tin của chúng từ các tài liệu của nhà sản xuất. Ví dụ: Phenol – rất dễ gây cháy Acrylamide – tác động độc lên hệ thần kinh Ethidium bromide – tác nhân gây ung thư Luôn đeo găng tay khi làm việc với các hóa chất và không bao giờ được hút chúng bằng miệng. Nếu tiếp xúc trực tiếp với những chất độc này phải nhanh chóng rửa vùng tiếp xúc dưới vòi nước và tuân theo chỉ dẫn của người hướng dẫn. Các hóa chất cần phải được bảo quản đúng nhiệt độ quy định: nhiệt độ phòng, trong tủ mát (40C) hoặc tủ lạnh âm (-200C) và được ghi nhãn cẩn thận. 2. Đèn tử ngoại (UV) Tiếp xúc trục tiếp với tia UV có thể gây hại mắt. Luôn luôn đeo kính bảo vệ khi sử dụng đèn UV. 3. Nguồn điện Điện thế sử dụng trong quá trình điện di có thể gây giật điện. Đậy nắp bồn điện di trong suốt quá trình điện di để tránh bị điện giật. Luôn tắt nguồn điện trước khi lấy bản gel ra khỏi bồn điện di. 4. Các vật dụng Vật dụng thủy tinh và nhựa dùng trong sinh học phân tử phải sạch và vô trùng. Ống nghiệm bẩn như nhiễm khuẩn hoặc dính các chất tẩy đều có thể ức chế phản ứng hoặc làm hỏng vật liệu di truyền (nucleicacid). Vật dụng thủy tinh (ống nghiệm, bình tam giác…) tốt nhất cần được rửa bằng nước cất, hấp thanh trùng hoặc sấy 1500C trong vòng 1 giờ. Đối với thí nghiệm liên quan RNA, vật dụng thủy tinh cần được xử lý bằng diethyl-pyrocarbonate để ức chế enzyme RNases là một loại enzyme rất bền đối với việc hấp thanh trùng. Vật dụng nhựa (pipets và ống nuôi cấy, ống nghiệm nhỏ…) cần được thanh trùng trước khi sử dụng. 5. Rác thải và hóa chất thừa Ethidium bromide là một tác nhân gây ung thư vì thế khi thao tác với những vật dụng có dính chất này cần phải đeo găng tay bảo hộ. Gel agarose có chứa Ethidium bromide cần phải được vứt bỏ trong một túi riêng có đánh dấu. Quy định túi rác cho từng khu vực, từng công đoạn Hóa chất nguy hiểm cần có túi để riêng

  !"#$% &'()* +, - TÀI LI.U T/P HU0N K1 THU/T PCR CH2N 3OÁN B.NH TRÊN TÔM CÁ 4$-5- 6789#:;;< 1 8=>?4@8ABC&8D8E8.# 7 FGH&8D8E8.#  I7 8JKL  !"#$%&#'($)*"+ ,-./012 !"3)#$%&452!, 6 !" 73)#$%& !").!8!49 8!#/":%&; <0="%>(?? @?!%0=++2 A%%0=((?3 +0B!?) !"!C+3D44E F--/4G-)*"+?! $!H-/4 %3)3)(0I%J8!3C3)%J K !"+3D+4+?+L;+.8 MN O KP8(MQRO O KPM$NOST7 :7 3PLQ"RSAT 7-/4&-)!U: V(?W+0#$%& +XU:7 U7 M Y-#$%&,+% V(?T+YT?WZ+% #[,+%+VL+TWZ+3)"?0! \Z+% 4. !VWLXY :T%&8?G!%H#'($#H] S3>S%"S?+^ V_-_ \T%?^M0!%P :T%&8?M[.,!`P["+3D$!E3)". "!H#"?abO O KaCY[)2!cF@.T %&8?+3D/$dE%0?Q?!!0+V_-0e?0cF!#0# 0e?0"^+[)"!H:T%&G!M0#[ "?.[\`P+3D!H3)#$%& 2 Z7 [!LVJKLL( A%%0((?3,-!)*T%& %"?+0B!?f0!!#0 _!A%%0 +3D_\42 +%" g?+L49G.9+  !"?V 4+V2 7&8F8C)A)\8 M-"]^_VXX*`aba 7 M-"]^h%L Z+0ai%%L Va_! #[! !"3j+3j)3D($8!"+  :%&;KSLaOO%%LF!KbiM'3D($;bkNbl+P K(RmRmF!KM;bkNbln/b0#n/OaP <!aOO3)"%% M-6cLd?FZ+BM3DnVPo'3D"!MP !aOO3)"%% :%&;KSL%%L!!#0Opq++%7rA K(Op!!#0 72%%L7rAas#!V[HaOO )X*`aba7 F^ !".%%L+3DSLtZ+! M%%LuPbMbsP3CMaOsP#)Z+-#$%& 73)#$%&4#v+3D!wD+V+3!^Z+-Mas8! %%LP :%&;KSL%%L+%7rAas; aOO%%L7rAaOs 72mOO3)"+VV[HaOOO%%L7rAas e5*XX*]VL(XX*` F^%%L2__%&#'($+\#$%&H  !"3!^Z+:,-+V_ !-2v !"?4!["2SL#x%%L[ +V%>%!w4- :%&; V!+7rAMaOi7#.aiAh7@PE[Da%%L 7#aiR%%LAh7@Obi)mkk3)"H K_%H+VZ+-3#!; 3 K/:oKy/:y oZ+!+.Z+8!XX*`z oV!+.3D%%Lu-. foZ+[.Z+[#!!z foV[.V[#!! 7g)h8C \ {2'2*,T%&ST |+3DGd#$%&-L3!+3D#G+Zd3!+3D3)%J #$%&8!3C3)%J |%%C%&&.-L9G?+-G3! d-8! 3C3)%J 7!?"}\ 8!-L #!]L |?(.(E3)?( !H8!??(#!#$%&-L"?S YT?W??(#$%&/ #"66^LL"i i600+^ )V%T?V!)V8!9 003)#$%&|+3D+^I00_)|+V j00/[+" 7ABjk&8lm&[[G823Gn <Kc_(~D -++hF@E*!! ,G'S6^TiZM0P   *  +  hF@  W M0%0#P BW~ #/),G+M,G hF@hF@P8!+[3j/ +LM%&3hF@ 8! •€€:  hF@8!{:P€!ZM0PW ,G+.0e?0 2 )F6"]^i^ #v-+-+•‚8! 6ZM0P+VG-, #~D+hF@- 7j8!i!#0i/_<Kc; 4 QhLhF@J Qh%L+8!_<KcM<Kcyy07!yy0P Qƒi R„ MiKRP Qh0/?0%0#!0M%F7<‚#;%@7<.%K7<.%f7<.%77<P QKZMZ/;…Z3D;cP QAe?Taq?0!#0 <_<KcZ !o!Lpqr-+; sL9.5Lt6 qu"X.4+3D^+V?-+,GhF@[€!6 qr-+#[3D($hF@ ++3D(2"+;9a($ 2R.2N2k.2al($`R   K-!,26} -+3#!; sL9;<($hF@#D++3D, t[2-?%*!! +j7,-.+ _ !B2! +- mb  K*t+? abQbO(?†+?[2- ?%*!!+j8!($hF@#D+L‡7!+5Lt6- 0+_! [2-?%!+, +3D-!($hF@+j Lt6;7!+W.+!3C%?,bOQlO O K.C !abQlO(?g,?4ZM0P,-W~#+ ),G+MhF@hF@PL[F+W& #[3Df.K ZM0P +u"X;€!ZM0P,-W~#),G+.+8! _! ?V^+D)+8!0e?0)F 6"]^i^3CpR O K*t+?•O(?+-R4H?0^% 8!+hF@+~D7,~D)F6"]^i^ #v"? ]^"LX^M@.7.f.KP93C_+VW+•‚8!ZM0P0 5 ?2W~#),G2($hF@hF@+FB3D%H ,W-?@7<ˆ 3C_|-, ?_<Kc+w!!($hF@+)9($hF@ +!+ F3T?#!^}-+M3C9•OQNO}P9($+!+ _<Kc+w!#[6LQ5i" q9L$vw!M*[ K[H#S<Kc+3D)A%%%0+0!##G !%3)!U:#!(#S<Kc20!!#003) !sL$xMsqyLWL&[ |1T<Kc +?"!.?2.3j?ˆ #[-#!; ,"Rz;3C!+w_+3DEtW[#!6 -+!3#va( $hF@+3D-+>_#!_ <Kc^#! *#S-+[ !iiJLX"o6"]^i^;€G#!‰t7!hF@?0!#0I #!!,aONF0%0,0e?0W#!0%07?2+ ?2'-!/+L/,G8!hF@ 7&8{E8l&82#&[ |3.)}4FF[G} 6 Y%!!#03C+3D#$%&+V/+L#S<Kc%G!2B( +hF@ 3)!#S<Kc%?V!!3) 6 0!!#0 h($hF@+(!|($ hF@+3D+%3)+3C/+L. *($ hF@ + ( ? #v% ?V  ^  !  G  %3j  8!  +  3C. 3CD+%!!#04#v% ?V!0!!#0+3D+%%L MMXK($\ B %?V!0!!#0^!G%3j#)($hF@) jF?2?‰1T+%(+hF@ 3) ! €S<Kc+3D)XX*MtL~S]"X^]T?V- 20!!#0+VG(%3)+8!+3Cf0!!#0 _! #x}LX5"X^,-hF@%?V0!!#0#v2-) A%%0 )X*MtL~S]"X^]T_!" Š'M3+3C##0 ?0P+V[hF@/[+?-20!!#0B hF@-%%L++%F!.%%+J_! "IL+(K"IL%?VH)hF@4%>%3) 3D#G%?V8!hF@0K"IL3C%Hs?00?! r00.4%?VH)*($hF@ ^%3j_ 3DbOOO!%•OO 3XX?Y+%4~+L+^3C‰,% ?V8!hF@+3D~+L#[,+%K ++% 3C%H(+%!!#0;7#!0!0Ah7@M7@AP.7#nr!0nAh7@ M7rAP|B+8!%%L+7@A"j#)7rA7?2.7@A ‰([+[)*+hF@)jY^?+Z‹!) %H+-"j"C!+%^j |-4,+%0#v+3D+%3)+8!!U:.+hF@ #S<Kc#!(03)#v+3DVL%3)%B #*L!3j_)3)^%8!4 7 A%%0 #x0#vX*!!ejj8!($hF@ %J+-4(8!($hF@€G#%_D hF@QA%%0!L+8!!U: Ghi chú: a|!-T%?^.!-"+%#S <Kc.3CDhF@9-+%> "3)+0_ R78!W+XG%H!-"_<Kc •f0!!#0?+%+3DSL84+ 8 8=>:?8C \H8•F80 I. sL5*V)YY I7 iRVL!sLVWL]XL€ a78!B;N O K=Ra O K Ri??(aNOOOc<iMc7Q<Kc, 2??(aNOOO c<iP •i?8?MŒ!0!P!?M%?0!P Ni?JM:0/P bi00;O.bQaOµzaOQaOOµzNOQROOµzROOQaOOOµz+ 00;O.bQaOµ.ROµ.ROOµ.aOOOµ lA0%y;O.RzO.ba.bM?2%H<KcPzf[ A0%y pf[0<KcO.RO.b k+G3)+ mh&&+E!? aOr,+GZ aa+G"?"!!? aRK‰.!H a•G! W+GT%j aNr/H abi?"3)R al78#"?%&&M/0P ap:T;K'#+V+GJ.Zmbq+V[+LJ. B!?."?!.4%.2H :7+sMR]^X i?(M0?0P r*+Ur€;0.#"ROOOŒ U7&L9qsLo ar+%ZZZ+%.+'-)!U:.?%H +V&- R|!?+~0M03)p/aOaO/abP.3D-) %_!JaOQROµ •i00bQbOµ Nr-+!%H+V+!!#0 bK(1T+/O.a!?O.Oa l]+aOObOO!?aOOO pK!8?L W.%RbO+V+@!#0 k78+~0M [4jA%%0P mG! W+T?_! aO:T;fB!?."?!!?.f"?!!yy.+aOQROOµ 9 78"!KLL!sLX]^ I78"!KLL!sLL)F )X*;ZG8;K(aF!•[+L_M[y!PbO2 3)"RH)_bO8![7! +3D%%LO.bFF!• )X*;:Z_);K(O.aRb€h€[y!bO23)"R H)_bO7! +3D%%LO.RbqM•n:P€h€ )X*G8;:Z_•);I:Z_; bF!•O.bF  b€h€O.Rbq  R •+8aOO rN  K :78"!KLLiR)F TE ( Tris-EDTA):!aOOMaai7#.ORObiAh7@3)+8aOOP "$HaRa  Kab4M!!0P#!+ tN O K Dung dịch 0.5M EDTAMA?00h!070!@0P;(ak.lapO3) "€!+ abQROF!•+VSok#!+ 23)"+8aOO +0+"!!0rtN O K Phenol pH 8;K(aOO0V.+V!tlk O K72V aOO%%L7#KO.biMokP|"?9ab4.+V?2%%L +-"?!!5.4\!227-&2V7#K O.aiMokP!32+-++3D%%L0ok Phenol pH 4;K(aOO0V.+V!tlk O K72VaOO 3)"!"$H|"?9ab4.+V?2%%L+- "?!!5.4\!227-&2V3)"32 !32+-++3D%%L0oN Phenol pH 8 : Chloroform : Isomyl alcolhol (25:24:1);<!aOO%%L- E%H+#4Rƒ#!?!bO0ok.W +^z#!+ 2Nk%%Ly+^ Sodium Acetate 3M (pH: 5.2);K(NO.kF!•@Ž• R •.!!kO R •€!+ SbR)!%!0723)+8aOO <;_?YpOZ?+[•O R •"H7!+3DaOOZ pOq LLMMaOOqP 8 : G‚)}&;4ahA<KM%0??!!0Pa3)"ƒ• !+2+0"H )X*MROi7#=K.ONiF!K.pNP U78"!KLL!sL[FSTrizolT 10 . &'()* +, - TÀI LI.U T/P HU0N K1 THU/T PCR CH2N 3OÁN B.NH TRÊN TÔM CÁ 4$-5- 6789#:;;< 1 8=>?4@8ABC&8D8E8.#. aµAe?000#0!#!#0iQi:M<0!P 15 M : Thang DNA Giếng 1, 3 : Mẫu tôm nhiễm WSSV nặng Giếng 2, 8 : Mẫu tôm không nhiễm WSSV Giếng 4, 5, 6, 7 : Mẫu tôm nhiễm WSSV nhẹ 1 2 M 3 4 5 6 7