CHỌN LỌC MÔI TRƢỜNG NHÂN SINH KHỐI NẤM Beauveria bassiana TẠO CHẾ PHẨM DẠNG BÀO TỬ VÀ ĐÁNH GIÁ HIỆU LỰC CỦA CHẾ PHẨM LÊN CÔN TRÙNG GÂY HẠI

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CHỌN LỌC MƠI TRƢỜNG NHÂN SINH KHỐI NẤM Beauveria bassiana TẠO CHẾ PHẨM DẠNG BÀO TỬ VÀ ĐÁNH GIÁ HIỆU LỰC CỦA CHẾ PHẨM LÊN CÔN TRÙNG GÂY HẠI Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : PHAN CÔNG NHẬT Niên khóa : 2011 – 2013 Tháng 01/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CHỌN LỌC MÔI TRƢỜNG NHÂN SINH KHỐI NẤM Beauveria bassiana TẠO CHẾ PHẨM DẠNG BÀO TỬ VÀ ĐÁNH GIÁ HIỆU LỰCCỦA CHẾ PHẨM LÊN CÔN TRÙNG GÂY HẠI Hƣớng dẫn khoa học Sinh viên thực ThS TRẦN THỊ VÂN PHAN CƠNG NHẬT Niên khóa: 2011 – 2013 Tháng 01/2014 LỜI CẢM ƠN Chân thành cảm ơn:  Ban Giám hiệu Trƣờng Đại học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, Ban Chủ nhiệm Bộ mơn Cơng nghệ sinh học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho em suốt trình học trƣờng  Xin gởi lời biết ơn sâu sắc đến Th.s Trần Thị Vân hết lịng hƣớng dẫn em suốt thời gian thực tập tốt nghiệp  Thành kính ghi ơn cha mẹ ni dƣỡng, thƣơng yêu dạy dỗ nên ngƣời  Sau cùng, xin cảm ơn bạn Ƣng Thị Mỹ Tiên toàn thể bạn lớp động viên giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 01/2014 Phan Cơng Nhật [Type text] TĨM TẮT Nấm trùng Beauveria bassiana có hiệu lực cao tiêu diệt nhiều lồi trùng sâu bệnh hại trồng, chiếm vị trí quan trọng chế phẩm thuốc trừ sâu vi sinh từ vi nấm góp phần giảm tỷ lệ kháng thuốc nhƣ thiệt hại ô nhiễm môi trƣờng, cân sinh thái đặc biệt ảnh hƣởng đến ngƣời thuốc trừ sâu hóa học gây Để nâng cao hiệu ứng dụng chế phẩm nấm cần đẩy mạnh thực nhiềuthí nghiệm khảo sát nghiên cứu việc sản suất chế phẩm để phịng trừ sâu hại trồng,đề tài“Chọn lọc mơi trƣờng nhân sinh khối nấm Beauveria bassiana tạo chế phẩm dạng bào tử đánh giá hiệu lực chế phẩm lên côn trùng gây hại”đƣợc thực Nội dung: chọn lọc mơi trƣờng bán rắn thích hợp cho nấm phát triển, theo dõi điều kiện phát triển nhƣ: ẩm độ, nhiệt độ, thời gian phát triển cao bào tử thời gian sấy ảnh hƣớng đến chế phẩm Thử nghiệm hoạt lực gây chết lên sâu xanh bƣớm trắng châu chấu nhà lƣới Kết quả: Đã chọn lọc đƣợc môi trƣờng bán rắn nhân sinh khối thích hợpcho nấm B bassiana gạo (tấm) có bổ sung khống chất, nấm phát triển tốt ẩm độ 20% nhiệt độ 27ºC, nhƣ thời gian phát triển đạt hàm lƣợng bào tử cao sau 10 ngày cấy lên môi trƣờng nhiệt độ sấy 37ºC 48 đạt mật số bào tử tốt thích hợp cho việc bảo quản Hiệu lực gây chết chế phẩm B bassiana lên sâu xanh bƣớm trắng 70% sau 15 ngày phun châu chấu 65% sau 15 ngày phun với tỷ lệ mọc lại nấm 38,46% 43% sâu xanh bƣớm trắng ii SUMMARY Beauveria bassiana, a high effective insect fungus have killed many insects and pests of crops, occupy an important position in the microorganisms pesticide preparations from fungal contribute to reduce the rate of drug resistance as well as damage due to environmental pollution, ecological imbalance and particularly affects people by chemical pesticides cause To improve the efficiency application of fungal preparations should promotion many experiments in the research and surveys about production preparations to prevent insects and crop pests,the thesis"Selective increase medium Beauveria bassiana fungus biomass make spores produce and evaluate the effectiveness of the products on harmful insects"is performed Contents: Selective suitable semi-solid medium for fungal development and monitoring of development conditions such as humidity, temperature, the highest time development of cell and drying timeaffects products Lethal potency testing to Pieris rapaeand Caeliferain a greenhouse Results: Selectedsemi-solid mediumincrease biomasssuitablyfor Beauveria bassiana fungus is rice (broken grains of rice) supplemented with minerals, fungi grow well in humidity 20% and temperature of 27ºC,as well as development time reachedhigh levels of spores after 10 days culture on the medium and the drying temperature at 37ºC in 48 hours to reach the density of spores is good and suitable for storage Lethal effective of productB bassiana onPieris rapae was 70% after 15 spray days and Caelifera is 65% after 15spray days with the rate of fungus regrowth nearly 38.46 % and nearly 43% on Pieris rapae Key words: Beauveria bassiana iii MỤC LỤC NỘI DUNG TRANG LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii SUMMARY iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH SÁCH CÁC BẢNG viii DANH SÁCH CÁC HÌNH ix Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Yêu cầu 1.3 Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu nấm Beauveria bassiana 2.2 Đặc điểm hình thái 2.3 Khả sinh độc tố diệt côn trùng 2.3.1 Độc tố 2.3.2 Cơ chế tác động 2.4 Triệu chứng sâu nhiễm bệnh 2.5 Các yếu tố ảnh hƣớng đến sinh trƣởng phát triến B.bassiana 2.5.1 Ảnh hƣởng môi trƣờng phƣơng pháp nuôi cấy 2.5.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ,ánh sáng độ thống khí độ pH Khái niệm lồi trùng dùng thí nghiệm 3.1 Sâu xanh bƣớm trắng (Pieri rapae) 3.2 Châu chấu (Caelifere) Các nghiên cứu nấm Beauveria bassiana 4.1 Các nghiên cứu nƣớc 4.2 Các nghiên cứu nƣớc Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 iv 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 11 3.2 Vật liệu nghiên cứu 11 3.2.1 Chủng vi sinh vật 11 3.2.2 Môi trƣờng nuôi cấy 11 3.3 Dụng cụ thiết bị 11 3.3.1 Dụng cụ 11 3.3.2 Thiết bị 11 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 12 3.4.1 Khảo sát chọn lọc môi trƣờng bán rắn để nhân sinh khối nấm Beauveria bassiana 12 3.4.2 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởngđến phát triển củaB Bassiana môi trƣờng nhân sinh khối tốt 13 3.5 Đánh giá hiệu lực chế phẩm nấm Beauveria bassiana để phịng trừ trùng hại trồng 15 3.5.1 Đối với sâu xanh bƣớm trắng 15 3.5.2 Đối với châu chấu 16 3.6 Phƣơng pháp pha loãng đếm số lƣợng bào tử 16 3.6.1 Phƣơng pháp pha loãng 16 3.6.2 Phƣơng pháp đếm số lƣợng bào tử 17 3.6.3 Phƣơng pháp tính tốn 17 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 19 4.1 Tuyển chọn nấm Beauveria bassiana đƣợc nuôi cấy 19 4.2 Khảo sát chọn lọc môi trƣờng bán rắn để nhân sinh khối nấm 19 4.3 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến phát triển nấm B bassiana môi trƣờng nhân sinh khối tốt 21 4.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hƣởng độ ẩm nhiệt độ đến phát triển B.bassiana 21 4.3.1.1 Khảo sát ảnh hƣởng độ ẩm đến phát triển nấm B.bassiana 21 4.3.1.2 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến phát triển củaB bassiana 24 4.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy đến phát triển nấm B bassiana 26 v 4.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hƣởng thời gian sấy tới suất chất lƣợng chế phẩm B bassiana 27 4.4 Các bƣớc sản xuất chế phẩm nấm Beauveria bassiana 28 4.5 Đánh giá hiệu lực chế phẩm nấm Beauveria bassiana để phịng trừ trùng hại trồng 29 4.5.1 Đánh giá hiệu lực trừ sâu xanh bƣớm trắng chế phẩm 29 4.5.2 Đánh giá hiệu lực trừ châu chấu chế phẩm 31 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 33 5.1 Kết luận 33 5.2 Đề nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 PHỤ LỤC vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT B.bassiana : Beauveria bassiana CMA : Corn meal agar Cs : Cộng Ha : Hecta LLL : Lần lặp lại MEA : Malt extract agar NA : Nutrient agar PGA : SDA : Sabouraud’s dextrose agar YPDA : Yeast extract potato dextrose agar PDA : Potato dextrose agar Potato glucoza agar vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 4.1 Sự phát triển B.bassiana môi trƣờng bán rắn sau ngày cấy nhiệt độ 27ºC 20 Bảng 4.2 Khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ nƣớc đến phát triển B bassiana môi trƣờng đƣợc chọn lọc 23 Bảng 4.3 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến phát triển B.bassiana độ ẩm 20% 25 Bảng 4.4 Ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy đến phát triển B bassiana ẩm độ 20% nhiệt độ 27ºC 26 Bảng 4.5 Ảnh hƣởng thời gian sấy tới chất lƣợng chế phẩm nấm B.bassiana 27 Bảng 4.6 Hiệu lực chế phẩm trừ sâu xanh bƣớm trắng thử nghiệm nhà lƣới 30 Bảng4.7 Hiệu lực chế phẩm trừ châu chấu xanh thử nghiệm nhà lƣới 31 viii ... chế phẩm, đề tài? ?Chọn lọc mơi trƣờng nhân sinh khối nấm Beauveria bassianatạo chế phẩm dạng bào tử đánh giá hiệu lực chế phẩm lên côn trùng gây hại? ??đƣợc thực 1.2 Yêu cầu Tạo chế phẩm nấm Beauveria. .. việc sản suất chế phẩm để phòng trừ sâu hại trồng,đề tài? ?Chọn lọc môi trƣờng nhân sinh khối nấm Beauveria bassiana tạo chế phẩm dạng bào tử đánh giá hiệu lực chế phẩm lên côn trùng gây hại? ??đƣợc thực...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CHỌN LỌC MƠI TRƢỜNG NHÂN SINH KHỐI NẤM Beauveria bassiana TẠO CHẾ PHẨM DẠNG BÀO TỬ VÀ