Bài giảng điện di hemoglobin chọn lọc

Định nghĩa Điện di là sự di chuyển của các phân tử tích điện trong một môi trường điện. Các yếu tố ảnh hưởng Tốc độ di chuyển của các phân tử phụ thuộc vào: điện tích, kích thước và hình dạng của phân tử, pH của dung dich đệm, đặc điểm của môi trường hỗ trợ, khung thời gian cho phương pháp tiến hành và nhiệt độ của hệ thống hoạt động. Ứng dụng: điện di hemoglobin Acid (Citrate agar) ở pH 6,2 Các phân tử Hb tách ra dựa trên sự khác biệt về điện tích và khả năng gắn kết với agar. Thường được sử dụng để phân biệt các Hb bất thường cùng di chuyển với nhau trên gel cellulose. (Vd HbS với HbD và HbG, HbC với HbE). Ở pH acid HbC tách ra trừ E và O; và HbS tách từ D và G. IEF Isoelectric Focusing: tập trung đẳng điện HPLC – High Performance Liquid Chromatography: Sắc ký lỏng hiệu năng cao Capillary electrophoresis (CE) Điện di mao quản

BN 10 11 RBC 4.95 5.1 6.68 6.45 5.76 5.58 5.73 4.32 6.65 6.41 4.93 HGB 10.0 9.5 13.5 11.8 10.1 11.0 11.0 10.7 14.4 10.9 9.4 HCT 32.4 32.9 46.3 38.1 34 34.3 36.3 36.2 40.8 39.4 31.5 MCV 65.5 64.5 69.3 59.1 59 61.6 63.4 83.8 61.4 61.5 63.9 MCH 20.2 18.6 20.2 18.3 17.5 19.7 19.2 24.8 21.7 17 19.1 MCHC 30.9 28.9 29.2 31 29.7 32 30.3 29.6 35.3 27.7 29.8 RDW 12.9 14.4 13 13.8 14.4 12.9 13.7 13.5 12 13.6 13 BN RBC HGB HCT MCV MCH MCHC RDW Đột biến gen 4.95 10.0 32.4 65.5 20.2 30.9 12.9 Beta - thal 5.1 9.5 32.9 64.5 18.6 28.9 14.4 Beta - thal 6.68 13.5 46.3 69.3 20.2 29.2 13 Beta - thal 6.45 11.8 38.1 59.1 18.3 31 13.8 Beta - thal 5.76 10.1 34 59 17.5 29.7 14.4 Beta - thal 5.58 11.0 34.3 61.6 19.7 32 12.9 Beta - thal 5.73 11.0 36.3 63.4 19.2 30.3 13.7 Beta - thal 4.32 10.7 36.2 83.8 24.8 29.6 13.5 Beta - thal 6.65 14.4 40.8 61.4 21.7 35.3 12 Beta - thal 10 6.41 10.9 39.4 61.5 17 27.7 13.6 Beta - thal 11 4.93 9.4 31.5 63.9 19.1 29.8 13 Beta - thal BN RBC HGB HCT MCV MCH MCHC RDW 5.23 13.2 39.3 75.1 25.2 33.6 12.8 5.05 11.6 34.1 67.5 23 34 12.5 5.21 13.7 42.9 82.3 26.3 31.9 10.7 4.72 13.2 39.6 83.9 28 33.3 10.2 5.35 15.2 44.8 83.7 28.4 33.9 11.2 5.14 13.0 41.1 80 25.3 31.5 12 BN RBC HGB HCT MCV MCH MCHC RDW Điện di Hb 5.23 13.2 39.3 75.1 25.2 33.6 12.8 BT 5.05 11.6 34.1 67.5 23 34 12.5 BT 5.21 13.7 42.9 82.3 26.3 31.9 10.7 BT 4.72 13.2 39.6 83.9 28 33.3 10.2 BT 5.35 15.2 44.8 83.7 28.4 33.9 11.2 BT 5.14 13.0 41.1 80 25.3 31.5 12 BT Đột biến gen Alphathal Alphathal Alphathal Alphathal Alphathal Alphathal PHÂN TÍCH KẾT QUẢ ĐIỆN DI HEMOGLOBIN GV: Lê Thị Hoàng Mỹ MỤC TIÊU Nêu nguyên lý kỹ thuật điện di Nêu định làm điện di hemoglobin Nêu bước đọc kết điện di Phân tích kết điện di hemoglobin ĐIỆN DI • Định nghĩa – Điện di di chuyển phân tử tích điện mơi trường điện • Các yếu tố ảnh hưởng – Tốc độ di chuyển phân tử phụ thuộc vào: • • • • • • điện tích, kích thước hình dạng phân tử, pH dung dich đệm, đặc điểm môi trường hỗ trợ, khung thời gian cho phương pháp tiến hành nhiệt độ hệ thống hoạt động • Ứng dụng: điện di hemoglobin, điện di protein huyết NGUYÊN LÝ • Phương pháp điện di – phương pháp lý hóa – dùng dòng điện chiều làm di chuyển phân tử mang điện • Mục đích phương pháp – dựa tích điện phân tử, tốc độ di chuyển khác để tách thành phần mong muốn  định tính định lượng Thiết bị thuốc thử • Nguồn điện • Bể chứa (mơi trường đệm, mơi trường hỗ trợ) • Thiết bị phát định lượng Electrophoresis tank Cathode Paper support medium Trong hệ thống điện di, phân tử tích điện di chuyển qua môi trường hỗ trợ nhờ lực phát từ môi trường điện Ngun lý phân tách • Theo điện tích • Theo kích thước 10 Kết điện di HbH 6.5 HbBart 0.3 HbA 92.5 HbF 0.0 HbE 0.0 HbA2 0.7 HbS 0.0 51 Kết điện di HbH 0.0 HbBart 0.0 HbA 74.3 HbF 0.6 HbE 21.6 HbA2 3.5 HbS 0.0 52 Case  CLS: Bệnh nhân nữ 47 year người Mỹ gốc Phi  Hgb: 5.9  Hct: 17.8  MCV: 97.1  RDW: 20.9  Iron: 83  Ferritin: 394.3 53 Case HbF: 1.0%; HbA: 38.7%; HbA2: 4.4%; HbS: 56.1% 54 LƯU Ý • Việc phân tích kết điện di lâm sàng phải kết hợp với – – – – – Bệnh cảnh lâm sàng bệnh nhân Tổng phân tích tế bào máu ngoại vi (công thức máu) Phết máu ngoại biên Bilan chuyển hóa sắt Tiền sử gia đình 55 ... KẾT QUẢ ĐIỆN DI HEMOGLOBIN GV: Lê Thị Hoàng Mỹ MỤC TIÊU Nêu nguyên lý kỹ thuật điện di Nêu định làm điện di hemoglobin Nêu bước đọc kết điện di Phân tích kết điện di hemoglobin ĐIỆN DI • Định... dụng: điện di hemoglobin, điện di protein huyết NGUYÊN LÝ • Phương pháp điện di – phương pháp lý hóa – dùng dòng điện chiều làm di chuyển phân tử mang điện • Mục đích phương pháp – dựa tích điện. .. nghĩa – Điện di di chuyển phân tử tích điện mơi trường điện • Các yếu tố ảnh hưởng – Tốc độ di chuyển phân tử phụ thuộc vào: • • • • • • điện tích, kích thước hình dạng phân tử, pH dung dich đệm,