Chọn lọc chất phụ gia tạo chế phẩm thuốc trừ sâu sinh học từ nuclear polyhedrosis virus (NPV) kiểm soát sâu khoang ăn tạp (spodoptera litura fab )

DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Ảnh hưởng của việc bổ sung hoạt chất Cypermethin vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh của sâu khoang Spodoptera litura Fab..... 34 Bảng 3.2: Ảnh hưởng của vi

ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP

CHỌN LỌC CHẤT PHỤ GIA TẠO CHẾ PHẨM THUỐC TRỪ SÂU SINH HỌC TỪ NUCLEAR POLYHEDROSIS VIRUS (NPV) KIỂM SOÁT SÂU KHOANG ĂN TẠP

(Spodoptera litura FAB.)

Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN THỊ HAI

TP Hồ Chí Minh, 2012

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của cá nhân tôi dưới sự hướng dẫn của Cô Nguyễn Thị Hai Những kết quả và số liệu trong đồ án là trung thực và chưa được ai công bố dưới bất kỳ hình thức nào Tôi hoàn toàn chịu trách nhiệm trước nhà trường và hội đồng về sự cam đoan này

Tp Hồ Chí Minh, ngày 21 tháng 07 năm 2012

Sinh viên

Nguyễn Thanh Lâm

LỜI CẢM ƠN

Để có thể hoàn thành chương trình đào tạo kỹ sư Công nghệ sinh học của trường Đại học Kỹ thuật Công nghệ thành phố Hồ Chí Minh Con xin khắc ghi công ơn sâu sắc của cha, mẹ và những người thân trong gia đình đã luôn ủng hộ và động viên con trong suốt đoạn đường dài về tinh thần cũng như tạo mọi điều kiện tốt nhất cho con học tập

Em xin gởi lời tri ân sâu sắc đến Cô Nguyễn Thị Hai, Cô đã chỉ dạy tận tình và tạo mọi điều kiện cho em trong quá trình học tập cũng như thực hiện đồ án tốt nghiệp

Em xin gởi lời cám ơn chân thành đến Thầy Hoàng Hưng, Thầy Nguyễn Tiến Thắng, Cô Nguyễn Hoài Hương, Cô Nguyễn Thị Sáu, Cô Đỗ Thị Tuyến, Thầy Bùi Đức Chí Thiện, Thầy Bùi Văn Thế Vinh, Thầy Phạm Minh Nhựt, Cô Trịnh Thị Lan Anh, Cô Nguyễn Thị Thu Hương cùng nhiều thầy cô đã cho em những giờ học lý thú

và bổ ích

Em xin cám ơn Thầy Huỳnh Văn Thành, Thầy Nguyễn Trung Dũng tổ thí nghiệm khoa Môi trường và Công nghệ sinh học đã tạo điều kiện cho em tiến hành thực nghiệm nội dung nghiên cứu của đồ án

Xin gởi lời chia sẽ đến các bạn Trần Hữu Ý, Võ Thị Mai, Phạm Thị Thùy Dương, Hồ Hoàng Đăng Khoa, Nguyễn Thị Tiền, Mai Thị Huỳnh Trân, Trần Mộng Hương Duyên, Lê Thị Mận đã đồng hành trong quá trình học tập và thực hiện đồ án tốt nghiệp

Tp Hồ Chí Minh, ngày 21 tháng 07 năm 2012

Sinh viên

Nguyễn Thanh Lâm

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN i

LỜI CẢM ƠN ii

MỤC LỤC iii

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii

DANH MỤC BẢNG viii

DANH MỤC HÌNH ix

MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết của đề tài 1

2 Mục tiêu của đề tài 2

3 Phạm vi và đối tượng nghiên cứu 2

3.1 Phạm vi nghiên cứu 2

3.2 Đối tượng nghiên cứu 2

4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 3

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cơ sở khoa học của đề tài 4

1.2 Virus đa diện nhân NPV 9

1.2.1 Sơ lược về virus đa diện nhân NPV 9

1.2.2 Vai trò của virus đa diện nhân NPV trong tự nhiên 9

1.2.3 Cơ chế tác động của virus đa diện nhân NPV 10

1.2.4 Ưu điểm và nhược điểm của virus đa diện nhân NPV 11

1.3 Quy trình sản xuất chế phẩm virus đa diện nhân NPV 12

1.3.1 Nhân sâu hàng loạt 12

1.3.2 Lây nhiễm virus đa diện nhân NPV lên vật chủ tạo chế phẩm 12

1.4 Sơ lược về sâu khoang 14

1.4.1 Đặc điểm sinh học, sinh thái sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 14

1.4.2 Tác hại và biện pháp phòng trừ sâu khoang ở Việt Nam 16

1.5 Những nghiên cứu trên thế giới và ở Việt Nam về sử dụng chất phụ gia bảo vệ virus NPV 18

1.5.1 Những nghiên cứu trên thế giới 18

1.5.2 Tình hình nghiên cứu trong nước 21

CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thời gian thực hiện đề tài 22

2.2 Địa điểm thực hiện đề tài 22

2.3 Dụng cụ và vật liệu thí nghiệm 22

2.3.1 Dụng cụ thí nghiệm 22

2.3.2 Vật liệu thí nghiệm 22

2.4 Nội dung nghiên cứu 24

3.5 Phương pháp nghiên cứu 24

2.5.1 Dịch virus NPV bổ sung một lượng nhỏ thuốc trừ sâu 24

2.5.2 Dịch NPV virus bổ sung Tween 80, rỉ đường 27

2.5.3 Dịch virus NPV bổ sung bột ngô, bột đậu nành 28

2.5.4 Dịch virus NPV bổ sung chất lọc tia cực tím dưới tác dụng động ánh sáng mặt trời 30 2.5.5 Dịch virus NPV bổ sung bột cao lanh và một số chất phụ gia 32 2.6 Phương pháp xử lý số liệu 33

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Tìm hiểu hiệu lực của virus NPV bổ sung hoạt chất hóa học 34 3.1.1 Đánh giá hiệu lực của virus NPV bổ sung thuốc trừ sâu nhóm Cypermethrin (Sherpa 25EC) 34 3.1.2 Đánh giá hiệu lực của virus NPV bổ sung thuốc trừ sâu nhóm Abamectin

(Alibaba 1.8EC) 36 3.1.3 Đánh giá hiệu lực của virus NPV bổ sung acid boric 37 3.2 Ảnh hưởng của Tween 80, rỉ đường tăng cường hiệu lực diệt sâu của virus NPV 40 3.2.1 Ảnh hưởng của Tween 80 đối với virus NPV 40 3.2.2 Ảnh hưởng của rỉ đường đối với virus NPV 40 3.3 Ảnh hưởng của bột ngô và bột đậu nành tăng cường hiệu lực diệt sâu của virus NPV 41 3.3.1 Ảnh hưởng của bột ngô đối với virus NPV tăng khả năng diệt sâu khoang 41 3.3.2 Ảnh hưởng của bột đậu tương đối với virus NPV tăng khả năng diệt sâu khoang 42 3.4 Tìm hiểu khả năng lọc tia cực tím bảo vệ virus NPV của trà xanh và rỉ đường duy trì hiệu lực diệt sâu của virus NPV 42 3.4.1 Chọn lọc tỷ lệ rỉ đường thích hợp bảo vệ virus NPV 42

3.5 Đánh giá hiệu lực của virus NPV khi bổ sung bột cao lanh và một số chất phụ gia

45

CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận 47

4.2 Kiến nghị 48

TÀI LIỆU THAM KHAO 49

PHỤ LỤC -1-

Phụ lục A: Các hình ảnh minh họa -1-

Phụ lục B: Bảng xử lý thống kê Statgraphics -7-

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 3.1: Ảnh hưởng của việc bổ sung hoạt chất Cypermethin vào chế phẩm NPV đến

tỷ lệ chết bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 34

Bảng 3.2: Ảnh hưởng của việc bổ sung hoạt chất Abamectin vào chế phẩm NPV đến tỷ

lệ chết bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 36

Bảng 3.3: Ảnh hưởng của việc bổ sung acid boric vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết

bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 39

Bảng 3.4: Ảnh hưởng của việc bổ sung Tween 80 vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết

bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 40

Bảng 3.5: Ảnh hưởng của việc bổ sung rỉ đường vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết

bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 41

Bảng 3.6: Ảnh hưởng của việc bổ sung bột ngô vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh

của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 42

Bảng 3.7: Ảnh hưởng của việc bổ sung bột đậu nành vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết

bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 42

Bảng 3.8: Ảnh hưởng của việc bổ sung cao lanh vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết

bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 46

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.1: Sơ đồ sản chế phẩm HaNPV phòng trừ sâu xânh 14

Hình 1.2: Sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 15

Hình 3.1: Ảnh hưởng của việc bổ sung hoạt chất Cypermethrin vào chế phẩm NPV đến thời gian ủ bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 35

Hình 3.2: Ảnh hưởng của việc bổ sung hoạt chất Abamectin vào chế phẩm NPV đến thời gian ủ bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 37

Hình 3.3: Ảnh hưởng của việc bổ sung Acid boric vào chế phẩm NPV đến thời gian ủ bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 39

Hình 3.4: Ảnh hưởng của việc bổ sung rỉ đường vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 41

Hình 3.5: Ảnh hưởng của việc bổ sung trà xanh vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh của sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 43

Hình 1: NPV dưới kính hiển vi với độ phóng đại 400 lần -1-

Hình 2: Chuẩn bị sâu khoang thí nghiệm -1-

Hình 3: Lá thầu dầu chuẩn bị sơ bộ -2-

Hình 4: Lá thầu dầu cảm nhiễm NPV bằng phương pháp nhúng lá -2-

Hình 5: Mẫu thí nghiệm bổ sung rỉ đường lọc tia cực tím của ánh sáng mặt trời -3-

Hình 6: Mẫu thí nghiệm bổ sung bột ngô, Tween 80, rỉ đường tăng cường khả năng ăn của sâu khoang và tăng độ bám dính lên lá của NPV -3-

Hình 7: Mẫu thí nghiệm NPV bổ sung Sherpa 25EC -4-

Hình 9: Sâu khoang chết do vi khuẩn -5-

Hình 10: Sâu khoang chết Sherpa 25EC -5-

Hình 11: Sâu khoang mẫu đối chúng -6-

Hình 12: Nuôi giữ giống sâu khoang bằng lá thầu dầu -6-

1 Tính cấp thiết của đề tài

Nông nghiệp là ngành kinh tế quan trọng của nước ta hiện nay với tổng sản lượng thu được hàng năm là rất lớn Năm 2010, tổng diện tích gieo trồng ở nước ta vào khoảng 12,285,500 ha, trong đó cây có thời gian sinh trưởng hàng năm là 9,855,500 ha

và cây lâu năm khoảng 2,431,000 ha (Viện quy hoạch và thiết kế nông nghiệp, 2002) (dẫn theo Hà Minh Tùng, 2005) [3] Với điều kiện thuận lợi, nông nghiệp Việt Nam được hình thành và phát triển trong điều kiện khí hậu khác nhau làm cho đa dạng sịnh học nông nghiệp trở nên phong phú Cùng với sự đa dạng của cây trồng thì sự đa dạng của sâu hại ở Việt Nam cũng rất lớn Hàng năm, thiệt hại do sâu hại gây ra khoảng 25 – 30% thậm chí có khi lên đến 40 - 50% Thành phần sâu hại khoảng 753 loài thuộc 99

họ và 10 bộ (Phan Kế Long, 2006) [21]

Sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) là loài sâu hại nghiêm trọng trên nhiều loại

cây trồng, chúng gây tổn thất lớn đến năng suất và sản lượng cây trồng Theo quan sát của Nguyễn Thị Chắt (1998), trên cây đậu đỗ ở miền Tây Nam Bộ thì mật độ sâu khoang cao vào vụ Đông Xuân lên tới 100 con/m2 và có thể làm trụi lá đậu trong vài ngày, còn ở miền Bắc mật độ sâu non cao từ tháng 4 – 10 và thành dịch có thể vào tháng 5 [11] Sâu khoang còn là đối tượng gây hại mạnh nhất trên cây lạc nước ta, khi mật độ cao có tới 70 - 80% diện tích lá bị hại, nhiều ruộng khi thu hoạch chỉ còn trơ trọi thân và cành (Ngô Thế Dân và cộng sự, 2000) [5] Ngoài cây lạc và đậu đỗ loài sâu hại nguy hiểm này phá hoại trên nhiều loại cây trồng ở nước ta như rau cải, rau muống,

cà chua…Nếu không có biện pháp phòng trừ kịp thời dễ phát triển thành dịch (Phạm Thị Hoa Lê, 2009) [19]

Theo Nguyễn Văn Huỳnh và cộng sự (2011), để quản lý tổng hợp sâu hại trên cây màu, các chuyên gia Trường Đại học Cần Thơ đã nghiên cứu virus SpltNPV để quản lý sâu khoang ăn tạp [17]

Nhưng khi phun NPV trừ sâu trên đồng ruộng, tia cực tím của ánh sáng mặt trời làm giảm hiệu lực của chúng Để duy trì hiệu lực của NPV khi phun ngoài đồng ruộng, theo nhiều tác giả cần trộn thêm các chất phụ gia vào dịch virus để lọc tia cực tím của ánh sáng mặt trời, tăng sức ăn của sâu, tăng lượng NPV vào cơ thể sâu và khả năng bám dính vào lá cây

Xuất phát từ thực tế trên, sinh viên tiến hành: “Chọn lọc chất phụ gia tạo chế

phẩm thuốc trừ sâu sinh học từ Nuclear polyhedrosis virus (NPV) quản lý sâu khoang ăn tạp (Spodoptera litura Fab.)” nhằm chọn lọc ra chất phụ gia thích hợp kết

hợp với NPV làm tăng cường hiệu lực diệt sâu khoang của chế phẩm

2 Mục tiêu của đề tài

Để có thể sản xuất và sử dụng NPV quản lý Spodopera litura có hiệu quả, phải

chọn lọc những chất phụ gia thích hợp có khả năng bảo vệ virus ngoài tự nhiên, cũng như kích thích sự thèm ăn và tăng độ bám dính của NPV khi phung trên đồng Bước đầu tiến hành thử nghiệm hiệu lực diệt trừ sâu khoang của NPV có phối trộn chất phụ gia Từ đó tìm ra chất phụ gia có tiềm năng cao để phối trộn với NPV tạo ra chế phẩm hoàn thiện có hiệu lực diệt trừ sâu tốt

3 Phạm vi và đối tượng nghiên cứu

3.1 Phạm vi nghiên cứu

Đề tài tập chung nghiên cứu các chất phụ gia có khả năng làm tăng hiệu lực diệt

trừ sâu khoang, các chất có thể bảo vệ NPV trước tia UV, tăng độ bám dính, kích thích

thèm ăn

3.2 Đối tượng nghiên cứu

- Đối tượng nghiên cứu tập trung vào sâu khoang (Spodopera litura F.) và virus

đa diện nhân ký sinh trên sâu khoang (Nucleo polyhedron virus)

- Các chất phụ gia như: cypermethrin, abamectin, acid boric, rỉ đường, trà xanh, Tween 80, bột cao lanh, bột ngô, bột đậu tương

4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

- Cung cấp những số liệu ban đầu về khả năng diệt sâu khoang (Spodoptera

litura Fab.) của NPV có bổ sung chất phụ gia, để làm cơ sở lựa chọn chất phụ gia thích

hợp tạo chế phẩm NPV sử dụng ra đồng ruộng phòng trừ sâu hại cây trồng có hiệu quả cao

- Kết quả nghiên cứu nói trên thực sự cần thiết, góp phần làm cơ sở cho việc xây dựng chế phẩm sinh học trong phòng trừ sâu khoang có hiệu lực cao, tiến tới xây dựng một nền nông nghiệp "sạch" không có sự hiện diện của các hoá chất BVTV độc hại

1.1 Cơ sở khoa học của đề tài

Sâu khoang (Spodopera litura Fab.) rất phổ biến còn được gọi là sâu thuốc lá, là

một loài ăn tạp gây hại nghiêm trọng cho cây trồng (Trang và S Chaudhari, 2002) [36]

Nó được ghi nhận lần đầu tiên ở huyện Nelson gây hại cho cây thuốc lá (Cottier & Gourlay 1955) [24] Đến năm 1977, Lynette cho biết nó xuất hiện với số lượng lớn ở Northland và Auckland trong vườn nhà và trên các cây linh lăng, cải dầu [24] Chúng phân bố rất rộng rãi, bên cạnh Ấn Độ còn hiện diện ở Thái Lan, Phillippines, Australia, Hàn Quốc, Việt Nam, Nhật Bản, Trung Quốc, Iran, Ai Cập, Bahrain, Fiji, và Formosa (Singh và Jalali, 1997) [37] Nó sống trên 200 loài cây trồng khác nhau như cây khoai tây, cây bắp, cây bông vải, cây thuốc lá, cây cải, cây cà chua, các loại đậu đỗ… (Nguyễn Thị Chắt , 1998) [11] và bùng phát thành dịch hại sau khi mưa lớn hoặc trời nắng nóng kéo dài (Trang, S Chaudhari, 2002) [32]

Kết quả nghiên cứu của Hill và Waller (1985), đã chỉ ra rằng trên cây lạc của vùng nhiệt đới có 8 loài sâu hại chính và 40 loài gây hại thứ yếu Những loài gây hại

đặc biệt nguy hiểm như sâu khoang (Spodoptera litura Fab.), sâu xám (Agrotis

ypsilon), sâu xanh (Heliothis armigera) (dẫn theo Nguyễn Thị Thu, 2008) [14]

Tác giả Wightman, J A (1990), cho biết trên lạc tác hại của sâu khoang phụ thuộc vào mật độ và giai đoạn sinh trưởng của cây Nếu sau gieo 10 ngày, mật độ là 1 con/cây, diện tích lá bị ăn là 47% thì năng suất sẽ giảm 22% Nhưng nếu mật độ 10 con/cây thì năng suất sẽ giảm là 56% Song ở giai đoạn cây hình thành củ, cũng với mật độ như trên thì năng suất giảm ít hơn nhiều (9% và 16% ứng với mật độ 1 con/cây

và 10 con/cây) Còn theo Nguyễn Thị Chắt điều tra trên cây lạc tại Trảng Bàng, Tây Ninh, trong vụ Đông Xuân sớm 2004 – 2005 thì sâu khoang xuất hiện khi cây 20 ngày sau gieo và đạt cao nhất là 16 con/m2, sau đó mật độ giảm đi nhưng gây hại đến cuối

vụ Sâu xanh Heliothis spp xuất hiện muộn hơn sâu khoang khi cây đậu được 30 ngày

sau gieo, mật số thấp 0,2 con/m2 [13]

Theo Hồ Khắc Tín (1982), sâu khoang là một trong 10 loài gây hại phổ biến trên đậu tương và đã gây thành dịch ở nhiều vùng trồng đậu tương (dẫn theo Nguyễn Thị Thu, 2008) [14] Ngô Thị Lam Giang đã ghi nhận được 31 loài côn trùng gây hại trên đậu tương tại Trảng Bom, Đồng Nai trong vụ Thu Đông 2004, trong đó gây hại nặng

nhất là sâu cuốn lá, sâu đo xanh, bọ trĩ và sâu khoang Spodoptera litura Trong điều

kiện canh tác của nông dân, sâu khoang phát triển và tạo 2 đỉnh cao về mật độ Đỉnh thứ nhất vào 40 ngày sau gieo với mật độ 10,5 con/m2, đỉnh thứ 2 kéo dài tới 70 ngày sau gieo với mật độ 7 con/m2 [13]

Một tác hại lớn của thuốc hóa học trừ sâu mà hiện nay trên toàn thế giới quan tâm là: việc sử dụng thuốc hóa học trừ sâu liên tục đã làm tăng sự chọn lọc gen của quần thể sâu hại và làm cho sâu ngày càng chịu đựng với thuốc Các nghiên cứu ở Mỹ

đã cho biết có rất nhiều loài sâu ở Mỹ đã kháng thuốc hóa học trừ sâu (Burrows, T.M., 1983) Sâu khoang ở Ấn Độ và Ai Cập đã kháng hầu hết các loài thuốc hóa học trừ sâu (Ramakrishnan, N và cộng sự, 1984) Tính đến năm 1986, trên thế giới đã có 447 loài sâu kháng thuốc, trong đó có 264 loài phá hại trong nông nghiệp (Nguyễn Công Thuật,1996) [7]

Tồn dư của thuốc hóa học trừ sâu đã gây ô nhiễm lớn cho nguồn nước, nhiễm độc cho thức ăn Frisbie, R và cộng sự (1997), cho biết sự phun thuốc hóa học trừ sâu

ở Mỹ đã làm nhiễm độc nặng cho nguồn nước và thức ăn Ở Việt Nam, Bùi Sĩ Doanh

và cộng sự (1995), cũng cho biết dư lượng thuốc Cypermethrin trên các loài đậu đỗ đã lên tới 0,4 – 0,7 mg/kg, vượt xa so với mức tồn dư cho phép (dẫn theo Ngô Trung Sơn, 1998) [6]

Với những lý do trên, các nhà khoa học trên thế giới đều nhất trí rằng: để phòng trừ sâu hại, không thể chỉ sử dụng bất cứ một biện pháp đơn lẽ nào mà phải sử dụng hệ thống quản lý dịch hại tổng hợp (IPM) Hội nghị tư vấn Châu Á – Thái Bình Dương

của FAO, năm 1992 đã khẳng định, “đấu tranh sinh học là nền tảng của chương trình

quản lý dịch hại tổng hợp” (dẫn theo Nguyễn Hoàng Nam, 2011) [8]

Trong biện pháp sinh học, virus gây bệnh cho sâu là tác nhân phòng trừ sâu hại

vô cùng quan trọng Ngoài tự nhiên, virus ký sinh hầu hết các loài sâu hại Đến nay người ta đã phân lập, mô tả được bệnh virus ở 800 loài côn trùng, riêng Baculovius người ta đã phân loại được 300 loài ký sinh trên côn trùng bộ cánh phấn, cánh màng và hai cánh (Jayarajs, 1971)

Theo Price D và cộng sự (1972), virus côn trùng là nhân tố phòng trừ sinh học quan trọng vì phổ ký chủ của chúng hẹp, lại dễ dàng sản xuất với số lượng lớn và độ thuần khiết cao Hơn nữa chưa có sự ghi nhận nào về sự truyền bệnh vào động vật có xương sống, mặc dù người ta đã tiêm rất nhiều virus vào các loài thú

Virus gây bệnh côn trùng đã được Philips mô tả từ năm 1720 Virus gây bệnh tằm đã được Louis Paster nghiên cứu từ năm 1861 Bệnh virus trên sâu xanh cũng đã được Mally phát hiện năm 1891 tại Nam Phi, song đến năm 1936 Parson mới xác định được nguyên nhân, từ đó việc nghiên cứu sử dụng virus trừ sâu phát triển mạnh (dẫn theo Ngô Trung Sơn, 1998) [6]

Từ những năm 1960 thế giới đã có những nghiên cứu về virus NPV, bao gồm các nghiên cứu cơ bản về tính độc hại của nó đối với môi trường, hiệu lực diệt sâu và quá trình sản xuất chúng (dẫn theo Dương Trình, 2003) [2]

Theo Rabindra và Jayaraj việc sử dụng NPV với nồng độ 250 – 500 LE/ha ở Ấn

Độ cho kết quả diệt sâu tương đương thuốc hóa học thông dụng hoặc sau khi dùng NPV ở mức 250 LE/ha mà phun tiếp Endosulfan với một phần hai liều lượng khuyến cáo thì cho kết quả bằng hai lần phun NPV ở mức 500 LE/ha

Còn ở Trung Quốc các nhà khoa học (1977), kết luận hiệu lực diệt sâu Heliothis

của NPV cao hơn Parathion và khi thử nghiệm ở nồng độ 2x106 PIB thì hiệu lực diệt sâu là 98,6% (dẫn theo Dương Trình, 2003) [2]

Tại Mỹ, khi dùng NPV ở mức độ 300 LE/ha trên bông sẽ làm giảm giá thành hơn khi sử dụng thuốc hóa học (Anon, 1977 và Ignoffo 1979) [6]

Ở nước ta, các nghiên cứu về virus côn trùng để trừ sâu hại được bắt đầu từ những năm tám mươi Trong thời gian này, các nghiên cứu tập trung vào nhóm virus

đa diện nhân NPV

Năm 1985, Trung Tâm Nghiên Cứu Cây Bông Nha Hố đã thu thập mẫu từ đồng ruộng về phân lập và sản xuất thử nghiệm chế phẩm NPV sâu xanh Kết quả cho thấy chế phẩm NPV có hiệu lực tương đương với Sherpa và có thể thay thế cho thuốc hóa học xử lý các ổ dịch bệnh

Sau thành công của chế phẩm NPV cho sâu xanh, gần đây các cơ quan nghiên cứu khoa học trong lĩnh vực bảo vệ thực vật đã tiến hành nghiên cứu chế phẩm NPV cho sâu xanh da láng, đến nay đã đưa ra phun thử nghiệm ở nhiều địa phương như: Long An, Tây Ninh, Bình Dương, Ninh Thuận, Lâm Đồng, Sóc Trăng… (Nguyễn Thơ, 1999) [15]

Ưu điểm quý giá của NPV theo Zhu, G.K và cộng sự (1990), là không ảnh hưởng xấu đến các loài thiên địch [6] Qua kết quả nghiên cứu trên 18 loài động vật có xương sống, 36 loài động vật không xương sống và 24 loài cây trồng khác nhau

Ignoffo (1975), kết luận NPV trên Heliothis là an toàn để sử dụng cho các loài cây

lương thực và an toàn cho người và gia súc Bên cạnh đó qua theo dõi 25 thế hệ của

He zea và 22 thế hệ của He armigera, các tác giả Inoffo và Allea (1972), Whilock

(1977), đã thấy rằng các loài Heliothis là không kháng NPV (dẫn theo Dương Trình,

2003) [2]

Ở Mỹ, các nguyên cứu trong phòng cũng cho thấy chuồn chuồn cỏ và các loài ong ăn thịt không bị nhiễm NPV (Heinz, K.M và cộng sự,1995) Ngoài tác động diệt sâu tức thời, NPV còn có khả năng truyền sang thế hệ sau (Khaire, V.M và cộng sự, 1986) Do đó có nhiều ưu điểm NPV đã được nghiên cứu để trừ sâu hại trên nhiều loại cây trồng (dẫn theo Ngô Trung Sơn, 1998) [6]

Mới đây tại Mỹ, người ta tìm ra được một loại virut đa diện nhân thu từ sâu đo hại cần tây, loại này có phổ ký chủ rộng, có khả năng lây bệnh cho 31 loài sâu hại thuộc 10 họ của bộ Lepidoptera (Hostetter, D.L.và cộng sự, 1991) Thành công này đã tạo điều kiện thuận lợi cho con người trong việc sản xuất và sử dụng NPV

Nhiều công trình nguyên cứu về nhân nuôi sâu ký chủ và pha trộn NPV với các loại thuốc trừ sâu khác, các chất phụ gia khác để trứ sâu cũng được tiến hành, bước đầu

đã có kết quả trong việc hạ giá thành chế phẩm NPV, tăng hiệu lực diệt sâu và rút ngắn thời gian ủ bệnh của NPV, kết quả này sẽ góp phần quan trọng trong việc triển khai sử dụng NPV trừ sâu hại

Tại Việt Nam, sâu hại là một trong những đối tượng nghiêm trọng đối với cây trồng Dó đó, để phòng trừ sâu hại con người đã dùng rất nhiều biện pháp, một trong những biện pháp được nông dân áp dụng nhiều nhất là biện pháp hóa học Tuy nhiên, việc dùng thuốc hóa học thường xuyên và liên tục, không đúng cách sẻ để lại nhiều hậu quả nghiêm trọng như hình thành các loài sâu kháng thuốc, đặc biệt là sâu khoang

(Spodoptera litura Fab.), sâu xanh (Helicopverpa armigera) sâu xanh da láng (Spodoptera exigua), xuất hiện nhiều loài sâu hại mới, tiêu diệt những loài thiên địch

của sâu hại cây trồng và để lại dư lượng độc hại trong sản phẩm nông nghiệp sau thu hoạch, gây ô nhiễm môi trường sống Vì vậy, việc áp dụng hệ thống phòng trừ tổng hợp trong đó có biện pháp sử dụng NPV phòng trừ sâu khoang gây hại thay thế cho việc sử dụng đơn độc thuốc hóa học là con đường có triển vọng nhất

1.2 Virus đa diện nhân NPV

1.2.1 Sơ lược về virus đa diện nhân NPV

Virus đa diện nhân Nuclear polyhedrosis virus (NPV) thuộc nhóm Baculovirus Cấu tạo của NPV gồm nhiều hạt virus trong 1 polyhedron, hạt virus có hình gậy và gồm có một hoặc nhiều nucleocapsid được một lớp vỏ bao bọc quanh, nucleocapsid gồm một phức hợp AND – Protein (Deoxyribo nucleo protein – DNP) được một lớp vỏ protein bao quanh, lớp vỏ ấy gọi là capsid Nếu bên trong vỏ chỉ có 1 nucleocapsid thì gọi là NPV một nucleocapsid (Single nucleocapsid NPV – SNPV) Nếu bên trong vỏ có nhiều nucleocapsid thì gọi là NPV nhiều nucleocapsid (Multiple nucleocapsid NPV –

MNPV) Theo thống kê chưa đầy đủ, trên thế giới có 284 loài côn trùng bị NPV xâm nhiễm, chiếm 40% số lượng côn trùng bị nhiễm virus, trong đó có 243 loài thuộc bộ cánh vẩy, 21 loại thuộc bộ cánh màng, 9 loài thuộc bọ hai cánh, 4 loài thuộc cánh cứng, 4 loài thuộc cánh thẳng và 2 loài thuộc cánh nửa (dẫn theo Chu Thị Thơm, 2006)

[1]

Kết quả nghiên cứu ở Thái Lan cho thấy NPV là nguyên nhân gây chết tự nhiên

chủ yếu của sâu đo xanh Trichoplusia ni trên cải bắp Tại Ấn Độ, sâu xanh H

armigera trên bông thường bị chết bệnh do NPV với tể lệ 6,9 – 24,5% NPV được đánh

giá là tác nhân sinh học quan trọng trong kìm hãm số lượng sâu xanh H armigera ở

Trung Quốc, Hoa Kỳ, Philippine (Bilipate, 1988; Coppel và cộng sự, 1977; Navasero

và nnk, 1993; Tipvadee, 1983)

Kết quả điều tra cho thấy NPV có mặt thường xuyên trong quần thể các loài sâu hại Ở điều kiện miền Bắc Việt Nam chúng phát sinh gây bệnh cho côn trùng từ tháng

4 – 9 hàng năm Sâu đo xanh Anomis flava hại đay thường bị nhiễm bệnh do NPV khá

cao vào tháng 6 – 7 hàng năm Tỷ lệ chết do NPV của sâu đo xanh đạt khoảng 11 –

khoang Spodoptera litura trên lạc bị chết bệnh do NPV khá cao, có khi tới 50 – 60% Trên bông ở phía Nam (Ninh Thuận, Đồng Nai) virus NPV là yếu tố gây chết tự nhiên trên sâu xanh khá quan trọng Tỉ lệ sâu xanh bị chết bệnh tự nhiên do NPV đạt 9 – 10% Tại Đắc Lắc, nhiều khi sâu xanh bị chết ở tự nhiên do NPV đạt tới 16% Sâu keo

da láng Spodoptera exigua trên hành tây ở Ninh Thuận bị bệnh do NPV, chết với tỷ lệ không cao thường chỉ khoảng 0,4 – 16,6% (N.V Cảm, 1991; N T Hai, 1996; N T Hồng, 1995; P.H Nhượng, 1996; N T Sơn, 1998)

Virus NPV xâm nhập vào cơ thể sâu qua đường tiêu hóa Khi virus vào đến ruột giữa dưới tác dụng của dịch ruột (pH > 9) các thể vùi đa diện nhân nhanh chóng hòa tan vào môi trường kiềm và giải phóng ra các nucleocapsid Các nucleocapsid này sẽ gắn vào các tế bào biểu bì, di chuyển qua lớp tế bào chất và tháo bỏ lớp vỏ khi đi vào nhân Quá trình nhân lên của virus bên trong nhân sẽ tạo ra các nucleocapsid con và mọc qua màng tế bào nhiễm đi vào trong hệ tuần hoàn của vật chủ Hệ thống tuần hoàn

sẽ giúp cho các virus đi đến được các mô khác nhau của vật chủ để gây ra quá trình xâm nhiễm tiếp theo Các nucleocapsid sau đó được bao lại tạo thành thể vùi trong nhân hoặc tiếp tục đi xâm nhiễm các tế bào khác của vật chủ Quá trình này có thể tóm tắt qua 3 giai đoạn như sau:

- Giai đoạn tiềm ẩn: Kéo dài 6 đến 12 giờ, đây là giai đoạn các thể vùi PIB xâm nhập vào trong tế bào, các virion được phóng ra, chúng tự đính vào các vị trí thích hợp trên màng nhân tế bào thành ruột của sâu

- Giai đoạn sinh trưởng: Giai đoạn này kéo dài 12 – 48 giờ, đây là giai đoạn tăng nhanh của các virion mới trong dịch ruột của sâu, những sâu tuổi nhỏ chỉ sau 32 giờ trong cơ thể sâu đã chứa đầy các virion trần

- Giai đoạn cuối: Giai đoạn này kéo dài 2 – 5 ngày, ở giai đoạn này xảy ra sự tạo thành thể vùi, nghĩa là các virion được bao bọc bởi các protein

Sâu bị nhiễm bệnh trong thời gian 2 – 3 ngày đầu, không có biểu hiện triệu chứng bệnh rõ rệt và không có sự thay đổi về sức ăn Các ngày sau, các đốt thân căng phồng và mọng nước Cơ thể sâu chuyển sang màu trắng đục, da bở dễ bị vỡ Trước khi chết sâu thường trèo lên ngọn cây, trúc đầu xuống phía dưới Dịch trắng chảy ra ngoài và sâu chết Nhiều trường hợp sâu nhiễm NPV, nhưng với lượng PIB cực nhỏ, không đủ để gây chết ở giai đoạn sâu non, tuy nhiên khi chuyển sang giai đoạn nhộng hoặc trưởng thành, làm giảm khả năng sinh sản, đẻ rất ít Nhiều trường hợp do nhiễm NPV sâu không làm nhộng và vũ hóa được Con trưởng thành đã nhiễm NPV khi đẻ trứng trên mặt vỏ trứng có các thể PIB bám vào và sâu non mới nở có tập tính ăn lại vỏ trứng Như vậy thế hệ này hoàn toàn bị chết di virus từ giai đoạn tuổi 1 - 2 Xác sâu chết do virus lại là thức ăn hấp dẫn đối với sâu sống Nhờ vậy mà sự lan truyền dịch hại trên đồng diễn ra mạnh và kéo dài

1.2.3 Ưu điểm và nhược điểm của virus đa diện nhân NPV

1.2.3.1 Ưu điểm

- Lợi ích về kinh tế: Theo Ngô Trung Sơn (1998) giá một lần phun thuốc NPV cao hơn thuốc hóa học, nhưng số lần phun ít hơn nên giá phòng trừ sâu toàn vụ bằng NPV thấp hơn so với thuốc hóa học, phun NPV trừ sâu trên diện rộng có xu hướng cho năng suất và hiệu quả kinh tế cao hơn thuốc hóa học Đối với những vùng đã nhiều năm dùng thuốc hóa học, sâu không giảm mà còn có hiện tượng bùng phát thành dịch thì sử dụng NPV rất hiệu quả [6] Trường hợp mật số sâu cao, sau khi phun NPV, sâu chết nông dân có thể tiếp tục thu thập sâu chết, hòa với nước phun trở lại để tiếp tục trừ sâu mà không mất tiền (Nguyễn Thơ, 1999) [15]

- Hiệu quả về môi trường: NPV giết sâu hại nhưng bảo vệ quần thể thiên địch, đảm bảo cân bằng sinh thái tự nhiên Dùng NPV tránh được hiện tượng sâu kháng thuốc và không để lại dư lượng trong nông sản, không độc cho người và gia súc, không

- Hiệu quả về mặt xã hội: Việc nghiên cứu tạo ra những chủng NPV có độc tính cao, xây dựng quy trình sản xuất sẽ được thực hiện bởi các nhà khoa học Sau đó chuyển giao cho địa phương sản xuất NPV ở quy mô vừa và nhỏ, chúng ta sẽ sử dụng nguồn nhân lực dồi dào ở nông thôn, giúp nông dân dễ dàng tiếp nhận những tiến bộ của khoa học kỹ thuật trong sinh học (Nguyên Thơ, 1999) [15]

1.2.3.2 Nhược điểm

- Thời gian ủ bệnh còn tương đối dài thường từ 5 – 6 ngày

- NPV thường mang tính chuyên hóa cao, thông thường mỗi loại NPV chỉ diệt được một loại sâu

- NPV dễ bị mất hiệu lực dưới tác động của tia tử ngoại và nhiệt độ cao

1.3.1 Nhân sâu hàng loạt

- Bước 1: Ghép cặp bướm mới vũ hóa 1 – 2 ngày, đảm bảo như điều kiện tự nhiên có cây cho bướm đậu để đẻ, có thể làm bằng giấy gấp Thức ăn cho bướm là nước đường 3% Sau giao phối 1 – 2 ngày, hằng ngày thu trứng, trứng để riêng từng ngày, thu trứng 3 – 5 ngày loại bỏ

- Bước 2: Để riêng trứng từng ngày vào trong tủ định ôn nơi có điều kiện ôn, ẩm

độ thích hợp, hằng ngày theo dõi cho đến khi trứng nở ra sâu non

- Bước 3: Sâu non mới nở được nuôi bằng thức ăn nhân tạo ngay Riêng sâu xanh bông thì tuổi nhỏ 1 – 2 nuôi tập thể, đến sâu tuổi 3 tách riêng để tránh cắn lẫn nhau, khi sâu đạt tuổi 4 có thể nhiễm virus hoặc nuôi tiếp cho đến khi vào nhộng

- Bước 4: Giữ nhộng trong điều kiện thích hợp để nhộng phát triển tốt, lưu ý là thu nhộng từng đợt để vũ hóa cùng đợt

1.3.2 Lây nhiễm virus đa diện nhân NPV lên vật chủ tạo chế phẩm

- Thu sâu chết bệnh: Thời gian sâu chết bệnh phụ thuộc vào nhiệt độ và ẩm độ trong quá trình lây nhiễm, nhưng thích hợp nhất là 28 – 300C và ẩm độ trên 80% Sau khi nhiễm 3 – 5 ngày thì sâu chết do NPV, phải tiến hành thu ngay vào trong lọ tối, đưa vào lạnh để giữ cho khỏi nhiễm tạp trong vài ngày ủ bệnh, tuy điều kiện cụ thể có thể

để lâu hơn

- Nghiền và ly tâm: Việc tách chiết dịch virus được thực hiện qua máy ly tâm, lấy NPV thu được trên sâu chết bệnh từ tủ lạnh ra, đem nghiền nhỏ (hỗn hợp 3 phần nước với 1 phần sâu chết bệnh) rồi lọc qua vải mỏng lọc bỏ bã xác sâu để thu dịch, ly tâm dịch 15,000 – 20,000 vòng/ phút, khoảng thời gian từ 15 – 20 phút, lấy phần tinh thể trắng lắng đọng là virus và loại bỏ nước phần trên

- Hỗn hợp tạo chế phẩm virus:

+ Chế phẩm dạng dịch thể: Trước khi tạo chế phẩm phải kiểm tra và đếm số lượng PIB, sau đó cho thêm các chất phụ gia như chất bám dính, chất chống thối, chất kháng sinh, chất chống tia tử ngoại, … cuối cùng đóng chai tối màu để bảo quản sử dụng

+ Chế phẩm dạng bột: Sau khi thu dịch virus tinh, đem sấy phun nhẹ hoặc đông khô rồi phối chế với các chất phụ gia để tạo chế phẩm dạng bột, phương pháp tạo chế phẩm dạng bột đòi hỏi hàm ẩm từ 7 – 10% để bảo quản trong thời gian dài hơn dạng dịch thể

Hình 2.1 Sơ đồ sản chế phẩm HaNPV phòng trừ sâu xânh

1.4.1 Đặc điểm sinh học, sinh thái sâu khoang (Spodoptera litura Fabr.)

Ghép cặp bướm

Tách nuôi sâu riêng(tuổi 3- 4)

Thu sâu giống

Giữ nhộng

Thu trứng

Nuôi sâu tập thể (tuổi 1 – 2)

Nuôi nhân ký chủ sâu xanh

Thêm chất phụ gia Hỗn hợp tạo chế phẩm

Ly tâm để thu dịch virus tinh Nghiền, lọc sâu chết bệnh Thu sâu chết do HaNPV Nhiễm HaNPV lên sâu

Đóng chai, bảo quản, sử dụng

Đóng gói, bảo quản, sử dụng Lây nhiễm HaNPV

- Sâu non: Có 6 tuổi Đẫy sức dài 38 – 51 mm, hình ống tròn, phần lớn có màu nâu, một số ít màu lục xanh Vạch lưng và vạch phụ lưng màu vàng Trên mỗi đốt dọc theo vạch phụ lưng có một vệt đen hình bán nguyệt trong đó vệt ở đốt thứ 1 và thứ 8 của bụng là lớn nhất

- Nhộng: Dài 18 – 20 mm, màu nâu tươi hoặc nâu tối, hình ống tròn Mép trước đốt bụng thứ 4 và vòng quanh đốt bụng thứ 5, 6, 7 có nhiều chấm lõm Cuối bụng có một đôi gai ngắn

Hình 2.1 Sâu khoang (Spodoptera litura Fab.)

1.4.1.2 Tập tính sinh sống và quy luật phát sinh gây hại

- Ngài sâu khoang thường vũ hoá vào buổi chiều và lúc chập choạng tối bay ra hoạt động Ngài thường đẻ trứng ở mặt dưới lá, số lượng trứng đẻ trung bình của ngài cái là 2000 - 2600 trứng

- Sâu non mới nở (tuổi 1) sống tập trung với nhau, lớn lên (tuổi 4) có phản ứng đối với ánh sáng rõ rệt, lẩn trốn ánh sáng vào ban ngày

- Sâu khoang phát sinh quanh năm trên rau Mỗi năm có 7 đỉnh cao mật độ trên đồng ruộng, thời gian giữa 2 đỉnh cao là 20 - 26 ngày

1.4.2 Tác hại và biện pháp phòng trừ sâu khoang ở Việt Nam

1.4.2.1 Tác hại của sâu khoang

Kết quả nghiên cứu sâu hại lạc năm 1991 - 1992 của Lê Văn Thuyết và cộng sự (1993) cho thấy: sâu khoang là 1 trong 15 loài sâu hại chính trên cây lạc, mật độ giao động từ 3,2 - 73 con/100 cây, về cuối vụ vẫn còn khoảng 60 con/100 cây Trên đậu tương sâu khoang thường gây thành dịch (Lương Minh Khôi, 1985)

Ở miền Bắc Việt Nam vào vụ lạc xuân sâu khoang thường đạt đỉnh cao về mật độ vào đầu tháng 5 (4 - 6 sâu non/cây) và có thể gây hại tới 30% diện tích lá Ở miền Nam trong vụ đông xuân sâu khoang phát triển đạt đỉnh cao vào khoảng cuối tháng 1 đầu tháng 2, trong trường hơp không áp dụng các biện pháp phòng trừ diện tích lá thường

bị hại tới trên 50% (Ngô Thế Dân và cộng sự, 2000)

Kết quả nghiên cứu của Đặng Thị Dung (1999) tại Hà Nội và các vùng phụ cận sâu khoang là một trong số 7 loài sâu hại chính trên đậu tương, xuất hiện thường xuyên trên các cánh đồng trồng đậu tương với mật độ cao

1.4.2.2 Biện pháp phòng trừ

Để phòng trừ sâu khoang đa số người dân sử dụng thuốc trừ sâu hoá học, với liều lượng phun và số lần phun cao hơn nhiều so với yêu cầu thực tế Đã có nhiều công trình nghiên cứu về biện pháp phòng trừ sâu khoang Trong đó, biện pháp quản dịch

hại tổng hợp (IPM) được coi là biện pháp hữu hiệu nhất cả về mặt kinh tế và môi trường

Nghiên cứu xác định tỷ lệ thành phần hoá học thích hợp của pheromone sâu

khoang (Spodoptera litura) tổng hợp để thu hút trưởng thành sâu khoang vào bẫy Với

tỷ lệ liều lượng Hexal 1 và Hexal 2 là 97/3 microlit cho một mồi hiệu lực hấp dẫn sâu khoang trên đồng ruộng cao nhất, ngày đỉnh cao (ngày thứ 8 sau đặt bẫy) có thể đạt tới 18con/bẫy và thời gian tồn tại hiệu lực là tới 20 ngày (Lê Thanh Hà, Nguyễn Thị Chúc Quỳnh, Lê Văn Trịnh, 2008)

Kết quả nghiên cứu của Lương Minh Khôi và cộng sự (1985) cho thấy ong

ký sinh trên sâu khoang hại đậu tương Microplitis prodeniae là một loài ký sinh nội

thực thụ, nó thể hiện vai trò rõ nét trong việc điều hoà chủng quần sâu khoang

Phạm Thị Vượng (1996) nghiên cứu về ký sinh sâu non sâu khoang hại lạc tại Nghệ An, Hà Tây, Hà Bắc mới chỉ phát hiện được 5 loài ong và ruồi ký sinh thuộc 3 họ của 2 bộ Bộ Hymenoptera có 2 loài thuộc họ Ichneumonidae, bộ Diptera có 3 loài thuộc họ: Họ Tachinidae có 2 loài, họ Phoridae có 1 loài Tỷ lệ ký sinh giao động từ 1,99% đến 4,91% cao nhất vào trung tuần tháng 5, thấp nhất ở Hà Bắc rồi đến Nghệ

An và cao nhất ở Hà Tây Nghiên cứu cho thấy tỷ lệ ký sinh thấp nhất ở những vùng nông dân phun thuốc nhiều lần trên một vụ

Theo kết quả điều tra của Nguyễn Thị Hiếu (2004) ở vùng đồng bằng Nghệ An trên sinh quần ruộng lạc sâu non sâu khoang có 8 loài côn trùng ký sinh Trong đó, 6

loài ong ký sinh (Bộ Hymenoptera) và 2 loài ruồi ký sinh (Bộ Diptera) Loài Microlitits

prodenidae Rao et Chad và Microlitits sp là loài phổ biến và có vai trò quan trọng trong

hạn chế số lượng sâu non sâu khoang trên ruộng lạc

Sâu khoang rất thích đẻ trứng trên lá hướng dương, dựa vào đặc điểm này các chuyên gia ICRISAT đã khuyến cáo sử dụng hướng dương trồng xen với lạc để làm cây dẫn dụ sâu khoang đến đẻ trứng rồi thu trứng và sâu non hoặc chỉ cần phun thuốc

dân ở tỉnh Nghệ An và Tây Ninh đã thu được hiệu lực cao Có thể thu thập hàng ngàn sâu non mới nở cùng nhiều ổ trứng sâu khoang từ mỗi cây hướng dương trồng xen trên ruộng lạc, bởi vậy mật độ sâu mới giảm (Nguyễn Thị Hiếu, 2004)

Các nguồn vi sinh vật (vi khuẩn, nấm, virus) có ích cũng được nghiên cứu để phòng trừ sâu khoang như chế phẩm NPV (Nuclear polyhedrosis virus) dưới dạng bột khô thấm nước khi phun ngoài đồng ruộng với liều lượng là 20g/bình, hiệu lực trừ sâu khoang đạt 53,1% sau 5 ngày phun thuốc và 68,7 - 71,6% sau 7 - 10 ngày phun thuốc.(Hoàng Thị Việt và cộng sự, 2002)

1.5 Những nghiên cứu trên thế giới và ở Việt Nam về sử dụng chất phụ gia bảo vệ virus NPV

1.5.1 Những nghiên cứu trên thế giới

Khi phun NPV trừ sâu trên đồng ruộng, tia cực tím của ánh sáng mặt trời là yếu

tố quan trọng nhất làm giảm hiệu lực của chúng Người ta cũng phát hiện ra tia sáng có bước sóng ngắn 215 – 216 nm có khả năng khử hoạt tính PIB của NPV (Bullok, H.R., 1967) Ignoffo, C.M và cộng sự (1971) đã phát hiện: dưới ánh sáng mặt trời, thể vùi đa diện bi khử hoạt tính là do các peroxide hoặc các gốc peroxide sản sinh từ các amino acid bị chiếu bức xạ bởi tia X (dẫn theo Ngô Trung Sơn,1998) [6]

Để duy trì hiệu lực của NPV khi phun ngoài đồng ruộng, nhiều tác giả đã nghiên cứu trộn thêm các chất phụ gia vào dịch để lọc tia cực tím của ánh sáng mặt trời, tăng sức ăn của sâu, tăng lượng NPV vào cơ thể sâu

Ignoffo C.M và cộng sự (1971) cho biết: các sản phẩm protein, phẩm màu, thuốc nhuộm, than hoạt tính, có khả năng lọc tia cựa tím bảo vệ NPV [30] Còn theo Arivudainambi và cộng sự (2000), đồng amonium nitrat và đồng sulphate cũng có chức năng tương tự [23] Các nghiên cứu của Rabindra và cộng sự (1989) tại Ấn Độ cho kết quả: sữa, trứng tươi, nước dừa, đường đen, bột hạt bông, dầu lạc trộn với HaNPV khi phun ra đồng ruộng làm tăng hiệu lực diệt sâu xanh của HaNPV, đặc biệt là đường đen