PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA : CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM MƠN: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM Bài báo cáo PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Tổng số VI KhuẩN HIẾU KHÍ Determination Aerobic Colony (Plate) Count tuthienbao.com GVHD: Nguyễn Thị Mỹ Lệ Nhóm Danh sách nhóm Nguyễn Thị Minh Trang Nguyễn Như Tuyết Nguyễn Ngọc Thùy Biện Thị Hồng Thắm Lâm Hoàng Quân Trịnh Đình Trung Trực 2005100091 2005100310 2005100384 2005100062 2005100083 2005100019 ỨNG DỤNG NGUYÊN TẮC NGUYÊN LIỆU & THIẾT BỊ CHUYÊN DỤNG CÁCH TIẾN HÀNH ỨNG DỤNG Phương pháp được áp dụng cho việc đếm số vi khuẩn hiếu khí hiện diện mẫu thực phẩm : Vi khuẩn ưa lạnh Vi khuẩn ưa ấm Vi khuẩn ưa nhiệt NGUYÊN TẮC Chỉ số ACC (hay APC) đánh giá số lượng vi sinh vật hiếu khí hiện diện mẫu thực phẩm  biểu diễn dưới dạng số đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) một đơn vị thực phẩm (g, ml) ACC = CFU/g (ml) NGUYÊN TẮC Mẫu thực phẩm  trộn vào môi trường Agar (đặc trưng cho VSV mẫu nuôi cấy dưới điều kiện nhiệt độ thời gian thích hợp thực phẩm đó)   mỡi vi khuẩn hiếu khí hiện diện sẽ nhân lên sinh số khuẩn lạc khả kiến có thể đếm được Vi khuẩn ưa lạnh: sinh trưởng tối ưu ở nhiệt độ < 15oC (0 – 20oC) Vi khuẩn ưa ấm: sinh trưởng tối ưu ở nhiệt độ giữa 20 - 45oC Vi khuẩn ưa nóng: sinh trưởng tới ưu ở nhiệt đợ > 45oC NGUYÊN LIỆU & THIẾT BỊ CHUYÊN DỤNG + Môi trường PCA + Chất hòa tan: đệm BPB KH2PO4 .Điều chỉnh Nước pH = cất 7.2 với dung dịch NaOH 1N .Định mức lên thể tích 1lít bằng nước cất .Vô trùng tại nhiệt độ 121oC 15 phút .Bảo quản tủ lạnh 34g 500ml + Natri 2,3,5 triphenyltetrazolium clorua (0,1%) (không bắt buộc) Kết 25 < Khuẩn lạc < 250  Có thể đếm Kết nhiều để đếm (TNTC) Kết 25 < Khuẩn lạc < 250 Có thể đếm Đĩa 10 10 -2 -3 Đĩa Đĩa 10 -4 10 -5 Đĩa Khuẩn lạc >< Phần tử ảnh hưởng Các phần tử thực phẩm thịt, bột sữa,… thường ảnh hưởng đến việc đếm khuẩn lạc đĩa Điều có thể được loại bỏ bằng cách song song một đĩa khác với từng nồng độ mà có chứa phần tử ảnh hưởng kiểm sốt chúng điều kiện lạnh để so sánh trình đếm 2ml dung dịch đệm Natri 2,3,5 triphenyltetrazolium clorua (0,1%)  Dung dịch bao phủ tồn bợ đĩa (nhiệt đợ phòng, 3h) Các vi kh̉n sẽ làm giảm lượng chất chỉ thị hình thành chất formanzan, chất nhuộm những khuẩn lạc đơn thành màu đỏ, hỗ trợ cho việc phân biệt với phần tử thực phẩm Báo cáo kết thí nghiệm Công thức : N=AxD N : số đơn vị khuẩn lạc g(ml) mẫu A : số khuẩn lạc trung bình đĩa D : hệ số pha loãng tương ứng Báo cáo kết thí nghiệm Tính số khuẩn lạc trung bình đếm Tính số lượng VSV hiếu khí (ACC or APC ) Nguyên tắc ghi kết Ước lượng VSV hiếu khí (EAPC) Tính số VSV hiếu khí (ACC or APC ) Cơng thức : N=AxD N : số đơn vị khuẩn lạc g(ml) mẫu A : số khuẩn lạc trung bình đĩa D : hệ số pha loãng tương ứng Nguyên tắc ghi kết quả K  ết quả làm tròn đến chữ số có nghĩa C  hỉ lại chữ số đầu tiên bên tay trái : Ví dụ: 11,300 CFU/g báo cáo là 1,1 x 10 CFU/g 235,000 CFU/g báo cáo là 2,4 x 10 CFU/g Ước lượng VSV hiếu khí (EAPC) K  ết quả làm tròn đến chữ số có nghĩa C  hỉ lại chữ số đầu tiên bên tay trái : Ví dụ: 11,300 CFU/g báo cáo là 1,1 x 10 CFU/g 235,000 CFU/g báo cáo là 2,4 x 10 CFU/g Ví dụ kết bất thường Đợ pha lỗng   Kh̉n lạc Mẫu 1:100   1:1000 EAPC/ml (g) 18 1.900 Mẫu 0 Mẫu TNTC 640 640.000 Mẫu LA 640 640.000 Mẫu SPR 350 350.000 Mẫu TNTC 600 < 100 ( 600.000 Ví dụ kết bất thường TNTC: Quá nhiều để đếm EAPC: Dự đốn số vi sinh vật hiếu khí LA: Sự cố phòng thí nghiệm SPR: Mọc loang (a): Dựa 1/4 đĩa Ví dụ kết bất thường 5.2 Trường hợp số đếm thấp Trường hợp có đĩa (mẫu thử huyền phù ban đầu dung dịch pha lỗng thứ nhất) có chứa 10 khuẩn lạc - Nếu đĩa chứa 10 khuẩn lạc, có khuẩn lạc, tính kết theo trường hợp chung báo cáo kết số ước tính x vi sinh vật ml (sản phẩm lỏng) gam (sản phẩm dạng khác) - Nếu tổng số từ đến 1, kết ghi sau: "Có mặt vi sinh vật nhỏ (4xd) gam ml" Trường hợp đĩa (mẫu thử huyền phù ban đầu dung dịch pha lỗng thứ nhất) khơng chứa khuẩn lạc - Nếu đĩa mẫu thử huyền phù ban đầu từ độ pha loãng thứ cấy giữ lại khơng chứa khuẩn lạc nào, biểu thị kết sau: “ít 1/d vi sinh vật milit (sản phẩm dạng lỏng) 1/d vi sinh vật gam (sản phẩm dạng khác)’’