NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ THUỐC MỠ DẠNG GEL CÓ TÁC DỤNG PHÒNG CHỐNG NHIỄM TRÙNG VẾT THƯƠNG NGOÀI DA DO TỤ CẦU VÀNG (Staphylococcus aureus) TỪ CAO ETHANOL LÁ CỎ THUỐC HÀN (Struchium sparganophorum (L.) O. Ktze)

Đề tài: Nghiên cứu bào chế thuốc mỡ dạng gel có tác dụng phòng chống nhiễm trùng vết thương ngoài da do tụ cầu vàng Staphylococcus aureus từ cao ethanol lá Cỏ thuốc hàn Struchium sparga

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN

(Staphylococcus aureus) TỪ CAO ETHANOL LÁ

CỎ THUỐC HÀN (Struchium sparganophorum (L.) O Ktze)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH HÓA HỌC – CHUYÊN NGÀNH HÓA DƯỢC

CẦN THƠ, 2017

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN

(Staphylococcus aureus) TỪ CAO ETHANOL LÁ

CỎ THUỐC HÀN (Struchium sparganophorum (L.) O Ktze)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH HÓA HỌC – CHUYÊN NGÀNH HÓA DƯỢC

CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ths NGUYỄN THỊ DIỆP CHI

CẦN THƠ, 2017

Trường Đại Học Cần Thơ

Khoa Khoa Học Tự Nhiên

Bộ Môn Hóa Học

Cộng Hòa Xã Hộ Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự do – Hạnh phúc

- -

NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN

1 Cán bộ hướng dẫn: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi

2 Đề tài: Nghiên cứu bào chế thuốc mỡ dạng gel có tác dụng phòng chống

nhiễm trùng vết thương ngoài da do tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) từ cao ethanol lá Cỏ thuốc hàn (Struchium sparganophorum (L.) O Ktze)

3 Sinh viên thực hiện: Đào Thị Thanh Mỵ MSSV: B1304068

Lớp: Hóa Dược 2 (KH13Y2A2) – Khóa: 39

4 Nội dung nhận xét:

a) Nhận xét về hình thức của LVTN:

b) Nhận xét về nội dung của LVTN (đề nghị ghi chi tiết và đầy đủ):

 Đánh giá nội dung thực hiện của đề tài:

 Những vấn đề còn hạn chế:

c) Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài (ghi rõ từng nội dung chính do sinh viên nào chịu trách nhiệm thực hiện nếu có):

d) Kết luận, đề nghị và điểm:

Trường Đại Học Cần Thơ

Khoa Khoa Học Tự Nhiên

2 Đề tài: Nghiên cứu bào chế thuốc mỡ dạng gel có tác dụng phòng chống

nhiễm trùng vết thương ngoài da do tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) từ cao ethanol lá Cỏ thuốc hàn (Struchium sparganophorum (L.) O Ktze)

3 Sinh viên thực hiện: Đào Thị Thanh Mỵ MSSV: B1304068

Lớp: Hóa Dược 2 (KH13Y2A2) – Khóa: 39

4 Nội dung nhận xét:

a) Nhận xét về hình thức của LVTN:

b) Nhận xét về nội dung của LVTN (đề nghị ghi chi tiết và đầy đủ):

 Đánh giá nội dung thực hiện của đề tài:

 Những vấn đề còn hạn chế:

c) Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài (ghi rõ từng nội dung chính do sinh viên nào chịu trách nhiệm thực hiện nếu có):

d) Kết luận, đề nghị và điểm:

………

Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2017

Cán bộ phản biện

i

LỜI CẢM ƠN - -

Quá trình học tập và rèn luyện trên giảng đường Đại học Cần Thơ đã giúp tôi có được một nền tảng kiến thức cơ bản và những kỹ năng cần thiết, là hành trang quý báu cho quá trình làm việc và trau dồi kiến thức của tôi sau này

Để đạt được kết quả như ngày hôm nay, tôi xin được gửi lời cảm ơn đến gia đình, đặc biệt gửi lòng biết ơn sâu sắc nhất đến ba mẹ đã nuôi dạy, chăm sóc tôi khôn lớn và trưởng thành, là điểm tựa tinh thần vững chắc của tôi trong cuộc sống cũng như trong học tập

Tôi xin chân thành cảm ơn quý thầy cô, đặc biệt là các thầy cô trong Bộ môn Hóa học – Khoa Khoa Học Tự Nhiên đã tận tâm giảng dạy và truyền đạt, không chỉ kiến thức chuyên môn, kỹ năng nghề nghiệp, mà hơn hết đó là những bài học đạo đức, bài học làm người quý giá giúp tôi hoàn thiện bản thân

Tôi xin đặc biệt gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc đến Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Cảm ơn cô đã tận tâm và nhiệt tình hướng dẫn, chỉ dạy tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành đề tài luận văn này

Xin được gửi lời cảm ơn chân thành đến các anh chị Phòng thử nghiệm Vi sinh – Trung tâm Kỹ Thuật Tiêu Chuẩn Đo Lường Chất Lượng Cần Thơ đã tận tình hướng dẫn và hỗ trợ tôi trong quá trình tiến hành các thử nghiệm sinh học tại trung tâm

Sau cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn đến những người bạn đã luôn sát cánh và đồng hành cùng tôi, giúp đỡ tôi vượt qua những khó khăn thiếu thốn trong thời gian học tập và sinh hoạt tại trường, cũng như trong quá trình thực hiện đề tài luận văn

Xin chân thành cảm ơn!

ii

TÓM TẮT - -

Bộ phận của dược liệu Cỏ thuốc hàn (Structrium sparganophorum (L.) O

Ktze) được sử dụng cho mục đích nghiên cứu là lá cây Bằng các phương pháp

hóa học cần thiết đã khảo sát được những đặc điểm cơ bản của dược liệu Kết quả cho thấy độ ẩm, tro toàn phần, tỉ lệ tạp chất và hàm lượng tannin toàn phần lần lượt là 6,16%; 5,23%; 0,13%; 1,04% Ngoài ra, mẫu dược liệu đạt yêu cầu về hàm lượng chì theo DĐVN IV (<10 ppm)

Kết quả khảo sát sơ bộ thành phần hóa học bằng các phản ứng định tính cho thấy trong lá Cỏ thuốc hàn có chứa alkaloid, flavonoid, tannin, saponin, steroids, triterpenoid và carotenoid

Cao ethanol lá Cỏ thuốc hàn được sử dụng để bào chế thuốc mỡ dạng gel có tác dụng phòng chống nhiễm trùng vết thương ngoài da do tụ cầu vàng

(Staphylococcus aureus) bằng phương pháp hòa tan Đề tài đã tiến hành thực hiện

10 nghiệm thức để khảo sát sự ảnh hưởng của tỷ lệ nước lên màu sắc, thể trạng và pH của gel ở nhiệt độ phòng Qua đó xác định công thức tối ưu nhất cho gel thành phẩm gồm 8 thành phần: cao đặc (1%), cồn

carbopol-triethanolamine-70o (5%), propylene glycol (25%), glycerin (20%), carbopol 940 (1%), Na EDTA (0,1%), triethanolamine (1,5%) và nước cất (vừa đủ 100%) Kết quả thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn của mẫu gel thành phẩm bằng phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch với đường kính vùng ức chế là 20 mm, cao hơn so với đường kính vùng ức chế của kháng sinh amoxicillin là 12 mm Các thí nghiệm kiểm tra độ đồng nhất và độ nhiễm khuẩn cũng được tiến hành với kết quả đạt yêu cầu theo DĐVN IV

Từ khóa: Gel, Struchium sparganophorum (L.) O Ktze, Staphylococcus

aureus

iii

ABSTRACT - -

Struchium sparganophorum (L.) O Ktze belongs to the family of

Asteraceae Leaves of herb Struchium sparganophorum (L.) O Ktze are used for

investigating in this experiment By necessary chemical methods, the basic characteristics of pharmaceuticals were examined Results showed that moisture, whole ash, the percentage of impurities and full tannin content 6,16%; 5,23%; 0,13%; 1,04%, respectively In addition, the pharmaceutical sample satisfactory for lead content based on Vietnam’s Pharmacopoeia IV (<10 ppm) Preliminary survey chemical constituents results by qualitative reactions indicated that

Struchium sparganophorum (L.) O Ktze ’s leaves contain alkaloid, flavonoid,

tannin, saponin, steroids, triterpenoid and carotenoid

Ethanolic leaves extracts of Struchium sparganophorum (L.) O Ktze’s

leaves is used to prepare gel which has ability in preventing wound infection

caused by Staphylococcus aureus by dissolving methods The thesis topic has

carried out 10 treatments to examine the influence of the ratio of triethanolamine to color, condition and the pH of the gel at room temperature Thereby, the optimal formula for gel was determined with 8 ingredients: concentrated extracts (1%), alcohol 70o (5%), propylene glycol (25%), glycerin (20%), carbopol 940 (1% ), Na EDTA (0.1%), triethanolamine (1.5%) and purified water (just enough 100%) Test results of antibacterial activity of gel samples by agar-diffusion method with diameter of zone of inhibition 20 mm which is larger than diameter of zone of inhibition of amoxicillin antibiotic

water-carbopol-12 mm The experimental test of homogeneity and infectious limitation were also conducted with satisfactory results according Vietnam’s Pharmacopoeia IV

Key words: Gel, Struchium sparganophorum (L.) O Ktze, Staphylococcus

aureus

iv

CAM KẾT KẾT QUẢ - -

Tôi xin cam kết luận văn này được hoàn thành dựa trên các kết quả nghiên cứu của tôi và các kết quả của nghiên cứu này chưa được dùng cho bất cứ luận văn cùng cấp nào khác

Cần Thơ, ngày 12 tháng 05 năm 2017

Sinh viên

Đào Thị Thanh Mỵ

v

MỤC LỤC

- -

LỜI CẢM ƠN i

TÓM TẮT ii

ABSTRACT iii

CAM KẾT KẾT QUẢ iv

MỤC LỤC v

DANH SÁCH BẢNG viii

DANH SÁCH HÌNH ix

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xi

CHƯƠNG 1 GIỚI THIỆU 1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục tiêu nghiên cứu 2

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4

2.1 Tổng quan về da người [4][5] 4

2.1.1 Thượng bì (epidemis) 5

2.1.2 Trung bì (dermis) 6

2.1.3 Hạ bì (hypodermis) 7

2.1.4 Phần phụ của da 7

2.2 Tổng quát về vết thương ngoài da [6] 8

2.2.1 Khái niệm 8

2.2.2 Phân loại 9

2.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình liền vết thương 9

2.3 Nhiễm trùng vết thương do tụ cầu vàng 10

2.3.1 Nhiễm trùng vết thương [6] 10

2.3.3 Nhiễm trùng vết thương do tụ cầu vàng 11

2.4 Tổng quan về thuốc mỡ 13

2.4.1 Định nghĩa [10] 13

vi

2.4.2 Phân loại [11] 13

2.4.3 Tá dược thuốc mỡ [11] 14

2.4.4 Yêu cầu chất lượng thuốc mỡ [11] 17

2.5 Tổng quan về cây Cỏ thuốc hàn 17

2.5.1 Phân loại khoa học [1] 18

2.5.2 Đặc tính thực vật [1] 18

2.5.3 Tác dụng dược lý, hoạt tính sinh học 19

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22

3.1 Phương tiện nghiên cứu 22

3.1.1 Địa điểm và thời gian nghiên cứu 22

3.1.2 Đối tượng nghiên cứu 22

3.1.3 Hóa chất 22

3.1.4 Thiết bị và dụng cụ 22

3.2 Nội dung nghiên cứu 23

3.3 Phương pháp nghiên cứu 23

3.3.1 Khảo sát đặc điểm của dược liệu [17] 23

3.3.2 Định tính các nhóm chất hữu cơ có trong dược liệu [18] 27

3.3.3 Chiết cao ethanol lá Cỏ thuốc hàn 30

3.3.4 Thử giới hạn nhiễm khuẩn của cao chiết 31

3.3.5 Thử nghiệm hoạt tính kháng tụ cầu vàng của cao chiết 31

3.3.5 Bào chế gel có tác dụng phòng chống nhiễm trùng vết thương ngoài da do tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) từ cao ethanol lá Cỏ thuốc hàn 32

3.3.6 Thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn của gel thành phẩm 36

3.3.7 Kiểm nghiệm gel thành phẩm [10] 37

CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39

4.1 Kết quả khảo sát đặc điểm của dược liệu 39

4.1.1 Độ ẩm, tro toàn phần và tỷ lệ tạp chất 39

4.1.2 Kết quả bán định lượng chì 40

vii

4.1.3 Kết quả định lượng tannin toàn phần 41

4.2 Kết quả định tính các nhóm hợp chất hữu cơ có trong dược liệu 41

4.2.1 Kết quả định tính alkaloid 42

4.2.2 Kết quả định tính flavonoid 42

4.2.3 Kết quả định tính tannin 43

4.2.4 Kết quả định tính saponin 44

4.2.5 Kết quả định tính các thành phần hóa học khác 45

4.3 Kết quả chiết cao ethanol lá Cỏ thuốc hàn 45

4.4 Kết quả kiểm hoạt tính kháng tụ cầu vàng của cao chiết 45

4.5 Kết quả kiểm giới hạn nhiễm khuẩn của cao chiết 47

4.6 Kết quả bào chế gel 47

4.7 Kết quả thử hoạt tính kháng tụ cầu vàng của gel thành phẩm 49

4.8 Kết quả kiểm nghiệm gel thành phẩm 51

4.8.1 Độ đồng nhất 51

4.8.2 Giới hạn nhiễm vi sinh vật 51

4.8.3 Hàm lượng kim loại nặng 52

CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53

5.1 Kết luận 53

5.2 Kiến nghị 53

TÀI LIỆU THAM KHẢO 55

PHỤ LỤC 57

viii

DANH SÁCH BẢNG

- -

Bảng 2 1 Bảng thông số chỉ khả năng kháng oxy hóa của dịch chiết ethanol lá 19 Bảng 3 1 Các chỉ tiêu thử giới hạn nhiễm khuẩn của cao chiết 31

Bảng 3 2 Vai trò và hàm lượng dùng theo lý thuyết của các tá dược 34

Bảng 3 3 Hàm lượng các thành phần cố định trong công thức gel 36

Bảng 3 4 Các chỉ tiêu thử giới hạn nhiễm vi sinh vật của gel thành phẩm 38

Bảng 3 5 Các chỉ tiêu đo hàm lượng kim loại nặng có trong gel thành phẩm 38

Bảng 4 1 Bảng kết quả khảo sát độ ẩm của dược liệu 39

Bảng 4 2 Bảng kết quả khảo sát tro toàn phần trong dược liệu 40

Bảng 4 3 Bảng kết quả khảo sát tỷ lệ tạp chất có trong dược liệu 40

Bảng 4 4 Kết quả định lượng tannin toàn phần có trong dược liệu 41

Bảng 4 5 Bảng kết quả định tính sơ bộ các thành phần hóa học khác 45

Bảng 4 6 Kết quả quá trình chiết cao ethanol lá Cỏ thuốc hàn 45

Bảng 4 7 Kết quả thử giới hạn nhiễm khuẩn của mẫu cao chiết 47

Bảng 4 8 Bảng kết quả khảo sát 10 nghiệm thức bào chế gel 48

Bảng 4 9 Công thức bào chế và đặc điểm của gel thành phẩm 49

Bảng 4 10 Kết quả thử nghiệm vi sinh vật trong gel thành phẩm 51

Bảng 4 11 Kết quả định lượng kim loại nặng trong gel thành phẩm 52

ix

DANH SÁCH HÌNH

- -

Hình 2 1 Cấu trúc da 4

Hình 2 2 Hình thái Staphylococcus aureus 12

Hình 2 3 Tụ cầu Staphylococcus aureus gram dương dưới kính hiển vi 12

Hình 2 4 Glycerin 15

Hình 2 5 Propylene glycol 15

Hình 2 6 Triethanolamine 15

Hình 2 7 Công thức tổng quát của carbopol 16

Hình 2 8 Các bộ phận của cây Cỏ thuốc hàn 18

Hình 2 9 Công thức cấu tạo của 3,7-Dimethylquercetin 20

Hình 2 10 Công thức cấu tạo của berberin 21

Hình 2 11 Một số hợp chất phenolic có trong lá Cỏ thuốc hàn 21

Hình 3 1 Sơ đồ quy trình bào chế gel 35

Hình 4 1 Kết quả so màu bán định lượng chì 41

Hình 4 2 Định tính alkaloid trong dược liệu theo thứ tự từ trái qua phải: mẫu trắng, phản ứng của mẫu trắng với thuốc thử Mayer, Bouchardat, Dragendorff 42 Hình 4 3 Màu giấy lọc theo thứ tự từ trái sang phải: khi hơ trên miệng lọ NH4OH và khi soi UV 42

Hình 4 4 Kết quả phản ứng theo thứ tự từ trái sang phải: mẫu trắng, dung dịch sau phản ứng Cyanidin 43

Hình 4 5 Kết quả phản ứng theo thứ tự từ trái sang phải: mẫu trắng, dung dịch sau phản ứng với FeCl3 5% 43

Hình 4 6 Kết quả phản ứng theo thứ tự từ trái sang phải: mẫu trắng, phản ứng của mẫu trắng với FeCl3, Pb(CH3COO)2, Cu(CH3COO)2 44

Hình 4 7 Kết quả phản ứng định tính saponin theo thứ tự từ trái sang phải: lắc với dung dịch HCl, lắc với dung dịch NaOH 44

Hình 4 8 Mẫu cao đặc kháng tụ cầu vàng với đường kính vùng ức chế là 19 mm 46

x

Hình 4 9 Mẫu dung dịch cao 100 mg/mL kháng tụ cầu vàng với đường kính vùng

ức chế là 17 mm 46Hình 4 10 Các mẫu gel tương ứng của 10 nghiệm thức đã khảo sát 48Hình 4 11 Mẫu gel kháng tụ cầu vàng với đường kính vùng ức chế là 20 mm 50Hình 4 12 Kháng sinh amoxicillin (100 mg/1mL) kháng tụ cầu vàng với đường kính vùng ức chế là 12 mm 50

Hình 4 13 Kết quả thử độ đồng nhất của mẫu gel thành phẩm theo DĐVN IV 51

xi

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

- -

- DĐVN IV Dược điển Việt Nam IV

- EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid

- D/N Nhũ tương kiểu dầu trong nước

- N/D Nhũ tương kiểu nước trong dầu

- TEA Triethanolamine

- MC Methyl cellulose

- CMC Carboxy methyl cellulose

- HPMC Hydroxy propyl methyl cellulose

- IC50 Nồng độ ức chế 50%

(Inhibitory concentration 50%)

- GC-MS Sắc ký khí ghép khối phổ

(Gas Chromatography-Mass Spectrometry)

- MRSA Chủng Staphylococcus aureus kháng kháng sinh methicillin

(Methicillin resistant Staphylococcus aureus)

- LOD Giới hạn phát hiện (Limit of Detection)

- MIC Nồng độ ức chế tối thiểu

(Minimum Inhibitory Concentration)

Ngày nay, cùng với sự phát triển của khoa học và với những nhu cầu cấp thiết trong lĩnh vực y học, các cây thuốc, bài thuốc dân gian ấy trở thành đối tượng nghiên cứu của các nhà khoa học trên thế giới như một nguồn dược liệu phong phú và tiềm năng Xu hướng kết hợp Đông y với Tây y, theo phương châm vừa

áp dụng kinh nghiệm chữa bệnh dân gian của cha ông vừa nghiên cứu tìm hiểu tính năng tác dụng của cây thuốc trong các bài thuốc trên cơ sở khoa học hiện đại

đã và đang đem đến những thành tựu ứng dụng vượt bậc

Cây Cỏ thuốc hàn (còn có tên khác là Cỏ lá xoài, Nọc xoài, Cốc đồng hay

Tam nhân đả) có tên khoa học là Struchium sparganophorum (L.) O Ktze, thuộc

họ Cúc - Asteraceae Theo kinh nghiệm dân gian, cây Cỏ thuốc hàn cho thấy tác dụng cầm máu, sát trùng, tiêu độc, tán ứ hiệu quả khi được giã nát và đắp lên vết thương hở Ngoài ra, người ta nhận thấy cây Cỏ thuốc hàn khi đắp vào vết thương còn giúp cho vết thương mau lành hơn Ở một số địa phương, nhân dân sử dụng cây Cỏ thuốc hàn để chữa chứng băng huyết.[1]

Vết thương ngoài da thông thường là những vết thương nhỏ như trầy xước da, bỏng nhẹ, đứt tay, côn trùng cắn, xương cá hoặc dằm gỗ đâm hoặc nguy hiểm hơn là các vết thương phần mềm làm tổn thương mạch máu, khoét sâu và lan rộng Cơ thể có cơ chế tự liền vết thương và không cần can thiệp từ bên ngoài, đó

là một quá trình phục hồi cơ bản trong bệnh lý ngoại khoa Tuy nhiên, nếu chủ quan và không xử lý vết thương ngoài da ban đầu tốt thì tỷ lệ nhiễm trùng từ vết thương này rất cao

Tụ cầu khuẩn (Staphylococcus) có khoảng hơn 30 loại khác nhau, có thể

tìm thấy trong mũi, hầu họng và trên da người Tụ cầu có mặt khoảng 25-30% ở

2

những người khỏe mạnh Trong đó, hầu hết các trường hợp nhiễm trùng gây ra

bởi Staphylococcus aureus (tụ cầu vàng) Ở điều kiện bình thường, các vi khuẩn

này không gây bệnh Tuy nhiên, khi da bị trầy xước và tổn thương, vi khuẩn đột nhập qua hàng rào bảo vệ cơ thể, vượt qua cơ chế bảo vệ tự nhiên của cơ thể và dẫn tới nhiễm trùng [2]

Staphylococcus aureus (S aureus ) sau khi xâm nhập vào cơ thể qua vết

thương ngoài da có thể gây nên nhiều viêm nhiễm cho các cơ quan trong cơ thể như viêm phổi, viêm thận, viêm màng não… Bất cứ ai cũng có thể bị nhiễm trùng

vết thương do S aureus Một số nhóm người có nguy cơ cao hơn là trẻ sơ sinh,

phụ nữ cho con bú, người già và và những người có bệnh mãn tính như tiểu đường, ung thư, bệnh tim mạch và bệnh phổi [2] Trong khi đó, phần lớn các

dòng S aureus được cho là đã kháng với nhiều loại kháng sinh khác nhau Một

vài dòng kháng với tất cả các loại kháng sinh ngoại trừ vancomycin, và những

dòng này ngày càng tăng Những dòng MRSA (Methicilin resistant

Staphylococcus aureus) rất phổ biến và đa số các dòng này cũng kháng với nhiều

kháng sinh khác Trong phòng thí nghiệm, các nhà nghiên cứu đã tìm thấy

plasmid kháng vancomycin ở Enterococcus faecalis có thể chuyển sang S aureus

và cho rằng việc chuyển này có thể xảy ra ngoài tự nhiên Ngoài ra, S aureus còn

kháng với chất khử trùng và chất tẩy uế.[3]

Do đó, nhằm tìm kiếm thêm một loại dược liệu mới có khả năng thay thế kháng sinh, cho tác dụng tương đương nhưng không bị kháng bởi dòng vi khuẩn

Staphylococcus aureus gây nên các trường hợp nhiễm trùng vết thương, đề tài:

“Nghiên cứu bào chế thuốc mỡ dạng gel có tác dụng phòng chống nhiễm

trùng vết thương ngoài da do tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) từ cao ethanol lá Cỏ thuốc hàn (Struchium sparganophorum (L.) O Ktze)” được thực

hiện

1.2 Mục tiêu nghiên cứu

Trong khuôn khổ của một đề tài luận văn tốt nghiệp đại học, đề tài hướng tới

ba mục tiêu nghiên cứu như sau:

- Khảo sát những đặc điểm cơ bản của dược liệu Cỏ thuốc hàn (lá) và nghiên cứu sơ bộ các thành phần hóa học có trong chúng

3

- Bào chế thuốc mỡ dạng gel có tác dụng phòng chống nhiễm trùng vết

thương ngoài da do tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) từ cao ethanol lá

Cỏ thuốc hàn

- Thử nghiệm hoạt tính kháng tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) của cao

ethanol lá Cỏ thuốc hàn và của gel thành phẩm

số chất cặn bã, đồng thời chuyển hóa cân bằng nước, điện giải và có vai trò trong

hệ thống miễn dịch Bên cạnh đó, da còn có chức năng cảm giác và thẩm mỹ đặc biệt quan trọng

Tổ chức da khá phức tạp, mô da là một khối tổng hợp gồm 3 lớp: thượng

bì (biểu bì), trung bì (bì), hạ bì (dưới bì) và các phần phụ của da

Hình 2 1 Cấu trúc da

5

2.1.1 Thượng bì (epidemis)

Trên các lát cắt mô học của da bình thường, ranh giới giữa thượng bì và trung bì không bằng phẳng mà lồi lõm do có nhiều nhú của thượng bì như những ngón tay ăn sâu vào trung bì Những chỗ lồi lên của trung bì giữa các nhú thượng

bì gọi là nhú trung bì

Thượng bì gồm 5 lớp: lớp đáy, lớp gai, lớp hạt, lớp sáng và lớp sừng

2.1.1.1 Lớp đáy (stratum basal)

Ở lớp đáy có hai loại tế bào cùng nằm trên màng đáy là tế bào đáy (tế bào sinh sản) và tế bào sắc tố

Tế bào đáy có hình trụ, nằm vuông góc với đường phân cách giữa thượng

bì và chân bì (màng đáy) Chúng có bào tương bắt màu kiềm nhẹ, nhân hình bầu dục hay dài chứa nhiều chất nhiễm sắc Các tế bào này nằm sát nhau và dính với nhau bằng các cầu nối bào tương Trong một số tế bào thường thấy hình nhân chia

Tế bào hắc sắc tố (các tế bào sáng hay các tế bào đuôi gai), có nguồn gốc thần kinh, chúng có khả năng tổng hợp sắc tố melanin Khi nhuộm muối bạc thấy

tế bào có nhiều nhánh bào tương dài, trong bào tương có những hạt sắc tố đen Khi nhuộm hematoxylin-eosin chúng là những tế bào sáng, nhân bắt màu sẫm, bào tương bắt màu kiềm nhẹ

Màng đáy không bắt màu thuốc nhuộm thông thường Khi sử dụng thuốc nhuộm acid schiff, màng đáy bắt màu đỏ (là một vạch mỏng, đậm đặc, thuần nhất, vì nó chứa một lượng khá lớn polysaccharide) Nó là một hàng rào để khuếch tán các hạt nhỏ như thuốc nhuộm lan vào chân bì

2.1.1.2 Lớp gai (stratum spinosum)

Các tế bào lớp gai có hình đa diện, nằm trên lớp đáy, có từ 5-10 hàng tế bào Các tế bào nằm sát nhau, nối với nhau bằng các cầu nối bào tương, rõ rệt hơn

ở lớp đáy Dưới kính hiển vi điện tử các tế bào này không nối hẳn với nhau mà chỉ tiếp xúc bằng các thể nối (desmosome) chứa những hạt đậm đặc mà bản chất

là phospholipid Khi tách các tế bào gai rời nhau ra thì thấy trên bề mặt có những nhú bào tương giống như những cái gai Trong bào tương có nhiều tơ trương lực

6

quy tụ vào các cầu nối Chúng có thể hợp lại thành bó Các tế bào gai cũng có khả năng sinh sản bằng gián phân Hoạt động gián phân của lớp đáy và lớp gai đều mạnh mẽ và liên tục Khoảng từ 19 - 20 ngày thượng bì của người lại được đổi mới một lần

2.1.1.3 Lớp hạt (stratum granulosum)

Các tế bào của lớp hạt gồm từ 3 - 4 hàng, chúng có hình dẹt, nằm trên lớp gai Trong bào tương chứa các hạt sừng keratohyalin Những hạt này xuất hiện chứng tỏ quá trình sừng hoá bắt đầu Keratin thuộc nhóm protein sợi có chứa nhiều gốc amino acid, arginin, lysine, cystidin chúng khá bền vững với những tác nhân hoá học như acid hoặc base Bề dày của lớp hạt dao động phụ thuộc vào mức độ sừng hoá Lớp hạt dày ở những nơi có lớp sừng dày Ở những nơi có á sừng thì thường không có lớp hạt

2.1.1.4 Lớp sáng (stratum lucidum)

Lớp này chỉ có ở lòng bàn tay, bàn chân, nó nằm ở trên lớp hạt và gồm những tế bào trong, thuần nhất, không có nhân, dẹt, chúng sắp xếp thành 2 hoặc 3 hàng Các tế bào này chứa chất eleidin, hình thành do hoá lỏng các hạt sừng trong chứa nhiều nhóm disulfide

2.1.1.5 Lớp sừng (stratum corneum)

Lớp sừng ở trên cùng, các tế bào trở nên dẹt hoàn toàn, màng bào tương dầy, nhân biến mất Trong bào tương chỉ còn toàn những sợi sừng Mỗi tế bào biến thành một lá sừng mỏng, chúng chồng chất lên nhau, những tế bào ở mặt trên cùng luôn luôn bị bong rơi ra

2.1.2 Trung bì (dermis)

Về cấu trúc, trung bì gồm 3 thành phần:

- Những sợi chống đỡ, sợi tạo keo là những sợi thẳng không phân nhánh cấu tạo bởi những chuỗi polypeptide (khoảng 20 loại acid amin) Sợi tạo keo có thể bị phá huỷ bởi enzyme colagenase do vi khuẩn tiết ra Sợi chun là những sợi lớn hơn có phân nhánh, nó bắt nguồn từ sợi tạo keo Sợi lưới tạo thành màng lưới mỏng bao bọc quanh mạch máu, tuyến mồ hôi Cấu trúc của nó giống hệt sợi tạo keo

- Ngoài các thành phần trên ở trung bì còn có những động mạch, tĩnh mạch, hệ thống bạch huyết và hệ thống thần kinh da

2.1.3 Hạ bì (hypodermis)

Nằm giữa trung bì và cân hoặc màng xương Hạ bì là tổ chức đệm biệt hoá thành tổ chức mỡ, có nhiều ô ngăn cách bởi những vách nối liền với trung bì, trong mỗi ô có mạch máu, thần kinh, tế bào mỡ, tế bào tròn, tế bào sáng

- Tiểu thể Water Pacini có nhiều ở lòng ngón tay cho biết cảm giác sờ mó

- Tiểu thể Golgi-Mazzoni giống loại trên nhưng nhỏ hơn

- Tiểu thể Ruffini cho biết cảm giác nóng

- Đĩa Meckel-Ranvier và tiểu thể Meisser cho cảm giác tiếp xúc

- Tiểu thể Krause cho cảm giác lạnh

2.1.4.4 Nang lông

Nang lông là phần lõm sâu xuống của thượng bì chứa sợi lông và tiếp cận với tuyến bã Nang lông ở rải rác khắp da trừ lòng bàn tay và lòng bàn chân Mỗi nang lông có 3 phần: miệng nang lông thông với mặt da, cổ nang - phần này bé lại và bao lông là phần dài nhất ăn sâu xuống hạ bì

2.2 Tổng quát về vết thương ngoài da [6]

2.2.1 Khái niệm

Vết thương ngoài da chỉ các thương tích gây rách da và gây tổn thương mô liên kết dưới da, gân và cơ do các nguyên nhân như xước tay chân do ngã, kim đâm, rách da sâu hoặc rách da mảng lớn Những vết thương này thường gây tổn thương không lớn, không ảnh hưởng tới tính mạng bệnh nhân, tuy nhiên nếu

9

không được đánh giá đúng, xử trí không đúng nguyên tắc sẽ dẫn đến hậu quả nghiêm trọng: uốn ván, hoại thư sinh hơi, nhiễm trùng máu

2.2.2 Phân loại

2.2.2.1 Theo thời gian

- Vết thương vô trùng: Vết thương trước 6 giờ, xử trí vết thương ở giai đoạn này tốt nhất

- Vết thương hữu trùng: Sau 6 – 12 giờ Vi trùng bắt đầu hoạt động, phát triển tỷ lệ nhiễm trùng cao

2.2.2.2 Theo hình thái tổn thương, nguyên nhân

- Vết thương phẫu thuật: Đây là loại tổn thương được chuẩn bị, xảy ra trong môi trường y tế đặc biệt, vết thương được làm sạch, cầm máu tốt,

bờ đều đặn Nếu không có những yếu tố khác tham gia, loại vết thương này thường chóng lành và không cần can thiệp

- Vết thương do chấn thương: Có nhiều mức độ, từ các vết rách da, xây xát, vết bỏng nhỏ đến bỏng nặng toàn thân, mảng rách da lớn sau tai nạn… Loại này thường có nguy cơ nhiễm trùng cao

- Vết thương mạch máu: Thường có nguyên nhân bệnh lý nhất định, ví

dụ như khối u chèn ép, viêm tắc mạch, xơ vữa mạch ở bệnh nhân tiểu đường, hay bệnh nhân nằm lâu một chỗ khiến tổ chức không được tưới máu nuôi dưỡng, dẫn đến hoại tử khô hoặc loét tại chỗ

2.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình liền vết thương

- Bị suy dinh dưỡng: thiếu chất đạm, vitamin A, C và chất kẽm

- Do bệnh nội tiết: bệnh tiểu đường, tăng năng vỏ thượng thận

- Nguyên nhân nội khoa: đang được điều trị bằng thuốc có chất corticoid, đang điều trị bằng thuốc chống đông…

- Người bệnh mắc bệnh của mô liên kết

- Bất thường ở hệ tim mạch hoặc bệnh hô hấp mãn tính làm giảm cung cấp oxy ở mô

- Rối loạn đông máu: bệnh giảm tiểu cầu, thiếu yếu tố VIII

- Người bị nhiễm HIV

Nguy cơ nhiễm trùng từ một vết thương hở là rất cao nếu vết thương bị bẩn, không được chăm sóc và thay băng vô khuẩn Với những người có các bệnh mạn tính gây suy giảm miễn dịch (đái tháo đường, ung thư, nhiễm HIV…) thì khả

11

năng bị nhiễm trùng vết thương càng cao Nguy hiểm hơn của nhiễm trùng vết thương là làm nhiễm khuẩn đến các tổ chức sâu hơn bên trong da và các cơ quan bên trong cơ thể dẫn đến nhiều hệ lụy nghiêm trọng

2.3.2 Dấu hiệu nhiễm trùng vết thương [6]

Khi vết thương bị nhiễm trùng thường gặp những dấu hiệu sau:

- Sốt: sốt là dấu hiệu của cơ thể khi xuất hiện phản ứng viêm, lúc này những tế bào bạch cầu, đại thực bào có nhiệm vụ đào thải những vi khuẩn lạ, từ đó cơ thể xuất hiện phản ứng viêm và sốt

- Đau tăng dần: thông thường vết thương sẽ dịu dần từ ngày thứ 2- 3, tuy nhiên nếu vết thương không có dấu hiệu giảm đau mà có dấu hiệu đau tăng dần lên thì nên kiểm tra lại vết thương để phát hiện bất thường và

có cách xử lý kịp thời

- Vết thương sưng đỏ: với vết thương mới thì phản ứng sưng và viêm xảy ra là bình thường, tuy nhiên nếu hiện tượng sưng xảy ra kéo dài 4- 6 ngày, đó cũng là một trong những dấu hiệu sớm cho thấy vết thương bị nhiễm trùng

- Chảy máu, mủ từ vết thương và có mùi hôi: nếu vết thương có dấu hiệu chảy dịch nhiều và có mùi hôi thì vết thương đang có dấu hiệu nhiễm trùng

2.3.3 Nhiễm trùng vết thương do tụ cầu vàng

Tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) là nguyên nhân chính gây nhiễm

trùng vết thương

2.3.3.1 Giới thiệu về tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) [7]

Staphylococcus aureus thuộc giống Staphylococcus, do đó mang những

tính chất chung của Staphylococcus S aureus là những vi khuẩn hình cầu, không

di động, gram dương, đường kính 0,5-1,5 µm, tế bào xếp thành hình chùm nho Thành tế bào kháng với lysozyme và nhạy với lysotaphin, một chất có thể phá hủy cầu nối pentaglycin của tụ cầu

12

Hình 2 2 Hình thái Staphylococcus aureus

Hình 2 3 Tụ cầu Staphylococcus aureus gram dương dưới kính hiển vi

2.3.3.2 Khả năng gây các bệnh nhiễm trùng của tụ cầu vàng

(Staphylococcus aureus)

Staphylococcus aureus (S aureus) gây bệnh cho những người bị suy giảm

đề kháng do chúng có nhiều yếu tố độc lực S aureus là vi khuẩn gây bệnh

thường gặp nhất và có khả năng gây nhiều bệnh khác nhau.[8]

Tụ cầu vàng S aureus sau khi xâm nhập vào cơ thể thông qua các vết

thương ngoài da có thể gây nên các nhiễm khuẩn sinh mủ : mụn nhọt, các ổ áp xe, eczema, hậu bối Mức độ các nhiễm khuẩn này phụ thuộc vào sự đề kháng của

cơ thể và độc lực của vi khuẩn S aureus xâm nhập vào máu gây nên nhiễm

khuẩn đường huyết Ðây là một loại nhiễm trùng rất nặng Khi đó, tụ cầu lưu

13

thông trong máu, nó có thể được đưa đến rất nhiều hệ cơ quan trong cơ thể, gây nên các ổ áp xe (gan, phổi, não, tuỷ) hoặc viêm nội tâm mạc, gây nên các viêm tắc tĩnh mạch, có thể nguy hiểm đến tính mạng Một số nhiễm trùng khu trú này trở thành viêm mãn tính như viêm xương Những phụ nữ cho con bú có thể bị nhiễm một bệnh do tụ cầu gọi là chứng viêm vú, có thể giải phóng vi khuẩn vào sữa mẹ.[9]

Chính vì khả năng gây nên các bệnh nguy hiểm của Staphylococcus aureus

mà việc phòng chống xâm nhiễm loại vi khuẩn này vào cơ thể thông qua các vết thương ngoài da là việc làm cần thiết và có ý nghĩa

2.4 Tổng quan về thuốc mỡ

2.4.1 Định nghĩa [10]

Theo DĐVN IV, thuốc mỡ là dạng thuốc có thể chất mềm, dùng để bôi lên

da hay niêm mạc nhằm để bảo vệ da hoặc đưa thuốc thấm qua da Thành phần của thuốc mỡ gồm một hay nhiều hoạt chất được hòa tan hay phân tán đồng đều trong một tá dược hay hỗn hợp tá dược thích hợp

2.4.2 Phân loại [11]

Theo thể chất và thành phần cấu tạo, thuốc mỡ được chia thành các nhóm như sau:

Thuốc mỡ mềm (unguentum, pommata): là dạng thường gặp nhất, thể chất

mềm gần giống mỡ lợn hoặc vaselin Tá dược thường được dùng trong dạng này

là các chất béo hoặc các hydrocarbon, các silicon… hoặc các tá dược nhũ tương khan Ví dụ: thuốc mỡ tra mắt tetracylin 1%

Thuốc mỡ đặc hay bột nhão bôi da (pasta dermica): là dạng thuốc mỡ có

hàm lượng cao các hoạt chất rắn được phân tán dưới dạng hạt mịn Tá dược được dùng trong dạng này có thể là tá dược thân dầu hoặc thân nước

Sáp (cera, unguentum, cereum): là dạng thuốc mỡ có thể chất dẻo Dạng

thuốc này ít gặp trong dược phẩm nhưng gặp nhiều trong mỹ phẩm (son môi)

Gel: là dạng thuốc mỡ được cấu tạo bởi các chất lỏng được gel hóa nhờ

các tác nhân tạo gel thích hợp Bao gồm:

14

- Gel thân dầu: tá dược thường được cấu tạo bởi parafin lỏng được cho thêm polyethylene, dầu béo và được gel hóa bởi keo SiO2 hay xà phòng nhôm hoặc xà phòng kẽm

- Gel thân nước: thường là nước, glycerin, propylene glycol được gel hóa bằng các tác nhân tạo gel như gôm adragant, tinh bột, dẫn xuất của cellulose, carbopol, magie hoặc nhôm silicat

Kem bôi da (creama dermica): là dạng thuốc mỡ có thể chất mềm và rất

mịn do trong thành phần có hàm lượng lớn các chất lỏng, thường có cấu trúc nhũ tương kiểu D/N hoặc N/D Các kem thuốc có thể chất lỏng sánh được gọi là sữa dùng cho da (sữa tắm)

Nghiên cứu này chỉ giới hạn việc bào chế thuốc mỡ dạng gel thân nước

2.4.3 Tá dược thuốc mỡ [11]

Đối với thuốc mỡ dạng gel thân nước, tá dược thường được sử dụng là nước, glycerin, propylene glycol và các tá dược tạo gel như gel alginate, dẫn chất của cellulose, carbomer,…

Ưu điểm:

- Có thể hòa tan hoặc trộn đều với nước và các chất lỏng phân cực khác

- Dễ bám thành lớp mỏng trên da và niêm mạc, kể cả niêm mạc ướt

- Dễ bị khô cứng nên cần dùng thêm các chất giữ ẩm

2.4.3.1 Glycerin (Propane-1,2,3-triol; glycerol) [12]

Glycerin được sử dụng rộng rãi trong một loạt các công thức dược phẩm, bao gồm đường uống, nhỏ mắt, thuốc bôi, và các chế phẩm tiêm Chúng được

15

dùng chủ yếu để giữ ẩm và làm mềm trong dược phẩm và mỹ phẩm hoặc dùng như một dung môi hay đồng dung môi trong các loại kem và nhũ tương

Hình 2 4 Glycerin Glycerin là chất thân nước Glycerin tinh khiết không bị oxy hóa ở điều kiện thường nhưng bị phân hủy khi đun nóng, tạo ra acrolein gây độc Hỗn hợp glycerin với nước, ethanol và propylene glycol ổn định về mặt hóa học

Glycerin là chất không độc và không kích ứng

2.4.3.2 Propylene glycol (Propane-1,2-diol) [12]

Propylene glycol là một dung môi được sử dụng rộng rãi trong dược phẩm

và mỹ phẩm Đây là loại dung môi hòa tan được rất nhiều hoạt chất như corticosteroid, phenol, sulfamid, vitamin…

Hình 2 5 Propylene glycol Propylene glycol ổn định ở nhiệt độ thấp Ở nhiệt độ cao, chúng bị oxy hóa sinh ra propionaldehyde, acid lactic, acid pyruvic và acid acetic Propylene glycol

ổn định khi trộn với ethanol, glycerin hoặc nước

Propylene glycol là chất không độc và kích ứng không đáng kể

2.4.3.3 Triethanolamine (TEA; 2,2’,2’’-Nitrilotriethanol) [12]

Triethanolamine đóng vai trò là một chất nhũ hóa hoặc chất điều chỉnh pH, được sử dụng rộng rãi trong các công thức thuốc dùng tại chỗ

Hình 2 6 Triethanolamine

Các dẫn chất của cellulose tương kỵ với phenol, resorcin, NaCl, AgNO3,… tạo phức với các paraben, làm giảm hoạt tính của một số chất kháng khuẩn.[11]

2.4.3.6 Carbopol (carbomer) [12]

Là các sản phẩm cao phân tử được trùng hợp từ acid arcrylic

Hình 2 7 Công thức tổng quát của carbopol Carbopol thường ở dạng bột trắng không tan hoặc ít tan trong nước nhưng trương nở trong nước và tạo ra những gel không sánh có pH acid Khi trung hòa bằng kiềm (NaOH, triethanolamine,…) sẽ làm tăng độ nhớt của gel Nồng độ

2.4.4 Yêu cầu chất lượng thuốc mỡ [11]

- Phải là hỗn hợp hoàn toàn đồng nhất giữa hoạt chất và tá dược Trong đó, hoạt chất phải đạt độ phân tán càng cao càng tốt

- Thể chất mềm, mịn màng, không tan chảy ở nhiệt độ thường và dễ bám thành lớp mỏng khi bôi lên da hoặc niêm mạc

- Không gây kích ứng, dị ứng đối với da và niêm mạc dù phải sử dụng trong thời gian dài

- Bền vững về lý, hóa và vi sinh trong quá trình bảo quản

- Gây được hiệu quả điều trị cao đúng với mục đích và yêu cầu khi thiết kế công thức

- Không gây bẩn áo quần và dễ rửa sạch bằng xà phòng và nước

2.5 Tổng quan về cây Cỏ thuốc hàn

- Tên khoa học: Struchium sparganophorum (L.) O Ktze, thuộc họ Cúc (Asteraceae), chi Struchium

- Các tên khác: Cỏ lá xoài, Cốc đồng, Nọc xoài, Tam nhân đả

- Tên đồng nghĩa: Ethulia sparganophora L.; Sparganophorus vaillantii

Crantz.[1]

Loài: Struchium sparganophorum (L.)O Ktze

Hình 2 8 Các bộ phận của cây Cỏ thuốc hàn

(Struchium sparganophorum (L.) O Ktze)

2.5.2 Đặc tính thực vật [1]

2.5.2.1 Mô tả thực vật

Loài cây thân thảo mọc hằng năm, cao 10–30 cm Lá mọc so le, phiến thon, mép có răng Hoa đầu đơn độc ở nách lá, rộng 6–8 mm, bao chung màu lục; hoa trắng, toàn hoa ống, vòi nhuỵ đỏ Quả bế trắng mang 5 vẩy dính nhau thành chén ở đầu

19

2.5.2.2 Vùng phân bố

Cây Cỏ thuốc hàn có nguồn gốc từ Trung Mỹ vào Singapore từ cuối thế kỉ XIX Cây được phát tán vào nước ta, mọc nhiều ở trong vườn, trên đồng ruộng các tỉnh vùng Đồng bằng sông Cửu Long

2.5.3 Tác dụng dược lý, hoạt tính sinh học

2.5.3.1 Theo y học cổ truyền và kinh nghiệm dân gian [1]

Theo kinh nghiệm dân gian tại Việt Nam, cây Cỏ thuốc hàn cho thấy tác dụng cầm máu, sát trùng, tiêu độc, tán ứ hiệu quả khi được giã nát và đắp lên vết thương hở Ngoài ra, người ta nhận thấy cây Cỏ thuốc hàn khi đắp vào vết thương còn giúp cho vết thương mau lành hơn Ở một số địa phương, nhân dân sử dụng cây Cỏ thuốc hàn để chữa chứng băng huyết

Ở Nigeria, lá cây Cỏ thuốc hàn được dùng như một loại rau trong khẩu phần ăn do chứa hàm lượng dinh dưỡng và khoáng chất cao

2.5.3.2 Các nghiên cứu trước về dược tính

Theo Ganiyu Oboh [13], lá cây Cỏ thuốc hàn chứa hàm lượng phenol tổng cao (5,4 g/100 g), đặc biệt là các hợp chất flavonoid – loại hợp chất có khả năng bảo vệ màng lipid của tế bào khỏi tác nhân oxy hóa, do đó hứa hẹn là nguồn cung cấp chất chống oxy hóa hữu hiệu

Tác giả cũng đưa ra các thông số cho thấy khả năng kháng oxy hóa của dịch chiết ethanol lá

Bảng 2 1 Bảng thông số chỉ khả năng kháng oxy hóa của dịch chiết ethanol lá

Khả năng bắt giữ gốc tự do (%) 65,2±0,2

Bên cạnh khả năng kháng oxy hóa, dịch chiết ethanol lá còn có khả năng

ức chế chọn lọc một số loài vi khuẩn và nấm với cường độ khác nhau đối với từng loài

Năm 2002, Maria do Céu de Madureira và cộng sự đã tiến hành thử hoạt tính kháng ký sinh trùng sốt rét trên 13 loại thảo dược truyền thống, trong đó có

20

cây Cỏ thuốc hàn (Struchium sparganophorum (L.) O Ktze) Kết quả cho thấy,

cao ether dầu hỏa của cây Cỏ thuốc hàn có IC50 < 10 µg/mL So với cao ether dầu

hỏa của cây Thanh hao hoa vàng Artemisia annua L., họ Cúc (Asteraceae)

(IC50 = 3,9 µg/mL) và cao nước của cây Neem Azadirachta indica A Juss, họ Xoan (Meliaceae) (IC50 = 10 µg/mL) – là hai loại cây thông dụng để chữa trị sốt rét – thì kết quả trên rất đáng được quan tâm trong việc tìm kiếm nguồn thuốc chống sốt rét mới.[14]

2.5.4 Thành phần hóa học có hoạt tính kháng khuẩn trong cây

Năm 2006, Ganiju Oboh định tính có sự hiện diện của alkaloid, flavonoid, tannin, saponin, phlobatanin, anthraquinon và glycosid từ dịch chiết ethanol lá.[13]

Cùng năm 2006, S.O Salawu và cộng sự cũng xác định bằng GC – MS sự hiện diện của một số hợp chất phenol có trong lá như acid p-coumaric, acid caffeic.[15]

2.5.4.1 Flavonoid

Flavonoid nổi bật với hoạt tính kháng oxy hóa hiệu quả

Bên cạnh đó, các hợp chất flavonoid đã được nghiên cứu trên tế bào vi sinh vật và được cho là những hợp chất có tác dụng kháng khuẩn Hoạt tính này của flavonoid là do khả năng tạo phức với các protein tan ngoại bào và tạo phức với thành tế bào vi khuẩn [16] Trong đó, hợp chất 3,7-Dimethylquercetin được phân lập từ lá cây Cỏ thuốc hàn có hoạt tính khá mạnh với chủng vi khuẩn tụ cầu

vàng (Staphylococcus aureus) và tụ cầu vàng kháng methicillin (MRSA).[1]

Hình 2 9 Công thức cấu tạo của 3,7-Dimethylquercetin

21

2.5.4.2 Alkaloid [16]

Diterpenoid alkaloids là một loại alkaloid có đặc tính kháng khuẩn Trong

đó một đại diện quan trọng chính là hợp chất berberine, kế đến là palmatin Những năm gần đây, một số nghiên cứu mới nhất cho thấy hoạt chất berberin có phổ kháng khuẩn rộng, có tác dụng ức chế đối với nhiều vi khuẩn Gram dương,

Gram âm và các vi khuẩn acid như Shigella shiga, Shigella dysenteria,

Staphylococcus aureus, Vibrio cholera, Streptococcus viridans

Hình 2 10 Công thức cấu tạo của berberin

2.5.4.3 Các hợp chất phenolic [16]

Phần lớn các phenolic tồn tại ở dạng kết hợp với đường (dạng glycosid) dễ tan trong nước Trong y học, các hợp chất phenolic có tác dụng chữa bệnh như là kháng sinh, chất chống viêm Các phenolic trong tế bào sống là một chất độc kiềm hãm sự phát triển của nấm, vi nấm và virus gây bệnh

Ngoài ra, các phenolic còn có tác dụng kích thích quá trình tái sinh, bảo vệ chống bức xạ và gốc tự do, do vậy có khả năng hỗ trợ quá trình làm liền sẹo

Hình 2 11 Một số hợp chất phenolic có trong lá Cỏ thuốc hàn