Ứng dụng nhựa trao đổi ion để phân lập rotundin từ củ bình vôi (stepania spp )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ KHUYÊN ỨNG DỤNG NHỰA TRAO ĐỔI ION ĐỂ PHÂN LẬP ROTUNDIN TỪ CỦ BÌNH VƠI (Stephania spp.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ KHUYÊN ỨNG DỤNG NHỰA TRAO ĐỔI ION ĐỂ PHÂN LẬP ROTUNDIN TỪ CỦ BÌNH VƠI (Stephania spp.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƢỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ MÃ SỐ 8720202 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Văn Hân TS Bùi Thị Thúy Luyện HÀ NỘI 2018 LỜI CẢM ƠN Luận văn thạc sĩ chuyên ngành công nghệ dƣợc phẩm bào chế thuốc với đề tài: “Ứng dụng nhựa trao đổi ion để phân lập rotundin từ củ bình vơi (Stephania spp.)” kết q trình cố gắng khơng ngừng thân đƣợc giúp đỡ, động viên khích lệ thầy, bạn bè đồng nghiệp ngƣời thân Qua trang viết xin gửi lời cảm ơn tới ngƣời giúp đỡ thời gian học tập - nghiên cứu khoa học vừa qua Tơi xin tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc thầy giáo PGS.TS Nguyễn Văn Hân cô giáo TS Bùi Thị Thúy Luyện trực tiếp tận tình hƣớng dẫn nhƣ cung cấp tài liệu thông tin khoa học cần thiết cho luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc hợp tác, hỗ trợ bạn, em tổ chiết xuất, Bộ môn Công nghiệp dƣợc thực nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình thầy cô giáo, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Công nghiệp dƣợc, thầy cô, cán trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, hỗ trợ tơi suốt q trình học tập thực luận văn Do thời gian có hạn trình độ thân hạn chế nên luận văn khơng thể tránh khỏi thiếu sót Vì vậy, tơi mong nhận đƣợc bảo tận tình thầy góp ý chân thành bạn bè Hà Nội, tháng năm 2018 Học viên Nguyễn Thị Khuyên MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH DANH MỤC SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Củ bình vơi 1.1.1 Phân bố 1.1.2 Thành phần hóa học củ bình vôi 1.1.3 Bộ phận dùng công dụng 1.2 Hoạt chất rotundin 1.2.1 Công thức hóa học tính chất lý-hóa 1.2.2 Tác dụng dược lý ứng dụng điều trị 1.2.3 Một số chế phẩm có chứa rotundin 1.2.4 Các phương pháp chiết xuất phân lập rotundin từ củ bình vơi 1.3 Tổng quan nhựa trao đổi ion 11 1.3.1 Nguyên lý trao đổi ion 11 1.3.2 Nhựa trao đổi ion tiềm ứng dựng Y - Dược học12 1.3.3 Ứng dụng phân lập hợp chất thiên nhiên 16 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG 20 VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Nguyên vật liệu, hóa chất thiết bị thí nghiệm 20 2.1.1 Các loại nhựa cationit sử dụng 20 2.1.2 Nguyên liệu, hóa chất, thiết bị, dụng cụ 21 2.2 Nội dung nghiên cứu 22 2.2.1 Lựa chọn hạt nhựa trao đổi ion 22 2.2.2 Phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi nhựa trao đổi ion… 23 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 24 2.3.1 Phương pháp xử lý hạt nhựa trao đổi ion trước sử dụng 24 2.3.2 Phương pháp định lượng rotundin 24 2.3.3 Phương pháp chiết xuất rotundin từ củ bình vơi tươi 26 2.3.4 Phương pháp xác định dung lượng hấp phụ rotundin nhựa cationit ………………………………………………………………… 26 2.3.5 Phương pháp xác định mức độ giải hấp phụ rotundin nhựa cationit ………………………………………………………………… 27 2.3.6 Phương pháp đánh giá khả tái sử dụng hạt nhựa cationit 28 2.3.7 Phương pháp phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi nhựa cationit 28 2.3.8 Phương pháp phân tích xử lý số liệu 29 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 30 3.1 Lựa chọn hạt nhựa trao đổi ion 30 3.1.1 Khảo sát dung lượng hấp phụ rotundin hạt nhựa cationit 30 3.1.2 Khảo sát trình giải hấp phụ rotundin từ nhựa cationit 33 3.2 Phân lập rotundin từ dịch chiết dƣợc liệu nhựa trao đổi ion 36 3.3 Đánh giá khả tái sử dụng nhựa trao đổi ion 38 3.4 Triển khai chiết xuất phân lập rotundin từ củ bình vơi 39 3.4.1 Xác định hàm lượng rotundin củ bình vơi 39 3.4.2 Khảo sát thời gian số lần chiết 40 3.4.3 Phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi 41 3.4.4 So sánh phương pháp phân lập rotundin nhựa trao đổi ion với phương pháp phân lập rotundin truyền thống 44 3.5 Đánh giá chất lƣợng sản phẩm 48 3.6 Xây dựng quy trình chiết xuất phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi sử dụng nhựa trao đổi in Tulsion CXO-9 49 CHƢƠNG BÀN LUẬN 52 4.1 Dung lƣợng hấp phụ tốc độ hấp phụ hạt cationit 52 4.2 Tác nhân giải hấp phụ 53 4.3 Khả ứng dụng cationit để phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi………………………………………………………………………… 55 4.4 So sánh hai phƣơng pháp phân lập rotundin từ củ bình vơi 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Phần viết tắt Phần viết đầy đủ DĐVN IV Dƣợc điển Việt Nam IV HPLC High Performance Liquid Chromatography (sắc ký lỏng hiệu cao) IR Infra-red (Phổ hồng ngoại) NMR Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân) Eq Equivalent (Đƣơng lƣợng) DANH MỤC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 2.1 Các thông số kỹ thuật nhựa cationit sử dụng 20 Bảng 2.2 Nguyên liệu, hóa chất dung môi sử dụng 21 Bảng 3.1 Dung lƣợng hấp phụ rotundin (mg/g) môi trƣờng acid acetic nhựa trao đổi ion 31 Dung lƣợng hấp phụ rotundin (mg/g) môi trƣờng acid sulfuric nhựa trao đổi ion 31 Hiệu suất phản hấp phụ (%) rotundin với tác nhân H2SO4 5% theo thời gian 34 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng nồng độ H2SO4 đến hiệu suất giải hấp phụ rotundin từ nhựa Tulsion CXO-9 Hiệu suất giải hấp phụ (%) rotundin với tác nhân NH3 5% Kết phân lập rotundin nhựa Tulsion CXO –9 Hiệu tái sử dụng nhựa Tulsion CXO – phân lập rotundin từ củ bình vôi Bảng 3.8 Hàm lƣợng rotundin dƣợc liệu tƣơi 40 Bảng 3.9 Hiệu suất phân lập rotundin từ củ bình vơi phƣơng pháp sử dụng nhựa trao đổi ion 43 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Hiệu suất tồn q trình chiết xuất phân lập Bảng 3.10 rotundin từ củ bình vơi 35 36 38 39 47 DANH MỤC HÌNH Tên hình Trang Hình 1.1 Củ bình vơi tươi Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo rotundin Hình 1.3 Q trình oxy hóa Rotundin thành Palmatin Hình 2.1 Các loại nhựa cationit (A Tulsion CXO – 9, B.Dowex HCR-S, C Purolite C100) 20 Hình 3.1 Lượng rotundin pha acid acetic 2% hấp phụ cationit (mg/g) thời điểm khác 32 Hình 3.2 Biểu đồ hiệu suất chiết rotundin từ củ bình vơi 41 Hình 3.3 Sản phẩm rotundin thô (A sử dụng tác nhân phản hấp phụ acid, B sử dụng tác nhân phản hấp phụ base) 43 DANH MỤC SƠ ĐỒ Tên sơ đồ Trang Sơ đồ 3.1 Quy trình phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi theo phương pháp truyền thống 46 Sơ đồ 3.2 Quy trình phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi nhựa Tulsion CXO – 51 ĐẶT VẤN ĐỀ Rotundin (L- tetrahydro palmatin) alcaloid có củ bình vơi (Stephania spp.) đƣợc dùng y học để làm thuốc trấn kinh, an thần, dùng trƣờng hợp: ngủ, trạng thái căng thẳng thần kinh, số trƣờng hợp rối loạn tâm thần,…[3],[5] Ngồi ra, rotundin đƣợc dùng làm thuốc giảm đau diều trị loét dày, hành tá tràng, đau dây thần kinh; điều trị hen co thắt phế quản [3] Củ bình vơi (Stephania spp.) nguồn nguyên liệu để chiết xuất phân lập rotundin Nƣớc ta có nguồn bình vơi đa dạng loài dồi số lƣợng, nhƣng thực tế phải nhập phần lớn rotundin nguyên liệu từ Trung Quốc Phƣơng pháp thông thƣờng dùng để chiết xuất phân lập rotundin từ củ bình vơi chiết rotundin nƣớc acid, sau dịch chiết đƣợc kiềm hóa nƣớc vơi tạo tủa thơ tinh chế tủa thô ethanol 96% [2] Sản phẩm rotundin thô thu phƣơng pháp truyền thống có hàm lƣợng thấp khoảng 10-30%, đƣợc tiếp tục kết tinh nhiều lần ethanol, thu đƣợc rotundin tinh khiết Nhìn chung, phƣơng pháp có ƣu điểm quy trình đơn giản, dung môi rẻ tiền, dễ kiếm, nhiên quy trình phân lập gồm nhiều bƣớc hiệu suất thấp [2] Những năm gần đây, nhựa trao đổi ion ngày đƣợc ứng dụng nhiều phân lập hợp chất thiên nhiên nhƣ: tách cocain ecgonin từ coca [34], tinh chế berberin từ bột sƣa [32], phân lập acid shikimic từ đại hồi [17], Phƣơng pháp có ƣu điểm: quy trình phân lập đơn giản, sản phẩm thu đƣợc có độ tinh khiết cao, kinh tế hạt nhựa tái sử dụng, thân thiện với ngƣời môi trƣờng sử dụng dung môi hữu độc hại, hạn chế nhƣợc điểm mà phƣơng pháp phân lập truyền thống gặp phải Với mong muốn tìm phƣơng pháp phân lập mới, hiệu để phân lập rotundin từ củ bình vơi, chúng tơi thực đề tài: “Ứng dụng nhựa trao đổi rotundin tinh khiết (50,0%) Nguyên nhân khác biệt kỹ thuật tiến hành ảnh hƣởng đến tốc độ mức độ trao đổi ion Với dung dịch rotundin tinh khiết thí nghiệm thực bình nón có sử dụng máy khuấy từ nên xảy đồng thời trình giải hấp phụ hấp phụ lại rotundin lên hạt nhựa, cân trao đổi ion xảy nhanh lƣợng rotundin chƣa đƣợc giải hấp phụ hết nên hiệu suất giải hấp phụ thấp Còn với dịch chiết củ bình vơi thí nghiệm thực cột sắc ký mà có chênh lệch nồng độ, hạt nhựa đƣợc tiếp xúc với dung môi Đối với phƣơng pháp giải hấp phụ tác nhân base: hiệu suất giải hấp phụ nhựa Tulsion CXO – hấp phụ rotundin từ dịch chiết củ bình vôi (72,1%) không khác biệt so với hiệu suất giải hấp phụ từ dung dịch rotundin tinh khiết (71,3%) tiến hành kỹ thuật Hiệu suất giải hấp phụ nhựa Tulsion CXO-9 khảo sát dung dịch rotundin tinh khiết tác nhân H2SO4 3% 50,0% với tác nhân NH4OH 5% 72,1% Nhận thấy sử dụng tác nhân base trình giải hấp phụ cho hiệu suất cao hơn, nhiên để có so sánh rõ hai loại tác nhân trình tinh chế nên có nghiên cứu dịch chiết dƣợc liệu củ bình vơi chất lƣợng sản phẩm thơ thu đƣợc giải hấp phụ hai tác nhân So sánh hai phƣơng pháp giải hấp phụ tác nhân acid tác nhân base phân lập rotundin mẻ 1,00 kg củ bình vơi tƣơi ta thấy phƣơng pháp giải hấp phụ tác nhân base có hiệu suất cao (69,6%) mà có hàm lƣợng rotundin tủa thô cao (91,3%) so với phƣơng pháp giải hấp phụ tác nhân acid với hiệu suất 66,1% hàm lƣợng rotundin tủa thơ 86,5% Vì lựa chọn phƣơng pháp giải hấp phụ tác nhân base 54 4.3 Khả ứng dụng cationit để phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi Dung lƣơng hấp phụ nhựa Tulsion CXO-9 dung dịch rotundin tinh khiết 120,8 mg/g cationit cao dịch chiết củ bình vơi 77,5 mg/g cationit Có khác biệt dịch chiết củ bình vơi có nhiều tạp chất ảnh hƣởng tới trình hấp phụ rotundin nhựa Tulsion CXO–9 Bên cạnh đó, hạt nhựa Tulsion CXO–9 thể khả tái sử dụng thí nghiệm khảo sát Sau lần sử dụng, dung lƣợng hấp phụ đạt ~ 60 mg/g hiệu suất giải hấp phụ đạt 50,2 % tác nhân acid 62,8% tác nhân base Quy trình hoàn nguyên hạt cationit đơn giản, dễ thao tác, sử dụng dung dịch HCl 4% rửa nƣớc đến pH trung tính Đây loại hóa chất dễ kiếm, giá thành rẻ Từ ƣu điểm bật trên, việc sử dụng nhựa trao đổi ion Tulsion CXO–9 hứa hẹn phƣơng pháp để phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi cho hiệu phân lập tốt, kinh tế Ứng dụng nhựa trao đổi ion phân lập rotundin từ củ bình vơi lƣợng nhỏ ngun liệu củ bình vơi cho hiệu suất cao Quy trình thực mẻ lớn ứng dụng sản xuất 4.4 So sánh hai phƣơng pháp phân lập rotundin từ củ bình vơi Từ kết q nghiên cứu cho thấy nhựa trao đổi ion acid yếu Tulsion CXO–9 có khả ứng dụng tốt việc phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi với hiệu suất tồn quy trình quy mơ kg/mẻ 66,4%, độ tinh khiết sản phẩm đạt 98,5% So sánh với phƣơng pháp truyền thống dùng nƣớc vôi để kết tủa alcaloid thơ từ dịch chiết củ bình vơi nên tủa thô chứa chứa nhiều tạp chất, hàm lƣợng rotundin tủa thô thấp (26,5%) cần phải tẩy màu tinh chế nhiều lần ethanol 96% thu 55 đƣợc rotundin tinh khiết, gây thời gian hiệu suất tồn quy trình thấp (43,7%) Q trình tinh chế phƣơng pháp phân lập rotundin nhựa trao đổi ion sử dụng hỗn hợp aceton- nƣớc đơn giản, tẩy màu than hoạt nhiệt độ phòng tránh đƣợc tác động nhiệt độ so với phƣơng pháp phân lập rotundin truyền thống tinh chế tủa thô cách kết tinh lại ethanol, tẩy màu than hoạt đun nóng, ảnh hƣởng đến độ ổn định rotundin Mặt khác, dung môi sử dụng phƣơng pháp phân lập rotundin nhựa trao đổi ion dung môi thƣờng quy, dễ kiếm dễ sử dụng cho thấy ứng dụng nhựa trao đổi ion để phân lập rotundin từ củ bình vôi phƣơng pháp mới, hiệu quả, kinh tế áp dụng quy mơ cơng nghiệp 56 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đã tiến hành khảo sát đƣợc số loại nhựa cationit thông dụng để ứng dụng phân lập rotundin từ củ bình vôi Lựa chọn đƣợc nhựa cationit acid yếu Tulsion CXO – loại cationit có dung lƣợng hấp phụ đạt 120,8 mg rotundin/ 1g hạt nhựa sau giải hấp phụ dung dịch NH4OH 5% đạt hiệu suất 72,1% 50,0% tác nhân H2SO4 3% sau dung dịch rotundin tinh khiết Dung lƣợng hấp phụ đạt 77,5 mg rotundin/ 1g hạt nhựa, hiệu suất giải hấp phụ tác nhân H2SO4 3% sau NH4OH 5% lần luợt 58,7% 71,3% dịch chiết dƣợc liệu Đã khảo sát đƣợc khả tái sử dụng nhựa Tulsion CXO–9 hấp phụ dịch chiết củ bình vơi Sau chu kỳ hấp phụ - giải hấp phụ hoàn nguyên, hiệu làm việc nhựa giảm trung bình từ – % Đã xây dựng đƣợc quy trình phân lập rotundn từ dịch chiết củ bình vơi nhựa Tulsion CXO – , gồm bƣớc: chiết xuất dung dịch CH3COOH 2%, chiết lần, lần/ 24 lần lƣợt với 1,7 L 1,5 L dung môi, phân lập rotundin nhựa Tulsion CXO – 9, giải hấp phụ dung dịch NH4OH 5%, tinh chế lại hỗn hợp aceton- nƣớc, tẩy màu than hoạt Hiệu suất tồn q trình đạt 66,4%, sản phẩm rotundin thu đƣợc có độ tinh khiết 98,5% Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu điều chỉnh thông số liên quan đến quy trình phân lập với quy mơ lớn Triển khai quy trình phân lập rotundin với quy mô lớn 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Trần Trọng Biên, Vũ Mai Hƣơng, Bùi Thị Thúy Luyện, Nguyễn Văn Hân (2017),"Nhựa trao đổi ion tiềm ứng dụng Y Dƣợc học", Tạp chí dược học Bộ môn Công Nghiệp Dƣợc (2016), Kỹ thuật chiết xuất Dược liệu, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, tr.74 Bộ môn Dƣợc liệu (2004), Bài giảng Dược liệu tập II, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, NXB Y học, tr 551, 696, 697 Bộ Y tế (2007), Dược học Cổ truyền, NXB Y học, tr 212 Bộ Y tế (2007), Kỹ thuật sản xuất dược phẩm tập 1: Kỹ thuật sản xuất thuốc phương pháp tổng hợp hóa dược chiết xuất dược liệu, NXB Y học, tr 229,232, 233 Bộ Y tế (2002), Thuốc biệt dược nước, NXB Y học, tập 1, tr 981 – 983 Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng, NXB Khoa học kĩ thuật, tập II, tr 2334 – 2340 Nguyễn Chiều, Ngô Văn Trại (1986), "Nghiên cứu Bình vơi Việt Nam", Tạp chí Dược học, tr 10 – 12 10 Nguyễn Chiều, Nguyễn Tiến Vững, "Phát lồi Bình vơi Stephania viridiflavens H.S.Lo et M.Yang Sơn La", Tạp chí Dược học, tr – 10 11 Nguyễn Văn Đàn, Ngô Ngọc Khuyến (1999), Hợp chất thiên nhiên dùng làm thuốc, NXB Y học, tr 106 12 Vũ Xuân Giang (2003), Nghiên cứu loài Stephania viridiflavens H.S.Lo et M.Yang thu hái Sơn La, Luận văn Thạc sĩ Dƣợc học, Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội, Hà Nội 13 Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ, Thành Phố Hồ Chí Minh, Quyển 1, tr 329 – 341 14 Nguyễn Quốc Huy (2010), Nghiên cứu thực vật, thành phần hóa học, số tác dụng sinh học số loài thuộc chi Stephania Lour Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Dƣợc học, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, Hà Nội 15 Phạm Thanh Kỳ (1998), Nghiên cứu số dƣợc liệu có tác dụng lên thần kinh trung ƣơng làm thuốc, Báo cáo đề tài nghiên cứu, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội 16 Phạm Thanh Kỳ, Nguyễn Quốc Huy, Đỗ Thanh Loan (2006), "Kết nghiên cứu L- tetrahydro palmatin lồi bình vơi Stephania brachyandra Diels thu hái Sa Pa (Lào Cai)", Tạp chí dược học, tr 37-39 17 Đỗ Thị Loan (2016), Ứng dụng nhựa trao đổi ion để phân lập acid shikimic từ Đại hồi, Luận văn Thạc sĩ dƣợc hoc, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, Hà Nội 18 Đỗ Tất Lợi (2005), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội 19 Đỗ Quyên (2015), Chiết xuất phân lập hợp chất thiên nhiên, NXB Giáo dục Việt Nam, tr 95 20 Viện Dƣợc Liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật, tập I, tr 210 -215 21 Viện Dƣợc liệu (1993), Tài nguyên thuốc Việt Nam, NXB Khoa học kĩ thuật, Hà Nội, tr 82 – 91 22 Nguyễn Tiến Vững (2000), Nghiên cứu thực vật, hóa học tác dụng sinh học số loài thuộc chi Stephania Lour Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Dƣợc học, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, Hà Nội 23 Nguyễn Tiến Vững, Bùi Kim Liên, Phạm Thanh Kỳ, Nguyễn Chiều (1999), "Phát Bình vơi Lạng Sơn", Tạp chí Dược Học, tr – TIẾNG ANH 24 Bartley P J., et al (1994), "Alkaloids of Stephania bancroftii", Phytochemistry, 36(5), pp 1327-1331 25 David P Elder (2005), "Pharmaceutical Applications of Ion-Exchange Resins", J Chem Educ, 82 (4), pp 575 26 JI Yubin, et al (2014), "The extraction, separation and purification of alkaloids in the natural medicine", Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 6(1), pp 338-345 27 Kin K F., et al (1965), "A study of the alkaloids of plants of the genus Stephania II The alkaloids of Stephania glabra", Khimiya Prirodnykh Soedinenii, 1(6), pp 392-394 28 Klaus D., Beck J J (2012), Methods in molecular biology chapter 8, pp.189-219 29 Lin X., et al (2012), "Respones of dopaminergic, serotonergic and noradrenergic networks to acute levo-tetrahydropalmatine administration in naive rats detected at 9.4T", Magnetic resonance imaging, 30(2), pp 261-270 30 Liu B., et al (2008), "Optimization of supercritical fluid extraction of dl – tetrahydropalmatine from rhizome of Corydalis yanhusuo W.T Wang with orthogonal array design", Separation and Purification Technology, vol.64 no.2, pp 242-246 31 Mantsch J.R., et al (2007), "Levo- tetrahydropalmatine attenuates, cocain self- administration and cocain- induced reinstatement in rats", Psychopharmacology 192(4), pp 581-591 32 Nie S., et al.(2009), "Separation and purification of berberine by ionexchange fiber", Chinese Journal of New Drugs,, 18(22), pp 21832188 33 Patra A., et al (1987), "The protoberberin alkaloids of Stephania suberosa", Phytochemistr, 26(2), pp 547-549 34 Ronald H., et al (1990), "Method of making a coca leaf flavor extract", United state patent US4956429 A 35 Yue K., et al (2014), "L-stepholidine, a natrually occurring dopamine D1 receptor agonist and D2 receptor antagonist, attenuates heroin selfadministration and cue- induced reinstatement in rats", NeuroReport, 25(1), pp 7-11 36 Zhong L., et al tetrahydropalmatine (2012), in "Study on vinegar-prepared the purification Corydalis of yanhusuo", Chongqing Medical University, Chongqing, 400016 P.R.China PHỤ LỤC Phụ lục Hình ảnh ngâm nhựa cationit với dung dịch rotundin tinh khiết Phụ lục Cột Tulsion CXO-9 phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi Phụ lục Sắc ký đồ rotundin chuẩn (A), dược liệu (B), sản phẩm thô giải hấp phụ acid (C), sản phẩm thô giải hấp phụ base (D) Phụ lục Phổ IR sản phẩm rotundin tinh khiết Phụ lục Phổ 1H-NMR Rotundin (500 MHz, đo dung môi CD3OD) 13 Phụ lục Phổ C-NMR Rotundin (125 MHz, đo dung mơi CD3OD) Phụ lục Hình ảnh ngâm nhựa cationit với dung dịch rotundin tinh khiết Phụ lục Cột Tulsion CXO-9 phân lập rotundin từ dịch chiết củ bình vơi mAU (x100) /8.392/2686682 283nm,1nm (1.00) 3.0 2.0 1.0 0.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 10.0 A mAU (x10) /7.927/374266 283nm1nm (1.00) 2.5 0.0 0.0 2.5 5.0 7.5 B mAU (x10) 283nm1nm (1.00) /7.968/821657 5.0 2.5 0.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 C mAU (x100) 283nm,1nm (1.00) /8.679/2411685 1.0 0.5 0.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 D Phụ lục Sắc ký đồ rotundin chuẩn (A), dược liệu (B), sản phẩm thô giải hấp phụ acid (C), sản phẩm thô giải hấp phụ base (D) Phụ lục Phổ IR sản phẩm rotundin tinh khiết Phụ lục Phổ 1H-NMR Rotundin (500 MHz, đo dung môi CD3OD) 13 Phụ lục Phổ C-NMR Rotundin (125 MHz, đo dung môi CD3OD) ... muốn tìm phƣơng pháp phân lập mới, hiệu để phân lập rotundin từ củ bình vơi, thực đề tài: Ứng dụng nhựa trao đổi ion để phân lập rotundin từ củ bình vơi (Stephania spp. ) với mục tiêu nhƣ sau:... pháp trao đổi ion phân lập alcaloid Phƣơng pháp trao đổi ion dựa vào trao đổi thuận nghịch ion dung dịch muối alcaloid ion bị hấp phụ chất mang (nhựa trao đổi ion) Các nhựa trao đổi ion (ionit)... hạt nhựa trao đổi ion Để lựa chọn đƣợc loại hạt nhựa trao đổi ion tốt sử dụng phân lập rotundin từ củ bình vơi, tiến hành khảo sát q trình hấp phụ trình giải hấp phụ rotundin hạt nhựa trao đổi ion