NGHIÊN CỨU SỰ ỔN ĐỊNH CỦA CÁC VI KHUẨN E. coli, Salmonella, S. aureus, P. aeruginosa, C. perfringens, B. cereus TRONG ĐIỀU KIỆN BẢO QUẢN ĐÔNG SÂU

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU SỰ ỔN ĐỊNH CỦA CÁC VI KHUẨN E coli, Salmonella, S aureus, P aeruginosa, C perfringens, B cereus TRONG ĐIỀU KIỆN BẢO QUẢN ĐÔNG SÂU Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : TRẦN THÙY TRANG Niên khóa : 2008 – 2012 Tháng 07/2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU SỰ ỔN ĐỊNH CỦA CÁC VI KHUẨN E coli, Salmonella, S aureus, P aeruginosa, C perfringens, B cereus TRONG ĐIỀU KIỆN BẢO QUẢN ĐÔNG SÂU Hƣớng dẫn khoa học Sinh viên thực ThS PHẠM VÂN AN TRẦN THÙY TRANG KS TRẦN THỊ QUỲNH DIỆP Tháng 07/2012 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực đề tài hồn thành luận văn tốt nghiệp tơi đƣợc giúp đỡ tổ chức, cá nhân Tôi xin chân thành cảm ơn ban giám hiệu Trƣờng Đại Học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh, ban chủ nhiệm môn Công nghệ Sinh học tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình học trƣờng Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Trung Tâm Kỹ Thuật Tiêu Chuẩn Đo Lƣờng Chất Lƣợng 3, phòng thử nghiệm vi sinh – GMO tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành tốt đề tài tốt nghiệp Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến ThS Phạm Vân An, CN Chu Nguyên Thanh, ThS Trần Thị Ánh Nguyệt chị phòng thử nghiệm vi sinh – GMO KS Trần Thị Quỳnh Diệp nhiệt tình giúp đỡ, hƣớng dẫn chu đáo suốt thời gian thực đề tài hoàn thành luận văn tốt nghiệp Bên cạnh đó, tơi xin cảm ơn tập thể lớp DH08SH chia sẻ, động viên suốt thời gian học tập nhƣ thực đề tài tốt nghiệp Và sau cùng, xin cảm ơn Ba, Mẹ - ngƣời sinh ra, nuôi dƣỡng giành cho lời động viên, an ủi gặp khó khăn Công ơn Ba, Mẹ không quên Xin chân thành cảm ơn Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2011 Trần Thùy Trang i TÓM TẮT Bảo quản vi sinh vật có tầm quan trọng đặc biệt, tảng cho nghiên cứu ứng dụng liên quan đến nhiều lĩnh vực: sinh học, y học, nông nghiệp môi trƣờng Trong trình bảo quản, tế bào vi sinh vật bị chết, cần tìm phƣơng pháp bảo quản tối ƣu nhằm hạn chế thấp khả chết chúng Hiện nay, phƣơng pháp bảo quản đông sâu đƣợc nghiên cứu nhiều giới, đạt kết khả quan nhƣng Việt Nam chƣa đƣợc nghiên cứu nhiều Sự ổn định bảo quản chủng vi khuẩn qua thời gian dài có ý nghĩa thực tiễn lớn phịng thử nghiệm vi sinh thực phẩm Vì thế, đề tài: “Nghiên cứu ổn định chủng vi khuẩn E coli, Salmonella, S aureus, P aeruginosa, C perfringens, B cereus điều kiện bảo quản đông sâu” đƣợc thực nhằm thiết lập quy trình bảo quản tối ƣu cho chủng vi khuẩn Sau tối ƣu hóa q trình đơng sâu yếu tố nhƣ nhiệt độ đông sâu, nhiệt độ rã đông tiếp tục khảo sát ổn định lâu dài chủng vi khuẩn E coli, Salmonella, S aureus, P aeruginosa, C perfringens, B cereus dung dịch bảo vệ khác đƣa số kết luận sau: Nhiệt độ bảo quản đông sâu cho chủng vi khuẩn khảo sát -700C (trừ vi khuẩn S aureus thích hợp -200C) Dung dịch bảo quản tốt vi khuẩn Salmonella P aruginosa skim milk 10%; vi khuẩn E.coli hỗn hợp skim milk 10% 10% glycerol; vi khuẩn S aureus B cereus dung dịch bảo quản thích hợp skim milk 10% hay hỗn hợp skim milk 10% glycerol 10%; C perfringens đƣợc bảo quản tốt môi trƣờng nƣớc mắm Sau bảo quản, chủng vi khuẩn trêncó thể đƣợc rã đơng tự nhiên điều kiện phịng thí nghiệm (25 - 270C) ii SUMMARY Thesis title “Research on the stability of the E coli, Salmonella, S aureus, P aeruginosa, C perfringens and B cereus in deep-freezing storage condition” Preservation of microorganism is the foundation for basic researches and applications relating to many fields such as: biology, medicine, agriculture and environment During the storage, the microbial cells maybe decrease of viability, so it’s necessary to find the suitable preservation method to reduce the mortality rate Stability of the bacteria after long time of preservation has great significance for the food testing laboratory in microbiology Currently, preservation of bacteria by freezing has been studied in the world and has got quite expected results, but it is still not popular in Vietnam As the result, the thesis "Research on the stability of the E coli, Salmonella, S aureus, P aeruginosa, C perfringens and B cereus in deep-freezing storage condition” was performed in order to establish optimal preservation procedure for these bacterial strains Optimization of some factors which affect the deep-freezing process such as temperature of deep-freezing and thawing as well as examining the long-term stability of the tested bacteria strains on the different preservation solutions, was done The optimized deep – freezing temperature for most of tested bacteria strains was -700C, except for S aureus of which the optimized deep – freezing temperature is -200C The best preservation solution for Salmonella and P Aeruginosa was skim milk 10%; for E.coli was the mixture of skim milk 10% and 10% glycerol; for S aureus and B cereus was skim milk 10% or the mixture of skim milk 10% and glycerol 10%; in particularly for C perfringens was fish sauce After the preservation, thawing was be carried out naturally in laboratory conditions (25 - 270C) Key words: deep-freezing, glycerol, long-term stability, preservation, skim milk, thawing iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii SUMMARY iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC BẢNG ix Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Yêu cầu 1.3 Nội dung thực Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Vi khuẩn E coli 2.1.1 Giới thiệu chung 2.1.2 Phân loại khoa học 2.1.3 Đặc điểm hình thái 2.1.4 Đặc điểm nuôi cấy 2.1.5 Đặc điểm sinh hóa 2.2 Vi khuẩn Salmonella 2.2.1 Giới thiệu chung 2.2.2 Phân loại khoa học 2.2.3 Đặc điểm hình thái 2.2.4 Đặc điểm nuôi cấy 2.2.5 Đặc điểm sinh hóa 2.2.6 Đặc điểm kháng nguyên Salmonella 2.2.7 Đặc điểm sinh hóa 2.3 Vi khuẩn S aureus 2.3.1 Giới thiệu chung 2.3.2 Phân loại khoa học iv 2.3.3 Đặc điểm hình thái 2.3.4 Tính chất nuôi cấy 2.3.5 Tính chất sinh hóa 2.4 Vi khuẩn B cereus 2.4.1 Giới thiệu vi khuẩn B cereus 2.4.2 Phân loại khoa học 2.4.3 Đặc điểm tính chất ni cấy vi khuẩn B cereus 2.4.4 Đặc điểm sinh hóa 2.5 Vi khuẩn P aeruginosa 2.5.2 Giới thiệu chung 2.5.2 Phân loại khoa học 2.5.3 Đặc điểm vi khuẩn P aeruginosa 2.5.4 Tính chất ni cấy 2.5.5 Đặc điểm sinh hóa 2.6 Vi khuẩn C perfringens 2.6.1 Giới thiệu chung 2.6.2 Phân loại khoa học 2.6.3 Đặc điểm vi khuẩn C perfringens 10 2.7 Giới thiệu số phƣơng pháp bảo quản vi sinh vật 10 2.7.1 Phƣơng pháp cấy truyền vi sinh vật 10 2.7.2 Phƣơng pháp giữ giống mơi trƣờng thạch có lớp dầu khống 10 2.7.3 Giữ giống vi sinh vật đất, cát hạt 11 2.7.4 Bảo quản vi sinh vật phƣơng pháp đông khô 11 2.7.5 Phƣơng pháp bảo quản đông sâu (hay lạnh sâu) 12 2.8 Tình hình nghiên cứu việc bảo quản đông sâu chủng vi khuẩn 13 2.8.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 13 2.8.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc 14 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 15 v 3.2 Vật liệu nghiên cứu 15 3.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 15 3.2.2 Dụng cụ thiết bị 15 3.2.2.1 Dụng cụ 15 3.2.2.2 Thiết bị 15 3.2.3 Môi trƣờng sử dụng 15 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 3.3.1 Phƣơng pháp đếm mật số vi khuẩn 16 3.3.1.1 Pha loãng mẫu 16 3.3.1.2 Cấy mẫu phƣơng pháp đổ đĩa 16 3.3.1.3 Đếm vi khuẩn phƣơng pháp cấy trang 17 3.3.1.4 Cách tính kết khuẩn lạc 17 3.3.2 Phƣơng pháp tối ƣu hóa q trình đơng sâu vi khuẩn 18 3.3.2.1 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đông sâu lên mật số vi khuẩn 18 3.3.2.2 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ rã đông sau bảo quản lên mật số vi khuẩn 19 3.3.3 Phƣơng pháp khảo sát ổn định lâu dài vi khuẩn dung dịch bảo quản 20 3.3.4 Thử sinh hóa vi khuẩn 22 3.3.4.1 Vi khuẩn S aureus 22 3.3.4.2 Vi khuẩn B cereus 23 3.3.4.3 Vi khuẩn C perfringens 23 3.3.4.4 Vi khuẩn P aeruginosa 24 3.3.4.5 Vi khuẩn Salmonella 24 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Tối ƣu hóa q trình bảo quản đơng sâu vi khuẩn 25 4.1.1 Tối ƣu hóa q trình bảo quản đơng sâu E coli 25 4.1.2 Tối ƣu hóa q trình bảo quản đơng sâu Salmonella 26 4.1.3 Tối ƣu hóa q trình bảo quản đông sâu S aureus 27 4.1.4 Tối ƣu hóa q trình bảo quản đông sâu B cereus 28 4.1.5 Tối ƣu hóa q trình bảo quản đơng sâu P aeruginosa 30 vi Tối ƣu hóa q trình bảo quản đơng sâu C perfringens 31 4.1.6 4.2 Khảo sát ổn định lâu dài vi khuẩn dung dịch bảo quản 32 4.2.1 Khảo sát ổn định vi khuẩn E coli 32 4.2.2 Khảo sát ổn định vi khuẩn Salmonella 33 4.2.3 Khảo sát ổn định vi khuẩn S aureus 33 4.2.4 Khảo sát ổn định vi khuẩn B cereus 34 4.2.5 Khảo sát ổn định vi khuẩn P aeruginosa 35 4.2.6 Khảo sát ổn định vi khuẩn C perfringens 35 4.2.6.1 Trên dung dịch bảo quản glycerol, đệm phosphate, skim milk 35 4.2.6.2 Trên dung dịch bảo quản nƣớc mắm 36 4.3 Các thử nghiệm sinh hóa vi khuẩn 37 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41 5.1 Kết luận 41 5.2 Đề nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 PHỤ LỤC 44 vii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT GMO: Genetically modified organism XLD: Xylose lysine deoxycholate HE: Hektoen enteric BS: Bismuth sulfite BPLS: Brilliant-green Phenolred Lactose Sucrose BP: Baird - Parker MYP: Egg Yolk Polymyxin TSA: Trypticase soy agar BHI: Brain Heart Infusion LDC: L-Lysine decarboxylation medium VP: Voges Proskauer NB: Nutrient broth ADC: Arginine decarboxylase PCA: Potato Glucose Carot TSC: Tryptose Sulfide Cycloserin TBX: Tryptone Bile X-Glucuronide CFU: Colony Forming Unit viii Đệm phosphate Skim milk 10% Skim milk 10% + Glycerol 4,9 x 106 5,1 x 106 5,6 x 106 5,2 x 106 4,5 x 106 4,4 x 106 4,1 x 106 4,3 x 106 3,9 x 106 4,2 x 106 4,5 x 106 4,2 x 106 10 2,6 x 106 2,4 x 106 2,6 x 106 2,5 x 106 12 2,0 x 106 1,8 x 106 1,8 x 106 1,9 x 106 9,8x 106 9,6 x 106 9,5 x 106 9,6 x 106 2,2 x 106 2,4 x 106 2,4 x 106 2,3 x 106 8,7 x 106 8,6 x 106 8,9 x 106 8,7 x 105 3,8 x 105 3,7 x 105 3,8 x 105 3,8 x 105 3,1 x 105 2,9 x 105 2,8 x 105 2,9 x 105 10 4,2 x 105 4,1 x 105 4,4 x 105 4,2 x 105 12 2,9 x 105 3,2 x 105 3,2 x 105 3,1 x 105 9,8x 106 9,6 x 106 9,5 x 106 9,6 x 106 8,3 x 106 8,7 x 106 8,5 x 106 8,5 x 106 5,3 x 106 5,3 x 106 5,5 x 106 5,4 x 106 7,0 x 106 6,9 x 106 6,5 x 106 6,8 x 106 6,1 x 106 5,7 x 106 6,0 x 106 5,9 x 106 10 6,4 x 106 6,3 x 106 6,6 x 106 6,4 x 106 12 6,1 x 106 5,7 x 106 6,0 x 106 5,9 x 106 9,8x 106 9,6 x 106 9,5 x 106 9,6 x 106 1,1 x 107 9,9 x 106 9,9 x 106 1,0 x 107 9,8 x 106 9,6 x 106 9,5 x 106 9,6 x 106 9,8 x 106 9,7 x 106 1,0 x 107 9,8 x 106 8,6 x 106 8,4 x 106 8,3 x 106 8,4 x 106 10 8,1 x 106 7,8 x 106 7,9 x 106 7,9 x 106 12 7,9 x 106 7,8 x 106 7,6 x 106 7,8 x 106 Bảng 83 Bảng ANOVA ổn định lâu dài E coli dung dịch bảo quản A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 40438.410 13479.470 4635.9134 0.0000 Factor B 29235.409 4872.568 1675.7932 0.0000 AB 18 20392.484 1132.916 389.6369 0.0000 -7 Error 56 162.827 2.908 Total 83 90229.130 - Bảng 84 Bảng trắc nghiệm phân hạng ổn định lâu dài E coli dung dịch bảo quản Error Mean Square = 2.908 Error Degrees of Freedom = 56 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 3.713 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 96.33 64.67 52.00 43.33 42.00 25.33 18.67 96.33 23.33 87.33 3.767 2.933 4.233 3.100 96.33 85.00 53.67 68.00 59.33 64.33 59.33 A D F G G H I A H B J J J J A B F D E D E Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Ranked Order 23 25 24 15 22 10 16 26 27 28 18 20 21 19 17 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 98.67 98.00 96.33 96.33 96.33 96.33 96.33 87.33 85.00 84.33 79.33 77.67 68.00 64.67 64.33 59.33 59.33 53.67 52.00 43.33 42.00 A A A A A A A B B B C C D D D E E F F G G Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 22 23 24 25 26 27 28 = = = = = = = 96.33 98.67 96.33 98.00 84.33 79.33 77.67 A A A A B Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean C C 13 11 14 12 = = = = = = = 25.33 23.33 18.67 4.233 3.767 3.100 2.933 H H I J J J J 2.2 Vi khuẩn Salmonella Bảng 85 Khảo sát ổn định lâu dài vi khuẩn Salmonella dung dịch bảo quản Dung dịch bảo quản Glycerol 15% Đệm phosphate Skim milk 10% Thời gian bảo quản ( tuần) Lần lặp lại Trung bình 7,2 x 107 6,8 x 107 7,1 x 107 7,0 x 107 2,2 x 107 2,1 x 107 2,0 x 107 2,1 x 107 1,7 x 107 1,7 x 107 1,9 x 107 1,8 x 107 1,3 x 107 1,2 x 107 1,4 x 107 1,3 x 107 1,5 x 107 1,7 x 107 1,5 x 107 1,6 x 107 10 1,3 x 107 1,3 x 107 1,5 x 107 1,4 x 107 12 1,0 x 107 1,2 x 107 1,1 x 107 1,1 x 107 7,2 x 107 6,8 x 107 7,1 x 107 7,0 x 107 5,1 x 107 5,0 x 107 4,7 x 107 4,9 x 107 5,9 x 106 5,5 x 106 5,8 x 106 5,7 x 106 9,6 x 105 9,3 x 105 9,2 x 105 9,4 x 105 6,3 x 105 6,2 x 105 6,4 x 105 6,3 x 105 10 5,2 x 104 5,5 x 104 5,4 x 104 5,4 x 104 12 3,7 x 104 3,9 x 104 4,1 x 104 3,9 x 104 7,2 x 107 6,8 x 107 7,1 x 107 7,0 x 107 9,7 x 107` 9,9 x 107` 9,7 x 107` 9,8 x 107` 1,0 x 107 9,1 x 107 8,9 x 107 9,3 x 107 Skim milk 10% + Glycerol 9,0 x 107 8,9 x 107 8,8 x 107 8,9 x 107 8,5 x 107 8,3 x 107 8,2 x 107 8,4 x 107 10 7,1 x 107 6,9 x 107 6,8 x 107 6,9 x 107 12 8,0 x 107 8,1 x 107 8,3 x 107 8,1 x 107 7,2 x 107 6,8 x 107 7,1 x 107 7,0 x 107 6,0 x 107 5,9 x 107 5,7 x 107 5,9 x 107 3,6 x 107 3,6 x 107 3,8 x 107 3,7 x 107 3,3 x 107 2,8 x 107 2,9 x 107 3,0 x 107 3,4 x 107 3,3 x 107 3,6 x 107 3,4 x 107 10 3,0 x 107 2,9 x 107 2,9 x 107 2,9 x 107 12 2,0 x 107 1,9 x 107 1,8 x 107 1,9 x 107 Bảng 86 Bảng ANOVA ổn định lâu dài Salmonella dung dịch bảo quản A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 6137887.527 2045962.509 3014.4066 0.0000 Factor B 1979623.663 329937.277 486.1111 0.0000 AB 18 1598482.084 88804.560 130.8397 0.0000 -7 Error 56 38008.775 678.728 Total 83 9754002.049 - Bảng 87 Bảng trắc nghiệm phân hạng ổn định lâu dài Salmonella dung dịch bảo quản Error Mean Square = 678.7 Error Degrees of Freedom = 56 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 56.72 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 2.3 = = = = = = = Ranked Order 703.3 575.0 441.8 303.2 334.9 281.0 278.4 A B C D D D D Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = 703.3 575.0 441.8 334.9 303.2 281.0 278.4 A B C D D D D Vi khuẩn S aureus Bảng 88 Khảo sát ổn định lâu dài vi khuẩn S aureus dung dịch bảo quản Dung dịch bảo quản Glycerol 15% Đệm phosphate Skim milk Thời gian bảo quản ( tuần) Lần lặp lại Trung bình 4,3 x 107 4,1 x 107 4,4 x 107 4,3 x 107 1,2 x 107 1,1 x 107 1,3 x 107 1,2 x 107 6,3 x 106 6,2 x 106 6,4 x 106 6,3 x 106 5,0 x 106 5,2 x 106 5,6 x 106 5,3 x 106 3,9 x 106 4,2 x 106 4,3 x 106 4,1 x 106 10 3,2 x 106 3,3 x 106 2,9 x 106 3,1 x 106 12 2,6 x 106 2,4 x 106 2,6 x 106 2,8 x 106 4,3 x 107 4,1 x 107 4,4 x 107 4,3 x 107 9,8 x 106 9,7 x 106 9,9 x 106 9,8 x 106 8,5 x 106 8,3 x 106 8,2 x 106 8,3 x 106 2,1 x 106 2,4 x 106 2,5 x 106 2,3 x 106 1,2 x 106 1,0x 106 1,3 x 106 1,2 x 106 10 9,9 x 105 1,1 x 106 9,8 x 105 1,0 x 106 12 8,1 x 105 7,9 x 105 7,8 x 105 7,9 x 105 4,3 x 107 4,1 x 107 4,4 x 107 4,3 x 107 10% Skim milk 10% + Glycerol 8,5 x 107 8,6 x 107 8,8 x 107 8,6 x 107 9,2 x 107 9,5 x 107 9,4 x 107 9,4 x 107 9,5 x 107 9,6 x 107 9,4 x 107 9,5 x 107 7,9 x 107 8,3 x 107 8,1 x 107 8,1 x 107 10 7,3 x 107 6,8 x 107 7,1 x 107 7,1 x 107 12 8,1 x 107 7,6 x 107 7,8 x 107 7,8 x 107 4,3 x 107 4,1 x 107 4,4 x 107 4,3 x 107 9,5 x 107 9,4 x 107 9,5 x 107 9,5 x 107 9,0 x 107 8,9 x 107 8,8 x 107 8,9 x 107 8,5 x 107 8,3 x 107 8,2 x 107 8,3 x 107 8,9 x 107 8,6 x 107 8,7 x 107 8,7 x 107 10 7,2 x 107 7,6 x 107 7,5 x 107 7,4 x 107 12 6,3 x 105 6,2 x 105 6,6 x 105 6,4 x 107 Bảng 89 Bảng ANOVA ổn định lâu dài S aureus dung dịch bảo quản A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 8405409.515 2801803.172 15289.9794 0.0000 Factor B 738691.073 123115.179 671.8632 0.0000 AB 18 2713113.123 150728.507 822.5545 0.0000 -7 Error 56 10261.687 183.244 Total 83 11867475.398 - Bảng 90 Bảng trắc nghiệm phân hạng ổn định lâu dài S aureus dung dịch bảo quản Error Mean Square = 183.2 Error Degrees of Freedom = 56 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 29.47 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 2.4 = = = = = = = 426.7 507.8 493.3 464.8 434.1 372.9 209.9 Ranked Order C A AB B C D E Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = 507.8 493.3 464.8 434.1 426.7 372.9 209.9 A AB B C C D E Vi khuẩn P aeruginosa Bảng 91 Khảo sát ổn định lâu dài vi khuẩn P aeruginosa dung dịch bảo quản Dung dịch bảo quản Glycerol 15% Đệm phosphate Skim milk 10% Thời gian bảo quản ( tuần) Lần lặp lại Trung bình 1,4 x 108 1,2 x 108 1,2 x 108 1,3 x 108 1,4 x 108 1,1 x 108 1,2 x 108 1,2 x 108 6,3 x 105 6,2 x 105 6,4 x 105 6,3 x 107 2,2 x 107 2,3 x 107 2,6 x 107 2,4 x 107 1,4 x 107 1,2 x 107 1,5 x 107 1,4 x 107 10 8,7 x 106 8,6 x 106 8,9 x 106 8,7 x 106 12 5,3 x 106 5,3 x 106 5,4 x 106 5,3 x 106 1,4 x 108 1,2 x 108 1,2 x 108 1,3 x 108 2,2 x 107 2,1 x 107 2,5 x 107 2,3 x 107 8,9 x 106 9,0 x 106 8,9 x 106 8,9 x 106 2,6 x 106 2,4 x 106 2,7 x 106 2,6 x 106 2,7 x 106 3,2 x 106 2,8 x 106 2,9 x 106 10 1,6 x 106 1,4x 106 1,5 x 106 1,5 x 106 12 9,9x 106 9,6 x 106 9,8 x 106 9,8 x 105 1,4 x 108 1,2 x 108 1,2 x 108 1,3 x 108 1,0 x 108 1,2 x 108 1,3 x 108 1,2 x 108 Skim milk 10% + Glycerol 9,8 x 107` 9,9 x 107` 9,9 x 107` 9,9 x 107 1,4 x 108 1,3 x 108 1,2 x 108 1,3 x 108 1,0 x 108 1,2 x 108 1,1 x 108 1,1 x 108 10 9,5 x 107` 9,9 x 107` 9,9 x 107` 9,8 x 107 12 7,2 x 107 7,6 x 107 7,5 x 107 7,4 x 107 1,4 x 108 1,2 x 108 1,2 x 108 1,3 x108 1,5 x108 1,4 x108 1,8 x108 1,6 x108 1,4 x108 1,6 x108 1,4 x108 1,4 x108 1,3 x108 1,0 x108 1,2 x108 1,2 x108 5,2 x 104 5,5 x 104 5,3 x 104 5,3 x107 10 4,3 x 107 4,1 x 107 4,4 x 107 4,3 x 107 12 3,4 x 107 3,3 x 107 3,6 x 107 3,4 x 107 Bảng 92 Bảng ANOVA ổn định lâu dài P aeruginosa dung dịch bảo quản A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 21449018.129 7149672.710 886.1399 0.0000 Factor B 43312743.473 7218790.579 894.7065 0.0000 AB 18 148105033.413 8228057.412 1019.7964 0.0000 -7 Error 56 451826.687 8068.334 Total 83 213318621.703 - Bảng 93 Bảng trắc nghiệm phân hạng ổn định lâu dài P aeruginosa dung dịch bảo quản Error Mean Square = 8068 Error Degrees of Freedom = 56 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 195.6 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 2.5 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 1267 1233 6.300 236.7 136.7 8733 53.33 1267 226.7 89.33 25.67 29.00 15.00 97.67 1267 1167 986.7 1300 1100 976.7 743.3 Ranked Order BC BC Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean G F FG A FG BC F FG G G G FG BC BCD D B CD D E 18 15 16 19 17 20 21 14 10 12 11 13 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 8733 1300 1267 1267 1267 1233 1167 1100 986.7 976.7 743.3 236.7 226.7 136.7 97.67 89.33 53.33 29.00 25.67 15.00 6.300 A B BC BC BC BC BCD CD D D E F F FG FG FG FG G G G G Vi khuẩn B cereus Bảng 94 Khảo sát ổn định lâu dài vi khuẩn B cereus dung dịch bảo quản Dung dịch bảo quản Glycerol 15% Đệm Thời gian bảo quản ( tuần) Lần lặp lại Trung bình 1,3 x 107 1,2 x 107 1,3 x 107 1,3 x 107 6,8 x 106 7,4 x 106 7,3 x 106 7,2 x 106 4,9 x 106 5,1 x 106 5,4 x 106 5,1 x 106 2,2 x 106 2,4 x 106 2,4 x 106 2,3 x 106 1,9 x 106 2,1 x 106 1,8 x 106 1,9 x 106 10 1,7 x 106 1,6 x 106 1,4 x 106 1,6 x 106 12 1,7 x 106 1,3 x 106 1,6 x 106 1,5 x 106 1,3 x 107 1,2 x 107 1,3 x 107 1,3 x 107 phosphate Skim milk 10% Skim milk 10% + Glycerol 6,3 x 106 6,2 x 106 6,5 x 106 6,3 x 106 8,7 x 105 9,3 x 105 9,2 x 105 9,1 x 105 2,3 x 105 2,4 x 105 2,1 x 105 2,3 x 105 9,1 x 105 9,3 x 105 9,4 x 105 9,3 x 105 10 5,5 x 105 5,6 x 105 5,1 x 105 5,4 x 105 12 3,0 x 105 2,9 x 105 2,8 x 105 2,9 x 105 1,3 x 107 1,2 x 107 1,3 x 107 1,3 x 107 8,1 x 106 7,8 x 106 7,9 x 106 7,9 x 106 8,7 x 106 9,1 x 106 8,9 x 106 8,9 x 106 9,8 x 106 9,7 x 106 9,9 x 106 9,8 x 106 7,0 x 106 6,9 x 106 6,6 x 106 6,8 x 106 10 6,9 x 106 6,7 x 106 7,2 x 106 6,9 x 106 12 7,0 x 106 7,4 x 106 7,2 x 106 7,2 x 106 1,3 x 107 1,2 x 107 1,3 x 107 1,3 x 107 1,6 x 107 1,7 x 107 1,5 x 107 1,6 x 107 1,3 x 107 1,6 x 107 1,5 x 107 1,5 x 107 1,3 x 107 1,2 x 107 1,4 x 107 1,3 x 107 1,4 x 107 1,6 x 107 1,4 x 107 1,5 x 107 10 1,8 x 107 1,5 x 107 1,6 x 107 1,6 x 107 12 1,1 x 107 1,4 x 107 1,3 x 107 1,3 x 107 Bảng 95 Bảng ANOVA ổn định lâu dài B cereus dung dịch bảo quản A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 156651.327 52217.109 1200.1667 0.0000 Factor B 46758.120 7793.020 179.1161 0.0000 AB 18 36549.902 2030.550 46.6705 0.0000 -7 Error 56 2436.460 43.508 Total 83 242395.809 - Bảng 96 Bảng trắc nghiệm phân hạng ổn định lâu dài B cereus dung dịch bảo quản Error Mean Square = 43.51 Error Degrees of Freedom = 56 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 14.36 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 2.6 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 126.7 71.67 51.33 23.33 19.33 15.67 15.33 126.7 63.33 9.067 2.267 9.267 5.400 2.900 126.7 79.33 89.00 98.00 68.33 69.33 72.00 Ranked Order A DE F G GH GHI GHI A EF GHI I GHI HI I A CD BC B DE DE DE Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 15 18 17 16 21 20 19 12 10 13 14 11 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 126.7 126.7 126.7 98.00 89.00 79.33 72.00 71.67 69.33 68.33 63.33 51.33 23.33 19.33 15.67 15.33 9.267 9.067 5.400 2.900 2.267 A A A B BC CD DE DE DE DE EF F G GH GHI GHI GHI GHI HI I I Vi khuẩn C perfringens Bảng 97 Khảo sát ổn định lâu dài vi khuẩn C perfringens dung dịch bảo quản Dung dịch bảo quản Glycerol Thời gian bảo quản ( tuần) Lần lặp lại Trung bình 2,7 x 106 2,8 x 106 3,0 x 106 2,8 x 106 15% Đệm 2,0 x 105 1,9 x 105 1,7 x 105 1,9 x 105 1,6 x 104 1,7 x 104 1,7 x 104 1,7 x 104 1,9 x 103 2,2 x 103 2,3 x 103 2,1 x 103 3,3 x 102 3,0 x 102 3,1 x 102 3,1 x 102 10 1,0 x 101 1,3 x 101 1,2 x 101 1,2 x 101 12 0 0 2,7 x 106 2,8 x 106 3,0 x 106 2,8 x 106 5,8 x 104 5,3 x 104 5,2 x 104 5,4 x 104 5,8 x 103 5,6 x 103 5,9 x 103 5,8 x 103 1,4 x 103 1,2 x 103 1,0 x 103 1,2 x 103 9,9 x 101 9,8 x 101 9,8 x 101 9,8 x 101 10 0 0 12 0 0 2,7 x 106 2,8 x 106 3,0 x 106 2,8 x 106 3,8 x 105 3,4 x 105 3,3 x 105 3,5 x 105 3,3 x 104 3,6 x 104 3,4 x 104 3,4 x 104 4,2 x 103 4,0 x 103 4,4 x 103 4,2 x 103 1,3 x 103 1,2 x 103 1,1 x 103 1,2 x 103 10 1,1 x 102 1,2 x 102 1,4 x 102 1,2 x 102 12 4,0 x 101 3,9 x 101 3,6 x 101 3,8 x 101 phosphate Skim milk 10% Bảng 98 Bảng ANOVA ổn định lâu dài C perfringens dung dịch bảo quản A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 23236.264 11618.132 3.4389 0.0414 Factor B 60623677.165 10103946.194 2990.7451 0.0000 AB 12 109635.598 9136.300 2.7043 0.0085 -7 Error 42 141892.981 3378.404 Total 62 60898442.009 - Bảng 99 Bảng trắc nghiệm phân hạng ổn định lâu dài C perfringens dung dịch bảo quản Error Mean Square = 3378 Error Degrees of Freedom = 42 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 128.0 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 2.7 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 2833 186.7 16.67 2.133 0.3133 0.01167 0.0000 2833 54.33 5.767 1.200 0.09800 0.0000 0.0000 2833 350.0 34.33 4.200 1.200 0.1233 0.03833 Ranked Order A C D D D D D A D D D D D D A B D D D D D Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 15 16 17 10 18 19 11 20 12 21 13 14 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 2833 2833 2833 350.0 186.7 54.33 34.33 16.67 5.767 4.200 2.133 1.200 1.200 0.3133 0.1233 0.09800 0.03833 0.01167 0.0000 0.0000 0.0000 A A A B C D D D D D D D D D D D D D D D D Vi khuẩn C perfringens Bảng 100 Khảo sát ổn định lâu dài vi khuẩn C perfringens môi trƣờng nƣớc mắm Dung dịch bảo quản Nƣớc mắm Nƣớc mắm Nhiệt độ bảo quản (0C) Lần lặp lại Trung bình Thời gian ủ ( tuần) 2,1 x 101 2,5 x 101 2,3 x 101 2,3 x 101 2,0 x 101 2,2 x 101 2,3 x 101 2,2 x 101 1,8 x 101 2,1 x 101 2,0 x 101 2,0 x 101 1,9 x 101 1,8 x 101 2,2 x 101 2,0 x 101 1,9 x 101 2,0 x 101 1,7 x 101 1,9 x 101 10 1,8 x 101 1,9 x 101 1,9 x 101 1,9 x 101 12 1,6 x 101 1,8 x 101 1,9 x 101 1,8 x 101 2,3 x 101 2,5 x 101 2,1 x 101 2,3 x 101 2,1 x 101 2,4 x 101 2,0 x 101 2,2 x 101 1,9 x 101 1,7 x 101 1,7 x 101 1,8 x 101 1,3 x 101 1,5 x 101 1,6 x 101 1,5 x 101 1,2 x 101 1,3 x 101 1,6 x 101 1,4 x 101 10 1,3 x 101 1,0 x 101 1,2 x 101 1,2 x 101 12 0,8 x 101 1,1 x 101 1,0 x 101 1,0 x 101 -20 -70 Bảng 101 Bảng ANOVA ổn định lâu dài C perfringens môi trƣờng nƣớc mắm A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E K Degrees of Sum of Mean F Value Source Freedom Squares Square Value Prob Factor A 156.214 156.214 56.0769 0.0000 Factor B 418.286 69.714 25.0256 0.0000 AB 94.286 15.714 5.6410 0.0006 -7 Error 28 78.000 2.786 Total 41 746.786 Coefficient of Variation: 9.31% Bảng 102 Bảng trắc nghiệm phân hạng ổn định lâu dài C perfringens môi trƣờng nƣớc mắm Error Mean Square = 2.786 Error Degrees of Freedom = 28 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 3.766 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 14 = = = = = = = = = = = = = = 23.00 21.67 19.67 19.67 18.67 18.67 17.67 23.00 21.67 17.67 14.67 13.67 11.67 9.667 Ranked Order A AB ABC ABC BC BC CD A AB CD DE E EF F Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 14 = = = = = = = = = = = = = = 23.00 23.00 21.67 21.67 19.67 19.67 18.67 18.67 17.67 17.67 14.67 13.67 11.67 9.667 A A AB AB ABC ABC BC BC CD CD DE E EF F ... LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU SỰ ỔN ĐỊNH CỦA CÁC VI KHUẨN E coli, Salmonella, S aureus, P aeruginosa, C perfringens, B cereus TRONG ĐIỀU KIỆN BẢO QUẢN ĐÔNG SÂU Hƣớng dẫn khoa học Sinh vi? ?n thực ThS... hình nghiên cứu vi? ??c bảo quản đơng sâu chủng vi khuẩn 2.8.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc Tanguay (1958) nghiên cứu bảo quản vi khuẩn khảo sát cách đông lạnh trực tiếp Tanguay tiến hành bảo quản. .. trình bảo quản đơng sâu vi khuẩn E coli, Salmonella, S aureus, P aeruginosa, C perfringens , B cereus Quá trình bảo quản vi khuẩn điều kiện đông sâu phụ thuộc vào nhiều yếu tố nhƣ nhiệt độ đông sâu,