các thử nghiệm sinh hóa

Phân lập khuẩn lạc thuần khiết là cần thiết cho việc định danh vsv

Các th nghi m sinh hóaử ệ Các th nghi m sinh hóaử ệ GV: Nguy n Văn H nhễ ạ Ch ng 4ươ  Phân l p khu n l c thu n khi t là c n ậ ẩ ạ ầ ế ầ thi t cho đ nh danh VSVế ị  Vi c đ nh danh d a ch y u vào đ c ệ ị ự ủ ế ặ đi m ki u hình đ c bi t là các ph n ng ể ể ặ ệ ả ứ sinh hóa.  Có 3 cách s d ng các th nghi m sinh ử ụ ử ệ hóa đ đ nh danh VSV:ể ị ◦ Cách truy n th ngề ố ◦ S d ng các b KITử ụ ộ ◦ S d ng các thi t b t đ ngử ụ ế ị ự ộ Th nghi m kh năng lên menử ệ ả Th nghi m kh năng lên menử ệ ả  Mục đích: thử nghiệm khả năng sữ dụng các nguồn CH của các VSV  Nguyên tắc: VSV sử dụng CH  tao acid  giảm pH môi trường  Các loại carbonhydrate ◦ Monocarbonhydrate: glucose, xylose, rhamnose … ◦ Dicarbonhydrate: sucrose, lactose … ◦ Polycarbonhydrate: tinh bột, cellulose ◦ Các loại đường khử: đường mono chứa chức –CHO ◦ Các loại đường rượu: chứa chức -OH Phenol Red Carbohydrate Broth Phenol Red Carbohydrate Broth H p 115ấ ở o C trong 15 phút Trang 104 Th nghi m kh năng lên menử ệ ả Th nghi m kh năng lên menử ệ ả  Môi trường: Phenolred broth base bổ sung 0,5-1% đường cần thử nghiệm  VSV sử dụng được nguồn đường trong môi trường sẽ làm giảm pH  thay đổi màu chất chỉ thị phenolred  Phản ứng (+): môi trường chuyển vàng  Phản ứng (-): môi trường có màu đỏ Th nghi m Citrateử ệ Th nghi m Citrateử ệ  Mục đích: Xác định khả năng vi sinh vật sử dụng nguồn citrat như là nguồn cacbon duy nhất.  Cở sở sinh hóa: ◦ VSV sử dụng citrate, sinh ra CO 2 làm kiềm hóa MT ◦ VSV sử dụng muối ammonium là nguồn đạm duy nhất tạo ra NH 3 làm kiềm hóa MT Th nghi m Citrateử ệ Th nghi m Citrateử ệ Môi trường Simmon citrate agar (tr. 105) Ammonium dihydrogen phosphate1.0g Dipotassium hydrogen phosphate 1.0g NaCl 5g Sodium citrate 2g MgSO 4 0,2g Bromothymol blue 0,08g Agar 13g Th nghi m Citrateử ệ Th nghi m Citrateử ệ  Chú ý - Cấy lượng sinh khối vừa đủ - Có đối chứng trắng đi kèm Đ i ch ng tr ngố ứ ắ P âm tínhứ P d ng tínhứ ươ Th nghi m Ureaseử ệ Th nghi m Ureaseử ệ  Mục đích: phát hiện VSV có mang enzym urease  Cơ sở sinh hoá: (NH 2 ) 2 CO + H 2 O  2 NH 3 + CO 2  tăng pH môi trường  đỏ phenol (vàng – đỏ)  Môi trường sử dụng: ◦ Urea Broth (Rustigian – Stuart) ◦ Christensen Urea (môi trường thạch nghiêng) . bi t là các ph n ng ể ể ặ ệ ả ứ sinh hóa.  Có 3 cách s d ng các th nghi m sinh ử ụ ử ệ hóa đ đ nh danh VSV:ể ị ◦ Cách truy n th ngề ố ◦ S d ng các b KITử. nghi m Ureaseử ệ Thử nghiệm khả năng sinh H Thử nghiệm khả năng sinh H 2 2 S S  Mục đích: phát hiện khả năng sinh H 2 S  Cơ sở sinh hóa: Acid amin chứa