NGHIÊN CỨU LÀM TĂNG ĐỘ BỀN HỆ PHÂN TÁN NANO RUTIN

2 nghiên cứu làm tăng độ bền hệ phân tán nano của rutin trong nước với nồng độ cao 5%, kích thước hạt nhỏ hơn 700nm và đánh giá khả năng cũng như đặc tính của hệ.. Mục tiêu của đề tài Đ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

NGHIÊN CỨU LÀM TĂNG ĐỘ BỀN HỆ PHÂN TÁN

Tháng 8 năm 2013

ii

LỜI CẢM TẠ

Để đạt được những kết quả như hôm nay, em xin gửi lòng tri ân sâu sắc đến

Ban chủnhiệm Bộ môn Công nghệ hóa học Trường Đại Học Nông Lâm TP.HCM,

cùng tất cả quý thầy cô đã truyền đạt kiến thức cho em trong suốt quá trình học tại

trường

Để hoàn thành luận văn này em xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc đến

TS Lê Thị Hồng Nhan, đã hết lòng hướng dẫn, giúp đỡ, chỉ bảo tận tình, giải đáp

những khúc mắc và tạo mọi điều kiện trong suốt thời gian thực hiện khóa luận tốt

nghiệp

Em xin gửi lời cảm ơn đến chị Quỳnh Anh và các anh chị trong bộ môn Kỹ

thuật Hóa Hữu Cơ, trường Đại Học Bách Khoa TP.HCM đã giúp đỡ và tạo điều kiện

về cơ sở vật chất để em thực hiện thí nghiệm tốt nhất

Cảm ơn các bạn lớp DH09HH đã giúp đỡ, động viên tôi trong suốt các năm học

vừa qua

Con xin cảm ơn gia đình đã tạo cho con mọi điều kiện tốt nhất, hỗ trợ con cả về

vật chất và tinh thần trong cuộc sống và học tập của con

TP.HCM, tháng 8 năm 2013

Phạm Thị Vân Anh

iii

TÓM TẮT

Đề tài:“Nghiên cứu làm tăng độ bền hệ phân tán nano rutin” được tiến hành

tại phòngthí nghiệm Bộ môn Kỹ thuật Hữu cơ, trường Đại học Bách Khoa TP.HCM, thời gian từ tháng 3/2013 đến tháng 8/2013

Luận văn tập trung nghiên cứu làm tăng độ bền của hệ huyền phù nano rutin với nồng độ rutin>5%bằng phương pháp kết hợp đồng hóa tốc độ cao Phillips với đồng hóa áp suất cao APV Bột rutin nguyên liệu được phân tán trong nướccất với hai hệ phụ gia khác nhau là: PEG400 0,1% và ethanol 10% - SSL 0,5% Thực hiện theo hướng tăng dần áp suất đồng hóa để thay đổi kích thước trung bình của các hạt rutin HệPEG400 0,1% đạt kích thước hạt 220 nm tại áp suất đồng hóa 400 bar và hệ ethanol 10% - SSL 0,5% có kích thước hạt 248,42 nm khi đồng hóa ở áp suất 600 bar.Khi bổ sung chitosan 0,2% vào hệ phụ gia PEG400, độ sa lắng được giảm đi, chỉ khoảng <20% sau 5 ngày lưu trữ Tuy nhiên việc sử dụng chiotsan như một chất ổn định sẽ làm tăng độ nhớt của hệ huyền phù, do đó áp suất đồng hóa cần đạt 800 bar để hạt có kích thước nhỏ nhất (236nm)

Từ những kết quả đạt được chứng tỏ rằng việc nâng cao nồng độ rutin trong hệ huyền phù mà vẫn đảm bảo kích thước nano là khả quan và có nhiều triển vọng ứng dụng trong tương lai

iv

ABSTRACT

Thesis: "Research to improve stability of the nano rutin suspensions" was researchedatlaboratoryof organic techniques Department, Ho Chi Minh CityUniversityof Technology, from Mar 2013to Aug 2013

This thesis focused on investigating and improving stability of the nano rutin suspensions which the rutin concentration was targeted at 5% Rutin powder was dispersed in deionized water with two different surfactant systems such as PEG400 0.1% and ethanol 10% - SSL 0.5% by using a Phillips blender and an APV2000 high presure homogenizer Increase of homogenizating presure led to change average size

of rutin particles The particles had size of 220 nm and 248 nm in case of using PEG400 (at 400 bar) and EtOH-SSL (at 600 bar), respectively Chitosan was applied

to nano rutin suspensions using PEG400at ratio of 0.2% and led to slow down the sedimentation rate which was under 20% after 5 storage days However, using chitosan as stabilizer influenced to viscosity of the suspensions and the pressure of 800 bar was needed to reach smallest size of about 236 nm

From the results obtained demonstrate to improve the concentration of rutin in dispersions while maintaining nanoscale is positive and promising applications in the future

v

MỤC LỤC

Trang

Lời cảm tạ ii 

Tóm tắt iii 

Mục lục v 

Danh mục từ viết tắt ix 

Danh mục hình x 

Danh mục bảng xiii 

Danh mục phụ lục xiv 

Chương 1 MỞ ĐẦU 1  

1.1 Đặt vấn đề 1 

1.2 Mục tiêu của đề tài 2 

1.3 Nội dung đề tài 2 

Chương 2.TỔNG QUAN 3  

2.1 Giới thiệu về rutin 3 

2.1.1 Tính chất vật lý và hóa học 4 

2.1.2 Hoạt tính sinh học của rutin 6 

2.2 Công nghệ nano 6 

2.2.1 Vật liệu nano 7 

2.2.2 Phân loại 7 

2.2.3 Tính chất của vật liệu nano 8 

2.2.3.1 Diện tích bề mặt và số phân tử của bề mặt lớn [18, 24] 8 

vi

2.2.3.2 Khả năng phân tán ổn định dạng huyền phù 9 

2.2.3.3 Tính bám dính mạnh 10 

2.2.3.4 Độ tan bão hòa, tính tan của vật liệu tăng lên khi đưa xuống kích thước nano 11 

2.2.3.5 Điểm nóng chảy thấp 13 

2.2.3.6 Hiệu quả trên sự vận chuyển sinh học 13 

2.2.4 Các phương pháp tạo vật liệu nano 13 

2.2.4.1 Phương pháp Bottom – up (Build – up) 14 

2.2.4.1.1 Phương pháp kết tụ 14 

2.2.4.1.2 Phương pháp dùng dung môi siêu tới hạn 15 

2.2.4.2 Phương pháp Top – down (Break – down) 15 

2.2.4.2.1 Phương pháp nghiền 16 

2.2.4.2.2 Đồng hóa ở áp suất cao 16 

2.2.4.3 Kết hợp đồng thời hai phương pháp “Top-down” và “Bottom-up” 17 

2.3 Một số công trình nghiên cứu về hệ phân tán nano rutin 18 

2.3.1 Tạo hệ huyền phù nano rutin và tinh thể nano rutin 18 

2.3.2 Hạt nano tinh thể rutin trong mỹ phẩm 21 

2.3.3 Hệ phân tán nano trong mạng chitosan 21 

Chương 3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23  

3.1 Thời gian, địa điểm và vật liệu nghiên cứu 23 

3.1.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 23 

3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 23 

3.2 Phương pháp nghiên cứu 24 

3.2.1 Xác định độ ẩm của nguyên liệu và mẫu 24 

vii

3.2.2 Xác định độ tinh khiết của nguyên liệu rutin 25 

3.2.3 Xác định phân tử lượng trung bình của nguyên liệu chitosan 27 

3.2.4 Xác định độ deacetyl hóa 27 

3.2.5 Đo kích thước hạt 28 

3.2.6 Phân tích cấu trúc 29 

3.2.7 Đánh giá độ sa lắng 29 

3.2.8 Xác định hàm lượng rutin trong hệ 30 

3.3 Nội dung thực nghiệm 30 

3.3.1 Đánh giá đặc tính nguyên liệu 30 

3.3.2 Khảo sát khả năng tạo hệ huyền phù rutin bằng đồng hóa áp suất cao 31 

3.3.2.1 Khảo sát ảnh hưởng của áp suất đồng hóa đếnkhả năng tạo hệ huyền phù rutin hỗ trợ bởi PEG400 31 

3.3.2.2.Khảo sát ảnh hưởng của áp suất đồng hóa đến khả năng tạo hệ huyền phù rutin hỗ trợ bởi ethanol 33 

3.3.3 Khảo sát ảnh hưởng của polymer đến khả năng tạo hệ huyền phù rutin 34 

Chương 4.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37  

4.1 Đánh giá đặc tính nguyên liệu 37 

4.1.1 Đánh giá đặc tính nguyên liệu rutin 37 

4.1.2 Đánh giá đặc tính nguyên liệu chitosan 40 

4.2 Quá trình tạo hệ huyền phù rutin bằng đồng hóa áp suất cao 43 

4.2.1 Hỗ trợ bằng PEG400 43 

4.2.2 Hỗ trợ bằng ethanol 48 

4.3 Ảnh hưởng của polymer đến khả năng tạo hệ huyền phù rutin 53 

4.4 So sánh khả năng tạo hệ huyền phù rutin bằng đồng hóa áp suất cao 58 

viii

Chương 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 60  

TÀI LIỆU THAM KHẢO 62  

PHỤ LỤC 66  

ix

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

DAD Diode array detection

DD Degree of Deacetylation (Độ deacetyl hóa)

DI water Deionized water

EtOH Ethanol

FT-IR Fourier transform infrared spectroscopy (Phổ hồng ngoại biến đổi

Fourier) GPC Gel Permeation Chromatography (Sắc kí thẩm thấu gel)

HPLC High performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu năng cao)

LD Laser diffractometry

LDS Laser diffraction spectrometry

MN Phân tử lượng trung bình số

MV Phân tử lượng trung bình nhớt

MW Phân tử lượng trung bình khối

PCS Photon correlation spectroscopy

PEG Polyethylene glycol

PI Polydispersity

SEM Scanning electron microscope

SSL Sodium Stearoyl Lactylate

x

DANH MỤC HÌNH

Hình 2.1: Công thức phân tử rutin 3 

Hình 2.2: Cây hoa hòe (Sophora Japonica L.) 4 

Hình 2.3: Phương trình phản ứng thủy phân rutin 5 

Hình 2.4: Công thức phân tử quercetin 5 

Hình 2.5: Kích thước các loại vật liệu nano ( L là kích thước không phải kích thước nano) [19] 8 

Hình 2.6: Sự tăng đáng kể diện tích bề mặt nhờ giảm kích cỡ hạt [18] 9 

Hình 2.7: Ảnh hưởng của bán kính hạt lên độ tan ở các điều kiện độ nhớt khác nhau [17] 12 

Hình 2.8: Ảnh hưởng của khoảng cách khuếch tán h lên gradient nồng độ và làm tăng tốc độ hòa tan [18] 13 

Hình 2.9: Nguyên lý “Bottom-up” và nguyên lý “Top-down” 14 

Hình 2.10: Phương pháp dùng dung môi siêu tới hạn CO2 15 

Hình 2.11: Phương pháp piston gap (A) and và phương pháp jet stream (B) 17 

Hình 2.12: Hình ảnh của kính hiển vi (độ phóng đại 1000 lần) của rutin thô (a) và các tinh thể nano rutin sau khi đồng hóa áp suất cao (b) [18] 19 

Hình 2.13: Kết quả kích thước hạt (LD) của hệ huyền phù sau khi tạo thành (trái) và hệ huyền phù tạo thành từ viên nén nano rutin (phải) Thanh sai số (error bar) thể hiện sự sai lệch của kết quả sau 3 lần đo 20 

Hình 2.14: Hình chụp kính hiển vi điện tử của hệ huyền phù sau khi tạo thành (A) và hệ huyền phù tạo thành từ viên nén nano rutin (B) 20 

Hình 3.1: Các loại thiết bị đồng hoá 24 

Hình 3 2 : Máy đo độ ẩm SATORIUS MB45 24 

Hình 3.3: Phổ FT-IR và cách tính độ deacetyl hóa của chitosan 28 

xi

Hình 3.4: Quá trình sa lắng 29 

Hình 3.5: Quy trình tạo hệ phân tán huyền phù nano rutin hỗ trợ PEG400 32 

Hình 3.6: Quy trình tạo hệ phân tán huyền phù rutin hỗ trợ ethanol 34 

Hình 3.7: Quy trình tạo hệ phân tán huyền phù nano rutin hỗ trợ PEG400 bổ sung chitosan 36 

Hình 4.1: Nguyên liệu rutin 37 

Hình 4.3: Kết quả nhiễu xạ tia X của rutin nguyên liệu 39 

Hình 4.4: Ảnh TEM của nguyên liệu rutin 40 

Hình 4.5: Nguyên liệu chitosan 41 

Hình 4.8: Kết quả phân tích phổ hồng ngoại FT-IR 42 

Hình 4.9:Ảnh hưởng của áp suất đồng hóa lên kích thước hạt sơ bộ của hệ phân tán rutin hỗ trợ PEG400 43 

Hình 4.10: Phân bố kích thước hạt của mẫu huyền phù rutin có hỗ trợ PEG tại áp suất đồng hóa 200 bar (a) và 1200 bar (b) 44 

Hình 4.11: Ảnh hưởng của áp suất đồng hóa lên nồng độ rutin của hệ phân tán rutin với hỗ trợ PEG400 44 

Hình 4.12: Ảnh hưởng của áp suất đồng hóa lên độ sa lắng của hệ phân tán rutin hỗ trợ PEG400 45 

Hình 4.13: Ảnh hưởng của thời gian lên kích thước hạt của hệ phân tán rutin hỗ trợ PEG400 46 

Hình 4.14: Kết quả nhiễu xạ tia X của hệ phân tán rutin hỗ trợ PEG400 ở các áp suất đồng hóa khác nhau 47 

Hình 4.15: Ảnh hưởng của áp suất đồng hóa lên kích thước hạt của hệ phân tán rutin hỗ trợ bằng ethanol 48 

Hình 4.16: Phân bố kích thước hạt của mẫu huyền phù rutin có hỗ trợ ethanol tại áp suất đồng hóa 200 bar (a) và 1200 bar (b) 48 

Hình 4.21: Ảnh hưởng của áp suất đồng hóa lên kích thước hạt của hệ phân tán rutin

hỗ trợ PEG400 và bổ sung chitosan 53 

Hình 4.22: Phân bố kích thước hạt của mẫu huyền phù rutin có hỗ trợ PEG400 và chitosan tại áp suất đồng hóa 400 bar (a) và 1000 bar (b) 54 

Hình 4.23: Ảnh hưởng của áp suất đồng hóa lên nồng độ rutin của hệ phân tán rutin với hỗ trợ PEG400 và chitosan 54 

Hình 4.24: Ảnh hưởng của áp suất đồng hóa lên độ sa lắng của hệ phân tán rutin hỗ trợ PEG400 và bổ sung chitosan 55 

Hình 4.25: Ngoại quan của các hệ phân tán rutin hỗ trợ PEG400 khi bổ sung chitosan

ở áp suất đồng hóa và thời gian tồn trữ khác nhau 56 

Hình 4.26: Ảnh hường của thời gian lên kích thước hạt của hệ phân tán rutin hỗ trợ PEG400 và bổ sung chitosan 57 

Hình 4.27: Kết quả nhiễu xạ XRD của hệ phân tán rutin hỗ trợ PEG400 và bổ sung chitosan ở các áp suất đồng hóa khác nhau 58 

xiii

DANH MỤC BẢNG

Bảng 2.1: Liên hệ giữa kích thước hạt và vận tốc lắng [24] 10 

Bảng 2.2: Liên hệ giữa kích thước hạt và tỷ lệ lượng bám dính [18] 10 

Bảng 2.3: Công thức thành phần của hệ huyền phù rutin [18] 18 

Bảng 2.4: Kích thước hạt trung bình và chỉ số phân bố hạt của hệ huyền phù rutin sau quá trình đồng hóa cao áp [18] 19 

Bảng 3.4: Thành phần hệ huyền phù rutin hỗ trợ PEG400 bổ sung chitosan 35 

Bảng 4.1: Tính chất cơ bản của rutin nguyên liệu 37 

Bảng 4.2: So sánh các điều kiện đồng hóa tạo huyền phù nano rutin tương ứng các hệ phụ gia khác nhau 59 

xiv

DANH MỤC PHỤ LỤC

Phụ lục 1: Giấy kiểm nghiệm chất lượng của rutin nguyên liệu 66 

Phụ lục 2: Độ ẩm của rutin nguyên liệu ban đầu 67 

Phụ lục 3: Phổ hấp thu UV-Vis của rutin chuẩn [26] 67 

Phụ lục 4: Phổ hấp thu UV-Vis của peak rutin đo bằng đầu do DAD của máy HPLC 67 

Phụ lục 5: Phổ hấp thu UV-Vis của quercetin chuẩn [26] 68 

Phụ lục6: Phổ hấp thu UV-Vis của peak quercetin đo bằng đầu do DAD của máy HPLC 68 

Phụ lục 7: Xây dựng đường chuẩn của rutin và đánh giá độ tinh khiết của rutin nguyên liệu 69 

Phụ lục 8: Xây dựng đường chuẩn quercetin và đánh giá hàm lượng quercetin trong nguyên liệu 70 

Phụ lục 9: Kết quả LDS của mẫu huyền phù rutin hỗ trợ PEG400 đồng hóa ở áp suất

Phụ lục 31: Kết quả tính độ deacetyl hóa theo phổ XRD 89 

Phụ lục 32: Hàm lượng chất rắn trong mẫu huyền phù sau quá trình đồng hóa ở các mẫu: hỗ trợ PEG400, hỗ trợ ethanol, hỗ trợ PEG400 và bổ sung chitosan 90 

Đặc biệt trong lĩnh vực dược phẩm, công nghệ nano đã tạo nên bước đột phá về hiệu quả điều trị do các sản phẩm kích thước nano dễ dàng lọt qua khoảng gian bào, một số loại vách tế bào để thâm nhập vào các mô, tế bào tạo nên tác dụng tốt trong chẩn đoán và điều trị Rutin là một hợp chất tự nhiên chiết xuất từ cây hoa hòe, một trong những dược liệu thiên nhiên quí giá từ hàng nghìn năm nay có nhiều hoạt tính sinh học quý báu như: hoạt tính kháng oxy hóa, tác nhân kháng ung thư, tác nhân chống viêm, tác dụng tốt với bệnh tiểu đường, có khả năng bảo vệ thành mạch máu, ngoài ra còn hữu ích trong việc điều trị các bệnh hen suyễn [8, 17] Tuy nhiên việc

mở rộng phạm vi ứng dụng của rutin bị hạn chế vì rutin kém tan trong nước dẫn đến khả năng hấp thu vào cơ thể rất ít Tính chất này được xem như là một trở ngại lớn nhất trong việc chế tạo loại thuốc mới Khả năng tan ít trong nước đã làm giảm đi hoạt tính sinh học của thuốc cũng như khả năng hấp thụ thuốc của cơ thể dẫn đến hiệu quả

sử dụng thuốc không cao [9] Vì vậy một trong những giải pháp được đưa ra là áp dụng công nghệ nano nhằm giảm kích thước hạt rutin xuống kích thước nano để tăng khả năng hấp thu vào cơ thể, nâng cao hiệu quả trong quá trình điều trị

Hướng nghiên cứu tạo hệ phân tán nano của rutin vẫn còn mới mẻ, chưa có nhiều công trình nghiên cứu trên thế giới cũng như trong nước về lĩnh vực này Đề tài:

“Nghiên cứu làm tăng độ bền hệ phân tán nano rutin” được đặt ra với mục tiêu là

2

nghiên cứu làm tăng độ bền hệ phân tán nano của rutin trong nước với nồng độ cao 5%, kích thước hạt nhỏ hơn 700nm và đánh giá khả năng cũng như đặc tính của hệ Kết quả nghiên cứu đạt được trong đề tài này là cơ sở cho những phần nghiên cứu sâu hơn, rộng hơn liên quan đến ứng dụng của rutin

1.2 Mục tiêu của đề tài

Đề tài được thực hiện với mục tiêu nghiên cứu khả năng làm tăng độ bền hệ phân tán nano rutin trong nước tạo thành bằng phương pháp đồng hoá áp suất cao Đề tài định hướng tạo sản phẩm mang tính thương mại và khả năng ứng dụng trong sản xuất thực tiễn nên sử dụng nồng độ rutin trong hệ cao, khoảng 5%

1.3 Nội dung đề tài

Với mục tiêu đặt ra, đề tài gồm các nội dung chính sau:

- Đánh giá nguyên liệu (độ ẩm, cấu trúc, hình thái, độ tinh khiết)

- Khảo sát khả năng tạo huyền phùrutin bằng phương pháp đồng hoá áp suất cao

- Khảo sát ảnh hưởng của polymer tự nhiên đến khả năng tạo huyền phù rutin

- Đánh giá tính chất hệ phân tán thu được như tính chất lý, hóa, độ bền …

1.4 Yêu cầu

- Đánh giá được đặc tính của nguyên liệu rutin và chitosan

- Đánh giá được tính chất hệ phân tán thu được như tính chất lý, hóa, độ bền

3

Chương 2

TỔNG QUAN

2.1 Giới thiệu về rutin

Rutin là hợp chất glycoside thuộc họ flavonoid bao gồm quercetin thuộc nhóm

flavonone và phần đường rutinose Tên của nó xuất phát từ tên của cây Ruta graveolens, một loại cây chứa nhiều rutin

Tên IUPAC: 3,4,5-trihydroxy-6-({[(2R,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy} methyl)oxan-2-yl]oxy}-4H-chromen-4-one

2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-{[(2S,3R,4S,5S,6R)-Công thức phân tử: C27H30O16

Hình 2.1: Công thức phân tửrutin

Rutin được tìm thấy trong nhiều loại thực vật, chẳng hạn như trà đen và vỏ quả táo Nguồn rutin dồi dào nhất là từ cây kiều mạch.Ngoài ra, rutin có thể tích tụ một

lượng đáng kể trong lúa mì, trong cây hòe Nhật Bản (Sophora Japonica L.) và trong hoađầu xuân Trung Quốc (Forsythia suspensa)[5]

4

Cây hòe được trồng khắp Trung Quốc, Nhật Bản, Đông Nam Á từ lâu.Ở Việt

Nam, nguồn chính của rutin là nụ, hoa của cây hoa hòe Nhật Bản (Sophora Japonica L.)trồng nhiều ở Thái Bình, Hà Bắc, Nam Hà, Hải Dương, Hải Phòng, Nghệ An và Tây

Nguyên

Hình 2.2: Cây hoa hòe (Sophora Japonica L.)

2.1.1 Tính chất vật lý và hóa học

Khối lượng phân tử: 610,52 g/mol

Ngoại quan: rutin tinh khiết là tinh thể hình kim màu vàng nhạt hay vàng hơi xanh lục, không mùi, không vị Rutin kém bền màu dưới tác dụng ánh sáng Do đó nó cần được bảo quản trong bình tối ở nơi thoáng khí, tránh tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng

Nhiệt độ nóng chảy của rutin là 188,5oC, khi lên đến 194oC thì rutin sẽ hoàn toàn bị phân hủy[30]

Thường gặp dạng rutin ngậm 3 phân tử nước Nó có thể giải phóng một phân tử nước khi được sấy khô với acid sulfuric đặc và lượng nước còn lại sẽ được loại ra bằng cách gia nhiệt đến 100oC trong áp suất chân không hay khoảng 160oC ở áp suất môi trường

g hấp thu đặquan trọng

n từ một sốdisaccharide

g pH thấp vượng đáng heo sơ đồ ph

Hình 2.3

n là chất chCông thức p

an của quer

Hìn

AC: 2-(3,4-

ước (từ 0,0anol, đặc bi

3: Phương tr

hống oxy hophân tử: C15rcetin: bột m

nh 2.4: Côn

dihydroxyp

5

01 đến 0,01iệt là trong

360 nm và 2rutin là dễ

ăn được, nókhông bền

ng thức phâ

phenyl)- 3,5

125 g/l ở npyridin và

254 nm [26

bị thủy phâ

ó luôn luôn

n, có thể dquercetin.Pành phần P

ân để hình chứa quer

dễ dàng bị Phần lớn ruPhản ứng t

thành querccetin ở nhiđứt ra đặc utin nguyênthủy phân r

rong các câ

hromen-4-o

n tốt Rutin

cetin

ều tỉ biệt

n liệu rutin

ây ăn

one

6

2.1.2 Hoạt tính sinh học của rutin

Nhiều nghiên cứu đã công bố cho thấy rutin có nhiều hoạt tính sinh học đáng chú ý như:

 Tác dụng tốt đối với bệnh suyễn [9]

 Tác dụng tốt đối với bệnh tiểu đường [22]

Với những chất có hoạt tính sinh học cao được đề cập trên đây cùng với tính an toàn và không gây tác dụng phụ, rutin là một dược chất thiên nhiên quý báu Tuy nhiên rutin tan rất kém trong nước, làm giảm khả năng hấp thu vào trong cơ thể, giảm hoạt tính, hạn chế tác dụng của rutin Vì vậy để tăng cường hiệu quả sử dụng của rutin thì công nghệ nano đang là một trong những biện pháp hữu hiệu nhất Khi giảm kích thước hạt rutin xuống kích thước nano thì sẽ giúp phân tán trong nước tốt hơn, tăng cường tính thẩm thấu của rutin

2.2 Công nghệ nano

Khoa học nano được định nghĩa là khoa học nghiên cứu hiện tượng và điều khiển vật liệu ở mức độ lớn hơn phân tử hoặc nguyên tử một chút, ở đó tính chất vật liệu khác biệt đáng kể so với ở kích thước micro

Công nghệ nano dùng để chỉ khả năng thiết kế, tổng hợp vật liệu nano nhằm đem lại những tính chất cần thiết cho những ứng dụng mới.Công nghệ nano bắt đầu phát triển trong ba thập kỷ qua, nhưng công nghệ mới này đã đạt được sự chú ý nhiều

cả trong và ngoài nước.Chương trình nghiên cứu và phát triển công nghệ, khoa học và

kĩ thuật nano của Mỹ (The National Nanotechnology Initiative) đã định nghĩa côngnghệ nano là:

 Khả năng điều khiển vật liệu ở mức độ nguyên tử

Hiện nay, công nghệ nano đã được ứng dụng rộng rãi trong các lĩnh vực y sinh, quang học, điện, cơ khí, hóa học cũng như trong các sản phẩm tiêu dùng như thực phẩm và mỹ phẩm Dược phẩm nano chiếm ưu thế hơn hẳn nhờ các hệ dẫn truyền thuốc hạt nano, chúng có khả năng đi vào các hàng rào sinh học, đi vào các khối u hoặc gia tăng khả năng hòa tan của thuốc [24]

2.2.1 Vật liệu nano

Vật liệu nano là vật liệu trong đó ít nhất có một chiều có kích thước nanomet Kích thước vật liệu nano trải một khoảng từ vài nm đến vài trăm nm phụ thuộc vào bản chất vật liệu và tính chất cần nghiên cứu Tính chất của vật liệu nano bắt nguồn từ kích thước của chúng, vào cỡ nanomet, đạt tới kích thước tới hạn của nhiều tính chất hóa lý của vật liệu thông thường

2.2.2 Phân loại

Có rất nhiều cách phân loại vật liệu nano, sau đây là một vài cách phân loại thường dùng[19]

Dựa trên kích thước nano

Có thể phân loại vật liệu nano làm ba loại [19]

 Vật liệu nano 0-D: bao gồm vật liệu mà cả ba kích thước đều là kích thước nano Các hạt nano, tinh thể nano và chất keo thuộc lớp này

 Vật liệu nano 1-D: khác với loại 0-D, chúng có một kích thước không phải nano Điển hình là ống nano, dây nano, sợi và sợi nano

 Vật liệu nano 2-D:chỉ có một kích thước là nano, đây là những lớp nano, chất phủ bề mặt nano, nano phim

Dựa vào tính chất vật liệu

 Vật liệu nano kim loại

 Vật liệu nano bán dẫn

 Vật liệu nano từ tính

2.2.3 Tính chất của vật liệu nano

Hạt có kích thước nano sở hữu nhiều tính chất lý hóa độc đáo Vì vậy mà chúng

là đối tượng rất phù hợp cho sự phát triển của hệ dẫn truyền thuốc

2.2.3.1 Diện tích bề mặt và số phân tử của bề mặt lớn[18, 24]

Với tinh thể rắn hình cầu có đường kính d, diện tích bề mặt trên một đơn vị đo diện tích bề mặt Sg là:

Theo công thức trên, diện tích bề mặt của vật liệu sẽ tăng lên một cách đáng kể khi vật liệu được đưa xuống kích thước nano

9

Hình 2.6: Sự tăng đáng kể diện tích bề mặt nhờ giảm kích cỡ hạt[18]

2.2.3.2 Khả năng phân tán ổn định dạng huyền phù

Hạt có kích thước micro dễ bị kết tụ và sa lắng do trọng lực Tuy nhiên, hạt có kích thước nano sẽ dễ dàng giữ ở trạng thái lơ lững và khả năng phân tán ổn định dạng huyền phù tăng lên Có hiện tượng này là do nhờ có kích thước hạt nhỏ, lực hấp dẫn lên hạt nano sẽ nhỏ hơn rất nhiều so với hạt lớn

Vận tốc lắng v theo định luật Stoke là:

Trong đó: g là gia tốc trọng trường ( 9,8 m/s)

ρ1là khối lượng riêng chất lỏng (997 kg/m3 với nước ở 25oC)

1 là độ nhớt chất lỏng(0,00089 Pa/s với nước ở 25oC)

Đối với các hạt có kích thước khác nhau, vận tốc lắng được tính theo Bảng 2.1 với khối lượng riêng của chất rắn (ρs) 1700 kg/m3[24]

và bền vững hơn, chúng dễ dàng giữ ở trạng thái lơ lửng với mật độ lớn [24]

2.2.3.3 Tính bám dính mạnh

Hạt nano thể hiện tính bám dính mạnh,khi vật liệu giảm xuống kích thước nano, diện tích bề mặt riêng tăng lên đáng kể giúp gia tăng sự tiếp xúc, kết quả là tăng bám dính của thuốc do lực hút Van der Waals Chính vì vậy thuốc có kích thước nano sẽ được hấp thu tốt hơn và có thời gian lưu trong cơ thể lâu hơn so với các loại thuốc thông thường[18]

Bảng 2.2: Liên hệ giữa kích thước hạt và tỷ lệ lượng bám dính[18]

Kích thước Tỷ lệ lượng hấp thu/ bám dính

so với vật liệu lớn (Hình 2.6) Do đó, tinh thể nano thuốc là giải pháp hiệu quả để tăng

độ tan bão hòa, tăng tính tan của dược liệu

Điều này có thể được giải thích bởi phương trình Ostwald–Freundlich :

Phương trình đã mô tả ảnh hưởng của bán kính (r), thể tích phân tử (tỷ trọng (), sức căng bề mặt () đến độ tan (S) của hạt cầu tại nhiệt độ (T) Trong đó So là độ tan của bản mỏng phẳng chất rắn (r  ∞), M là trọng lượng phân tử chất rắn và R là hằng số khí lý tưởng Kích thước của hạt càng nhỏ, độ tan bão hòa của hạt rắn càng tăng Chính điều này đã gia tăng sự chênh lệch nồng độ của thuốc trong máu và thành ruột dẫn đến làm tăng quá trình khuếch tán thuốc vào máu, khả năng hấp thụ của thuốc tăng [6, 12]

Trong đó D là tốc độ khuếch tán, A là diện tích bề mặt, Cs là độ tan bão hòa, Cx

là nồng độ khối, h là khoảng cách khuếch tán trong đó gradient nồng độ (cs-cx)/h diễn

ra và dc/dt là tốc độ tan

2.2.3.6 Hiệu quả trên sự vận chuyển sinh học

Hạt nano có kích thước phù hợp với kích thước các khe hở, lỗ trên tế bào hay

mô, nên chúng dễ dàng di chuyển vào cơ thể con người và được hấp thụ một cách dễ dàng Chính vì thế, hạt nano đóng vai trò rất quan trọng trong sự phát triển hệ dẫn truyền thuốc (uống hay tiêm tĩnh mạch) [12]

2.2.4 Các phương pháp tạo vật liệu nano

Hiện nay có rất nhiều những phương pháp khác nhau để tạo ra vật liệu nano Nhưng nhìn chung các phương pháp này đều dựa trên 2 nguyên lý cơ bản, đó là

“Bottom-up” và “Top-down” [6, 25] Sau đây là một số phương pháp thường được sử dụng để tạo ra vật liệu cấu trúc nano

14

Hình 2.9: Nguyên lý “Bottom-up” và nguyên lý “Top-down”

2.2.4.1 Phương pháp Bottom – up (Build – up)

Phương pháp nàylà quá trình lắp ghép các hạt cỡ phân tử hay nguyên tử lại để thu được kích thước nano Quy trình được bắt đầu bằng việc hòa tan vật liệu trong một dung môi xác định, sau đó bằng việc thay đổi độ phân cực của dung môi (đổi dung môi) hoặc cho dung môi bay hơi đột ngột, vật liệu sẽ kết tinh và vật liệu nano sẽ được tạo thành

Phương pháp này rất khó thực hiện vì dễ tạo ra kích thước micro và dung môi

sử dụng đắt tiền Đồng thời, quá trình này lại phụ thuộc vào độ tan của thuốc trong dung môi và dung môi tan trong nước Từ đó, việc thực hiện công nghệ nano theo phương pháp bottom-up có thể tạo ra các hình thái vật liệu có ứng dụng rất nhiều trong công nghiệp

2.2.4.1.1.Phương pháp kết tụ

Đây là phương pháp được xây dựng dựa trên phương pháp kết tụ truyền thống Thuốc đầu tiên sẽ được hòa tan vào một dung môi thích hợp (có khả năng hoàn tan thuốc tốt), dung dịch tạo thành sẽ được nhỏ từ từ vào một dung môi khác hòa tan thuốc kém hơn hoặc không hòa tan thuốc [6, 25] Việc thay đổi dung môi một các đột ngột như vậy sẽ làm cho thuốc kết tinh tạo ra những hạt rất mịn Đặc biệt dưới điều kiện khuấy tốc độ cao, quá trình sẽ diễn ra rất nhanh đồng thời các tinh thể thu được cũng

có kích thước rất nhỏ

15

Ưu điểm lớn nhất của phương pháp này đó là nó sử dụng các thiết bị đơn giản

và chi phí thấp Ngoài ra, khả năng chuyển từ quy mô phòng thí nghiệm ra sản xuất công nghiệp của phương pháp này rất cao bằng việc sử dụng các thiết bị khuấy chuyên dụng [6] Tuy vậy, phương pháp này cũng có những nhược điểm rất lớn như quá trình đòi hỏi phải được kiếm soát rất gắt gao để tránh hiện tượng phát triển tinh thể đột ngột, thêm vào đó việc lựa chọn dụng dung môi thích hợp và loại dung môi ra khỏi sản phẩm làm cho phương pháp này trở nên phức tạp ở nhiều trường hợp [25]

2.2.4.1.2 Phương pháp dùng dung môi siêu tới hạn

Trong phương pháp này CO2 siêu tới hạn là một trong những dung môi thường được sử dụng nhất đó là do khả năng hòa tan cũng như việc loại dung môi dễ dàng Thuốc được hòa tan trong CO2 ở trạng thái siêu tới hạnvà khi xả áp suất đột ngột về áp suất khí quyển, CO2 hóa hơi để lại các tinh thể thuốc Quá trình giảm áp có thể được thực hiện rất nhanh do đó tốc độ kết tinh của thuốc được đẩy nhanh và giúp tạo ra những hạt thuốc có kích thước nhỏ hơn Tuy nhiên trong nhiều trường hợp một số dung môi hỗ trợ như methanol, acetone cũng được cho vào để hỗ trợ hòa tan, đây chính là một nhược điểm của phương pháp này[24]

Hình 2.10: Phương pháp dùng dung môi siêu tới hạn CO2

2.2.4.2 Phương pháp Top – down (Break – down)

Phương pháp “Top – down”là phương pháp dùng năng lượng cao để chia nhỏ một hệ thống lớn, cuối cùng tạo ra một đơn vị có kích thước nano.Phương pháp này

chủ yếu được sử dụng để điều chế thuốc dạng tinh thể nano[16]

16

Do việc áp dụng phương pháp “bottom-up” gặp nhiều khó khăn trong nhiều trường hợp đặc biệt việc sản xuất thuốc, phương pháp “top-down” thường được sử dụng cho các sản phẩm dược phẩm thương mại hóa trên thị trường

Nhược điểm lớn của phương pháp này chính là sựmài mòn của bi nghiền, quá trình này có thể làm cho sản phẩm sau nghiền bị nhiễm tạp.Kích thước hạt sau nghiền

và thời gian của quá trình nghiền phụ thuộc rất nhiều vào độ cứng của thuốc, kích thước bi nghiền, độ nhớt của hệ, thời gian nghiền[25]

2.2.4.2.2 Đồng hóa ở áp suất cao

Phương pháp này bao gồm hai kĩ thuật chính là : microfluidisation và đồng hóa kiểu piston-gap

 Micro-fluidisation

Kĩ thuật microfluidisation vận hành theo nguyên lý jet-stream, hạt nano được tạo ra do sự va chạm trực diện của hai dòng huyền phù ở áp suất cao trong đường ống hình chữ Y hoặc chữ Z Động lực của quá trình đồng hóa ở đây là lực va chạm của các hạt, lực shear và hiện tượng cavitation[25] Phương pháp này thường cho hiệu quả không cao do thời gian đồng hóa lâu (có thể lên tới 75 chu kì) thêm vào đó tồn tại một lượng lớn các hạt ở kích thước micro còn ở trong sản phẩm (đặc biệt đối với các loại thuốc có độ cứng cao) đã được đề cập đến trong nhiều nghiên cứu khác nhau[6]

 Phương pháp đồng hóa kiểu piston-gap với dung môi là nước hoặc các dung môi khác (hỗn hợp với nước hoặc không có nước)

Lúc đầu, phương pháp này sử dụng nước làm môi trường phân tán, một hỗn hợp gồm nước, thuốc và chất hoạt động bề mặt được ép bởi một piston dưới áp suất

17

cao (thường từ 1500-2000 bar) đi qua một khe rất hẹp rất nhỏ (thường từ 5-20 µm) Ở trong khe này, áp suất động của hỗn hợp huyền phù tăng rất nhanh do vận tốc dòng rất lớn, chính điều này đã làm giảm áp suất tĩnh của hệ xuống dưới áp suất hơi bão hòa của nước và hình thành các bọt khí trong lòng của hệ Những bong bóng khí này sẽ vỡ ngay khi rời khỏi khe hẹp và tạo ra hiện tượng cavitation Các sóng chấn động sinh ra trong quá trình này sẽ làm bể các hạt thuốc thành các hạt có kích thước nano[25]

Thế hệ thứ hai của phương pháp này sử dụng môi trường đồng hóa không có nước hoặc hỗn hợp của nước và một dung môi hòa tan được trong nước (ví dụ việc sử dụng hỗn hợp nước-PEG hay nước-glycerol)[6].Do hệ bây giờ có áp suất hơi cao hơn trước nên quá trình cavitation không còn diễn ra như trên Tuy vậy, các hạt nano vẫn được tạo thành do các lực khác như lực shear, va chạm phân tử và do quá trình chảy rối của dòng huyền phù khi đi qua khi hẹp Quá trình này thường được áp dụng cho các thuốc có tính bền nhiệt kém

Hình 2.11: Phương pháp piston gap (A) and và phương pháp jet stream (B)

2.2.4.3 Kết hợp đồng thời hai phương pháp “Top-down” và “Bottom-up”

Để tận dụng ưu điểm của cả hai phương pháp trên, những công nghệ mới kết hợp cả hai phương pháp “Top-down” và “Bottom-up” đã được nghiên cứu và phát triển.Có thể kể đến ở đây như công nghệ NANOEDGE của công ty Baxtercompany.Phương pháp này bao gồm hai bước liên tiếp nhau.Bước đầu tiên xuất liên quan đến việc kết tụ các hạt đến một kích thước nào đó.Tuy nhiên rất khó khống

18

chế hệ này ở kích thước nano Vì vậy bước tiếp theo đó là sử dụng đồng hóa cao áp để khống chế các hạt này ở kích thước nano mong muốn[6, 25]

2.3 Một số công trình nghiên cứu về hệ phân tán nano rutin

Như đã đề cập, nhược điểm lớn của rutin chính là độ tan trong nước thấp, nên hạn chế khả năng hấp thu vào cơ thể khi sử dụng trong mỹ phẩm, dược phẩm tăng ứng dụng của rutin trong dược hiện nay còn rất hạn chế Vì vậy để tăng khả năng hấp thụ của rutin vào cơ thể, một số công trình nghiên cứu về việc tạo hệ phân tán nano rutinđã được công bố

2.3.1 Tạo hệ huyền phù nano rutin và tinh thể nano rutin

Nhóm nghiên cứu của R.H.Müller và các cộng sự thuộc trường đại học Free, Berlin, Đức đã thành công trong việc tạo hệ huyền phù nano rutin có thể dùng trong dược phẩm.Trong công trình công bố năm 2009, hệ nano rutin với nồng độ rutin 10%

đã được điều chế bằng cách sử dụng máy đồng hóa cao áp Micron Lab40 (APV Deutschland GmbH, Unna, Germany) Sau 20 chu kì ở áp suất là 1500 bar, hệ phân tán với nồng độ rutin 10% có sự hỗ trợ của các chất làm bền khác nhau đã được điều chế[18].Công thức các thành phần chi tiết được liệt kê trong Bảng 2.3

Bảng 2.3: Công thức thành phần của hệ huyền phù rutin[18]

19

Kích thước hạt rutin trong hệ huyền phù được xác định bằng phương pháp PCS (Photon Correlation Spectroscopy) và LD (Laser Diffraction).Kết quả kích thước hạt trung bình và chỉ số phân bố hạt PI (polydispersity index) được trình bày trong Bảng 2.4

Bảng 2.4:Kích thước hạt trung bình và chỉ số phân bố hạt của hệ huyền phù

rutin sau quá trình đồng hóa cao áp[18]

Hình 2.12: Hình ảnh của kính hiển vi (độ phóng đại 1000 lần) của rutin thô (a) và các

tinh thể nano rutin sau khi đồng hóa áp suất cao (b)[18]

Từ hệ huyền phù nano rutin tạo được, nhóm nghiên cứu của R.H.Müller tiếp tục tạo ra thuốc dạng viên nén nano rutin [23].Khả năng tái phân tán của những viên nén

Hình 2.13: Kết quả kích thước hạt (LD) của hệ huyền phù sau khi tạo thành (trái) và

hệ huyền phù tạo thành từ viên nén nano rutin (phải) Thanh sai số (error bar) thể hiện

sự sai lệch của kết quả sau 3 lần đo

Hình 2.14: Hình chụp kính hiển vi điện tử của hệ huyền phù sau khi tạo thành (A) và

hệ huyền phù tạo thành từ viên nén nano rutin (B)

21

2.3.2 Hạt nano tinh thể rutin trong mỹ phẩm

Trước khi công nghệ nano ra đời, không có báo cáo chứng minh rằng thuốc dạng tinh thể nano rất tốt khi tiếp xúc với da Đặc biệt là không có thông tin rằng các hoạt tính sinh học của thuốc trong da được tăng lên Hơn nữa, cũng không có báo cáo mỹ phẩm

về tăng hoạt tính sinh học khi sử dụng chúng dưới dạng tinh thể nano.Tuy nhiên, có nhiều nghiên cứu cho rằng hạt tinh thể nano rutin cũng đóng vai trò quan trọng trong mỹ phẩm cho da [12]

Hiệu quả điều trị da: dạng huyền phù nano rutin với 5% rutin đã được thử trên da của tình nguyện viên và so sánh với 5% Alpha-G-Rutin PS hoà tan trong nước để thử tính chất bảo vệ da (tính chất chống oxi hóa) Mặc dù nồng độ thấp hơn đáng kể nhưng hiệu quả bảo vệ da tốt hơn 25% so với các sản phẩm trước đây

Điều trị các bệnh nhiễm trùng da, so với rutin liposomal, trong công thức dạng tinh thể nano, sự hòa tan bão hòa của rutin được tăng lên, do đó, có xâm nhập làm gia tăng nồng độ trong da nên quá trình điều trị nhanh Các dạng tinh thể nano cũng được

sử dụng trong công thức mỹ phẩm da như kem hay mỹ phẩm lỏng có chứa các hạt rắn dạng nano (SLN) hay chất mang rắn có cấu trúc nano (NLC) để tăng quá trình xâm nhập vào da [12]

2.3.3 Hệ phân tán nano trong mạng chitosan

Trên thế giới, hệ dẫn truyền thuốc chitosan đã được nghiên cứu khá nhiều.Hầu hết hết, các nghiên cứu này đều nhằm mục tiêu tạo ra hệ dẫn truyền thuốc, protein… có thể đưa thuốc đến đúng nơi, đúng thời điểm và điều khiển mức độ phóng thích thuốc.Dưới đây là một số công trình nghiên cứu liên quan đến việc tạo hệ nano trong mạng polymer chitosan

Trong nghiên cứu “Development of new chitosan/carrageeman nanoparrticles for drug delivery application” của Ana Grenha và các cộng sự tại đại học Minho, Bồ

Đào Nha (năm 2009), hạt nano tạo thành có kích thước khoảng 350 – 650nm, mang điện thế Zeta dương từ 50 – 60mV[7] Tương tác giữa các hạt nano được đo bằng quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier Khả năng tải thuốc của hệ này từ 4% - 17% và

22

sự phóng thích thuốc có thể lên đến 3 tuần.Quan trọng hơn, kết quả nghiên cứu này cũng cho thấy hệ nano trên mạng chitosan không mang lại sự độc hại.Bên cạnh công trình này, rất nhiều nghiên cứu về khả năng tạo hệ nano của các loại thuốc khác như amphotericin, insulin, ofloxacin, protein, aspirin… trong mạng polymer chitosan đã được nghiên cứu [7, 11]

Về khả năng tạo hệ nano rutin trong mạng polymer chitosan rất ít các nghiên cứu được công bố Mới đây tháng 10 năm 2012, nhóm nghiên cứu của K.Konecsni và

cộng sự tại đại học Saskatchewan, Canada đã công bố đề tài “Chitosan– tripolyphosphate submicron particles as the carrier of entrapped rutin” trên tạp chí

Food Chemistry Trong nghiên cứu này, các hạt rutin được đính trên mạng chitosan (CH) – tripolyphosphate (TPP) có kích thước là 814 nm khi tỉ lệ mol CH:TPP là 2:1, kích thước 528 nm khi tỉ lệ này là 2.5:1 và 4:1; đặc biệt khi tỉ lệ này là 5:1 thì kích thước hạt giảm xuống còn 322 nm Qua khảo sát thế Zeta, hệ có điện tích bề mặt dương khoảng 21 đến 59 mV [11]

Tại Việt Nam, các đề tài nghiên cứu rutin chủ yếu là xây dựng quy trình trích ly, tinh chế và khảo sát hoạt tính sinh học, hoạt chất nguyên chất hay các dẫn xuất của rutin và rất ít đề tài nghiên cứu hệ phân tán kích thước nano của rutin Nhóm nghiên cứu tại Đại học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh dựa trên thiết bị của Mueller và Mauludin sử dụng Tween80 làm chất hỗ trợ phân tán, khác biệt là nhóm có sử dụng hỗ trợ thêm ethanol, và đạt được kích thước 10 nm (TEM) sau khi đồng hóa áp ở 500 bar,

15 chu kì[13] Tuy nhiên kết quả của nghiên cứu này chỉ mới là bước đầu nên nồng độ rutin trong hệ khá nhỏ (<0,1%), khó có khả năng ứng dụng vào sản xuất Vì vậy, trong

đề tài này tiến hành nghiên cứu khả năng tạo hệ phân tán nano rutin ở nồng độ cao (nồng độ rutin 5%) với sự hỗ trợ các chất trợ phân tán, và polymer chitosan bằng phương pháp đồng hóa áp suất cao mà vẫn đảm bảo các tiêu chí kích thước và độ bền của hệ

23

Chương 3

NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Thời gian, địa điểm và vật liệu nghiên cứu

3.1.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

Địa điểm:Phòng thí nghiệm Bộ môn Kỹ thuật Hữu cơ, trường Đại học Bách Khoa TP.HCM

Thời gian: tháng 3/2013 đến tháng 8/2013

3.1.2 Vật liệu nghiên cứu

 Nguyên liệu - hoá chất:

- Rutin (độ tinh khiết 95%) được cung cấp bởi công ty Dược Khải Hà (Thái Bình) Rutin chuẩn phân tích được mua từ Sigma Aldrich (CAS Number 250249-75-3)

- Chitosan thương mại sản xuất tại Cần Thơ

- Ethanol 99% (Việt Nam); SSL (Sodium stearoyl lactylate) và PEG400

(Polyethylene glycol 400) (Trung Quốc)

 Dụng cụ - thiết bị:

- Beaker 100ml, 500 ml

- Micropipet

- Bình định mức 25 ml

- Đồng hóa gia dụng: Phillips (tốc độ tối đa 15000 vòng/phút)

- Đồng hóa áp lực cao APV (áp suất tối đa 2000 bar)

- Máy đo độ hấp thu UV-VIS

- Máy phân tích sắc kí lỏng hiệu năng cao HPLC

- Máy siêu âm