ĐẶC ĐIỂM MỘT SỐ CHỦNG SALMONELLA PHÂN LẬP TRÊN GÀ TẠI MỘT TRẠI GIỐNG THUỘC HUYỆN DĨ AN, TỈNH BÌNH DƯƠNG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NI – THÚ Y ******************* KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẶC ĐIỂM MỘT SỐ CHỦNG SALMONELLA PHÂN LẬP TRÊN GÀ TẠI MỘT TRẠI GIỐNG THUỘC HUYỆN DĨ AN, TỈNH BÌNH DƯƠNG Sinh viên thực hiện: VÕ THỊ KIỀU NHUNG Lớp : DH06DY Ngành : Dược Thú Y Khóa : 2006 - 2011 Tháng 08/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NI – THÚ Y ******************** VÕ THỊ KIỀU NHUNG ĐẶC ĐIỂM MỘT SỐ CHỦNG SALMONELLA PHÂN LẬP TRÊN GÀ TẠI MỘT TRẠI GIỐNG THUỘC HUYỆN DĨ AN, TỈNH BÌNH DƯƠNG Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Bác sỹ Thú y Giáo viên hướng dẫn TS TRẦN THỊ BÍCH LIÊN BSTY LÊ THỊ HÀ Tháng 08/2011 i PHIẾU XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Họ tên sinh viên thực đề tài: VÕ THỊ KIỀU NHUNG Tên khóa luận: “Đặc điểm số chủng Salmonella phân lập gà trại giống thuộc huyện Dĩ An, tỉnh Bình Dương” Sinh viên hồn thành khóa luận tốt nghiệp theo yêu cầu Giáo viên hướng dẫn ý kiến đóng góp Hội đồng chấm bảo vệ luận văn tốt nghiệp ngày…/…/2011 Giáo viên hướng dẫn Giáo viên hướng dẫn TS Trần Thị Bích Liên BSTY Lê Thị Hà ii LỜI CẢM ƠN ♥ Kính dâng cha mẹ Người sinh thành, nuôi dưỡng dạy dỗ cho có ngày hơm ♥ Xin trân trọng tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Trần Thị Bích Liên BSTY Lê Thị Hà tận tình hướng dẫn, giúp đỡ truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quí báu, tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp ♥ Chân thành cảm ơn Toàn thể quý thầy cô cán công nhân viên Khoa Chăn nuôi – Thú Y Trường Đại học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh tận tình dạy dỗ, truyền đạt kiến thức chun mơn kinh nghiệm q báu cho suốt thời gian học tập trường ♥ Xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc công ty giống gia cầm miền Nam tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp ♥ Xin cảm ơn Các bạn Hưng, Phú, Chung, Điệp toàn thể bạn lớp Dược Y 32 giúp đỡ động viên suốt thời gian học tập iii TÓM TẮT Đề tài “Đặc điểm số chủng Salmonella phân lập gà trại giống thuộc huyện Dĩ An, tỉnh Bình Dương” từ tháng 01/2011 đến tháng 06/2011, Phòng Vi Sinh, khoa Chăn Nuôi Thú Y trường Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Bằng phương pháp ni cấy phân lập, tiến hành khảo sát số đặc điểm chủng vi khuẩn Salmonella phân lập từ 170 mẫu (100 mẫu phân, 60 mẫu trứng sát, 10 mẫu gà ngày tuổi), kết cho thấy: Tỷ lệ phân lập Salmonella loại mẫu 4,11 %, diện phân gà %, trứng sát % gà ngày tuổi 10 % chủng Salmonella phân lập mang đặc điểm nuôi cấy môi trường chuyên biệt BGA, MC tài liệu kinh điển mô tả Bằng phương pháp ngưng kết với kháng huyết Salmonella đa giá OMA đơn giá, xác định chủng phân lập thuộc serovar Salmonella Enteritidis (14,28 %), chủng phân lập thuộc serovar Salmonella Typhimurium (28,57 %), lại chủng phân lập chưa định danh serovar (57,15 %) Các chủng Salmonella phân lập nhạy cảm với norfloxacin (85,71 %), đề kháng hoàn toàn với colistin (100 %) Đặc biệt có chủng đa đề kháng (kháng với loại kháng sinh trở lên) Các serovar gây ngộ độc thực phẩm (Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium) gây chết chuột với thời gian ngắn (trong vòng 48 giờ) so với chủng khác (trong vòng 60 giờ) Tỷ lệ tái phân lập vi khuẩn Salmonella từ chuột sau tiêm Salmonella 100 % iv MỤC LỤC Trang Trang tựa i Phiếu xác nhận Giáo viên hướng dẫn ii Lời cảm ơn iii Tóm tắt iv Mục lục v Danh sách chữ viết tắt viii Danh sách bảng ix Danh sách hình x Danh sách biểu đồ xi Danh sách sơ đồ xi Chương MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1.2 MỤC ĐÍCH 1.3 YÊU CẦU Chương TỔNG QUAN 2.1 SƠ LƯỢC VỀ VI KHUẨN SALMONELLA VÀ BỆNH DO SALMONELLA GÂY RA TRÊN GIA CẦM 2.1.1 Lịch sử phân bố vi khuẩn Salmonella 2.1.2 Phân loại 2.1.3 Đặc điểm vi khuẩn Salmonella 2.1.3.1 Đặc điểm hình thái 2.1.3.2 Đặc điểm nuôi cấy 2.1.3.3 Đặc tính sinh hóa 2.1.3.4 Sức đề kháng 2.1.3.5 Cấu trúc kháng nguyên độc tố 2.1.3.6 Tính gây bệnh 11 2.1.3.7 Sự phân bố lây nhiễm 11 v 2.2 BỆNH DO VI KHUẨN SALMONELLA GÂY RA .11 2.2.1 Trên gia cầm 11 2.2.1.1 Truyền nhiễm học .12 2.2.1.2 Cơ chế sinh bệnh .13 2.2.1.3 Triệu chứng .14 2.2.1.4 Bệnh tích .14 2.2.1.5 Chẩn đoán bệnh 14 2.2.1.5 Phòng điều trị bệnh 15 2.2.2 Salmonella gây ngộ độc thực phẩm người 15 2.2.2.1 Dịch tễ .15 2.2.2.2 Một số chủng Salmonella gây ngộ độc thực phẩm 16 2.2.2.3 Tình hình ngộ độc thực phẩm .17 2.2.2.4 Tính gây bệnh 18 2.2.2.5 Triệu chứng ngộ độc 19 2.2.2.6 Phòng điều trị bệnh .19 2.3 MỘT SỐ KHẢO SÁT VỀ SALMONELLA TRÊN GIA CẦM .20 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM .22 3.1.1 Thời gian 22 3.1.2 Địa điểm 22 3.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU .22 3.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .22 3.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .22 3.4.1 Nội dung 22 3.4.1.1 Vật liệu 23 3.4.1.2 Phương pháp tiến hành .23 3.4.1.3 Chỉ tiêu theo dõi 26 3.4.2 Nội dung 26 3.4.2.1 Vật liệu .26 vi 3.4.2.2 Phương pháp tiến hành 27 3.4.2.3 Chỉ tiêu theo dõi 28 3.4.3 Nội dung 28 3.4.3.1 Vật liệu 28 3.4.3.2 Phương pháp tiến hành 28 3.4.3.3 Chỉ tiêu theo dõi 29 3.5 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU .29 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .30 4.1 Kết phân lập định danh Salmonella .30 4.1.1 Tỷ lệ nhiễm Salmonella .30 4.1.2 Kết khảo sát số đặc tính ni cấy sinh hóa chủng Salmonella phân lập 31 4.1.3 Kết thử kháng huyết Salmonella đa giá OMA đơn giá .34 4.2 Kết khảo sát tính nhạy cảm với kháng sinh serovar Salmonella phân lập 36 4.3 Kết thử độc lực chuột với serovar Salmonella phân lập kết tái phân lập vi khuẩn Salmonella từ chuột .39 4.3.1 Kết thử độc lực chủng Salmonella phân lập 39 4.3.2 Kết tái phân lập vi khuẩn Salmonella từ chuột .40 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .42 5.1 KẾT LUẬN 42 5.2 ĐỀ NGHỊ 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO .44 PHỤ LỤC 48 vii DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT NB : Nutrient Broth NA : Nutrient Agar BPW : Buffered Pepton Water RV : Rappaport Vassiliadis BGA : Brilliant Green Agar BSA : Bismuth Sulfite Agar MC : MacConkey KIA : Kliger Iron Agar IMViC : Indol, Methyl red, Voges – proskauer, Citrat MHA : Mueller Hinton Agar SIM : Sulfide Indole Motility LT : Heat – Labile toxin ST : Heat – Stable toxin cAMP : cyclo Adenosine - monophosphate cGMP : cyclo Guanosine - monophosphate CDC : Centers for Disease Control and Prevention ECDC : European Centers for Disease Control and Prevention EFSA : European Food Safety Authority USDA : United States Department of Agriculture FSIS : Food Safety and Inspection Service CLSI : Clinical and Laboratory Standards Institure viii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Phân biệt Salmonella với số loài khác Bảng 2.2 Phân biệt loài phụ loài Salmonella Bảng 2.3 Cấu trúc kháng nguyên serovar Salmonella quan trọng .10 Bảng 2.4 Các serovar Salmonella phân lập từ gia cầm .12 Bảng 3.1 Bố trí thí nghiệm xác định độc lực serovar Salmonella 28 Bảng 4.1 Kết tỷ lệ nhiễm Salmonella .30 Bảng 4.2 Đặc điểm ni cấy hình thái khuẩn lạc chủng Salmonella phân lập 31 Bảng 4.3 Kết xác định Salmonella dựa vào phản ứng sinh hóa 32 Bảng 4.4 Kết thử kháng huyết Salmonella đa giá OMA đơn giá 35 Bảng 4.5 Kết thử kháng sinh đồ với chủng Salmonella .36 Bảng 4.6 Kết thử nghiệm độc lực chuột với chủng serovar Salmonella phân lập 39 Bảng 4.7 Kết tái phân lập vi khuẩn Salmonella từ chuột 40 ix 23 Lê Thị Cẩm Trinh, 2009 Ứng dụng kỹ thuật PCR để xác định vi khuẩn Salmonella E Coli thực phẩm Luận văn tốt nghiệp Khoa Chăn Nuôi - Thú Y trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, Việt Nam TÀI LIỆU TIẾNG NƯỚC NGOÀI 24 Michel Y Popoff Léon Le Minor, 1997 Antigenic formulas of the Salmonella, page 11 25 Surette, Michael G., and Bonnie L Bassler, 2007 Quorum sensing in Escherichia coli and Salmonella typhmurium Microbiology 95.7046–7050 (June 1998): 12 Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2007 National Academy of Sciences 26 Quinn P.J, Carter M E, Markey B.K, Carter G.R, 1998 Clinical veterinary microbiology 27 Calnek B.W, 1997 Diseases of poultry 10th Edition 28 Everest, Paul ctv Evaluation of Salmonella typhimurium Mutants in a Model of Experimental Gastroenteritis, Infection and Immunity 67.6 (June 1999): 2815-2821 Infection and Immunity 2007 29 Guard-Petter J The chicken, the egg and Salmonella enteritidis Environ Microbiol 2001;3:421–30 30 Robert S Breed, E G D Murray, Nathan R Smith, 1994 Bergey’s manual of determinative bacteriology Ninth Edition 31 CLSI, 2010 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; 20th Infomational Supplement, M100 – S20, Vol 27 No1 TÀI LIỆU TỪ INTERNET 32 Võ Thị Hoàng Mi, 2005 Các phương pháp chẩn đốn thương hàn thơng dụng Truy cập ngày 23/04/2011 33 Bảo Trâm, 2011 Thế giới với nỗi lo an toàn vệ sinh thực phẩm Truy cập ngày 23/04/2011 46 34 Nguyễn Ý Đức, 2008 Ngộ độc thực phẩm Truy cập ngày 23/04/2011 35 The Journal of the American Medical Association, 2008 Ngộ độc thực phẩm vi khuẩn Salmonella Truy cập ngày 25/04/2011 36 Phan Xuân Trung, 2009 Dinh dưỡng an toàn thực phẩm Truy cập ngày 25/04/2011 37 Báo Việt, 2008 Ngộ độc thực phẩm Salmonella Truy cập 25/04/2011 38 Xuân Nghĩa, 2011 Ngộ độc thực phẩm người chết, 30 người nhập viện Truy cập ngày 25/04/2011 39 Đăng Trần, 2011 Quyết tâm cải thiện tình trạng An tồn vệ sinh thực phẩm Truy cập ngày 26/04/2011 40 EFSA, 2009 Report of the Task Force on Zoonoses Data Collection on the Analysis of the baseline survey on the prevalence of Salmonella in broiler flocks of Gallus gallus, in the EU Truy cập ngày 02/05/2011 41 CDC, 2009 FoofNet Surveillance Report for 2009 Truy cập ngày 15/06/2011 47 PHỤ LỤC CÔNG THỨC PHA CHẾ CÁC LOẠI MÔI TRƯỜNG MÔI TRƯỜNG TIỀN TĂNG SINH BPW (Buffered Pepton Water, Oxoid, CM0425) Thành phần Pepton 10 g Sodiumchloride 5g Disodium phosphate 3,5 g Potassium dihydrogen phosphate 1,5 g Cách pha chế Cân 20 g môi trường cho vào 1000 ml nước cất Hòa tan hồn tồn mơi trường Phân vào ống nghiệm ml đậy nút lại, sau hấp tiệt trùng autoclave 121oC 15 phút MÔI TRƯỜNG TĂNG SINH RV (Rappaport Vassiliadis, Oxoid, CM0669) Thành phần Soya pepton 5g Sodium chloride 8g Potassium dihydrogen phosphate 1,6g Magnesium chloride 40 g Malachite green 0,04 g Cách pha chế Cân 30 g môi trường cho vào 1000 ml nước cất Hòa tan hồn tồn môi trường, phân vào ống nghiệm 10 ml môi trường đậy nút bơng lại, sau hấp tiệt trùng autoclave 121oC 15 phút MÔI TRƯỜNG CHUYÊN BIỆT BGA (Brilliant Green Agar, Oxoid, CM0329) Thành phần ‘Lab – lemco’ powder 5g 48 Peptone 10 g Yeast extract 3g Disodium hydrogen phosphate 1g Sodium dihydrogen phosphate 0,6g Lactose 10 g Sucrose 10 g Phenol red 0,09 g Brilliant green 0,0047 g Agar 12 g Cách pha chế Cân 52 g môi trường cho vào 1000 ml nước cất vơ trùng, sau đun cách thủy để hòa tan hồn tồn, để nguội 45oC đổ vào đĩa petri (khoảng 20 ml/đĩa) MÔI TRƯỜNG ĐỊNH DANH VI KHUẨN 4.1 KIA (Kligler Iron Agar, HiMedia, M078) Thành phần Beef extract 3g Yeast extract 3g Peptone 15 g Sodium chloride 5g Proteose peptone 5g Lactose 10g Dextrose 1g Ferrous sulphate 0,2g Sodium thiosulphate 0,3g Phenol red 0,024g Agar 15g 49 Cách pha chế Cân 57,5 g môi trường cho vào 1000 ml nước cất Hòa tan hồn tồn môi trường Phân vào ống nghiệm (cỡ 12 mm) ml, sau đậy nút bơng lại Tiệt trùng autoclave 121oC 15 phút Đặt ống nghiệm nghiêng khoảng mm a Indol Thành phần Tryptone 20g Disodium phosphate 2g Dextrose 1g Potassium nitrate 1g Agar 1g Cách pha chế Cân 25 g môi trường cho vào 1000 ml nước cất Hòa tan hồn tồn mơi trường Phân vào ống nghiệm ml, sau đậy nút lại Tiệt trùng autoclave 121oC 15 phút b MR – VP Thành phần Bufferred pepton 7g Dextrose 5g Dipotassium phosphate 5g Cách pha chế Cân 17 g môi trường cho vào 1000 ml nước cất Hòa tan hồn tồn mơi trường Phân vào ống nghiệm ml, sau đậy nút bơng lại Tiệt trùng autoclave 121oC 15 phút c Simmons citrate Thành phần Magnesium sulphate 0,2 g Amonium dihydrogen phosphate 1g 50 Dipotassium phosphate 1g Sodium chloride 5g Sodium citrate 2g Bromothymol blue 0,08 g Agar 15 g Cách pha chế Cân 24,28 g môi trường cho vào 1000 ml nước cất Hòa tan hồn tồn mơi trường Phân vào ống nghiệm ml, sau đậy nút bơng lại Tiệt trùng autoclave 121oC 15 phút Đặt phần nghiêng môi trường tới đáy ống nghiệm MÔI TRƯỜNG GIỮ GIỐNG VI KHUẨN NA (Nutrient Agar, Difco, 001 – 01) Thành phần Beef extrate 5g Pepton 10 g Sodium chloride 5g Agar 15 g Cách pha chế Cân 23 g môi trường cho vào 1000 ml nước cất Hòa tan hồn tồn mơi trường Phân vào ống nghiệm ml, sau đậy nút bơng lại Tiệt trùng autoclave 121oC 15 phút Đặt phần nghiêng môi trường tới đáy ống nghiệm MÔI TRƯỜNG THỬ KHÁNG SINH ĐỒ MHA (Mueller Hinton Agar, HiMedia, M173) Thành phần Beef extract 300 g Casein amino acid 17,5 g Starch 1,5 g Agar 17 g 51 Cách pha chế Cân 38 g môi trường cho vào 1000 ml nước cất Đun cách thủy để hòa tan hồn tồn mơi trường Phân vào ống nghiệm 20 ml, đậy nút lại, hấp tiệt trùng autoclave 121oC 15 phút Sau rót vào đĩa petri (loại đĩa có đường kính 90 mm) THUỐC THỬ 7.1 Thuốc thử Kovac’s Thành phần Paradimethyl aminobenzaldehyde 5g Iso – amyl alcohol 75 ml Acid chlohydride đặc 25 ml Cách pha chế Cho paradimethyl aminobenzaldehyde vào cồn để vào nước ấm 50 – 60oC, lắc đề cho tan hoàn toàn, đợi nguội, cho từ từ HCl đặc vào Bảo quản thuốc thử nhiệt độ lạnh khoảng 4oC 7.2 Thuốc thử Methyl red Thành phần Methyl red 0,1 g Ethanol (95%) 300 ml Nước cất vừa đủ 500 ml Cách pha chế Hòa tan methyl red vào cồn, sau cho nước cất vào vừa đủ 500 ml 7.3 Thuốc thử VP (Voges – Proskauer) Thành phần Dung dịch Dung dịch α – napthol 5g alcol tuyệt đối 100 ml KOH 10 g Nước cất 100 ml 52 Cách giữ giống vi khuẩn Salmonella Giống vi khuẩn Salmonella cấy chuyển qua thạch nghiêng NA, 37oC 24 Sau giữ gốc tủ lạnh nhiệt độ 4oC – 8oC Hoặc cho – ml NB vào ống thạch NA, dùng que cấy làm bong tróc khuẩn lạc Canh khuẩn thu cho vào eppendorf với glycerin với tỷ lệ 1:1, trữ nhiệt độ - 20oC Các phản ứng sinh hóa vi khuẩn Salmonella Phản ứng Indol Nguyên tắc: Trong môi trường canh dinh dưỡng Nutrient Broth (NB) có chứa tryptophan Một số vi khuẩn có khả sinh enzyme tryptophanse thủy phân tryptophan có mơi trường NB tạo thành indol Lượng indol sinh kết hợp với paradimethylaminobenzaldehyde thuốc thử Kowacs tạo thành rositol (có vòng màu đỏ lên mặt) Ngược lại, vi khuẩn khơng có enzyme tryptophanse không thủy phân tryptophan để tạo thành indol, nhỏ thuốc thử kowacs vào khơng tạo rositol (khơng có vòng màu đỏ lên mặt) Môi trường thuốc thử − Môi trường: canh dinh dưỡng Nutrient Broth (NB) có chứa pepton − Thuốc thử: thuốc thử Kowacs Tiến hành: dùng que cấy vòng, thao tác vơ trùng cấy vi khuẩn Salmonella vào môi trường NB, ủ 37oC, đọc kết sau 24 nuôi cấy Kết quả: nhỏ giọt thuốc thử Kowacs vào ống môi trường nuôi cấy vi khuẩn Salmonella 37oC/24 đọc kết quả: − Khơng xuất vòng màu đỏ bề mặt mơi trường (phản ứng sinh indol âm tính) Phản ứng MR (Methyl Red) Nguyên tắc: Một số vi khuẩn có khả lên men đường glucose tạo thành acid pyruvic, acid sinh lại tiếp tục chuyển hóa thành nhiều loại acid hữu khác như: acid acetic, acid lactic…và làm cho pH môi trường giảm xuống, pH chất thị màu methyl red nhỏ vào giữ màu đỏ Ngược lại vi khuẩn 53 lên men glucose yếu không lên men glucose sử dụng peptone làm pH mơi trường tăng lên, làm chất thị màu methyl red đổi từ đỏ sang vàng Môi trường thuốc thử − Môi trường: mơi trường canh dinh dưỡng có chứa 1% đường glucose (môi trường pepton glucose) − Thuốc thử: Methyl red Tiến hành: dùng que cấy vòng, thao tác vơ trùng cấy vi khuẩn Salmonella vào môi trường, ủ 37oC, đọc kết sau 24 nuôi cấy Kết quả: nhỏ giọt thuốc thử methyl red vào ống môi trường nuôi cấy khuẩn Salmonella 37oC/24 đọc kết quả: − Mơi trường có màu đỏ, phản ứng MR dương tính Phản ứng VP (Voges – Proskauer) Nguyên tắc: Một số vi khuẩn có khả lên men đường glucose tạo thành acid pyruvic, lại không chuyển hóa acid pyruvic thành acid hữu mà chuyển hóa thành hợp chất acetyl methyl carbinol (acetoine)… Acetoine mơi trường kiềm cao bị oxy hóa thành diacetyl Diacetyl sinh kết hợp với nhóm guanin agrinin có pepton tạo thành phức chất có màu đỏ với thuốc thử α – napthol Môi trường thuốc thử − Môi trường: Môi trường canh dinh dưỡng có chứa % đường glucose (mơi trường pepton glucose) − Thuốc thử: NaOH 40 % α – napthol 10 % cồn Tiến hành: Dùng que cấy vòng, thao tác vô trùng cấy vi khuẩn Salmonella vào môi trường, ủ 37oC, đọc kết sau 24 nuôi cấy Kết quả: cho 0,5 ml dung dịch NaOH 40 %, sau nhỏ thêm giọt α – napthol 10 % vào ống môi trường nuôi cấy vi khuẩn Salmonella 37oC/24 giờ, lắc kỹ, đợi – 10 phút − Mơi trường (phần phía trên) khơng có màu đỏ nhạt, phản ứng VP âm tính 54 Phản ứng Simmons citrat Ngun tắc: mơi trường có chứa hợp chất sodium citrat (Na C H O ), số vi sinh vật có khả sử dụng citrat làm thừa gốc Na+ khiến cho môi trường trở nên kiềm (pH tăng) làm cho màu chất thị xanh brommothymol có mơi trường chuyển từ xanh sang màu xanh dương Môi trường chất thị màu − Môi trường: môi trường Simmons citrat − Chất thị màu: xanh brommothymol Tiến hành: dùng que cấy vòng, thao tác vơ trùng cấy vi khuẩn Salmonella lên bề mặt môi trường thạch nghiêng, ủ 37oC, đọc kết sau 24 nuôi cấy Kết quả: Môi trường có màu xanh dương (pH mơi trường tăng): vi khuẩn sử dụng citrat Phản ứng citrat dương tính Khả phân giải Urê Nguyên tắc: Urê tác dụng enzyme urease vi sinh vật bị phân giải tạo thành NH làm kiềm hóa mơi trường làm cho thị màu phenol red chuyển từ màu đỏ hồng sang màu đỏ cánh sen Môi trường chất thị màu − Mơi trường: canh pepton – glucose có urê − Chất thị màu: phenol red Tiến hành: dùng que cấy vòng, thao tác vơ trùng cấy vi khuẩn Salmonella vào môi trường, ủ 37oC, đọc kết sau 24 ni cấy Kết quả: Mơi trường có màu đỏ hồng (mơi trường khơng bị kiềm hóa): Phản ứng phân giải urê âm tính 55 Phụ lục Phân nhóm serovar Salmonella theo cấu trúc kháng nguyên Nhóm A B Tên vi khuẩn Kháng nguyên H O Pha Pha Sal Paratyphi A 1, 2, 12 A _ Sal Paratyphi B 1, 4, 5, 12 B 1, Sal Abortus ovis 4,12 C 1, Sal Abortus bovis 1, 4, 12, 27 B e, n, x 4, 12 g, m, t _ 1, 4, 5, 12 i 1, Sal Africana 4, 12 r (i) 1, w Sal Indicana 1, 4, 12 z 1, Sal Choleraesuis 6, C 1, Sal Typhi suis 6, C 1, Sal Paratyphi C 6, 7, Vi C 1, Sal California Sal Typhimurium C1 Kháng nguyên C2 Sal Newport 6, e, h 1, C3 Sal Virgina d _ (20) i 2, 9, 12, Vi d 2, 9, 12 g, m 1, Sal Panama 1, 9, 12 _ _ Sal Pullorum (1), 9, 12 _ _ Sal Anatum 3, 10 e, h 1, Sal London 3, y 1, Sal Newengton 3, 15 e, h 1, Sal Binza 3, 15 z, 10 1, Sal Mieapolis (3), 15, 34 e, h 1, Sal Illinois (3), 15, 34 z, 10 1, Sal Kentucky Sal Typhi D E1 E2 E3 Sal Enteritidis 56 Nhóm Tên vi khuẩn Kháng nguyên Kháng nguyên H O Pha Pha Sal Inloese 1, 3, 19 d 26 Sal Cheemeberg 1, 3, 19 z e, n, z, 15 Sal Senftenberg 1, 3, 19 g, s, t _ 11 e, n, x 13, 22 z 1, (1), 6, 14, 24 l, v e, n, x Sal Carraw 6, 14, 24 y 1, Sal Brazil 16 a 1, Sal Hull 16 b 1, Sal Camel 17 l, v e, n, x Sal Cattle 28 a e, n, x Sal Chicago 28 r 1, N Sal Landaw 30 i 1, P Sal Adelaide 35 f, g _ E4 F Sal Rubislaw G Sal Poona H I J M Sal Horscem (Trích dẫn Văn Thiên Bảo, 2004) 57 Phụ lục Đường kính vòng vơ khuẩn chuẩn theo phương pháp Kirby – Bauer (CLSI, 2010 M100 – S20, Vol 27 No1) Hàm lượng Kháng sinh Đường kính vòng vơ khuẩn (mm) (μg) / đĩa Đề kháng Trung gian Nhạy ampicilline 10 ≤ 13 14 – 16 ≥ 17 penicilline 10 ≤ 20 21 – 28 ≥ 29 gentamycine 10 ≤ 12 13 – 14 ≥ 15 neomycine 30 ≤ 12 13 – 16 ≥ 17 streptomycine 10 ≤ 11 12 – 14 ≥ 15 erythromycine 15 ≤ 13 14 – 22 ≥ 23 tetracycline 30 ≤ 14 15 – 18 ≥ 19 bactrim 25 ≤ 10 11 – 15 ≥ 16 colistine 10 ≤8 – 10 ≥ 11 kanamycine 30 ≤ 13 14 – 17 ≥ 18 norfloxacin 10 ≤ 12 13 – 16 ≥ 17 cephalexin 30 ≤ 14 15 – 17 ≥ 18 Phụ lục Đề kháng kháng sinh chủng Salmonella phân lập Số loại kháng sinh bị đề kháng n Tỷ lệ (%) 14,28 n Tỷ lệ (%) 14,28 n Tỷ lệ (%) 28,57 n Tỷ lệ (%) 14,28 n: số chủng đề kháng với số loại kháng sinh 58 n Tỷ lệ (%) 28,57 n Tỷ lệ (%) n Tỷ lệ (%) Phụ lục Một số hình ảnh có liên quan Hình Lấy mẫu phân Hình Lấy mẫu trứng sát gà ngày tuổi (a) (b) Hình Tiêm truyền chuột (a) chuột chết (b) 59 Xử lý kết trắc nghiệm Chi – Square So sánh tỷ lệ nhiễm Salmonella mẫu phân mẫu trứng sát DT 3.75 Total Total 100 57 60 96.25 2.25 AT 97 57.75 154 160 Chi-Sq = 0.150 + 0.006 + 0.250 + 0.010 = 0.416 DF = 1, P-Value = 0.519 60 ... nghiên cứu đề tài: Đặc điểm số chủng Salmonella phân lập gà trại giống thuộc huyện Dĩ An, tỉnh Bình Dương 1.2 MỤC ĐÍCH Định danh khảo sát đặc điểm số chủng Salmonella phân lập từ gà, làm sở cho... – THÚ Y ******************** VÕ THỊ KIỀU NHUNG ĐẶC ĐIỂM MỘT SỐ CHỦNG SALMONELLA PHÂN LẬP TRÊN GÀ TẠI MỘT TRẠI GIỐNG THUỘC HUYỆN DĨ AN, TỈNH BÌNH DƯƠNG Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp... đỡ động viên suốt thời gian học tập iii TÓM TẮT Đề tài Đặc điểm số chủng Salmonella phân lập gà trại giống thuộc huyện Dĩ An, tỉnh Bình Dương từ tháng 01/2011 đến tháng 06/2011, Phòng Vi Sinh,