NGHIÊN cứu ỨNG DỤNG NHỰA TRAO đổi ION TRONG PHÂN lập ACID SHIKIMIC từ đại hồi FULL

NG CHUYÊN NGÀNH 60720402 I 2016 www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com M CL C TV CH TS www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com quý báu , sinh viên N HƠ N NG Y U Q P T NG QUAN 1.1 T ng quan v acid shikimic 1.1.1 Công th c hóa h c, tính ch t 1.1.2 Ngu n g c acid shikimic 1.1.3 Vai trò acid shikimic NG HƯ O Ạ Đ T ng quan v 1.2 T i h i m t s ph ng pháp chi t xu t acid shikimic t i h i ẦN B 0 không H Í N Ễ I N À Đ N Á O ÓA -L Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú Vài nét v 1.2.2 M t s ph 1.3 T ng quan v nh 1.3.1 Ph i ion 15 1.3.2 Nh i ion 17 CH NG IT ng pháp chi t xu t, tinh ch acid shikimic t i h i: i ion 15 NG VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U 24 2.1 Nguyên v t liêu, hóa ch t, dung môi, thi t b 24 2.1.1 Nguyên v t li u, hóa ch t, dung môi 24 2.1.2 Thi t b thí nghi m 25 26 2.2 2.2.1 anionit 26 T D TR i h i 1.2.1 26 2.2.2 2.2.3 Th Loan Kh o sát kh 2.2.4 d ng anionit 27 27 2.3 Ph 27 2.3.1 Ph 27 www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn 29 2.3.2 Ph 2.3.3 Ph ng pháp 2.3.4 Ph ng pháp phân l p acid shikimic d ch chi t d CH 30 Tên b ng c li u b ng anionit 31 Kh o sát thông s h p ph ph n h p ph acid shikimic c a nh ion 3.1.1 3.1.2 ng c a nhi t i dung l Kh o sát kh 3.1.4 Kh 3.2 ng d ng nh 3.2.1 i ion phân l p acid shikimic t nh hàm l Chi t xu t phân l p acid shikimic t 3.2.3 Kh o sát kh 3.2.4 Chi t xu t phân l p acid shikimic v i m CH ẦN i h i 40 3.2.2 25 i h i 41 d ng c a Diaion SA12A 44 A Ó H 0B 0 i h i 45 NG HƯ TR Dung l ng h p ph t 4.2 Tác nhân ph n h p ph 53 4.3 Kh ng d h p ph c a h t anionit 52 - Í L phân l p acid shikimic t d ch chi N Á O N Ễ I N À Đ T D Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú nhi 33 b i anionit 35 khác acid shikimic kh i m i lo i 37 anionit c a tác nhân NaCl (%) B ng 3.4 Hi u su t ph n h p ph acid shikimic kh i m i lo i 37 anionit c a tác nhân HCl (%) B ng 3.5 Hi u su t ph n h p ph acid shikimic kh i m i lo i 38 anionit c a tác nhân CH3COOH (%) B ng 3.6 39 B ng 3.7 43 i h i 54 K T LU N VÀ KI N NGH 59 c h p ph B ng 3.3 Hi u su t ph n h p ph NG BÀN LU N 52 4.1 ẠO T Đ (mg/g) i h i 40 14 B ng 2.2 Hóa ch t B ng 3.2 d ng anionit 39 N Trang 24 ng h p ph acid shikimic c a n h p ph c a m i lo i anionit 36 HƠ B ng 2.1 Các h t anionit s d ng B ng 3.1 anionit 34 3.1.3 i ion i Kh o sát th i gian h p ph acid shikimic c a lo i anionit 32 nh h Y U Q P B ng 1.1 C u trúc c a ch 32 Kh o sát s N DANH M C B NG NG TH C NGHI M VÀ K T QU 32 3.1 www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com shiki ih i B ng 3.8 Hi u qu tái s d ng nh a Diaion SA12A phân l p 44 acid shikimic t ih i 48 B ng 3.9 Diaion SA12A B ng 4.1 S khác bi t h p ph dung d ch acid shikimic tinh 54 t d ch chi ih i www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com B ng 4.2 S khác bi t c a l n tái s d ng v i dung d ch acid shikimic tinh t d ch chi ih i Tên hình DANH M ih i Hình 1.2 t ng h p acid shikimic theo Raphael (1960) Smissman (1959) Hình 1.3 t ng h p Acid Shikimic theo Dangschat, G www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com Hình 1.4 N Ễ I N À Đ N Á O T Í L - -H ÓA B 0 T N Trang Công th c c u t o acid shikimic O Ạ Đ (1950) N Ầ R UY HƠ Hình 1.1 h 47 3.1 N DANH M C HÌNH V 55 NG HƯ c Hình 2.1 Nguyên li u qu Hình 3.1 L th Q P T ih i 24 c h p ph b i anionit 33 m khác ng c a nhi Hình 3.2 t ng h p ph c a 35 ih i 41 t ng anionit Hình 3.3 S c am Hình 3.4 S c a acid shikimic chu n Hình 3.5 Acid shikimic thô 49 Hình 3.6 Acid shikimic tinh t 49 Hình 4.1 Hi u su t ph n h p ph acid shikimic t h t anionit 52 41 c a ba tác nhân NaCl, HCl CH3COOH HPLC : High Performance Liquid Chromatography D Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com N TV Acid shikimic m t ch t trung gian quan tr ng trình t ng h p nhi u loài th c v t vi sinh v t G n c dùng làm nguyên li u ch oseltamivir md T ng quan v acid shikimic 1.1.1 Công th c hóa h c, tính ch t : u thu c ch ng www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com cúm v n r t b c thi t Vì v y c n nghiên c u tìm ki m ngu n nguyên li u u qu nh c acid shikimic v i hi u su t cao i h i ngu n nguyên li u quan tr ng acid shikimic li chi t xu t acid shikimic i h i có th t 5-7%, nên i h i nguyên s n xu t oseltamivir Ngoài N Ầ R Ginkgo biloba Liquidambar Eucalyptus Escherichia coli c ta, ih i c li u l n, ti u nghiên c u chi t xu t acid shikimic cs d i nghiên c u ch -L d ng nh N Á O phân l p acid shikimic t : N À Đ Kh o sát l a ch acid shikimic t d ch chi Xây d ng D N Ễ I i ion T c lo i nh T A Ó H ng T : acid (3R,4S,5R) trihydroxy -1-cyclohexen -1- : 174,15 g/100mL (2,25g/100mL), không tan ethylacetat, aceton, cloroform, benzen : 183 ng 184,50C [ ]18 = -183,8 ih i i ion thích h 3,4,5 carboxylic c b ng i: O Ạ Đ N Hình 1.1 Công th c c u t o acid shikimic i h i, song (C = 4,03/ H2O) [32] phân l p i h i c quy trình phân l p acid shikimic t d ch chi t b ng 1.1.2 Ngu n g c acid shikimic Acid shi c chi t xu t l u tiên b i Eykman t lo i h i Nh t B n shikimi-no-ki (tên khoa h c Illicium religiosum Sieb et Zucc.) vào t phát t tên loài h i [6],[29],[32] Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú NG HƯ t ngu n có th phân l i ion, nên nh Í- u dung môi h B 0 Y U Q P Công th c hóa h c : C7H10O5 phosphat (oseltamivir phosphat ho t ch t có tác d ng ch ng cúm) M c dù d 1.1 HƠ www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com N (Illicium Y U Q P verum www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com [25] Nam ( I.verum) [1 - 7% [6 Hình 1.2: N Ầ R 4% [18 n NG HƯ Ginkgo biloba Salix nigra Eucalyptus (E.sieberiana F.Muell, E.citriodora Syzygium aromaticum Vaccinium macrocarpon, V.oxycocos, V.myrtillus) [13] Ngoài ra, acid shikimic có th c 1,3-butadien-1,4[26],[27],[30] N Á O 1,3-butadien Ngoài ra, acid -L Í- A Ó H 0 0B O Ạ Đ N Ễ I N À Đ N T id shikimic theo Raphael (1960) Smissman (1959) t T Hình 1.3: t (hình 1.2) 1.1.3 Vai trò acid shikimic -manose (hình 1.3) [16],[29] T HƠ L-phenylalanin, L-tyrosin L- flavonoid, coumarin), -aminobenzoic thông (hình 1.4) [20] D Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com N 21] Y U Q P Acid 6- O Ạ Đ 17] www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com , 0B ÓA N À Đ N Á O T Hình 1.4: N Ễ I 0 N Ầ R NG HƯ Ơ H N shikimic T enzym neuraminidase ype A type 13 -isopenyl ete T [2],[27] H Í -L quy mô công nghi p [2] c Tamiflu (O D Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com ch ng Escherichia coli - Bacillus q - www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com Citrobacter S - 10g/L [14] [5] NG HƯ Thu hái: N Ầ R g hi u qu , 1.2 T ng quan v shikimic t Cây ih i i h i có tên khác 0 ih i N Á O - LÍ -H N Ễ I D i h i g N À Đ N Mùa hoa: Tháng - 6; mùa Illicium verum) t Thành ph n hoá h c: T - (80 - 85%), có a-pinen, d-pinen, l-phellandren, safrol, terpineol, limonen [5] Công d ng: T ih i c s d ng nhi u c ih i kh hàn, m kinh, Tên khoa h c Illicium verum Hook.f , h H i ( Illiciacea) m th c v t: O Ạ Đ 12 [5] UY HƠ t xu t acid ih i 1.2.1 Vài nét v ÓA i h i m t s 0B Q P T - ho c tháng 11 Phân b : ê N - gi c, kháng khu n Quy vào kinh Ca , cao - th - 3- ng Ngoài dùng [9] - Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com Vì v y sau có nhi u nghiên c u c i ti n trình chi t xu su t phân l t xu t b N Ơ H N nâng hi u c nóng [24], chi t Soxhlet [6],[25],[34], chi t xu t b ng sóng siêu âm, sóng viba, chi t b ng CO2 siêu t i [5] h n, chi t b ng dun ion l ng Illicium anisatum [5],[23] Hai loài h u có ch a ch Illicium griffithii c d b nh m l n v i www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com m bên c a qu gi ng Các nghiên c u có s d ng nh ih i d ng t nh anisatin, [22],[23] N Ầ R ( I.verum [5] 5] N Á O 1.2.2 M t s - ÓA 0B 0 -H c chi t xu t l T N Ễ I phân l D ph c t c s d ng nh d ng nh a Amberlite IRA-410 T phân l : c s d ng i ion nh tính acid ng s chi t xu t acid shikimic t B Eucaliptus citriodora Hook.) tinh ch b ng c lo Amberlite IRA- t h p ph , dung d ph n h p ph acid shikimic [12] Tuy nhiên nghiên c u m i d ng l i acid shikimic loài ch acid shikimic t c li vi nh tính t quy trình phân l p, tinh c li c hi u su phân l p acid shikimic 1962 Weinstein c ng s nghiên c u s chuy n hóa c a th c v c nghiên c u phân l p t p b ng nh nh tính acid shikimic t shikimic t loài h t tr n [19 N i Eykman t nhi u ngu n nguyên li u khác T r t s m, nh c ng tinh t c a s n ph m dùng nh lo i h i Nh t B n shikimi-no-ki ( tên khoa h c Illicium religiosum Sieb N À Đ c li i ion dung d ch ph n h p ph Illicium safrol eugenol LÍ NG HƯ ngu c, ho c phân l phân l p acid shikimic nghiên c ng ti t ni u et Zucc) [6],[29],[32 O Ạ Đ Vi c s d ng nh shikimin sikimitoxin th n, Q P T UY n hành phân l u C-14) B ch qu (Ginkgo biloba) Tác gi ti n hành chi t B ch qu b ng ethanol c, d ch chi c cho qua c t cationit Dowex 50- lo i t p, sau t anionit Dowex 1-X8, ph n h p ph b ng dung d ch acid acetic Hi u su t c t 0,74% so v i nguyên li ng acid shikimic B ch qu u Trong hàm i 4% [13], ch ng t quy trình c a Weinstein v a ph c t p hi u su t không cao ng h p ph c a nh a th p nên hi u su t quy trình th p Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú 10 www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com ms c ng s h i ( Illicium anisatum) v i 4L ethanol 95% b 24 gi N n hành chi t xu t 900g qu t Soxhlet lo i t p b ng dung d ch formaldehyd 37 o 40%, phân l p b ng c t 500g Amberlite IRA-400, ph n h p ph b ng dung d ch acid acetic c c a s n ph ph m acid shikimic 98%, hi u su c chuy n lên c t Solka-Floc S n c k t tinh methanol-toluen, anionit) tinh t t 5% [11],[13] Quy trình c www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com hi u su t cao so v i nghiên c N Ầ R formaldehyd 37 IRA 400 - 7% [25 2006 N Á O - Í L A Ó H 0B 0 toluent NG HƯ O Ạ Đ C m ng) Amberlite IRA N Ễ I T D c a Payne: s d ng nh T ó t Soxhlet v Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú i ion c c t, phân l p b ng c t nh a Amberlite IRA-900 ph n h p ph b ng dung d ch acid acetic 2N, d ch r a gi cô c n, hòa tan l i methanol 95% 50 c 60 C, t y màu b ng than ho t, l c lo i than, cô c n k t tinh l i dung môi ethanol 95%, t hi u su t kho 11 34 t acid shikimic t thông (Pinus sylvestris) b ng 6] 15] -400 - 10,4% y), chi t ki t 10 gi (theo dõi b ng s c ký l p N À Đ Q P T UY N n dùng c a Richard Payne HƠ uid): [C2mim]Oac làm nóng 10 phút c li u, s n ph m tinh t 98% [31] Quy trình tinh ch c 12 www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 19 20 mC: Khối lượng acid shikimic chuẩn + Pha động: dung dịch acid phosphoric 0,01% : acetonitril = 95:5 mT: Khối lượng đại hồi đem chiết + Bước sóng phát hiện: 213nm SC: Diện tích peak mẫu chuẩn + Tốc độ dòng: 0,8mL/phút ST: Diện tích peak mẫu thử + Thể tích mẫu tiêm vào cột: 5µL fC, fT: Hệ số pha loãng mẫu chuẩn mẫu thử + Nhiệt độ buồng cột: 30°C VC, VT: Thể tích dung dịch chuẩn dung dịch thử Y U Q P HƠ N T a: Hàm lượng acid shikimic mẫu chuẩn Chuẩn bị mẫu www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com N + Cột: Phenomenex C18 (250 x 4,60mm, 5µm) O Ạ Đ + Dung dịch chuẩn: 2.3.2.Phương pháp xác định dung lượng hấp phụ acid shikimic dịch chiết Cân xác 25mg acid shikimic chuẩn vào bình định mức 50mL, thêm nước cất, dược liệu anionit lắc hòa tan hoàn toàn Thêm nước cất vừa đủ đến vạch.Hút xác 5mL, cho vào - Nguyên tắc NG bình định mức 25mL, thêm nước cất đến vạch, lắc Lọc qua màng 0,45µm dung dịch chuẩn có nồng độ 100µg/mL N Ầ R + Dung dịch thử: Mẫu thử dược liệu: 0B Cân 10g bột Đại hồi gói giấy lọc, cho vào bình nón 100mL thêm 50mL nước 0 cất ngâm trưởng nở Chiết lần, lần siêu âm với 50mL nước cất Lọc, rửa bỏ bã dược liệu, gộp dịch chiết lần.Chuyển dịch chiết nước thu vào ÓA bình định mức 250mL, thêm nước đến vạch, lắc HƯ Dựa vào trình trao đổi ion: nhựa trao đổi ưu tiên hấp phụ ion SA- pha T lỏng nhờ ion pha lỏng dễ dàng chỗ ion có khung mang nhựa trao đổi: R-OH + SA-H R-SA+ H2O Tiến hành cho dịch chiết dược liệu có hàm lượng acid shikimic tính dư (theo dung lượng hấp phụ acid shikimic tinh khiết [10]) qua cột nhựa anionit Cho chảy với tốc độ dòng 0,5mL/phút thu mẫu dung dịch sau hấp phụ Định lượng HPLC để xác định lượng acid shikimic lại dung dịch.Từ lượng acid shikimic ban đầu đem chảy qua cột trừ lượng acid shikimic lại tính Hút 1mL dịch chiết nước vào bình định mức 25mL, thêm nước đến vạch, lắc đều, lượng acid shikimic bị loại nhựa anionit hấp phụ lọc qua màng lọc 0,45µm, tiến hành định lượng sắc ký lỏng - Công thức tính LÍ -H Mẫu thử dịch chiết: Pha loãng dịch chiết đến nồng độ acid shikimic khoảng - Khối lượng acid shikimic gam nhựa anionit hấp phụ: 50 – 150µg/mL, lọc qua màng 0,45µmvà tiến hành định lượng sắc ký lỏng Công thức tính T Hàm lượng acid shikimic đại hồi: X% = N À Đ mc.a.VT.fT.ST ×100% mT.VC.fC.SC Trong đó: DI ỄN N Á O (1) X%: Hàm lượng acid shikimic đại hồi Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú X  m a V T f T S T =  m − C V C f C S C    : m (2)  Trong đó: X: Khối lượng acid shikimic gam nhựa anionit hấp phụ mC: Khối lượng acid shikimic chuẩn m1: Khối lượng nhựa anion SC: Diện tích peak mẫu chuẩn www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 21 22 ST: Diện tích peak mẫu thử Hiệu suất phản hấp phụ: H = m: Khối lượng acid shikimic dịch chiết ban đầu fC, fT: Hệ số pha loãng mẫu chuẩn mẫu thử ௑భ N × 100% HƠ N 2.3.4 Phương pháp phân lập acid shikimic dịch chiết dược liệu VC, VT: Thể tích dung dịch chuẩn dung dịch thử Y U Q P anionit a: Hàm lượng acid shikimic mẫu chuẩn - Xác định hàm lượng acid shikimic dược liệu (phương pháp 2.3.1) 2.3.3.Phương phápxác định hiệu suất phản hấp phụ acid shikimic dược - Xử lý dịch chiết thu liệu nhựa anionit - Lựa chọn loại anionit tốt để xác định dung lượng hấp phụ acid shikimic - Nguyên tắc www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com ௑మ gam anionit dịch chiết dược liệu (phương pháp 2.3.2), xác định tỷ lệ Khi nhựa anionit hấp phụbão hòa acid shikimic, sử dụng dung dịch phản hấp dược liệu/ anionit mẻ lớn NG phụ dung dịch NaCl 9M Các dung dịch phân ly anion thay - Lựa chọn loại tác nhân nồng độ thích hợp làm dung dịch phản hấp phụ xác định ion SA- nhựa: R-SA + Na+Cl- R-Cl + SA-Na N Ầ R nước cấtvà cho dung dịch phản hấp phụ chạy qua cột đến dịch sau phản hấp phụ không phát thấy acid shikimic Hút dịch phản hấp phụ, phaloãng, lọc, định lượng HPLC để xác định lượng acid shikimic phản hấp phụ từ - Công thức tính Khối lượng acid shikimic phản hấp phụ gam nhựa: X = m C a VT f T S T : m1 V C f C S C (3) Trong đó: - Í L A Ó H HƯ khả phản hấp phụ acid shikimic anionit (phương pháp 2.3.3) Cho dịch chiết dược liệu chạy hấp phụ qua cột nhựa anionit Sau rửa nhựa nhựa O Ạ Đ T 0 0B T - Phân lập thu acid shikimic thô từ dịch phản hấp phụ - Tiến hành tái sử dụng anionit hấp phụ acid shikimic dịch chiết Đại hồi - Tiến hành thực nghiệm mẻ lớn dựa vào thông số xác định trước đó: loại anionit, dung lượng hấp phụ acid shikimic anionit lựa chọn, dung dịch phản hấp phụ X: Khối lượng acid shikimic phản hấp phụ gam nhựa N Á O mC: Khối lượng acid shikimic chuẩn m1:Khối lượng nhựa anion N À Đ SC: Diện tích peak mẫu chuẩn T ST: Diện tích peak mẫu thử fC, fT: Hệ số pha loãng mẫu chuẩn mẫu thử N Ễ DI VC, VT: Thể tích dung dịch chuẩn dung dịch thử a: hàm lượng acid shikimic mẫu chuẩn Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 23 24 N + Hút xác 1mL dung dịch cho vào bình định mức 100mL thêm nước cất đến CHƯƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45μm, định lượng HPLC xác định - Tiến hành hàm lượng acid shikimic có dịch chiết sau xử lý + Cân 10g bột Đại hồi gói giấy lọc, cho vào bình nón 100mL thêm 50mL www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com HƠ 3.1.Xác định hàm lượng acid shikimic có dược liệu Y U Q P Hấp phụ N nước cất ngâm trưởng nở Chiết lần, lần siêu âm với 50mL nước + Nạp 2g nhựa anionit lên cột sắc ký Chuyển lượng lại lên cột sắc ký Điều cất Lọc, rửa bỏ bã dược liệu, gộp dịch chiết lần chỉnh tốc độ dòng 0,5 mL/phút + Chuyển dịch chiết nước thu vào bình định mức 250mL, thêm nước đến vạch, + Sau dịch chiết chảy hết qua cột lắc Thêm 20mL nước cất rửa cột sắc ký Gộp + Hút 1mL dịch chiết nước vào bình định mức 25mL, thêm nước đến vạch, lắc đều, dịch sau hấp phụ dịch rửa cột, hút lọc qua màng lọc 0,45µm, tiến hành định lượng sắc ký lỏng xác 1mL dung dịch cho vào NG O Ạ Đ T HƯ bình định mức 100mL, thêm nước đến - Kết Hàm lượng acid shikimic có Đại hồi xác định 6,3% ± 0,1% Sắc ẦN ký đồ mẫu Đại hồi acid shikimic chuẩn trình bày hình (phụ lục 4) 3.2 Xác định dung lượng hấp phụ, hiệu suất phản hấp phụacid shikimic dịch chiết dược liệu nhựa anionit - Mục đích B 0 Xác định dung lượng hấp phụ, hiệu suất phản hấp phụacid shikimic dịch chiết ÓA Diaion SA12A, Trilite SAR-20 từ thiết kế thí nghiệm ứng dụng nhựa anionit phân lập acid shikimic từ đại hồi H Í - Tiến hành Tạo dịch chiết dược liệu -L + Cân 10g bột dược liệu gói giấy lọc, cho vào bình nón 100mL thêm 50mL N Á O TR vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45μm, định lượng acid shikimic có dung dịch sau hấp phụ HPLC, từ tính dung lượng hấp phụ acid shikimic nhựa anionit từ dịch chiết dược liệu Phản hấp phụ + Phản hấp phụ dung dịch NaCl 0,9M đến acid shikimic rửa giải hết (khoảng 50mL), điều chỉnh tốc độ chảy: 0,5 mL/phút.Hình 3.1.Cột sắc ký 15×300 (mm) nước cất ngâm trưởng nở Chiết lần, lần siêu âm với 50mL nước T cất Lọc, rửa bỏ bã dược liệu, gộp dịch chiết lần, thu dịch chiết nước cho vào N À Đ + Thu dịch sau phản hấp phụ Hút xác 1mL dịch vào bình định mức bình cầu 250mL, cất quay áp suất giảm thu cao mềm 100mL, thêm nước đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45µm, định lượng + Thêm 40 ml ethanol 96% vào cao mềm, siêu âm, lặp lại lần Lọc lấy dịch HPLC từ tính lượng acid shikimic phản hấp phụ thu dịch acid shikimic/ ethanol N Ễ DI + Cất cô quay dịch acid shikimic/ethanol đến cắn, thêm vừa đủ 50mL nước cất thu dung dịch Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú Tinh chế + Chuẩn bị bình cầu khô 250mL Cân bình thu mb www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 25 26 N + Cho dịch phản hấp phụ vào bình cầu, cất cô quay thu cắn gồm NaCl acid - Nhận xét shikimic Sấy khô bình chứa cắn + Kết cho thấy dung lượng hấp phụ acid shikimic dịch chiết nhựa + Cho 50mL EtOH 96% vào bình cầu Siêu âm 30 phút Lọc lấy dịch, thực anionit giảm mạnh so với dung lượng hấp phụ acid shikimic chuẩn Nguyên nhân lần, thu dịch lọc acid shikimic ethanol đem cô thu cắn acid dịch chiết dược liệu nhiều tạp cạnh tranh hấp phụ vào shikimic Cân bình chứa cắn thu m Tính khối lượng cắn acid shikimic nhựa anionit cản trở tiếp xúc, hấp phụ acid shikimic vào nhựa thô.mcắn = m - mb + Đặc biệt, dung lượng hấp phụ acid shikimic dịch chiết Diaion SA 12A + Lấy xác 20mL nướccất hòa tan cắn: sau hút 1mL cho vào bình định mức giảm tới 40,4% so với acid shikimic tinh khiết, thông số 100mL, thêm nước đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45µm; định lượng Trilite SAR-20 giảm 19,7% Và dung lượng hấp phụ acid shikimic dịch HPLC xác định hàm lượng acid shikimic cắn chiết dược liệu Trilite SAR-20 79,5% so với Diaion SA 12A Có thể nhận - Kết thấy, dung lượng hấp phụ acid shikimic dịch chiết dược liệu tỉ lệ acid NG Bảng 3.1.Kết giai đoạn trình phân lập acid shikimic Trilite SAR20 Diaion SA 12A Dung lượng hấp phụ acid shikimic (mg/g) 102,21 128,5 Hiệu suất phản hấp phụ acid shikimic (%) 91,0 92,4 Hàm lượng acid shikimic/cắn (%) 75,6 81,8 A Ó H HIỆU SUẤT PHẢN HẤP PHỤ (%) (mg/g) Í- Dung dịch acid shikimic tinh khiết Dung dịch acid shikimic tinh khiết Dịch chiết dược liệu Dịch chiết dược liệu 98 250 N Á O 96 200 94 150 92 100 T 90 50 Trilite SAR-20 N À Đ Diaion SA 12A N Ễ DI -L 88 Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú HƯ B 0 TR ẦN quy mô lớn Vì vậy, dựa thông số này, thiết kế thí nghiệm phân lập acid shikimic từ Đại hồi nhựa anionit 3.3.Khảo sát khả tái sử dụng nhựa anionit phân lập acid shikimic từ đại hồi 3.3.1 Khảo sát với dung dịch acid shikimic tinh khiết - Mục đích Thí nghiệm khảo sát khả tái sử dụng nhựa anionit chất chuẩn nhằm đánh giá khả tái sử dụng nhựa phân lập acid shikimic - Tiến hành + Khảo sát với loại hạt nhựa Diaion SA12A Trilite SAR-20 + Cân 2,5g acid shikimic chuẩn cho vào bình định mức 250mL, thêm nước cất lắc hòa tan hoàn toàn, thêm nước đến vạch thu dung dịch A (nồng độ acid + Nạp 2g hạt nhựa loại lên cột sắc ký tiến hành trình hấp phụ với 80mL Diaion SA 12A Hình 3.2.So sánh khác dùng dung dịch acid shikimic tinh khiết dịch chiết dược liệu T shikimic 10 mg/mL) 86 Trilite SAR-20 N shikimic phản hấp phụ loại nhựa mức cao, ứng dụng nhựa anionit từ dịch chiết dược liệu DUNG LƯỢNG HẤP PHỤ O Ạ Đ Y U Q P HƠ dung dịch A – rửa 10mL nước cất - phản hấp phụ với 80mL dung dịch NaCl 0,9 M – hoàn nguyên 10mL dung dịch NaOH 1% - rửa nước cất đến dịch rửa có pH trung tính (khoảng 20mL) + Tốc độ dòng: 0,5mL/phút www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 27 28 + Chu kỳ hấp phụ - phản hấp phụ lặp lại lần - HIỆU SUẤT PHẢN HẤP PHỤ (MG/G) Bảng 3.2 Kết khảo sát số lần tái sử dụng nhựa anionit chất chuẩn Trilite SAR-20 Diaion SA12A Dung lượng sử dụng Hiệu suất Dung lượng Hiệu suất phản 96 phản hấp phụ hấp phụ hấp phụ (%) 94 (%) (mg/g) hấp phụ (mg/g) 92 90 Lần 127,3 95,8 215,6 97,5 Lần 123,6 93,9 202,4 96,2 88 86 NG O Ạ Đ LẦN Lần 121,5 91,2 199,8 92,3 Lần 122,3 90,7 191,4 90,1 DUNG LƯỢNG HẤP PHỤ (MG/G) Trilite SAR-20 Diaion SA 12A 250 200 N Á O 150 100 50 LẦN N À Đ LẦN N Í- -L A Ó H Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú T LẦN LẦN LẦN HƯ Hình 3.4.Biểu đồ hiệu suất phản hấp phụ acid shikimic nhựa anionit ẦN B 0 TR - Nhận xét: Từ kết đồ thị ta thấy, dung lượng hấp phụ acid shikimic nhựa anionit giảm nhẹ qua lần sử dụng nhựa Diaion SA 12A thấy chênh lệch rõ rệt lần so với nhựa Trilite SAR-20 Cùng với đó, hiệu suất phản hấp phụ giảm dần qua lần sử dụng, đặc biệt giảm mạnh nhựa Diaion SA 12A sau lần sử dụng thứ Tuy nhiên, dung lượng hấp phụ acid shikimic nhựa anionit mức cao, tiếp tục khảo sát khả tái sử dụng nhựa anionit dịch chiết dược liệu 3.3.2 Khảo sát với dịch chiết dược liệu - Mục đích Đánh giá khả tái sử dụng nhựa anionit việc phân lập acid shikimic từ dịch chiết dược liệu + Khảo sát với loại hạt nhựa Diaion SA12A Trilite SAR-20 LẦN Hình 3.3.Biểu đồ dung lượng hấp phụ acid shikimic nhựa anionit Ễ DI N - Tiến hành T LẦN Diaion SA 12A Y U Q P 100 98 Số lần www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com Trilite SAR-20 N HƠ Kết quả: Chu kỳ thao tác lần sử dụng nhựa anionit: + Nạp 2g hạt nhựa loại lên cột sắc ký + Tiến hành trình hấp phụ với 50mL dịch chiết từ 10g Đại hồi, sau xử lý với ethanol 96% www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 29 30 + Rửa cột 20mL nước cất, gộp dịch rửa với dịch sau hấp phụ nhựa anionit qua lần sử dụng + Phản hấp phụ khoảng 50mL dung dịch NaCl 0,9M + Hoàn nguyên 10mL NaOH 1% Trilite SAR - 20 + Rửa cột nước cất đến dịch rửa cột có pH trung tính (khoảng 30mL nước 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 cất) Lặp lại quy trình chu kỳ hấp phụ - phản hấp phụ lần - Kết www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com Bảng 3.3.Hiệu tái sử dụng nhựa anionit phân lập acid shikimic từ Đại hồi Diaion SA 12A Trilite SAR - 20 Số lần sử dụng Dung lượng hấp Hiệu suất phản Dung lượng hấp Hiệu suất phản phụ (mg/g) hấp phụ (%) phụ (mg/g) hấp phụ (%) Lần 105,3 89,9 128,5 92,4 Lần 92,4 80,1 120,9 85,2 Lần 80,7 74,6 114,8 79,7 Lần 73,0 75,4 107,7 Í- DUNG LƯ ỢNG HẤP P HỤ ( M G/ G) Trilite SAR - 20 Diaion SA 12A 140 N Á O 120 100 80 60 40 20 N Ễ DI LẦN N À Đ LẦN A Ó H 72,0 -L HƯ LẦN T LẦN LẦN LẦN Hình 3.6.Hiệu suất phản hấp phụ acid shikimic qua lần sử dụng - Nhận xét Trong lần sử dụng hai loại nhựa, dung lượng hấp phụ acid shikimic từ dịch chiết dược liệu giảm dần hai loại nhựa, trung bình giảm -7 % hạt Diaion SA 12A – 12% hạt Trilite SAR-20 Hiệu suất phản hấp phụ acid shikimic giảm dần hai loại nhựa Tuy nhiên, lần sử dụng thứ 4, hiệu suất phản hấp phụ acid shikimic hạt Trilite SAR-20 tăng nhẹ Nguyên nhân lượng acid shikimic hấp thụ giảm mạnh hấp phụ liên kết phía nên dễ rửa giải dẫn đến hiệu suất phản hấp phụ tăng Kết cho thấy, hai loại nhựa anionit trêncó thể tái sử dụng nhiều lần, việc lựa chọn nhựa sử dụng tùy theo tính toán hiệu kinh tế, nguồn nguyên liệu thuận tiện 3.4.Chiết xuất phân lập acid shikimic với mẻ 150g Đại hồi T - Mục đích Thiết lập sơ bộ, đánh giá hiệu suất quy trìnhphân lập acid shikimic từ dịch chiết dược liệu sử dụng nhựa anionitvới tỉ lệ nhựa : dược liệu 1:1,5 LẦN LẦN Hình 3.5.Dung lượng hấp phụ acid shikimic từ dịch chiết Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú B 0 TR ẦN NG O Ạ Đ N Diaion SA 12A Y U Q P N HƠ HIỆU S UẤT P HẢN HẤP PHỤ (% ) - Tiến hành Tạo dịch chiết dược liệu www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 31 32 Thí nghiệm tiến hành lần loại nhựa, thu kết trung bình máy khuấy, lần 1000mL nước cất Lọc bỏ bã dược liệu qua bông, Quy trình thực sơ đồ hình 3.1: gộp dịch chiết Bột Đại hồi + Dịch chiết thu đem cất quay áp suất giảm thu cao mềm Thêm 150 (g) 200mLcồn 96%, siêu âm, lặp lại lần,lọc loại tạp, thu lấy dịch acid + Cô dịch acid shikimic/cồn đến cắn,sau thêm 250mLnước cất hoà tan, lọc dịch O Ạ Đ Dịch chiết nước qua giấy lọc thu 250mL dịch chiết Phân lập NG +Nạp 100g nhựa Diaion SA12A lên cột sắc ký 30 x 600 (mm) Cho 250mL dịch chiết chảy qua cột với tốc độ 1mL/phút + Sau hấp phụ, nhựa anionit rửabằng 300mLnước cất trước tiến hành giải ẦN hấp phụ 250mL dung dịch NaCl 0,9M.Thu dịch sau phản hấp phụ Xác định hàm lượng acid shikimic có dịch chiết ban đầu dung dịch sau hấp phụ, sau phản hấp phụ phương pháp HPLC + Dịch rửa giải cất quay áp suất giảm đến cắn Hoà 150mL ethanol 96% vào ÓA khoảng 50mL để kết tinh acid shikimic ngày tủ lạnh, lọc lấy tinh thể, sấy khô thu sản phẩm thô màu trắng vàng 0B 0 cắn, lắc đều, lọc lấy dịch, thực lần Gộp dịch lọc Dịch lọc đem cô TR HƯ -L N Á O T Bã Đại hồi Cô thành cao mềm Thêm 200mL Ethanol 96%, siêu âm (lặp lại lần) Lọc loại tạp, cất thu hồi ethanol 96% acid shikimic/H2O Phân lập cột (30x600mm) chứa 100g nhựa anionit Dung dịch acid shikimic+muối/H2O Cô đến cắn Loại muối Ethanol 96% Lọc thu lấy dung dịch acid shikimic/Ethanol 96% + Hòa sản phẩm thô vào 60mL ethanol 96%, thêm 1g than hoạt, đun cách thủy 15 phút, lọc nóng Dịch lọc cô khoảng 20mL, để kết tinh tủ lạnh N Dung dịch H Í Tẩy màu kết tinh lại Y U Q P Ngâm trương nở 2h HƠ 1L H2O, siêu âm 1h x lần shikimic/ethanol www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com N + Cân 150g đại hồi ngâm trương nở với nước giờ, sau chiết lần Cô dung dịch đến 50ml, để kết tinh Lọc thu lấy sản phẩm Acid shikimic thô kết tinh + Sản phẩm kết tinh lọc rửa ethanol lần (mỗi lần 5mL) Sấy khô thu sản phẩm kết tinh màu trắng Hòa tan nóng 60mL Ethanol 96% T Xác định độ tinh khiết acid shikimic có sản phẩm thô, sản phẩm tinh Tẩy màu than hoạt khiết: cân 0.25g sản phẩm thu cho vào bình định mức 100mL, thêm nước đến Kết tinh lại ethanol 96% N À Đ vạch, lắc Hút xác 1ml dịch cho vào bình định mức 25mL, thêm nước N Ễ DI Acid shikimic tinh khiết đến vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,45µm; định lượng HPLC xác định hàm lượng acid shikimic sản phẩm Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 33 34 - Kết Y U Q P Bảng 3.4.Kết ứng dụng nhựa anionit phân lập acid shikimic từ Đại hồi Sản phẩm thô acid www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com Nhựa shikimic dịch SA 12A Trilite SAR-20 9,2 ± 0,2 Hàm lượng Hiệu Khối lượng acid Khối lượng acid suất quy (g) shikimic (g) shikimic trình (%) (%) đầu (g) Diaion Sản phẩm tinh khiết Hàm lượng chiết ban 10,4 ± 0,5 9,0 ± 0,3 8,9 ± 0,6 74,7 ± 2,4 72,5 ± 1,8 NG 6,9±0,2 98,8±0,5 75,1±1,4 5,8±0,4 98,2±0,8 63,3±2,6 ÓA O Ạ Đ T 0 0B T N Ầ R HƯ sau mẻ 150g ddược liệu phân lập nhựa Diaion SA12A Kiểm tra chất lượng sản phẩm Sản phẩm acid shikimic thu đem tiến hành kiểm tra chất lượng đo thông số vật lý, đo phổ IR, phổ NMR Kết thu sau: - Đặc điểm sản phẩm acid shikimic: Hiệu suất phản hấp phụ trung bình với dung dịch NaCl 0,9M Diaion SA12A Trilite SAR-20 91,1% 73,9% Hiệu suất trình phân lập thu COOH H Í sản phẩm tinh khiết so với lượng acid shikimic chiết từ Đại hồi -L đồng đều, đạt trung bình 75,1% Diaion SA12A 63,3% Trilite N Á O N Hình 3.7 Sản phẩm acid shikimic thô(trái), acid shikimic tinh khiết(phải) thu (%) - Nhận xét: HO SAR-20 Hiệu suất trình phân lập acid shikimic sử dụng Diaion SA12A OH OH Trilite SAR-20 đạt 4,5% 3,8% so với khối lượng dược liệu sử dụng Kết T cho thấy khả phản hấp phụ acid shikimic với dung dịch NaCl 0,9M mẻ N À Đ HƠ nhựa, làm giảm hiệu suất phản hấp phụ nhựa anionit Khối lượng N cản tiếp xúc dịch phản hấp phụ với nhựa, đặc biệt vào sâu cấu trúc Sơ đồ 3.1 Sơ đồ tóm tắt quy trình phân lập acid shikimic từ dịch chiết dược liệu Hình 3.8 Cấu trúc sản phẩm lớn dịch chiết dược liệu nhựa giảm giảm mạnh nhựa Trilite SAR-20 so với dịch chiết mẻ nhỏ (vì thí nghiệm thiết kế với khối lượng nhựa ỄN anionit dư đủ khả hấp phụ hết lượng acid shikimic có dịch chiết dược DI Hình thức cảm quan: Bột kết tinh trắng Nhiệt độ nóng chảy: 184,3°C (Merck Index 183 - 184,5°C) liệu nên không đánh giá dung lượng hấp phụ nhựa) Nguyên nhân hàm Năng suất quay cực: [α [α]D20 = -183,6° (dung dịch 4,03% nước, Merck Index: - lượng tạp dịch chiết mẻ lớn cao nhiều so với dịch chiết mẻ nhỏ, ngăn 183,8°) Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 35 36 N Phổ hồng ngoại (IR):vmax (cm-1): 3477, 3373, 3211(OH); 1678 (C=O); 1645 HƠ (C=C) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR, 13C NMR) 13 www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com C NMR Y U Q P N KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Bảng 3.5.Kết phân tích phổ 1H-NMR, 13C NMR acid shikimic H NMR, ppm I Kết luận Vị Thực nghiệm Tài liệu [21] Thực nghiệm Tài liệu [21] trí (500 MHz, (75 MHz, D2O, (500 MHz, MeOD, (300 MHz, sau: C MeOD, ppm) ppm) ppm) D2O, ppm) 1.Xác định đặc tính hấp phụ số nhựa anionit phân lập acid 130,72 129,8 138,81 137,1 6,80 (t, 1H) 6,70 (m, 1H) 72,74 75,1 4,37 (m, 1H) 4,30 (m, 1H) 68,40 66,5 3,68 (dd, 1H) 3,67 (dd, 1H) 67,31 65,8 3,99 (m, 1H) 3,93 (m, 1H) 31,65 30,4 2,70 (m, 1H H-6α) 2,64 (dd, 1H) 2,20 (m, 1H, H-6β) 2,12 (dd, 1H) 170,02 ÓA N Ễ DI Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú O Ạ Đ T shikimic từ Đại hồi 170,1 N À Đ Sau trình nghiên cứu làm thực nghiệm, đạt số kết T N Á O -L H Í NG - Dung lượng hấp phụ acid shikimic từ dịch chiết Đại hồi của: nhựa Diaion SA12A HƯ 128,5 mg/1g hạt, nhựa Trilite SAR-20 102,21 mg/1g hạt B 0 TR ẦN - Hiệu suất phản hấp phụ acid shikimic: nhựa Diaion SA12A 92,4%, nhựa Trilite SAR-20 91,0% - Khảo sát khả tái sử dụng nhựa Diaion SA12A, Trilite SAR-20 hấp phụ dịch chiết Đại hồi Sau quy trình hấp phụ - phản hấp phụ - hoàn nguyên, hiệu làm việc nhựa Diaion SA 12A giảm 5-7%, nhựa Trilite SAR-20 giảm 8-12% Ở lần sử dụng thứ 4, Diaion SA12A cho dung lượng hấp phụ 107,7 mg/1g hạt, hiệu suất phản hấp phụ đạt 72,0%; Trilite SAR-20 cho dung lượng 73,0 mg/1g hạt, hiệu suất phản hấp phụ đạt 75,4% 2.Xây dựng phương pháp phân lập acid shikimic từ dịch chiết nhựa trao đổi ion Từ thông số khảo sát, xây dựng quy trình phân lập acid shikimic từ Đại hồi với nhựa anionit gồm bước: chiết xuất nước – loại tạp ethanol – phân lập acid shikimic nhựa anionit – tẩy màu kết tinh lại ethanol 96%.Hiệu suất trình phân lập so với lượng acid shikimic chiết từ Đại hồi thu qua lần thí nghiệm đồng đều, đạt trung bình 75,1% Diaion SA12A 63,3% Trilite SAR-20 Hiệu suất trình phân lập acid shikimic sử dụng Diaion SA12A Trilite SAR-20 đạt 4,5% www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 37 3,8% so với khối lượng dược liệu sử dụng Sản phẩm tinh khiết có hàm lượng TÀI LIỆU THAM KHẢO - Tiếp tục khảo sát để xác định thông số tối ưu cho phương pháp phân lập acid N Nguyễn Tiến Bân (1997), Cẩm nang tra cứu nhận biết họ thực vật hạt Y U Q P kín Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, tr.9 II.Kiến nghị N HƠ TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT acid shikimic khoảng 98% Đỗ Huy Bích, Nguyễn Thượng Dong cs (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật Hà Nôi, tập I, tr 986-990 shikimic nhựa trao đổi ion T Nguyễn Quyết Chiến, Đoàn Thị Mai Hương, Phạm Văn Cường, Trần Thị O Ạ Đ Thu Thủy, Lê Anh Tuấn, Phạm Xuân Vũ, Nguyễn Văn Hùng (2006), “Phân - Nâng cấp quy mô với lượng lớn Đại hồi www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com lập axit shikimic từ hồi Việt Nam (Illicium verum Hook.f-Illciaceae)”, Tạp NG chí hóa học, 44(6), tr 745-748 HƯ ẦN N Ễ DI N À Đ Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú T N Á O -L Í- A Ó H B 0 TR Nguyễn Quyết Chiến (2006), “Chọn lựa hướng nghiên cứu tổng hợp Oseltamivir (Tamiflu) Việt Nam”, Tạp chi hóa học, 45, tr 199-206 Nguyễn Thượng Dong, Nguyễn Thị Bích Thu (2010), Nghiên cứu phát triển hồi làm nguyên liệu sản xuất acid shikimic khai thác tinh dầu, Đề tài Khoa học Công nghệ cấp Bộ Y tế, Viện Dược liệu Lê Minh Đức (2013), Bài giảng nhựa trao đổi ion, Bộ môn công nghệ hóa học Nguyễn Văn Hân, Phùng Thị Mỹ Hạnh (2016), “Phân lập acid shikimic từ phế vật liệu, Trường Đại học Bách khoa Đà Nẵng phẩm trình sản xuất tinh dầu đại hồi”, Tạp chí Dược học, 478, tr 4547 Nguyễn Thị Thu Hiền (2010), Nghiên cứu chiết xuất acid shikimic từ Đại hồi, Khóa luận tốt nghiệp dược sỹ khóa 2005-2010, Trường đại học Dược Hà Nội Trần Công Khánh, Nguyễn Thị Sinh (1997), Thực vật dược, Trường Đại học Dược Hà Nội 10 Nguyễn Thị Khuyên, Đỗ Thị Loan (2015), Nghiên cứu sử dụng nhựa trao đổi ion để phân lập acid shikimic từ đại hồi, Khóa luận tốt nghiệp dược sỹ khóa 2010 – 2015, Trường đại học Dược Hà Nội 11 Đỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr 323-324, tr 524-525 www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com N 12 Nguyễn Đình Luyện (2006), “Chiết xuất acid shikimic từ hoa hồi (Illicium 22 Derek S Tan et al (1999), “Synthesis and preliminary evaluation of a library verum Hook.f”, Tạp chí Dược học, 358, tr 8-9 Chem Soc., 121 (39), pp 9073 – 9087 13 Nguyễn Đình Luyện, Hà Thị Mai Trang (2008), “Nghiên cứu định lượng acid shikimic Đại hồi (Illicium verum Hook.f.) phương pháp HPLC”, Y U Q P N 23 Enrich L B., Scheuermann M L., Mohadjer A., Matthias K R., Eller C F., Tạp chí dược học, 386, tr 28-30 Newman M S., Fujinaka M., Poon T., (2008), “Liquidambar styraciflua: a renewable source of shikimic acid”, Tetrahedron Letters, 49, 2503–2505 14 Cao Thị Thúy Nga (2010), Ứng dụng phương pháp trao đổi ion xử lý nước, Trường Đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh, Viện Khoa học 24 Huang I et al T (2002), “Anti-Platelet and Anti-Thrombotic Effects of O Ạ Đ Triacetylshikimic Acid in Rats”, Journal of Cardiovascular Pharmacology, công nghệ quản lý môi trường www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com HƠ of polycyclic small molecules for use in chemical genetic assays”, J Am 15 Phạm Xuân Sinh (2006), Dược học cổ truyền, NXB Y học, tr 144-145 39(2), pp 262-270 NG 16 Đào Chánh Thuận (2013), Nghiên cứu trình trao đổi ion amoni nhựa 25 JI Yubin, Yu Miao, Wang Bing and Zhang Yao (2014), “The extraction, C100, Đồ án tốt nghiệp, Viện Khoa học Môi trường ẦN TÀI LIỆU TIẾNG ANH 17 Ambhaikar N (2005), Shikimic acid, The Baran laboratory Group Meeting The Scripps Research Institute B 0 18 Bogosian G et al (2008), “Use of glyphosate to produce shikimic acid in microorganisms”, World intellectual property organization, 128076 A Ó H 19 Bui Quang Thuat, Bui Thi Bich Ngoc (2010), “Obtaining Essential Oil and Shikimic Acid from Star Anise Fruit (Illicium verum Hook)”, VNU Journal of Í L Science, Natural Sciences and Technology, 26, pp 110-113 HƯ separation and purification of alkaloids in the natural medicine”, Journal of TR Chemical and Pharmaceutical Research, 6(1), pp 338-345 26 Katarína Hroboňováa, Jozef Lehotaya and Jozef Čižmárik (2007), “Determination of Quinic and Shikimic Acids in Products Derived from Bees and their Preparates by HPLC”, Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 30(17), pp.2635-2644 27 LI Wei, CAO Yong, WEI Hua, ZHOU Dong-wu (2008), “Reversed-Phase HPLC Determination of Shikimic Acid in Illicium Verum Hook F.” –Journal of Jishou University (Natural Sciences Edition), 01 28 Merck & Co., Inc (2001), The Merk Index 13th edition, pp 1457-1458 20 Davies GM, Barrett-Bee KJ, Jude DA, Lehan M, Nichols WW, Pinder PE, 29 Ohira H., Torii N., Aida M T., Watanabe M., Smith L R (2009), “Rapid Thain JL, Watkins WJ, Wilson RG (1994),“(6S)-6-fluoroshikimic acid, an separation of shikimic acid from Chinese star anise (Illicium verum Hook f.) antibacterial agent acting on the aromatic biosynthetic pathway”,Antimicrob with hot water extraction”, Separation and Purification Technology, 69, p T N Á O - Agents Chemother., 38(2), pp 403-406 N À Đ 21 Denis V Bochkov et al (2012), “Shikimic acid: review of its analytical, isolation, and purification techniques from plant and microbial sources”, J.Chem Biol., 5(1), pp – 17 N Ễ DI Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú 102-108 30 Payne R., Edmonds M (2005), “Isolation of Shikimic Acid from Star Aniseed”, Journal of Chemical Education, 82(4), pp 599-600 31 Ronald Harmetz , Louis A Laurenzo , David V Petrocine (1990), “Method of making a coca leaf flavor extract”, United stated patent, 19, 956 429 www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com N 32 Ronald Z., Katharina S., Peter G., Christian S va Katharina B (2013) “Exploring ionic liquid–biomass interactions: towards the improved isolation PHỤ LỤC of shikimic acid from star anise pods”, The Royal Society of Chemistry, 3, pp 33 Sakaguchi I et al (2004), “The water soluble extract of Illicium anisatum Application WO/2007/138607 4.1 Sắc ký đồ HPLC acid shikimic chuẩn, a = 99,8% NG 35 Singh G., Jiang S (1998), “Chemical synthesis of shikimic acid and its 4.2 Sắc ký đồ HPLC acid shikimic dịch chiết Đại hồi analogues”, Tetrahedron,54, pp 4697-4753 36 Stavric B., Stoltz D R (1976), “Shikimic acid”, Food Cosmet Toxicol., 14 (2), N Ầ R pp.141-145 37 Zirbs R., Strassl K., Gaertner P , Schroder C Bica K (2013) “Exploring ionic liquid–biomass interactions: towards the improved isolation of shikimic B 0 acid from star anise pods”, The Royal Society of Chemistry, 3, pp 26010 – 26016 N Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú O Ạ Đ Phụ lục Sắc ký đồ HPLC 34 Sankar I V et al (2007), “Method for obtaining shikimic acid”, WIPO Patent Ễ DI T Phụ lục Phổ IR acid shikimic 449 – 504 N À Đ N Phụ lục Phổ 13C-NMR acid shikimic stimulas mouse vibrissae follicles in organs culture”, Exp Dermaton, 13(8), pp www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com Y U Q P Phụ lục Phổ 1H-NMR acid shikimic 26010 – 26016 HƠ N Á O - Í L A Ó H HƯ 4.3 Sắc ký đồ HPLC mẫu dịch chiết sau hấp phụ 4.4 Sắc ký đồ HPLC mẫu dịch phản hấp phụ T T www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com N NG N Ễ DI N À Đ Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú N Á O - Í L A Ó H B 0 N Ầ R O Ạ Đ Y U Q P HƠ N T HƯ T T www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com N NG Phụ lục 4: Sắc ký đồ HPLC N Ễ DI N À Đ Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú T N Á O - Í L A Ó H B 0 N Ầ R HƯ O Ạ Đ Y U Q P HƠ N T 4.1 Sắc ký đồ HPLC acid shikimic chuẩn, a = 99,8% T 4.2 Sắc ký đồ HPLC acid shikimic dịch chiết Đại hồi www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon www.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com www.daykemquynhon.ucoz.com Produced by Nguyen Thanh Tu MailBox : tuhoahocqn@hotmail.com N NG 4.3.Sắc ký đồ HPLC mẫu dịch chiết dược liệu sau hấp phụ N Á O 4.4 Sắc ký đồ HPLC mẫu dịch phản hấp phụ N Ễ DI N À Đ Sưu tầm GV Nguyễn Thanh Tú - Í L A Ó H B 0 N Ầ R O Ạ Đ Y U Q P HƠ N T HƯ T T www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial ... ion phân l p acid shikimic t N Á O hay t ngu n nguyên li u khác Các nghiên c u không s d ng nh T Nh ng nghiên c u phân l p acid shikimic t N À Đ i ion t c dung d c, thêm 50 n -5 C) cho acid shikimic. .. p ph acid shikimic c a ng acid shikimic mà anionit h p ph vào t NG HƯ S 2.3.1) m nh t l ẦN c li u/ anionit m l n lo i tác nhân n acid shikimic c N À Đ ng h p ph acid shikimic c a h t anionit... u l n, ti u nghiên c u chi t xu t acid shikimic cs d i nghiên c u ch -L d ng nh N Á O phân l p acid shikimic t : N À Đ Kh o sát l a ch acid shikimic t d ch chi Xây d ng D N Ễ I i ion T c lo i