NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG Bacillus subtilis TRONG BẢO QUẢN THANH LONG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG Bacillus subtilis TRONG BẢO QUẢN THANH LONG Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : HOÀNG MỘNG THÚY NHI Niên khóa: 2008 – 2012 Tháng 7/ 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG Bacillus subtilis TRONG BẢO QUẢN THANH LONG Hƣớng dẫn khoa học Sinh viên thực ThS NGUYỄN NHƢ NHỨT HOÀNG MỘNG THÚY NHI Tháng 7/ 2012 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến: Ban Giám hiệu trƣờng đại học Nơng Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Môn Công nghệ sinh học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho em suốt trình học tập trƣờng Xin cảm ơn quý Công ty TNHH Gia Tƣờng tạo điều kiện tốt cho em thực khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến ThS Nguyễn Nhƣ Nhứt, ngƣời tận tình bảo, hƣớng dẫn, góp ý khơng ngừng quan tâm, động viên em suốt trình thực luận văn tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến tất anh chị làm việc Chi nhánh Công ty TNHH Gia Tƣờng tỉnh Bình Dƣơng nhiệt tình giúp đỡ bảo em suốt thời gian thực khóa luận Các bạn lớp CNSH 34 bên em, giúp đỡ, động viên, chia sẻ em thời gian thực tập nhƣ suốt năm học vừa qua Đồng cảm ơn bạn sinh viên thực khóa luận tốt nghiệp Chi nhánh Cơng ty TNHH Gia Tƣờng tỉnh Bình Dƣơng nhiệt tình giúp đỡ động viên, chia sẻ em suốt thời gian thực tập Cha mẹ, bậc sinh thành sinh nuôi dƣỡng em, anh chị em gia đình ln quan tâm, ủng hộ em học tập hồn thành khố luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn Sinh viên thực HỒNG MỘNG THÚY NHI i TĨM TẮT Thanh long loại trái có giá trị kinh tế cao Hiện nay, q trình trồng, sản xuất long gặp nhiều vấn đề, có thất hƣ hỏng trình bảo quản nhiều loại nấm bệnh Vì vậy, đề tài đƣợc thực với mục tiêu nghiên cứu ứng dụng Bacillus subtilis để kiểm soát số nấm bệnh gây hƣ hỏng long trình bảo quản Từ long bị hƣ hỏng sau bảo quản, phân lập nấm bệnh môi trƣờng Potato Glucose Agar (PGA) kiểm tra khả gây hƣ hỏng cách gây nhiễm nhân tạo Sau sử dụng chủng Bacillus subtilis (Ba01, Ba02, Ba06, Ba23 Ba36) đối kháng với chủng nấm bệnh đĩa thạch môi trƣờng PGA để chọn chủng Bacillus subtilis thích hợp nuôi cấy tăng sinh chủng môi trƣờng nƣớc chiết giá đậu đƣờng peptone với thay đổi thành phần môi trƣờng tốc độ lắc Kết phân lập cho thấy có chủng nấm bệnh khác (NB 3.6, NB 4.2, NB 4.7, NB 5.3, NB 5.5 NB 5.6) có khả gây hƣ hỏng trái long Các chủng nấm bệnh (NB 5.3, NB 5.5 NB 5.6) đƣợc kiểm soát tốt chủng B subtilis Ba02 Điều kiện thích hợp để tăng sinh chủng B subtilis Ba02 nuôi cấy lắc 48 175 vòng/phút mơi trƣờng nƣớc chiết giá đậu đƣờng peptone có bổ sung NH4H2PO4 0,1% Canh trƣờng thu nhận đƣợc có mật độ 65,3 x 107 CFU/ml có khả ức chế phát triển nấm bệnh kể trình bảo quản trái long Qua làm giảm mức độ hƣ hỏng, thất long q trình bảo quản ii SUMMARY Pitahaya is a fruit with high economic value Nowadays, the process of planting and producing pitahaya is having many problems, including loss or damaged by fungal diseases during storage So this research was carried in order to find out the application of Bacillus subtilis to control some fungal diseases on pitahaya during storage From pitahaya was damaged after the storage, the fungus was isolated on Potato Glucose Agar medium (PGA) and tested capable of causing damage by artificial infection Then, we used Bacillus subtilis strains (Ba01, Ba02, Ba06, Ba23, and Ba36) was used compete the fungus strains on PGA agar medium to select a appropriate Bacillus subtilis strain and proliferate this strain on peptone sugar bean extract water medium with and varied shaking speed The results of isolation showed that different fungal strains (NB 3.6, NB 4.2, NB 4.7, NB 5.3, NB 5.5 and NB 5.6) might cause the damage of pitahaya The fungal strains (NB 5.3, NB 5.5 and NB 5.6) were well controlled by B subtilis strain Ba02 Suitable conditions to proliferate B subtilis strain Ba02 were cultured peptone sugar bean extract water medium supplemented with 0.1% NH4H2PO4 in 48 hours and agitated at 175 rpm Bacterial broth obtained having density of 65,3 x 107 CFU/ml could inhibit the development of the above pathogens during storage of pitahaya This has reduced the extent of damage, loss of pitahaya during the storage iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CFU: conlony- forming unit KT: khoai tây MT: môi trƣờng NB: nấm bệnh PGA: Potato Glucose Agar TSA: Trypticase Soya Agar TSB: Tryticase Soya Broth ALG: tốc độ tăng trƣởng sợi nấm MT1: môi trƣờng PGA MT3: môi trƣờng nƣớc chiết giá đậu đƣờng peptone iv MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii SUMMARY iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv MỤC LỤC v DANH SÁCH CÁC BẢNG ix DANH SÁCH CÁC HÌNH x Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Nội dung thực Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sơ lƣợc long 2.1.1 Nguồn gốc phân bố long 2.1.2 Các giống long có Việt Nam 2.1.3 Đặc tính sinh thái long 2.1.4 Lợi ích long 2.1.5 Một số bệnh hại long 2.1.6 Bảo quản long 2.1.6.1 Các tƣợng vật lý xảy bảo quản 2.1.6.2 Các tƣợng sinh lý, sinh hóa xảy q trình bảo quản 2.1.6.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình bảo quản long 2.2 Sơ lƣợc nấm bệnh hại long 2.2.1 Nguồn gốc phát sinh nấm bệnh 2.2.2 Sự lan truyền xâm nhiễm nấm gây bệnh 2.2.2.1 Sự lan truyền nấm gây bệnh 2.2.2.2 Quá trình xâm nhiễm nấm gây bệnh 2.2.3 Chu trình gây bệnh nấm 10 2.2.4 Một số loại nấm gây hƣ hỏng trình bảo quản long 10 v 2.2.4.1 Fusarium sp 10 2.2.4.2 Colletotrichum gloeosporioides 11 2.2.4.3 Nấm Phomopsis sp 12 2.2.4.4 Nấm Alternaria sp 12 2.3 Sơ lƣợc vi khuẩn Bacillus subtilis 13 2.3.1 Lịch sử phát Bacillus subtilis 13 2.3.2 Đặc điểm phân loại vi khuẩn Bacillus subtilis 13 2.3.2.1 Vị trí phân loại Bacillus subtilis 13 2.3.2.2 Đặc điểm phân bố Bacillus subtilis 13 2.3.3 Đặc điểm hình thái Bacillus subtilis 14 2.3.4 Đặc điểm nuôi cấy Bacillus subtilis 14 2.3.5 Khả kiểm soát sinh học Bacillus subtilis 15 2.3.6 Một vài ứng dụng Bacillus subtilis 15 2.3.6.1 Ứng dụng B subtilis công nghệ sản xuất enzyme kháng sinh 15 2.3.6.2 Ứng dụng Bacillus subtilis thực phẩm 16 2.3.6.3 Ứng dụng Bacillus subtilis y học 16 2.3.7 Ứng dụng Bacillus subtilis bảo quản nông sản sau thu hoạch 16 2.4 Các biện pháp bảo quản long 18 2.4.1 Biện pháp vật lý 18 2.4.2 Biện pháp sinh học 18 2.4.3 Biện pháp hóa học 19 Chƣơng VẬT LIỆU PHƢƠNG PHÁP 20 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 20 3.2 Vật liệu nghiên cứu 20 3.2.1 Chủng giống nghiên cứu 20 3.2.2 Vật liệu sử dụng 20 3.2.3 Thiết bị dụng cụ 20 3.3 Phƣơng pháp 20 3.3.1 Phƣơng pháp phân lập nấm bệnh 20 3.3.1.1 Môi trƣờng phân lập 20 3.3.1.2 Mẫu phân lập 21 3.3.1.3 Cách tiến hành 21 vi 3.3.2 Phƣơng pháp kiểm tra khả gây hƣ hỏng nấm bệnh 21 3.3.2.1 Nguyên tắc 21 3.3.2.2 Cách tiến hành 21 3.3.3 Phƣơng pháp xác định tốc độ tăng trƣởng sợi nấm 22 3.3.4 Phƣơng pháp cấy trung gian Bacillus lên đĩa thạch 22 3.3.5 Phƣơng pháp cấy trung gian nấm bệnh lên đĩa thạch 22 3.3.6 Phƣơng pháp xác định hiệu đối kháng Bacillus nấm bệnh 22 3.3.6.1 Nguyên tắc 22 3.3.6.2 Cách tiến hành 23 3.3.7 Phƣơng pháp xác định mật độ tế bào vi khuẩn phƣơng pháp đếm khuẩn lạc 23 3.3.7.1 Nguyên tắc 23 3.3.7.2 Cách tiến hành 23 3.3.7.3 Cách tính 24 3.3.8 Phƣơng pháp ly tâm thu nhận sinh khối Bacillus subtilis 24 3.3.8.1 Cách thực 24 3.3.8.2 Cách tính 24 3.3.9 Phƣơng pháp nuôi cấy lỏng để thu nhận sinh khối Bacillus subtilis 24 3.3.10 Khảo sát điều kiện ảnh hƣởng đến nuôi cấy tăng sinh B subtilis 25 3.3.10.1 Khảo sát ảnh hƣởng tốc độ lắc 25 3.3.10.2 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ glucose 25 3.3.10.3 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ peptone 25 3.3.10.4 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn nitrogen vô bổ sung 26 3.3.11 Thử nghiệm khả kiểm soát nấm bệnh long canh trƣờng Bacillus subtilis 26 3.3.11.1 Chuẩn bị mẫu thí nghiệm 26 3.3.11.2 Tiến hành thí nghiệm 26 3.3.12 Thử nghiệm bảo quản canh trƣờng chứa sinh khối vi khuẩn B subtilis 28 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 28 3.4.1 Phân lập nấm gây hƣ hỏng từ trái long bị nhiễm bệnh qua trình bảo quản 28 3.4.2 Kiểm tra khả gây bệnh nấm phân lập đƣợc 28 vii 3.4.3 Khảo sát tốc độ tăng trƣởng nấm phân lập đƣợc 28 3.4.4 Khảo sát khả ức chế nấm bệnh chủng Bacillus subtilis 28 3.4.5 Khảo sát ảnh hƣởng số điều kiện nuôi cấy đến phát triển chủng Bacillus subtillis chọn lọc 28 3.4.5.1 Khảo sát ảnh hƣởng tốc độ lắc 28 3.4.5.2 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ glucose 29 3.4.5.3 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ peptone 29 3.4.5.4 Khảo sát ảnh hƣởng nguồn nitrogen vô bổ sung 29 3.4.6 Đánh giá hiệu kiểm soát nấm bệnh canh trƣờng chứa sinh khối Bacillus chọn lọc trái long 29 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Phƣơng pháp phân lập nấm bệnh 30 4.2 Tốc độ tăng trƣởng chủng nấm gây bệnh 30 4.3 Khảo sát khả ức chế nấm bệnh chủng Bacillus subtilis 34 4.4 Ảnh hƣởng số điều kiện nuôi cấy lên tăng sinh chủng Bacillus subtilis Ba02 35 4.4.1 Ảnh hƣởng tốc độ lắc 35 4.4.2 Ảnh hƣởng nồng độ glucose 36 4.4.3 Ảnh hƣởng nồng độ peptone 36 4.4.4 Ảnh hƣởng nguồn nitrogen vô bổ sung 37 4.5 Thử nghiệm bảo quản long 38 4.6 Thử nghiệm bảo quản canh trƣờng chứa sinh khối B subtilis Ba02 41 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 42 5.1 Kết luận 42 5.2 Đề nghị 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 viii 2.1.4 Hiệu ức chế chủng B subtilis với nấm bệnh 5.3 Bảng 2.1.4 Hiệu ức chế chủng B subtilis với nấm bệnh 5.3 Lần lặp lại (đĩa) Chủng B subtilis đối kháng với nấm bệnh đc NB 5.3-Ba01 NB 5.3-Ba02 NB 5.3-Ba06 NB 5.3-Ba23 NB 5.3-Ba36 8,8 8,7 8,9 5,0 4,5 4,9 4,6 4,7 4,7 5,1 4,6 4,6 6,2 6,1 6,0 5,0 4,8 4,3 đc: đối chứng 2.1.5 Hiệu ức chế chủng B subtilis với nấm bệnh 5.5 Bảng 2.1.5 Hiệu ức chế chủng B subtilis với nấm bệnh 5.5 đc NB 5.5-Ba01 NB 5.5-Ba02 NB 5.5-Ba06 NB 5.5-Ba23 NB 5.5-Ba36 đc: đối chứng 8,8 5,3 5,0 5,2 6,5 5,6 Lần lặp lại (đĩa) 8,9 5,5 4,9 5,8 6,6 5,6 9,0 5,0 4,7 5,7 6,4 5,4 2.1.6 Hiệu ức chế chủng B subtilis với nấm bệnh 5.6 Bảng 2.1.6 Hiệu ức chế chủng B subtilis với nấm bệnh 5.6 Lần lặp lại (đĩa) đc NB 5.6-Ba01 NB 5.6-Ba02 NB 5.6-Ba06 NB 5.6-Ba23 NB 5.6-Ba36 đc: đối chứng 8.6 9,0 8,8 6,0 4,8 5,7 6,0 5,4 5,7 5,0 5,8 6,1 5,8 6,2 5,1 5,7 6,0 5,8 2.2 Đƣờng kính khuẩn lạc nấm bệnh đĩa đối kháng chủng Bacillus với nấm bệnh Bảng 2.2 Đƣờng kính khuẩn lạc nấm bệnh đĩa đối kháng chủng Bacillus subtilis với nấm bệnh Đƣờng kính khuẩn lạc nấm bệnh đĩa đối kháng chủng Bacillus subtillis với nấm bệnh (cm) Chủng Bacillus subtilis Ba01 Ba02 Ba06 Ba23 Ba36 Đc đc: đối chứng NB 3.6 6,170 5,630 6,000 6,100 5,830 8,870 NB 4.2 6,270 5,530 6,470 6,470 6,030 8,930 Chủng nấm bệnh NB 4.7 NB 5.3 4,570 5,000 3,430 4,500 4,400 4,830 4,770 6,100 4,100 4,800 5,830 8,800 NB 5.5 5,270 4,870 5,570 6,500 5,530 8,930 NB 5.6 5,970 4,970 5,770 6,030 5,670 8,770 2.3 Bảng anova phân tích hiệu đối kháng B subtilis với chủng nấm bệnh 2.3.1 Bảng anova phân tích hiệu đối kháng chủng B subtilis với chủng nấm bệnh 3.6 Variable (lll) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 21.873 4.375 112.491 0.0000 Within 12 0.467 0.039 Total 17 22.340 Coefficient of Variation = 3.07% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 26.600 8.867 0.06 0.11 3.00 18.500 6.167 0.15 0.11 3.00 16.900 5.633 0.15 0.11 3.00 18.000 6.000 0.36 0.11 3.00 18.300 6.100 0.17 0.11 3.00 17.500 5.833 0.15 0.11 -Total 18.00 115.800 6.433 1.15 0.27 Within 0.20 Bartlett's test Chi-square = 5.093 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.399 RANGE Error Mean Square = 0.03900 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.4925 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 8.870 6.170 5.630 6.000 6.100 5.830 Ranked Order A B C BC BC BC Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 8.870 6.170 6.100 6.000 5.830 5.630 A B BC BC BC C 2.3.2 Bảng anova phân tích hiệu đối kháng chủng B subtilis với chủng nấm bệnh 4.2 Variable (lll) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 21.145 4.229 68.578 0.0000 Within 12 0.740 0.062 Total 17 21.885 Coefficient of Variation = 3.75% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 26.800 8.933 0.06 0.14 3.00 18.800 6.267 0.31 0.14 3.00 16.600 5.533 0.49 0.14 3.00 19.400 6.467 0.06 0.14 3.00 19.400 6.467 0.15 0.14 3.00 18.100 6.033 0.06 0.14 -Total 18.00 119.100 6.617 1.13 0.27 Within 0.25 Bartlett's test Chi-square = 13.292 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 RANGE Error Mean Square = 0.06200 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.6210 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 8.930 6.270 5.530 6.470 6.470 6.030 Ranked Order A B C B B BC Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 8.930 6.470 6.470 6.270 6.030 5.530 A B B B BC C 2.3.3 Bảng anova phân tích hiệu đối kháng chủng B subtilis với chủng nấm bệnh 4.7 Variable (lll) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 9.478 1.896 25.090 0.0000 Within 12 0.907 0.076 Total 17 10.385 Coefficient of Variation = 6.09% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 17.500 5.833 0.42 0.16 3.00 13.700 4.567 0.40 0.16 3.00 10.300 3.433 0.15 0.16 3.00 13.200 4.400 0.20 0.16 3.00 14.300 4.767 0.21 0.16 3.00 12.300 4.100 0.10 0.16 -Total 18.00 81.300 4.517 0.78 0.18 Within 0.27 Bartlett's test Chi-square = 4.668 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.476 RANGE Error Mean Square = 0.07600 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.6876 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 5.830 4.570 3.430 4.400 4.770 4.100 A B C B B BC Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 5.830 4.770 4.570 4.400 4.100 3.430 A B B B BC C 2.3.4 Bảng anova phân tích hiệu đối kháng chủng B subtilis với chủng nấm bệnh 5.3 Variable (lll) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 39.769 7.954 511.321 0.0000 Within 12 0.187 0.016 Total 17 39.956 Coefficient of Variation = 2.20% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 26.400 8.800 0.10 0.07 3.00 15.000 5.000 0.10 0.07 3.00 13.500 4.500 0.10 0.07 3.00 14.500 4.833 0.12 0.07 3.00 18.300 6.100 0.10 0.07 3.00 14.400 4.800 0.20 0.07 -Total 18.00 102.100 5.672 1.53 0.36 Within 0.12 Bartlett's test Chi-square = 1.636 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.941 RANGE Error Mean Square = 0.01600 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.3155 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 8.800 A Mean = 8.800 A Mean = 5.000 C Mean = 6.100 B Mean = 4.500 D Mean = 5.000 C Mean = 4.830 C Mean = 4.830 C Mean = 6.100 B Mean = 4.800 CD Mean = 4.800 CD Mean = 4.500 D 2.3.5 Bảng anova phân tích hiệu đối kháng chủng B subtilis với chủng nấm bệnh 5.5 Variable (lll) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 33.024 6.605 182.904 0.0000 Within 12 0.433 0.036 Total 17 33.458 Coefficient of Variation = 3.11% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 26.800 8.933 0.06 0.11 3.00 15.800 5.267 0.25 0.11 3.00 14.600 4.867 0.15 0.11 3.00 16.700 5.567 0.32 0.11 3.00 19.500 6.500 0.10 0.11 3.00 16.600 5.533 0.12 0.11 -Total 18.00 110.000 6.111 1.40 0.33 Within 0.19 Bartlett's test Chi-square = 5.838 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.268 RANGE Error Mean Square = 0.03600 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.4732 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 8.930 A Mean = 8.930 Mean = 5.270 CD Mean = 6.500 Mean = 4.870 D Mean = 5.570 Mean = 5.570 C Mean = 5.530 Mean = 6.500 B Mean = 5.270 Mean = 5.530 C Mean = 4.870 A B C C CD D 2.3.6 Bảng anova phân tích hiệu đối kháng chủng B subtilis với chủng nấm bệnh 5.6 Variable (lll) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 25.989 5.198 183.455 0.0000 Within 12 0.340 0.028 Total 17 26.329 Coefficient of Variation = 2.72% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 26.300 8.767 0.15 0.10 3.00 17.900 5.967 0.25 0.10 3.00 14.900 4.967 0.15 0.10 3.00 17.300 5.767 0.06 0.10 3.00 18.100 6.033 0.06 0.10 3.00 17.000 5.667 0.23 0.10 -Total 18.00 111.500 6.194 1.24 0.29 Within 0.17 Bartlett's test - Chi-square = 5.411 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.342 RANGE Error Mean Square = 0.02800 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.4173 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 8.770 5.970 4.970 5.770 6.030 5.670 A B C B B B Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 8.770 6.030 5.970 5.770 5.670 4.970 A B B B B C 2.4 Hiệu đối kháng chủng B subtilis với chủng nấm bệnh Nấm bệnh b c a b c a b c a d e d B subtilis f e f e f a b d c d e f c d e f c d e f a a b b Hình phụ lục Hiệu đối kháng chủng Bacillus subtilis với chủng nấm bệnh Chủng nấm bệnh 3.6 (1); chủng nấm bệnh 4.2 (2); chủng nấm bệnh 4.7 (3);chủng nấm bệnh 5.3 (4); chủng nấm bệnh 5.5 (5); chủng nấm bệnh 5.6 (6) đĩa đối chứng chứa nấm bệnh (a); Ba01 đối kháng nấm bệnh (b); Ba02 đối kháng nấm bệnh (c); Ba06 đối kháng nấm bệnh (d); Ba23 đối kháng nấm bệnh (e); Ba36 đối kháng nấm bệnh (f) 3.1.1 Ảnh hƣởng tốc độ lắc Bảng 3.1.1 Ảnh hƣởng tốc độ lắc đến phát triển chủng Ba02 Tốc độ lắc (vòng/ phút) Lần lặp lại (erlen) 125 0,8 150 0,8 175 1,0 200 0,9 225 0,7 0,6 0,7 1,1 0,9 0,8 0,8 0,8 1,0 0,7 0,8 đc 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 3.1.2 Ảnh hƣởng nồng độ glucose Bảng 3.1.2 Ảnh hƣởng nồng độ glucose lắc đến phát triển chủng Ba02 Nồng độ glucose (%) Lần lặp lại (erlen) đc 3,5 6,5 0,4 0,6 0,5 0,2 0,7 0,6 0,7 0,2 1,0 0,8 0,9 0,2 0,5 0,6 0,7 0,2 0,6 0,5 0,6 0,2 3.1.3 Ảnh hƣởng nồng độ peptone Bảng 3.1.3 Ảnh hƣởng nồng độ peptone đến phát triển chủng Ba02 Lần lặp lại (erlen) Nồng độ peptone (%) 0,5 1,5 0,6 0,6 0,8 0,8 0,7 0,5 0,6 0,9 0,7 0,6 0,6 0,6 0,9 0,6 0,6 đc 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 3.1.4 Ảnh hƣởng nguồn nitrogen vô bổ sung Bảng 3.1.4 Ảnh hƣởng nguồn nitrogen vô bổ sung đến phát triển chủng Ba02 Lần lặp lại (erlen) đc Nguồn nitrogen vô bổ sung 0,1% (NH4)2SO4 NH4NO3 NH4Cl NH4H2P04 0,6 0,6 0,7 1,0 0,4 0,7 0,6 0,8 0,4 0,6 0,7 0,9 0,2 0,2 0,2 0,2 3.2 Bảng anova phân tích ảnh hƣởng điều kiện ni cấy đến phát triển chủng Ba02 3.2.1 Ảnh hƣởng tốc độ lắc Variable (lll) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 1.158 0.232 37.891 0.0000 Within 12 0.073 0.006 Total 17 1.231 Coefficient of Variation = 10.82% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.600 0.200 0.00 0.05 3.00 2.200 0.733 0.12 0.05 3.00 2.300 0.767 0.06 0.05 3.00 3.100 1.033 0.06 0.05 3.00 2.500 0.833 0.12 0.05 3.00 2.300 0.767 0.06 0.05 -Total 18.00 13.000 0.722 0.27 0.06 Within 0.08 Bartlett's test Chi-square = 15.030 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 RANGE Error Mean Square = 0.006000 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.1932 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 0.2000 0.7300 0.7700 1.030 0.8300 0.7700 Ranked Order C B B A B B Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 1.030 0.8300 0.7700 0.7700 0.7300 0.2000 A B B B B C 3.1.2 Ảnh hƣởng nồng độ glucose Variable (lll) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.783 0.157 25.618 0.0000 Within 12 0.073 0.006 Total 17 0.856 Coefficient of Variation = 13.66% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.600 0.200 0.00 0.05 3.00 1.500 0.500 0.10 0.05 3.00 2.000 0.667 0.06 0.05 3.00 2.700 0.900 0.10 0.05 3.00 1.800 0.600 0.10 0.05 3.00 1.700 0.567 0.06 0.05 -Total 18.00 10.300 0.572 0.22 0.05 Within 0.08 Bartlett's test Chi-square = 14.153 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 RANGE Error Mean Square = 0.006000 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.1932 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 0.2000 0.5000 0.6700 0.9000 0.6000 0.5700 Ranked Order C B B A B B Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 0.9000 0.6700 0.6000 0.5700 0.5000 0.2000 A B B B B C 3.2.3 Ảnh hƣởng nồng độ peptone Variable (lll) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.729 0.146 43.767 0.0000 Within 12 0.040 0.003 Total 17 0.769 Coefficient of Variation = 9.71% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.600 0.200 0.00 0.03 3.00 1.700 0.567 0.06 0.03 3.00 1.800 0.600 0.00 0.03 3.00 2.600 0.867 0.06 0.03 3.00 2.100 0.700 0.10 0.03 3.00 1.900 0.633 0.06 0.03 -Total 18.00 10.700 0.594 0.21 0.05 Within 0.06 Bartlett's test Chi-square = 25.325 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 RANGE Error Mean Square = 0.003000 Error Degrees of Freedom = 12 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.1366 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 0.2000 0.5700 0.6000 0.8700 0.7000 0.6300 Ranked Order C B B A B B Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 0.8700 0.7000 0.6300 0.6000 0.5700 0.2000 A B B B B C 3.2.4 Ảnh hƣởng nguồn nitrogen vô bổ sung Variable (lll) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.777 0.194 32.389 0.0000 Within 10 0.060 0.006 Total 14 0.837 Coefficient of Variation = 14.00% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.600 0.200 0.00 0.04 3.00 1.400 0.467 0.12 0.04 3.00 1.900 0.633 0.06 0.04 3.00 1.700 0.567 0.06 0.04 3.00 2.700 0.900 0.10 0.04 -Total 15.00 8.300 0.553 0.24 0.06 Within 0.08 Bartlett's test Chi-square = 14.276 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.006 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value RANGE Error Mean Square = 0.006000 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.2004 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 0.2000 0.4700 0.6300 0.5700 0.9000 C B B B A Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 0.9000 0.6300 0.5700 0.4700 0.2000 A B B B C Phụ lục Thử nghiệm bảo quản canh trƣờng chứa sinh khối chủng B subtilis Ba02 Bảng 4.1 Mật độ tế bào (CFU/ml) có canh trƣờng B subtilis Ba02 theo thời gian bảo quản Thời gian bảo quản Nhiệt độ mát Nhiệt độ thƣờng (ngày) (100C) (300C) 62,3 x 107 65, x 107 68,3 x 107 68,3 x 107 65,3 x 107 65,3 x 107 55,5 x 107 49,0 x 107 50,0 x 107 52,0 x 107 61,0 x 107 46,0 x 107 48,8 x 107 44,5 x 107 56,3 x 107 41,0 x 107 43,0 x 107 48,3 x 107 14 Phụ lục Môi trƣờng nuôi cấy - Môi trƣờng PGA (MT1) Khoai tây 200 g Glucose 20 g Agar 24 g Nƣớc 1000 ml - Môi trƣờng nƣớc chiết giá đậu - đƣờng peptone agar (MT3) Giá đậu 200 g Glucose 50 g Agar 24 g Peptone 10 g Nƣớc 1000 ml ... quản long Nhi t độ: Trái long có nhi t độ bảo quản thích hợp - 100C, theo Lê Văn Tố ctv (1999) nhi t tối ƣu 50C Thái Thị Hòa (2001) - 70C Do đó, q trình bảo quản lạnh sau xử lý, nên chọn nhi t độ... khơng khí kho bảo quản (Nguyễn Văn Thoại ctv, 1982) Sinh nhi t sinh lƣợng q trình bảo quản hơ hấp, 2/3 lƣợng tỏa mơi trƣờng Sự sinh nhi t làm nhi t độ trái tăng điều kiện thuận lợi cho vi sinh vật... viên thực HỒNG MỘNG THÚY NHI i TĨM TẮT Thanh long loại trái có giá trị kinh tế cao Hiện nay, q trình trồng, sản xuất long gặp nhi u vấn đề, có thất hƣ hỏng trình bảo quản nhi u loại nấm bệnh Vì