NGHIÊN CỨU TÁC NHÂN PHYTOPHTHORA VÀ PYTHIUM GÂY HẠI TRÊN CÂY HOA LÀI (Jasminum spp.) TẠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA NƠNG HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU TÁC NHÂN PHYTOPHTHORA VÀ PYTHIUM GÂY HẠI TRÊN CÂY HOA LÀI (Jasminum spp.) TẠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGÀNH : BẢO VỆ THỰC VẬT NIÊN KHÓA : 2007-2011 SINH VIÊN THỰC HIỆN : ĐINH THỊ ÁNH TUYẾT Tp Hồ Chí Minh, tháng 08/2011 i   NGHIÊN CỨU TÁC NHÂN PHYTOPHTHORA VÀ PYTHIUM GÂY HẠI TRÊN CÂY HOA LÀI (Jasminum spp.) TẠI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Tác giả ĐINH THỊ ÁNH TUYẾT Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp kỹ sư ngành Bảo Vệ Thực Vật GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN: TS Lê Đình Đơn ThS Lê Cao Lượng Tp Hồ Chí Minh, tháng 08/2011 ii   LỜI CẢM ƠN ™ Chân thành cảm ơn: Ban giám hiệu quý thầy trường Đại Học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh; Quý thầy cô Khoa Nông Học truyền đạt kiến thức quý báu suốt thời gian em theo học trường Cảm ơn Ban Lãnh Đạo anh chị Trung tâm Kiểm Dịch Thực Vật Sau Nhập Khẩu II tận tình giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho em suốt thời gian thực đề tài tốt nghiệp Cảm ơn anh Nguyễn Mạnh Thế, bạn Bùi Thị Tôn Thất, bạn Nguyễn Thị Phụng Kiều, bạn Võ Nhất Sinh tất bạn giúp đỡ, động viên góp ý cho suốt thời gian học tập trường, đặc biệt thời gian thực đề tài tốt nghiệp có nhiều lo lắng căng thẳng ™ Lời cảm ơn sâu sắc: Thầy Lê Đình Đơn, thầy Lê Cao Lượng chị Phan Thị Thu Hiền (Trung tâm Kiểm Dịch Thực Vật Sau Nhập Khẩu II) tận tình hướng dẫn em trình thực hồn thiện đề tài tốt nghiệp ™ Ln ghi nhớ công ơn: Con cảm ơn cha mẹ sinh thành nuôi dạy khôn lớn ngày hơm nay, gia đình ln điểm tựa để phấn đấu cho mục tiêu đời Xin chân thành cảm ơn! Tp Hồ Chí Minh, 08/2011 Đinh Thị Ánh Tuyết iii   TÓM TẮT Đinh Thị Ánh Tuyết, Khoa Nông Học – Trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh, tháng 08/2011 Đề tài “Nghiên cứu tác nhân Phytophthora Pythium gây hại hoa lài (Jasminum spp.) thành phố Hồ Chí Minh” Giáo viên hướng dẫn: TS Lê Đình Đơn ThS Lê Cao Lượng Cây hoa lài từ lâu biết đến với nhiều công dụng đời sống, hoa lài dùng để ướp trà, làm cảnh, làm thuốc, nước hoa, mỹ phẩm có vai trò tín ngưỡng số nơi Đây loài dễ trồng mang lại hiệu kinh tế cao, nhiều vùng chuyên canh trồng từ lâu có Tp Hồ Chí Minh, nhiên tình hình sâu bệnh hại phần nguyên nhân làm diện tích canh tác hoa lài giảm sút năm qua Tp Hồ Chí Minh bệnh thối rễ chết hoa lài có liên quan đến tác nhân Phytophthora Pythium mà nước chưa có nghiên cứu liên quan đến hai tác nhân gây hại hoa lài Xuất phát từ thực tế trên, đề tài thực Đề tài thực từ tháng 02/2011 đến tháng 07/2011, Phòng Khảo Sát Thực Nghiệm – Trung tâm Kiểm Dịch Thực Vật Sau Nhập Khẩu II Đề tài tiến hành mẫu Phytophthora Pythium phân lập từ 30 mẫu bệnh thu thập từ vùng trồng lài Tp Hồ Chí Minh gồm: Xã Nhị Bình – Huyện Hc Mơn, Xã Bình Mỹ – Huyện Củ Chi Phường Thạnh Lộc – Quận 12 Mục tiêu đề tài xác định tác nhân Phytophthora Pythium gây bệnh thối rễ chết hoa lài Các mẫu bệnh sau thu thập tiến hành phân lập nhóm tác nhân Phytophthora Pythium Với mẫu Phytophthora Pythium phân lập thực thí nghiệm đánh giá khả gây hại chúng rễ đậu nành hoa lài, sử dụng non, bánh tẻ, già với phương pháp gây vết thương không gây vết thương Khảo sát sinh trưởng mẫu Phytophthora Pythium loại môi trường CMA, CRA, PCA, PGA, mức nhiệt độ 15oC, 20oC, 25oC, 30oC, 35oC Xếp mẫu phân lập vào hai nhóm Phytophthora Pythium phương pháp mơ tả hình thái học, đồng thời dựa vào đặc điểm hình thái học phân thành nhóm nhỏ hai nhóm lớn Phytophthora Pythium iv   Qua thí nghiệm tiến hành, 30 mẫu bệnh thu thập phân lập 16 mẫu thuộc hai nhóm Phytophthora Pythium Từ hai nhóm lớn phương pháp mơ tả hình thái học, khảo sát khả sinh trưởng mẫu phân lập môi trường CMA, CRA, PCA, PGA phân thành nhóm nhỏ thuộc nhóm Phytophthora nhóm nhỏ thuộc nhóm Pythium Hai thí nghiệm đánh giá khả gây hại mẫu Phytophthora Pythium phân lập rễ đậu nành hoa lài chứng tỏ động bào tử sợi nấm hai nhóm Phytophthora Pythium có khả xâm nhiễm, gây hại đến trồng Khoảng nhiệt độ 20oC – 30oC thích hợp cho hai nhóm Phytophthora Pythium phát triển, nhiệt độ 35oC có mẫu NB03 TL04 16 mẫu phân lập sinh trưởng chậm nhiệt độ 15oC hai nhóm sinh trưởng chậm Trên môi trường dinh dưỡng mức nhiệt độ thí nghiệm, nhóm Pythium ln sinh trưởng nhanh so với nhóm Phytophthora v   Mục lục Trang Trang tựa i Lời cảm ơn ii Tóm tắt .iii Mục lục v Danh sách chữ viết tắt .viii Danh sách bảng ix Danh sách hình x Chương 1: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu 1.2.1 Yêu cầu 1.3 Giới hạn đề tài Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược hoa lài 2.1.1 Nguồn gốc phân loại 2.1.2 Đặc tính thực vật học 2.1.3 Điều kiện sinh thái 2.1.4 Giá trị kinh tế hoa lài 2.1.5 Tình hình nghiên cứu bệnh hại hoa lài 2.1.5.1 Nghiên cứu nước bệnh hại hoa lài 2.1.5.2 Nghiên cứu nước bệnh hại hoa lài 2.2 Sơ lược Phytophthora Pythium 2.2.1 Vị trí phân loại Phytophthora Pythium 2.2.2 Đặc điểm Phytophthora Pythium 2.2.2.1 Sơ lược Phytophthora 11 2.2.2.2 Sơ lược Pythium 12 2.2.3 Những điểm khác biệt Phytophthora Pythium 14 vi   Chương 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 15 3.1.1 Thời gian nghiên cứu 15 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu 15 3.2 Nội dung nghiên cứu 15 3.3 Phương pháp nghiên cứu 15 3.3.1 Phương pháp thu thập mẫu bệnh 15 3.3.2 Phương pháp phân lập Phytophthora Pythium từ mẫu bệnh thu thập 16 3.3.2.1 Phương pháp chuẩn bị số môi trường phân lập 16 3.3.2.2 Phương pháp phân lập từ rễ 17 3.3.2.3 Phương pháp phân lập từ đất 18 3.3.3 Phương pháp đánh giá khả gây hại mẫu Phytophthora Pythium phân lập 18 3.3.3.1 Phương pháp đánh giá rễ 18 3.3.3.2 Phương pháp đánh giá 19 3.3.4 Phân nhóm mẫu Phytophthora Pythium phân lập đặc điểm hình thái 20 3.3.4.1 Mô tả hình thái mơi trường dinh dưỡng 20 3.3.4.2 Mơ tả hình thái phương pháp búi sợi nấm 20 3.3.5 Khảo sát khả sinh trưởng mẫu Phytophthora Pythium phân lập 21 3.3.5.1 Khảo sát khả sinh trưởng môi trường dinh dưỡng 21 3.3.5.2 Khảo sát khả sinh trưởng mức nhiệt độ khác 22 3.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 22 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Kết phân lập phân nhóm Phytophthora Pythium 23 4.1.1 Kết phân lập Phytophthora Pythium 23 4.1.2 Kết phân nhóm dựa vào đặc điểm hình thái học 23 4.2 Khả gây hại mẫu Phytophthora Pythium phân lập 24 vii   4.2.1 Khả gây hại rễ 24 4.2.2 Khả gây hại 26 4.3 Khả sinh trưởng mẫu Phytopthora Pythium phân lập môi trường dinh dưỡng 31 4.4 Đặc trưng hình thái mẫu Phytophthora Pythium phân lập 40 4.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển mẫu Phytophthora Pythium phân lập 47 4.6 Thảo luận kết 56 4.6.1 Khả gây hại mẫu Phytophthora Pythium phân lập 56 4.6.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển mẫu Phytophthora Pythium phân lập 56 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 58 5.1 Kết luận 58 5.2 Đề nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC viii   DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT CMA Thạch bột bắp (Cornmeal Agar) CR Dung dịch cà rốt (Carrot) CRA Thạch cà rốt (Carrot Agar) ctv Cộng tác viên CV Hệ số biến thiên (Coefficient of Variation) Duncan Duncan’s Multiple Range Test NSC Ngày sau cấy, ngày sau chủng PCA Thạch cà rốt khoai tây (Potato Carrot Agar) PGA Thạch đường khoai tây (Potato Glucose Agar) SD Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) WA Thạch nước cất (Water Agar) ix   DANH S ÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Diện tích canh tác hoa lài Tp Hồ Chí Minh qua năm Bảng 3.1 Thời gian, địa điểm số mẫu bệnh thu thập 16 Bảng 4.1 Số mẫu Phytophthora Pythium phân lập từ nơi lấy mẫu 23 Bảng 4.2 Tỉ lệ nhiễm bệnh đậu nành sau ngày chủng 24 Bảng 4.3 Kích thước vết bệnh non có gây vết thương NSC 10 NSC 26 Bảng 4.4 Kích thước vết bệnh bánh tẻ có gây vết thương NSC 10 NSC 27 Bảng 4.5 Kích thước vết bệnh già có gây vết thương NSC 10 NSC 28 Bảng 4.6 Đường kính tản nấm tốc độ sinh trưởng trung bình mẫu Phytophthora Pythium môi trường CMA nuôi cấy nhiệt độ phòng 32 Bảng 4.7 Đường kính tản nấm tốc độ sinh trưởng trung bình mẫu Phytophthora Pythium môi trường CRA nuôi cấy nhiệt độ phòng 33 Bảng 4.8 Đường kính tản nấm tốc độ sinh trưởng trung bình mẫu Phytophthora Pythium môi trường PCA nuôi cấy nhiệt độ phòng 34 Bảng 4.9 Đường kính tản nấm tốc độ sinh trưởng trung bình mẫu Phytophthora Pythium môi trường PGA ni cấy nhiệt độ phòng 35 Bảng 4.10 Tốc độ sinh trưởng trung bình hai nhóm Phytophthora Pythium môi trường dinh dưỡng 36 Bảng 4.11 Bảng mơ tả tóm tắt hình thái học mẫu Phytophthora Pythium môi trường dinh dưỡng 40 Bảng 4.12 Đường kính tản nấm tốc độ sinh trưởng trung bình mẫu Phytophthora Pythium mơi trường CRA nhiệt độ 15oC 48 Bảng 4.13 Đường kính tản nấm tốc độ sinh trưởng trung bình mẫu Phytophthora Pythium môi trường CRA nhiệt độ 20oC 49 Bảng 4.14 Đường kính tản nấm tốc độ sinh trưởng trung bình mẫu Phytophthora Pythium môi trường CRA nhiệt độ 25oC 50 Bảng 4.15 Đường kính tản nấm tốc độ sinh trưởng trung bình mẫu Phytophthora Pythium môi trường CRA nhiệt độ 30oC 51 Bảng 4.16 Đường kính tản nấm tốc độ sinh trưởng trung bình mẫu Phytophthora Pythium môi trường CRA nhiệt độ 35oC 52   Phụ lục 8: Đường kính tản nấm tốc độ sinh trưởng mẫu Phytophthora Pythium môi trường CRA nhiệt độ 15oC Đường kính tản nấm (cm) Mẫu NSC NSC Tốc độ sinh trưởng trung bình (cm ngày-1) NSC I II III TB I II III TB I II III TB I II III NB03 0.65±0.07 0.60±0.00 0.55±0.07 0.60±0.05 1.20±0.00 1.20±0.14 1.25±0.07 1.22±0.03 1.85±0.07 1.80±0.00 1.75±0.07 1.80±0.05 0.62 0.60 0.58 0.60±0.02 NB04 0.30±0.00 0.35±0.07 0.35±0.07 0.33±0.03 0.40±0.00 0.45±0.07 0.45±0.07 0.43±0.03 0.85±0.07 0.90±0.00 0.80±0.14 0.85±0.05 0.28 0.30 0.27 0.28±0.02 BM03 0.55±0.07 0.55±0.07 0.60±0.00 0.57±0.03 1.15±0.07 1.10±0.00 1.20±0.00 1.15±0.05 1.85±0.07 1.90±0.00 1.85±0.07 1.87±0.03 0.62 0.63 0.62 0.62±0.01 h BM10 0.35±0.07 0.30±0.00 0.35±0.07 0.33±0.03 0.55±0.07 0.50±0.00 0.55±0.07 0.53±0.03 1.35±0.21 1.35±0.07 1.30±0.14 1.33±0.03 0.45 0.45 0.43 0.44±0.01 NB02 1.35±0.07 1.30±0.00 1.30±0.14 1.32±0.03 2.50±0.14 2.40±0.14 2.40±0.14 2.43±0.06 5.75±0.07 5.65±0.07 5.70±0.00 5.70±0.05 1.92 1.88 1.90 1.90±0.02 BM05 1.85±0.07 1.75±0.07 1.70±0.00 1.77±0.08 3.80±0.14 3.85±0.07 3.80±0.00 3.82±0.03 6.05±0.21 5.85±0.07 6.00±0.14 5.97±0.10 2.02 1.95 2.00 1.99±0.04 BM06 1.15±0.07 1.20±0.00 1.15±0.07 1.17±0.03 2.95±0.07 2.85±0.07 2.90±0.14 2.90±0.05 4.50±0.14 4.55±0.07 4.40±0.14 4.48±0.08 1.50 1.52 1.47 1.50±0.03 BM08 1.45±0.07 1.40±0.14 1.40±0.14 1.42±0.03 3.50±0.28 3.55±0.07 3.60±0.14 3.55±0.05 5.85±0.21 5.80±0.00 5.85±0.07 5.83±0.03 1.95 1.93 1.95 1.94±0.01 TL02 1.50±0.14 1.50±0.14 1.55±0.07 1.52±0.03 3.05±0.21 3.05±0.07 3.00±0.14 3.03±0.03 4.95±0.07 4.85±0.07 4.80±0.14 4.87±0.08 1.65 1.62 1.60 1.62±0.03 TL04 1.60±0.00 1.55±0.07 1.45±0.07 1.53±0.08 3.40±0.00 3.30±0.14 3.20±0.00 3.30±0.10 6.10±0.00 6.05±0.07 5.95±0.07 6.03±0.08 2.03 2.02 1.98 2.01±0.03 TL05 2.15±0.07 2.20±0.00 2.10±0.00 2.15±0.05 3.80±0.14 3.85±0.07 3.80±0.00 3.82±0.03 6.00±0.14 5.95±0.21 5.85±0.07 5.93±0.08 2.00 1.98 1.95 1.98±0.03 TL06 1.80±0.00 1.70±0.14 1.65±0.07 1.72±0.08 3.95±0.07 3.85±0.07 3.90±0.00 3.90±0.05 6.35±0.07 6.30±0.14 6.30±0.00 6.32±0.03 2.12 2.10 2.10 2.11±0.01 TL07 1.40±0.00 1.35±0.07 1.25±0.07 1.33±0.08 3.10±0.14 3.05±0.07 3.00±0.00 3.05±0.05 5.80±0.14 5.75±0.07 5.80±0.00 5.78±0.03 1.93 1.92 1.93 1.93±0.01 TL08 1.75±0.07 1.70±0.00 1.70±0.14 1.72±0.03 3.45±0.21 3.40±0.00 3.40±0.14 3.42±0.03 6.25±0.21 6.20±0.00 6.20±0.14 6.22±0.03 2.08 2.07 2.07 2.07±0.01 TL09 1.25±0.07 1.20±0.14 1.15±0.07 1.20±0.05 2.60±0.14 2.55±0.07 2.40±0.00 2.52±0.10 5.15±0.07 5.20±0.14 5.15±0.21 5.17±0.03 1.72 1.73 1.72 1.72±0.01 TL10 1.55±0.07 1.50±0.14 1.45±0.07 1.50±0.05 3.40±0.14 3.35±0.07 3.40±0.00 3.38±0.03 5.95±0.07 5.80±0.00 5.95±0.21 5.90±0.09 1.98 1.93 1.98 1.96±0.03 P h y t o p P y t h i u m I: lần lặp lại 1; II: lần lặp lại 2; III: lần lặp lại 3; TB: trung bình; NSC: ngày sau cấy TB   Toc sinh truong nhom PHYTOPHTHORA o nhiet 15 111 13:05 Thursday, July 27, 2011 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values Mau BM03 BM10 NB03 NB04 Number of Observations Read 12 Number of Observations Used 12 Toc sinh truong nhom PHYTOPHTHORA o nhiet 15 112 13:05 Thursday, July 27, 2011 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Toc sinh truong Sum of Mean Square F Value Pr > F 0.07474167 373.71 F Mau 0.22422500 0.07474167 373.71 F 168.51 F 0.05476667 168.51 F 75.83 F F 0.0038 0.00718333 Toc sinh truong Mean 3.817500 Mean Square 0.07505278 F Value 10.45 Toc sinh truong nhom PHYTOPHTHORA o nhiet 30 Pr > F 0.0038 126 13:05 Thursday, July 27, 2011 The ANOVA Procedure Duncan's Multiple Range Test for Toc sinh truong NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.007183 Number of Means Critical Range 2322 2417 2474 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N Mau A A A A A B 3.92667 BM10 3.91333 NB04 3.84333 3.58667 3 NB03 BM03   Toc sinh truong nhom PYTHIUM o nhiet 30 147 13:05 Thursday, July 27, 2011 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values Mau 12 BM05 BM06 BM08 NB02 TL02 TL04 TL05 TL06 TL07 TL08 TL09 TL10 Number of Observations Read 36 Number of Observations Used 36 Toc sinh truong nhom PYTHIUM o nhiet 30 148 13:05 Thursday, July 27, 2011 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Toc sinh truong Sum of Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F Model 11 6.78083333 0.61643939 94.43 F Mau 11 6.78083333 0.61643939 94.43 F Model 11 114.9124306 10.4465846 994.39 F Mau 11 114.9124306 10.4465846 994.39