1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

Nghiên cứu đặc tính hoá sinh dược của cây cam thảo đất (Scoparia dulcis L.)

71 620 1

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 71
Dung lượng 2,43 MB

Nội dung

Mụcđíchnghiêncứu Nghiêncứuđặctínhhóasinh,tácdụnghạđườnghuyếtcủamột sốphânđoạndịchchiếttừcâyCamt hảođấttrênmôh ìn h chuộtđáitháođườngtype2 thựcnghiệm... Tácdụngsinhh ọc củatanninlàchấtbảo

Trang 1

MỞĐẦU

1 Lýdochọnđềtài

Dosựpháttriểncủaxãhộihiệnnaykéotheonhịpsốngcôngnghiệphiệnđ ạ i củaconngười,sựkhôngphùhợpvềthayđổilốisống,các chếđộănuốngm ấtcânđốidinhdưỡnglànguyênnhândẫnđếnnhiềucănbệnhnguyhiểmnhư:bệnhđ á i t h á o đ ư ờ n g( D i a b e t e s mellitus),bệnhbéophì(Obesity),u n g t h ư,timm ạch.Trongđóđáitháođường(ĐTĐ)làcănbệnhpháttriểnnhanhnhấthiệnnaycủaxãhội

Đáit h á o đ ư ờ n g làmộtbệnhr ố i loạnchuyểnhóag â y tăngđườngh u y ế t m ã ntínhdothiếuinsulintươngđốihaytuyệtđốicủatuyếntụy,nếukhôngkiểms o á t t ốtsau

m ộ t t h ờ i g i a n tiếnt r i ể n kéod àicóthểgâyn h i ề u biếnchứngn g u y h i ểm.Bệnhcótínhchấtdântộc,chủngtộcđãvàđangtrởthànhvấnđềmangtínhxãhội,bởisựbùngphátnhanhchóng,mứcđộnguyhạiđếnsứckhỏe,tốnkémchongườibệnhvàkinhtếcộngđồng

TheoTổchứcYtếthếgiới(WHO):năm1994,thếgiớicó98.9triệungườim ắcbệnhđáitháođường,cuốinăm2002cókhoảng177triệungười,consốnàyđãtănglên300triệungườivàonăm2025.RiêngchâuÁ,sốliệucôngbốtạihộin g h ịđáitháođư ờn g quốctếtổchứ c vàot há ng 12năm19 97 tạ i Singapo:Năm1995châuÁcókhoảng62triệun

g ườ i m ắc bệnhĐ T Đ , c u ố i nă m 20 02 c o n sốnàylà89triệungười.TheođánhgiácủaHiệphộiĐTĐquốctế(IDF)năm2005sốngườimắcbệnhđáitháođườngtạichâuÁtănglên1.7lần.WHOđãcảnhbáocóthểxuấthiệnđạidịchĐTĐởchâuÁvàothếkỷ21[4],[2]

Việt

Nam,năm1990tỷlệmắcbệnhĐTĐởHàNộilà1.2%,Huếlà0.96%vàthànhphốHồChíMinhlà2.5%,năm2000ViệnNộitiếtTrungươngđiềutratạikhuv ự c nộithànhHàNộitỷlệĐTĐlà4%dân sốvà7%ở tuổi>35t uổ i CuộcđiềutradoViệnNộitiếttiếnhànhnăm2001tại4thànhphốHàNội,HảiPhòng,ĐàNẵngvàthànhphốHồCh íMinhđãchothấytỷlệĐTĐt r o n g độtuổi30-64tuổilà4.9%[4],[2]

SựgiatăngnhanhchóngtỷlệngườimắcbệnhlàmchoĐTĐtrởthànhmộtvấnđềlớnchosứckhỏevìbệnhcótỷlệmắc,chếttrầmtrọngtrongquátrìnhtrị

Trang 2

liệulâudài,đặcbiệtlàĐTĐtype2mộ ttrongnhữngbệnhphổbi ến nhấttrongbệnhĐTĐ.ĐTĐcóthểmangnhiềubiếnchứngnguyhiểmnhư:biếnchứngvõngmạc,suythận,biếnchứngmạchmáulớn,tổnthươngbànchândẫnđếncụt Vìvậyđạiđasốngườibệnhđềucónhucầuchữabệnhmộtcáchantoàn.Mỗinămn ư ớ c MỹđãphảichihàngtỉđôlachođiềutrịĐTĐbằngcácthuốcdotổchức

ant o à n thựcp h ẩ m vàdượcp hẩ m Mỹphêchuẩn(FoodandDrugA m i n i s t r a t i o n FDA)như:Metformin,Orlistat,Sibutramin,Ephedrin,Fenfluramin.Songhầuhếtc á cthuốcnàyđềucónguồngốct ổ n g hợp,thường cótác dụngph ụvàđắttiền.Trướctìnhhìnhđóủybanchuyêngiacủa(WHO)đãkhuyếnnghịnênsửdụngcácthuốccónguồngốcthảodượcsẵncó,giáthànhrẻvàítđộctính[4],[ 2 ] , [23],[39]

-Từthực tếđó,nhằm gópphầntìmki ếmvànghiêncứuthuốcđiềutrịđáit h á o đườ

ngvàthànhphầnhóahọccơbảncủacâyCamthảođất(Scopariadulcis

L.)trênch u ộtnhắtgâ y bệnhĐ T Đ bằngstreptozotocin(STZ),chúngt ô i q u y ế t đ ị

n h chọnđềtàinghiêncứu“Nghiêncứuđặctínhhóasinhdượccủacâycamt h ảođấ t(ScopariadulcisL.)”

2 Mụcđíchnghiêncứu

Nghiêncứuđặctínhhóasinh,tácdụnghạđườnghuyếtcủamột sốphânđoạndịchchiếttừcâyCamt hảođấttrênmôh ìn h chuộtđáitháođườngtype2 thựcnghiệm

Trang 4

4cm,khôngcólákèm.Bìalácórăngở2/3phíatrên,răngcưatù,khôngđều,sâu1

-2 mm.Phiếnlákéodàimendọctheo-2 bêncuốnglá,mặttrêns ẫm,mặtdướinhạt.Khôngcólákèm.Gânláhìnhlôngchimlồiởmặtdưới;4-

5cặpgânp h

ụhơilồiởmặtdưới.Cuốngládài5-7mm.Cụmhoamọcriêngrẻhaythànhđ ô i ở n á c h lá.Hoag ầnđều,lưỡngtính,mẫu4 đ

ô i khig ặ p m ẫ u 5,m àutrắng.C u

ốnghoamảnh,dài4-6mm,màuxanh.Láđài4,rời,đôikhigặp5láđài,màux a n h , hìnhbầudục,dàikhoảng2,5mm,có3gânnổiởmặtngoài,mépcólông,t ồntạivàđ ồ n g t r ư ở n g vớiq u ả Cánhhoa4,d í n h n h a u ở dưới( đ ô i k h i g ặ p 5)t h à n h ốngrấtngắn,màutrắngphớttím;trênchiathành4phiếnhìnhbầudục,gầnnhưđềunhau,dàikhoảng2mm,uốncongngượcrabênngoàikhihoanở,nhiềul ô n g màutrắng,dạngsợi,dàigầnbằngnhịđínhởmiệngốngtràng.Tiềnkhai:1c á n h hoaởngoàicùng,1cánhởtrongcùng,2cánhhoacònlạixenkẽnhau.Nhị4,rời,đínhtrênmiệngốngtràng,xenkẽc á n h hoa;chỉnhịhìnhsợimàutrắng,đ ỉ n h hơitím,dàikhoảng1,5mm Baophấnhìnhmũitên,2ô,đínhgiữa,hướngtrong,khaidọc.Hạtphấnhìnhbầudục,córãnh.2lánoãnởvịtrítrước-

sau,dínhliềnthànhbầutrên2ô,mỗiôđựngnhiềunoãn,đínhnoãntrungtrụ.1vòinhụydàikhoảng1,5mmđínhởđỉnhbầu.Đầunhụymàuxanh,dànhđiểmcó2thùy,cóchấtdính.Quảnanghủyvách,hìnhcầu,trongchứanhiềuhạtnhỏmàuđen

HoathứcvàHoađồ:

Trang 5

Đặcđiểmgiảiphẫu:Rễbầngồm2-3lớptếbào,bịbong,nứtnhiều.Tếbàomômềmvỏhìnhtrònhaybầudục,xếptạonhữngkhuyếtrấtlớn.NộibìkhungC a s p a r y rõ.Trụbì1-

2lớp,mộtvàitếbàobịhóamôcứng.Libe2tếbàobịépdẹp,váchu ố n lượn.Gỗ2c hi ếm t

â m Môm ề m gỗv á c h rấtdày.M ạchgỗk í c h t h ư ớ c lớ n , phânbốđ ề u vàn h i ềuhơnở t

h â n

Tiatủy1-2dãytếbào.Thân:Viphẫugầnnhưvuông.Cácmôgồm:biểubìlà1lớptếbàoxếpđềuđặn,cutincórăngcưa,manglỗkhívàrảiráclôngtiếtchânđabàohayđơnbào,đầuđabào.Ởt h â

n

già,2-3lớpbầnxuấthiệnngaydướilớpbiểubì.Môdàygóctậptrungở4g ó c thân,ởcạnhrấtít,thỉnhthoảnggặpsợitrongmô

dày.Ởthângià,môdàyở4g ó c

bịhóamôcứng.Mômềmvỏlàmômềmkhuyết,3-6lớptếbàohìnhtrònhayb ầudục,kíchthướckhôngđều.NộibìkhungCasparyrõ.Trụbì1-2lớptếbào,h ó a môcứngriênglẻhaythànhđámnhỏ.Libe2-

gỗ2thànhvòngliêntục.Gỗ1phânbốđều.Mômềmgỗváchrấtdày.Tiatủy1-2dãytếbào,váchmỏnghơnmômềmgỗ.Mômềmtủyhìnhtròn,kíchthướckhôngđều.Lá:Gângiữa:Lồirõở mặtdưới,mặttrênphẳng.Biểubìtrênvàbiểubìdướitếbàoxếpkhôngđều,manglôngtiếtchânđabàovàđơnbào,đầuđabào.Biểubìdướimanglỗk hí Lớpcutincórăngcưa.Dướibiểubìlà1-

Trang 6

2lớpmôdàygóc.Mômềmtếbàohìnhc ầu,kíchthướckhôngđều,xếpchừanhữngkhuyếtnhỏ.Cácbólibe-

gỗxếpthànhhìnhvòngc u n g P h i ếnlá:biểubìtrêntếb àolớnhơnbiểubìd ưới,k í c h thước

Trang 7

khôngđều,nhiềutếbàonhôlênthànhđỉnhnhọntù.Lôngtiếtchânngắn,đầuđabàovàlỗkhíởcả2biểubì.Lớpcutincórăngcưacạn.Mômềmgiậugồm1lớptếb à o k í c h thướckhôngđ ề u Môm ề m k h u y ế t tếbàov á c h m ỏng,k í c h thướckhôngđều.

1.1.2 Phânloại,nguồngốcvàphânbốcâyCamthảođất

Phânbố,sinhhọcvàsinhthái:GốcởnhiệtđớiChâuMỹ,đượcthuầnhóatrongtấtcảcácvùngnhiệtđớicủathếgiới.Ởnướcta,câymọckhắpnơitừBắcvàoNam.T h ư ờ n g

g ặ p t r ê n đ ấ t h o a n g , dọcbờđ ư ờ n g , trênc á c dảic á t c ủ a cács ô n g vàtrongcácruộngkhô,ởvùngthấp

1.1.3 Thànhphầnhóahọc

Câychứamộtalcaloidvàmộtchấtđắng;còncónhiềuacidsilicicvàmộthoạtchấtgọilàa m e l l i n Phầnc â y t r ênm ặtđấtc h ứ a m ộ t c h ấ t d ầ u sềns ệ t , màt r o n g thànhphầncódulciol,scopariol,(+)manitol,glucose.Rễ

chứa(+)manitol,tanin,alcaloid,mộthợpchấttriterpen.Vỏrễchứahexcoxinol,-sitosterolvà(+)manitol

-1.1.4 MộtsốtácdụngSinh-DượcvàcôngdụngcủacâyCam thảođất

Thườngdùngtrị:cảmcúm,sốt,nóngnhiều,hokhan,hocóđàm.Lỵtrựctrùng.Têphù,phùthủng,giảmniệu.Dùngngoài,éplấydịchtừcâytươitrịmụnn h ọt,lởn g ứ a ,

e c z e m a Hoạtc h ấ t a m e l l i n t r o n g c a m t h ả o đ ấ t cót h ể làmg i ảmđ ư ờ n g máuvàc á c t r i ệuc h ứngc ủ a bệnhđáit h á o đ ư ờ n g type2,k h i ế n c h o q u á trìnhg i ảmn

ồ n g độđườngmáuvàn ư ớ c tiểudiễnradầ n dần.Nócònlà mt ăngmứcdựtrữkiềmbịhạthấpởngườibệnhnhânvàgiảmhàmlượngcácchấttạocetontrongmáu

1.2 Giớithiệuvềmộtsốhợpchấttựnhiênởthựcvật

*Cácchấtthứsinhthựcvật(plantsecondarymetabolites)

Trang 8

Ởthựcvật,ngoàiprotein,saccarid,lipid,vitamin,còncónhữngchấtkháccóvaitròquantrọngtrongđổichấtcủacâyđượcgọilàcácchấtthựcvậtthứsinh( p l a n t secondarymetabolites).Căncứvàotínhchấthóahọc,các hợpchấ tthựcvậtthứsinhđượcc h

i a thànhmộtsốn h ó m c h í n h như:nhómp h e n o l i c , nhómt e r p e n vànhómalkaloid.Nhiềucôngtrìnhnghiêncứugầnđâyđãchoth ấycáchợpch ất polyphenol(thuộcnhómhợpchấ tphenolic)ngàycàngứngdụngrộngrãitrongđiềutrịmộtsốbệnhnanynhư:ungthư,béophì,tiểuđường…

a Cáchợpchấtphenolictừthựcvật

Hợpchấtphenoliclànhómcácchấtkhácnhaurấtphổbiếntrongthựcvật.Đặcđiểmchungcủachúnglàtrongphântửcóvòngthơm(benzene)mangmột,haihaybanhómhydroxyl(-

OH)gắntrựctiếpvàovòngbenzene.Dựavàothànhphầnvàcấutrúcngườitachiahợpchấtphenolicthành3nhómnhỏ[41]:

Nhómhợpc h ấ t phenolicđ ơ n g i ả n :Trongphântửchỉcóm ộ t vòngb e n z e

n e vàmộtvàinhómhydroxyl.TùythuộcvàosốlượngnhómOHmàchúngđượcg ọ i l àcácmonophenol( p h e n o l ) , diphenol(pyrocatechin,h y d r o q u y n o n e ) , t r i p h e n

o l (pyrogalol,oxyhydroquynol…)

Nhómhợpchấtphenolicphứctạp:Trongthànhphầncấutrúcphântửcủach

úngngoàivòngthơmbenzene(C6)chúngcòncódịvòng,mạchnhánh.Đạid i ệnnhómnàycóaxidcyamic,axidceramic

vàchutrìnhpentosephosphatequaa c i d sikimichaytheoconđườngacetatemanolatequaacetyl–

SCoA.Trongsốc á c chấtpolyphenoltựnhiên,flavonoid lànhómchấtquantrọngnh

Trang 9

ấtvìchúngphổbiếnởhầuhếtcácloàithựcvậtvàmangnhiềuhoạttínhsinhdượchọccógiátrị.

Trang 10

Flavan(2-phenylchroman)Tùytheomứcđộoxyhóavòngpyran,sựcómặthaykhôngcómặtcủanốiđ ô i giữa

C2vớiC3vàn h ó m cac bo ny l ởC4màcóthểphânbiệtflavonoidthànhc á c nhómphụsau:Flavonvàflavonol,flavanol(đihidroflavon),chalcol,aurol,l e u c o a n t o

x i a n i d i n , catechin,isoflavonoid,rotenoidvàneoflavonoid

• Hoạttínhsinhhọccủaflavonoid

*Tácdụngchốngoxyhóa(antioxidant)

Flavonoidcókhảnă n g kìmhãmcácquátrìnhoxyhóadâytruyềngâyrabởic á c gốctựdohoạtđ ộ n g T u y n h i ênhoạttínhn àymạnhhayy ế u c ònphụt h u ộcvàođặcđiểmcủatừngflavonoidcụthể

Gốctựdosinhratrongquátrìnhsinhlýbìnhthườngcủacơthểhaydotácđ ộ n g b ênngoàilànguyênnhâ ng ây pháhủyADN,protein,lipidlàmphátsinhnhiềubệnhtậtnguyh i ể m vàsựlãohóac h o cơt h ể F l a v o n o i d cób ả n c h ấ t p o l y p h e n o lnêndễdàngbiếnđổidướitácđộngcủacácenzymecótrongtếbàođ ộ n g ,thựcvật.Đặcbiệtflavonoidcónhómhyđroxylởvịtríorthodễdàngbịoxyh ó a bởixúct á c củae n z y

m e p o l y p h e n o l o x y d as e vàp e r o x y d a s e tạos e m i q u y n o l hoặcquynol[27].Đâylàcácgốctựdobềnvữngchúngcóthểnhậnđiệntửvàtrởt h à n h dạnghidroquynol.Bởivậycácchấtnàycókhảnăngphảnứngvớicácgốc

Trang 11

(Hiđroquynol) Peroxydas

e

(semiquynolhoặcquynol)

Ngoàiraflavonoidcòncótácdụngbảovệcáchệthốngsinhhọcnhờkhản ă n g tạophứcvớicáckimlo ại chuyểntiếpnhưFe+2,Cu+2…

hoạthóaenzymec h ốngoxyhóavàứcchếsựoxyhóa

* Tácdụngkhángkhuẩn

Nhiềucôngtrìnhnghiêncứutrongnướcvàthếgiớiđãchứngtỏtácdụngc h ốngviêmnhiễm( a n t i -inflamatory)chốngvik h u ẩ n (anti-bacterial)vàvirut(antiviral)[5],[12]

* Tácdụnglàmbềnthànhmạchmáu

Cácdẫnxuấtđườngc ủ a f l a v o n o i d cóhoạtt í n h củav i t a m i n P n h ư rutin,h e s

p e r i d i n …

cótácdụnglàmtăngsứcbềnvàtínhđànhồicủathànhmaomạch,g i ảmsứcthẩmthấucủahồngcầuquathànhmaomạch.Hoạttínhnàyđượcứngd ụngt r o n g chữatrịcácr ố i l o

ạ nchứcnăngtĩnhmạch,g i ãnhaysuyy ếut ĩ n h m ạch,trĩ,rốiloạntuầnhoàntĩnhmạch[21]

* Tácdụnggiảmbéophìvàlipidmáu

Theok ếtq uả n g h i ênc ứuc ủ ac á c nhàk h o a h ọcNhậtch o t h ấ y khichuộtbéop

hìđượcđiềutrịbằngdịchc h i ế t g i àuf l a v o n o i d từláB ằngl ă n g ( Lagerstroemias

Trang 12

ượngcaotrênhọcamc h a n h ( R u t a c e a e ) đãđ ư ợ c n h i ề u nhànghiênc ứuc h i ế t xuấtvàthửt á c

Trang 13

Tácdụngsinhh ọc củatanninlàchấtbảovệcâytrồngtrướcsựtấncôngcủavisinhvậtgâybệnhvàcôntrùngănlá[42],

[50].Trongyhọc,tanninđượcsửdụnglàmthuốccầm máu,chữađingoài,ngộđộckimloạinặng,chữatrĩ,viêmm i ệng,viêmxoang,điềutrịcaohuyếtápvàđộtquỵ[1]

Trang 14

8 0 0 loàithựcvật.Tac ũ n g dễdàngtìmt h ấyc o u m a r i n trongtấtcảcácbộphậnkhácnhaucủacâynhư:áohạt,quả,hoa,rễ,lá,thân…

Coumarincũngcóvaitròlàmộtnhómchấtphòngthủhóahọchữuhiệuchốnglạivikhuẩnvàtácnhâncóhạicủamôitrường.Tuynhiênchotớinayconđườngtổnghợpcoumarinvẫnchưahoàntoànsángtỏ[40]

CoumarinCoumarinsửdụngtrongđờis ố n g h à n g ngàyn h ư l à m n ư ớ c hoa,h ư ơ n g l i ệu,làmchấtchốngđôngmáuvàchấtdiệt

loàigặmnhấm.Trongyhọcdẫnxuấtcủac o u m a r i n cótácdụngc h ố n g cothắt,giãnnởđộngmạchv ành,l à m bềnvàbảovệt h ànhm ạch,n g ă n c ả n đ ộ t quỵ[ 4 0].Mộtsốc o u m a

r i n k há c cót á c dụngk h á n g khuẩn,khángnấm,khángkhốiu,trừ giunsánvàgiảmđau

Trang 15

N N

e Alkaloidthựcvật

Alkaloidlàhợpchấtchứan i t ơ , đasốcón h â n dịvòngvàcótínhk i ềm,t h ư ờ n g gặpởthựcvậtvàđộngvật.Đasốcácalkaloidthànhphầnchứaoxyởthểrắn( c a f e i n ) , k

h ô n g cóoxyt h ư ờ n g ở thểlỏngdễb a y hơi( n i c o t i n ) A lkaloidt h ư ờ n g khôngcómàu,khôngmùivàvịđắng.Mộtsốalkaloidcómàuvàngnhưb e r b e r i n , palmitin.Cácalkaloidởdạngbasethườngkhôngtantrongnước[40]

N

N

H3C

CH3N

N O

CH3

Alkaloidcótínhk i ềmy ế u , doc á c mạchcacbonchứanitơquyếtđ ị n h C h ú n

g cóthểliênkếtvớikimloạinặngtạophứcvàphảnứngvớimộtsốthuốcthửđặctrưngnhư:Bouchardat(kếttủamàunâusẫm),Vans-

Mayer(kếttủatrắngánhvàng)hayDragendroff(màudacam,nâuđỏ)

Loàingườicólịchsửhơn2000nămnghiêncứuvàsửdụngalkaloid.Chotớinaycóhơn12000alkaloidkhácnhauđượcphânlập.Chúngkhôngphổbiếnt r o n g tựnhiênmàchỉtậptrungởmộtsốloàithựcvậtcóhoa(khoảng20%loàithựcvậtcóhoacókhảnăngsinhalkaloid).Vớicâytrồngalkaloidlàchấthóahọcbảovệcâytrồngtrướccôntrùngvàsâubọănlá[40].Trongyhọcnhiềuthuốcchữabệnhcóthànhphầnalkaloidnhưthuốcgâykíchthíchhoặcứcchếhệthầnkinht r u n g ư ơ n g , thuốcđiềuh ò a h u y ếtáp,chữar ố i loạnnhịpt i m … Mộtsốnghiêncứugầnđâychothấycácalkaloidchiế

ttừthựcvậtcũngcótácdụnghạg l u c o s e huyếtnhư:Berberin(Tinosporacordifoli

a,Coptissinensis),Casuarine6-O-α-glucoside(Syzygiummalaccense).

f Terpenthựcvật

Terpenlànhómh y d r o c a c b o n thựcv ậ t l ớ n vàđadạngn h ấ t , đ ư ợ c h ìnhthànhtừquátrìnhpolymehoácáctiểuđơnvịisopren5-

carbon(C5H8),cócôngthứccấ u t ạ o c h u n g là(C5H8)n.T r o n g t h ựcvậ t t e r p e n đ ư ợ ctổnghợpt h ô n g qua

Trang 16

Người trưởng thành châu Âu

< 18.518.5 - 24.9

chungmộtnhómlớncáchợpch ất baogồ mcảterpenvàt e r p e n o i d T e r p e n làt

h à n h phầnc h í n h củac á c l o ạ i t i n h d ầ u , đượcd ùngt r o n g côngnghệhươngmỹp

Trang 17

1.3.2 ThựctrạngbéophìtrênthếgiớivàViệtNam

Theotổchứcytếthếgiới(WHO)hiệnnaysốngườibéophìđãlêntới1,7tỉngười[2],khôngchỉgặpnhiềuởcácquốcgiapháttriểnmàcòngặpcảởcácq u ốcg i a đangp h á t triển.Mỹlàn ư ớ c cósốdânm ắ c bệnhc a o n h ấ t thếgiới,k h o ảng60triệungười(chiếm3

0 % dânsố),tănggấp3 lầnsovớiđiềutranăm1991.ỞchâuÂu,Anhlàquốcgiađứngđầubảngvới23%dânsố.TạichâuÁtỉlệt h ừ a c â n béop h ìở m ộ t sốnướcnhưsau:T h á i L a

n 3,5%,Philipin4,27%,Ma l a ys i a 3,01%,Nhật3%,TrungQuốc2%,HồngKông3%

TạiViệtNam,theoti êuchuẩnchon gư ời châuÁ,sốn gư ời thừacânbéop h ì cũngtăngtheothờigian.Năm1991theođiềutracủaLêHuyLiệuvàcộngsựthìtỉlệthừacânmắcbệnhbéophìnóichungtạiHàNộilà1,1%.Đếnnăm2000c o n sốnàyđãlà2,62%tănggần2,5lầntrongvòng10năm(điềutracủaLêVănHải)[2]

Năm2007,Việndinhdưỡng

Quốcgiađiềutratrênđốitượngngườitrưởngt h à n h

25-64tuổichothấytỉlệthừacânbéophìlà16,8%vàcòncóxuhướngt ă n g lên.TheoViệntrưởngTS.NguyễnCôngKhẩnthìtỉlệnàyởthànhthịlớnhơnnôngt h ô n , ở nữgiớicaohơnn a m g i ớ i TrẻemViệtNamc ũ n g có16,3%m ắcthừacânbéophì.HàNộicó4,9%trẻ4-

6tuổimắcbệnh,ThànhphốHồChíM i n h 6%trẻdưới5tuổivà22,7%họcsinhtiểuhọccũngrơivàotìnhtrạngnày[ 5 1 ].TrướctìnhhìnhđóBộytếđãkíquyếtđịnhthànhlập“Trungtâmphụchồid i n h dưỡngvàkiểmsoátbéophì”trựcthuộcViệndinhdưỡng,chínhthứctuyênc h i ếnvới bệnhbéophì

1.3.3 Táchạivànguy cơcủabệnhbéophì

Chứngt h ừ a c â n vàbệnhbéop h ìg â y n h i ềut á c hạic h o cuộcs ố n g conngườinhưmấtthoảimáitrongsinhhoạt,giảmhiệusuấtlaođộng,khốilượngcơthểnặngnềkémlanhlợi

Ngườibéophìcónguycơbệnhtậtcaohơnsovớingườithườngdonhiễmđ ộ c mỡmáu,tiêubiểunhư:

 Bệnhtimm ạ c h : Domỡt ạ n g làmtimkhócob óp vàmỡmáulàmxơ

cứng mạchvànhvàcácmạchmáukhácgâynhồimáucơtimtănghuyếtáp

Trang 18

 Rốiloạnlipidmáu:Tìnhtrạngnàyrấthaygặpởngườibéobụngvàcóbiểuhiệnđặctrưnglàtăngtriglyceridvàlipidcóhại(LDL-c),giảmlipidcólợi( H D L - c )

 Tiểuđường:BéophìtoànthâncónguycơmắcĐTĐtype2

 Độtquỵ:NhữngngườicóBMI>30dễbịtửvongdobệnhliênquan

đếnmạchmáunão

 Ngoàirabéophìcònlàmgiatăngnguycơcủanhiềubệnhkhác:xấuđitìnhtrạngrốiloạntiềnmãnkinhởphụnữ,suygiảmchứcnănghôhấp,rốiloạnhoạtđộngcơxương,ungthư,sỏimậtvàc ác vấnđềbệnhlýtâmthầnkhác[1],[ 3 8 ]

1.3.4 Nguyênnhânvàgiảiphápphòng,điềutrịbéophì

Nguyênnhânchínhdẫnđếnthừacânbéophìlàdokhẩuphầnvàthóiquend i n h dưỡngkhônghợplý,hoạtđộngthểlựckémdẫnđếnnănglượnghấpthụvàocơthểvượtquámứccầnthiếtvàtíchlũydướidạngmỡ.Ngoàiramộtsốbệnhlýnộitiếtnhư:HộichứngCushing(dohormonecortisosteroidtrongcơthểtăngquácao),bệnhsuytuyếngiáptrạng,bệnhtrứngđananghoặccóchứagenbéophìditruyền

Đểphòngbệnhbéophìcóhiệuquả,mỗicánhâncầnnângcaonhậnthứcvềdinhdưỡngvàhoạtđộngthểlực.Trênphạmvixãhội,việcphòngbệnhcầntậptrungvàonhómcónguycơcaomắcbệnhnày

Điềutrịthừacânbéophìdựatrênnguyêntắckếthợpgiữachếđộănuống,luyệntậpvàdùngthuốc.Trongđóthuốcvàphẫuthuậtchỉdùngtrongtrườnghợpb ắtbuộc.Thuốcchốngbéophìđượcchialàmhainhómlớn

 Nhómcótácdụnglênhệthầnkinhtrungương

 Nhómtácdụnglênhệtiêuhóa

ThuốcđiềutrịbéophìphổbiếnhiệnnaylàMetforminthuộcnhómhaivớitácdụngchủyếulàứcchếphângiảiglycogenthànhglucoseởgan,làmtăngtínhn h ạycảmcủainsulinngoạivi,tác độnghạglucosetrongkhoảng2 -4mmol/

l,g i ảmHbA1Cđến2%.Vìthế,Metforminđượcdùngchocảbệnhnhânbéophìvàtiểuđường.Tuynhiênt h u ốcc ũ n g cóm ộ t sốtácdụngphụvớiđườngt iêuh óa ,

Trang 19

u ngaytừkhitỉlệthànhphầncủalipidm á u cósựthayđổi.Kháiniệmnàychỉrõrốiloạnlipidmáucóthểxảyratừrấts ớm,ngaycảkhichưacótăngcácgiátrịtuyệtđốinồngđộcủacácthànhphầnt r o n g máu[4].Rốiloạnnàycóthểtiênphátdoditruyềnhoặcthứphátsaucácbệnhkhácnhư:béophì,đáitháođường,nghiệnrượu,suygiáptrạng.Fredricksonc ă ncứvàokĩthuậtđiện

divàsiêulytâmvớicácthànhphầnhuyếtthanhđãphânl o ạic h ứ n g tănglipidmáuthành

5 t y p e dựat r ênn h ữngt h a y đổit h ànhphầnl i p o p r o t e i n CáchphânloạinàyđãđượcWHOchínhthứcsửdụngvàonăm1970[ 2 5 ] Nhiềunghiêncứuđãchứngminhngườimắcbệnhbéophìcónguycơcao

Trang 20

mắccácbệnhrốiloạnlipidmáudẫnđếnxơvữađộngmạch(liênquanchủyếuđ ế n cáclipoprotein)hoặchiệntượng“nhiễmđộcmỡtếbào”[21],[25].

1.4 Bệnhđáitháođường(Diabetesmellitus)

1.4.1 Kháiniệmvàphânloại

Danhtừđáitháođường(Diabetesmellitus)cónguồngốctừtiếngHyLạp( D i a

b e t e s : n ư ớ c chảyt r o n g ố n g s y p h o n ) vàt i ếngL a t i n h ( m e l l i t u s : n g ọ t )[ 65].K h o ảng1550nămtrướccôngnguyêncácthầythuốcHyLạpđãmôtảbệnhnàyvớicáctriệuchứngănnhiều,uốngnhiều,tiểunhiều,nướctiểucóđườngvàsútc â n nhanh[4].PGS.TSTạVănBìnhđịnhnghĩađáitháođườnglàmộthộichứngcóđặctínhbiểuhiệnbằngtăngđườngmáu,dohậuquảcủaviệcmấthoàntoàninsulinhoặclàdocóliênquanđếnsựsuyyếu trongbàitiếtvàh o ạtđộngcủ a insulin.BệnhĐTĐđượcxácđịnhdựavàonhữngtiêuchítrongbảng1.2[4]

Bảng1.2.Cáctiêuchíđểchuẩn đoán ĐTĐtheoWHO

Kếtluận

Đườnghuyết lúcđói(mm ol/l)

Đườnghuyết2giờsa

u khilàmnghiệmphá ptăngđườnghuyết(

mmol/l)

Đườnghuyếttạit hờiđiểm bấtkì(mmol/l)

kèmtriệuchứnguốngnhiều,đáinh iềuvàgầysút

Trang 21

ĐTĐtype2:Chiếm80%-90%bệnhnhân,cót ín h quytụgiađ ìnhvàhaygặpở n h ữ n g n g ư ờ i t r ên30t u ổi.Haiyếutốch ín h đóngva i tròquant r ọngt r o n g cơchếsinhĐTĐtype2làkhiếmkhuyếtchứcnăngtếbàoβtuyếntụyvàtìnhtrạngk h á n g i n s u l i n [ 4],

[38].Haiyếutốn à y l u ô n cót á c độngq ua l ạ i vớin h a u vàkhôngthểkếtluậnyếutốnàoxuấthiệntrước.Khánginsulincóthểdob ấtthườngởhậuthụthểinsulin,bấtthườngvềsốlượngreceptorinsulinhoặcáil ựcgắnhormoncủainsulinvàcũngcóthểdoacidbéotựdotăngcaogiántiếplàmả n h h ư ở n g quát r ìnhtruyềntinnộibàocủainsulinở tếbàođích.Bởivậy,bệnhbéobệulàmộttrongnhữngnguyênnhânmôitrườngđượcđềcậpđếnnhiề

- Giaiđoạn3:Khánginsulinkhôngđổinhưngbàitiếtinsulinsuygiảmgâyt ă n g glucosehuyếtlúcđói,bệnhĐTĐbiểuhiệnrabênngoài

 NgoàiracòncóĐTĐthainghénvàmộtsốtypeĐTĐđặcbiệtkhácnhưt h i ếuhụtchứcnăngtếbàoβ,thiếuhụtditruyềnvềtácđộngcủainsulin,bệnh tụyngoạitiết,

1.4.2 ThựctrạngđáitháođườngtrênthếgiớivàViệtNam

Cùngvớicácbệnhk h ô n g l â y n h iễ m k hác bệnhĐTĐđangpháttriểnvớitốcđộnhanhchóngcùngsựpháttriểncủanềnkinhtếxãhội.Năm1994,toànthếgiớicó98,9triệungườimắcĐTĐ.Năm1995đãtănglên135triệungườichiếm4%dânsốthếgiới,cuốinăm2002cókhoảng177triệungười[2].Dựđoánđếnnăm2010cókhoảng222triệuvànăm2025cókhảng300triệubệnhnhânchiếm5,4%dânsốthếg i ớ i [2].Đặcbiệtn g àynaytỉlệngườimắcbệnhởc h â u Áđãv ư ợ t xachâuÂu-

nơivẫnđượcxemlàổbệnh[1].TạiTâyTháiBìnhDươngcó12quốcgiacótỉlệĐTĐtype2trên8%,cábiệtcóquốcđảocótỉlệbệnhvượt4 0 %

Trang 22

ViệtNamhiệnnayĐTĐđanggiatăngrấtnhanh.Năm1990,HàNộicótỉlệmắcbệnhlà1,2%,Huế0,96%,ThànhphốHồChíMinhlà2,52%.Theođiềutraquốcgianăm2002chot hấ ytỉlện g ư ờ i m ắ c bệnhĐTĐl ứ a tuổitừ30- 64t r o n g toànquốclà2,7%

(khuvựcđôthịvàkhucôngnghiệptỉlệtới4,4%).Đặcb i ệtbệnhnàytrongnhómngườicóyếutốnguycơlàrấtcao(10,3%).Hiệnnay,cók h o ảnghaitriệun g ư ờ i m ắc bệnhĐT

Đn h ư n g cótới65%sốđók h ô n g biếtm ì n h đãm ắcb ệ n h TheoPGS.TSTạVănBình:

Đ TĐ t y p e 2 ở l ứ a tuổit h a n h t h i ếuniênngàymộttăngnhanh,đâylàmộtvấnđềrấtđánglưutâm[2]

1.4.3 Táchạivàbiếnchứng

ĐTĐảnhhưởngtrựctiếpđếnsứckhỏevàkhảnănglàmviệccủangườilaođ ộ n g , nhưnghơncảlànguycơbiếnchứngcủabệnhnhânthườngrấtcao[4]

- Biếnc h ứ n g mắtnhư:bệnhlývõngmạc( 2 7 , 8 % ) , đ ụ c t h ủ y t i n h thể( 6, 1 % ) tăngsinhgâymùlòa(1,1%) Bệnhvềvõngmạctăngdầntheothờigianpháthiệnbệnh

- Biếnchứngthận như:microalbuminniệu( 1 1 , 6 % ) , m a c r o a l b u m i n(3%),suythậntừđộ1đếnđộ4(3,5%)…

+Insulinvàcácthuốck í c h thíchb àit i ếtinsulinnhư S u l f o n f l u r e a ,

Nateglinid(Starlix)…

+T h u ốcl à m t ă n g tínhn h ạ y c ả m c ủ a thụthểvớii n s u l i n n h ư : B i g u a n i d ,nhómthiazolidinedion…

Trang 23

ănkhôngđủ,cơthểsẽhuyđộngnguồnglucosethứhainhờsựthoáihóaglycogenởgan,cơ.Ngoàirag l u c o s e còncóđượcnhờquátrìnhtântạoglucosenhờhệthốngenzymeđặchiệuriêngbiệt(xảyraởgan,thận,ruột)từpyruvat,lactathaycácsảnphẩmtrunggiancủachutrìnhKrebs.

Glucosesaukhiđượchấpthuhoặctạothànhtrongcơthểsẽtantrongmáuvàđượcvậ

nc h u y ể n vàot r o n g tếbàonhờc á c p r o t e i n v ậ n c h u y ể n Cuốicùngg l u c o s e sẽthoáihóa đểtạonă ng lượnghaycácsảnphẩmtrunggianthôngqua q u á trìnhđườngphân,chutrìnhpentosep h os p h a t hayconđườngtạou ro ni c vàa s c o r b i c G l u

c o s e dưthừak h i n h u cầunănglượngc ủ a cơthểthấplạiđ ư ợ c chuyểnthànhdạnggluciddựtrữlàglycogenởgan[29]

Đểduytrìnồngđộglucoseổnđịnhtrongmáucơthểphảihuyđộngnhiềucơc h ế, cósựxúctácc ủ a n h i ề u loạienzymek h á c n h a u nhằmc â n bằngg i ữ a l ư ợ n g glucoseđivàomáuvàlượngglucoseđượcthunạpbởicáctổchức.Trongđóquantrọngnhấtlàviệcđiềuhòaquátrìnhtântạoglucosevàquátrìnhthoáih ó a g l u c o se cósựthamgiacủan h i ề u proteinvậ nc h u y ể n g l uc o s e q ua màngtếbào[19]

Glucosetrongcơthểđượcđiềuhòaổnđịnhbởicáchormonmàchủyếulàc á c hormontuyếntụynộitiết.InsulinlàhormontiếtbởicáctếbàoβcủađảotụyL a n g e r h a n s cótácdụnglàmg i ảmg l u c o s e máudolàmtăngdựtrữg l y c o g e n ở g a n , cơ,ứcchếquátrìnhtântạođườngmới.Glucagonlàhormontiếtbởitếbàoαđảotụy,cótácdụngngượcvớiinsulin,nghĩalàlàmtăngsựphângiảiglycogenvàtăngtântạođườngmớidođógiảmglucosehuyết

1.5 Mốiquanhệgiữabéophìvàđáitháođường

BéophìvàĐTĐlàhaibệnhkhôngtruyềnnhiễmnguyhiểmnhấtcủathếkỉ

21.Haic ă n bệnhn àycómốil i ênquanc h ặtchẽvớinhaut h ể h i ệ n ở c h ỗ tỉlệ

Trang 24

ngườibéophìluôntăngtươngđươngvớisốbệnhnhânbịĐTĐ.MộtcuộckhảosátcủaMỹgầnđâyđãchỉrarằngcótới58%sốngườibịĐTĐtype2đượcquycholàdob é o p h ì Béophìl i ê n q u a n t ớiĐ T Đ type2 thôngquasựđềk h á n g insulin.Nồngđộacidbé otựdoc

ứt ă n g 100µMth ìmứcđềk h á n g insulintăngk h o

ảng5-10%[4].Thiếuinsulindẫnđếnsựtăngtrọnglượngcơthể,tăngđườngmáu,cuốicùngdẫnđếnbệnhĐTĐtype2

Cónh iềunhântốảnhhưởngtớimốiquanhệgiữabéophìvàbệnhĐTĐt y p e 2baogồm:chỉsốkhốicơthể,thờigianbéophì,chếđộdinhdưỡng,sựvậnđ ộ n g thânthể.Mộtthốngkêđãchỉrarằngnhữngngườicóchỉsốkhốicơthểlớnhơn30kg/m2trong10nămcónguycơmắcbệnhĐTĐt y p e 2caogấphail ầ n ngườibịbéophìdưới5nămvànếutrọnglượngcơthểtăngmộtkilogamthìrủirovềbệnhĐTĐtype2tăng4,5%[38].ĐâychínhlàcơsởđểReedvàcộngsựđưaraphươngphápgâymôhìnhĐTĐthựcnghiệmởđộngvậtbằngcáchtiêmS T Z l iềuđơnc h o c h u ộ t đãđ ư ợ c vỗbéon h i ề u n g ày[ 6 0 ] ,

[ 6 3 ] TạiViệtNam,TrầnThịChiMaiđãápdụngphươngphápnàyvàđạthiệuquả90%chuộtxuấth i ệnĐTĐvớinồngđộglucosemáu≥10mmol/l[24]

KếtquảcủanhiềunghiêncứuchothấyacidbéotựdocóvaitròtrongbệnhsinhĐTĐtype2.Phầnlớnngườibéophìcónồngđộacidbéotronghuyếttươngt ă n g cao.Sựtăngnàyứcchếquátrìnhhấpthuglucosengoạividướitácdụngcủainsulin,ứcc h ế sửd ụ n g g l u c

o s e c ủ a toàncơt h ể , ứcchếo x y h ó a glucoseở cơ[ 3 9 ]

ĐTĐđặctrưngbởisựr ố i l oạnc h u y ể n hóag l u c i d , sựr ố i loạnnàyả n h h ư ở

n g đế nmôitrườngnộimôidođókéotheohoặclàmchoquátrìnhrốiloạnchuyểnhóalipidởmỗiloạiĐTĐmangnhữngđặctrưngriêng.Đặctrưngchungcủar ố i loạnchuyểnhóalipidt ro ng ĐTĐlàsựtăngtriglycerid,giảmHDL-cvàLDL-

cvẫnnằmtronggiớihạnbìnhthường.TuynhiênởĐTĐtype1rốiloạntăngtriglyceridsẽmấtđikhikiểmsoátđượcglucosemáukhácvớitype2,rốiloạnnàycóthểvẫnkéodàimặcdùcósựđiềutrịgiảmglucosemáuthíchhợp.LDL-

ccủatype2 cũngcóthểtăngnhẹvàxuấthiệnnhiềuLDL-cvới

Trang 25

STZtạoranitricoxide(NO)làmtổnthươngADNcủatếbàoβ.Mặtkhác,

hoạtđộngcủaNOlàmứcchếchutrìnhKrebs,giảmtiêuthụoxytrongtythểtừ

Trang 26

Hình 1.1 Cơ chế gây độc của STZ lên tế bào β của tụy đảo chuột

(MIT – Ty thể, XOD – xanthine oxidase) [47]

đólàmgiảmmạnhsựsảnxuấtATPvàtổnhạiđếncácnucleotitcủatếbào.Đồngthờiphântửnàycònứcchếhoạttínhenzymeaconitase.Mặtkhác,sựtăngcườngl o ạibỏgốcphosphatecủaATPsẽbổsungcơchấtchoxanthineoxidasevàtăngc ư ờ n g sảnxuấtacidu r i c Sauđó,xanthine o x i d a se x ú c tácphảnứ n g tạothànhanionsuperoxyde (O2-).Cuốicùnganionsuperoxyde sinhrah y d r o g e n peroxide

(H2O2)vàgốchydroxyl(OH-).Các dạngoxyphảnứngnàycũngtậptrungphá

hủyADNvàgâyranhữngthayđổibấtlợichotếbào.NOvàcácdạngoxyhoạtđ ộ n g c òncóthểtạot h à n h per ox yn it ra te (ONOO)cóđ ộ c tínhc a o Tổnt h ư ơ n g A D N gâyrabởiSTZlàmt ă n g c ư ờ n g q u á trìnht r ù n g hợpA D P (PolyADP-

r i b o s y l a t i o n ) dẫnđếnlàmmấtNAD+,xahơnnópháhủyATPdựtrữvàsauđóứcchếsựtổnghợpvàtiếtinsulincủatếbàoβ,[47]

OH - ONOO NO Poly(ADP-ribosylation)

NDAdamage

Trang 28

2.1.2 Mẫuđộngvật

Chuộtn h ắ t t r ắ n g (Musm u s c u l u s )c h ủngSwiss4 t u ầ n tuổi( 1 4

-17g)doViệnVệsinhDịchtễTrungư ơ n g c u n g cấp.C h u ộ t đượcn u ô i trongđiềuk i ệ nnhiệtđộphòng22-

25°Cvớichukỳsáng12hvàtối12h,đượcchoănvàuốngn ư ớ c theochếđộănthườngvàănbéo

Hình2.2.TủsấythứcănchochuộtTN ovà chuộtnuôi(béophì,chuẩn)TN o

Trang 29

- Phễuchiết,phễulọc,giấylọc….

Trang 30

hexan,chloroform,ethylacetate cấtdungmôidướiápsuấtgiảmthuđượccáccaophânđoạndịchchiếttươngứng.

Trang 31

Flavonoid Shinoda Mg/HCl Màuđ ỏ, h ồ n g , dacamxuấth i ệ nc h ứ n g tỏ

sựcómặtc ủ a f l a v o n, f l a v o n o l vàc ác dẫn

Trang 32

Diazohoá Diazo Phảnứngchomàudacamlàdươngtính.

Dungdịchkiềm

NaOH 10%

Phảnứ n g cókếtq u ả d ư ơ n g tínhk h i xuấthiệnmàuvàngcam

Acidsulfuric

H2SO410

%

Phảnứngchomầuv à n g đậmc h o t h ấ y sựcómặtcủafavonvàflavonol,mầuđỏha ynâuchothấysựcómặtcủachalconvàauron

Vanilin/HCl Màuđỏs o n xuấthiệnch ứn g tỏsựcómặt

Phảnứngdươngtínhnếucómàuđỏthẫm

VansMayer

HỗnhợpHgCl2+KI Phảnứ n g d ư ơ n g tínhn ế u cókếttủamàutrắng

Trang 33

Chovàomỗicuvert20µlmẫuthử(dungdịchgallicchuẩnởcácnồngđộhoặcdịchchiếtcácphânđoạn)+1,58mlH2O+100µlthuốcthửFolin-

C iocalteaus a u 30giâyđ ế n 8 phútch o t h êm3 0 0 µ l N a2CO3.Đểh ỗ n hợpdungd ịchp

hả nứngtrong2giờở 20oCrồixácđịnhở bướcsóng765nm.Tiếnh ànhđ ị n h lượngacidgallicđểdựngđườngchuẩn

*Địnhlượngphenoliccủamẫunghiêncứubằng

cáchlấy20µl(0,02ml)đểđ ị n h lượngtươngtựnhưđãlàmvớimẫuchuẩnacidgallic

Trang 34

2.2.2.3 Phươngphápsắckílớpmỏng(TLC)

Sắckílớpmỏng(TLC-thinlayerchromatography)làkĩthuậtsắckíkhánhanhgọnvàtiệnlợi.Nógiúpnhậnbiếtcácnhómchấtcótrongmẫunghiêncứu.Phươngphápsắckílớpmỏng,thànhphầntronghỗnhợpđượcxácđịnhnhờsos á c h hệsốlưucủahỗnhợp(Rf)vàhệsốlưucủamộtsốchấtđãbiết[5]

b.Trongđóalàkhoảngdichuyểncủac h ấtnghiêncứu,blàkhoảngdichuyểncủadungmôi

kg(thểtíchvàkhốilượngtốiđachophép).Theodõibiểuhiệnvàsốchuộtchếttrong72hđểđánhgiámứcđộđ ộ c củadịchchiếtcâyCamthảođất

Trang 35

Nhóm2-Nhómnuôibéo:Cácconchuộtđượcchămsócbằngchếđộthứcăng i àul i p i d vàcholes

teroldochúngt ô i p h ốit r ộ n c á c thựcphẩmdinhd ư ỡ n g đượctínhtoánvớithànhphầnnhưbảng2.2

Cácnhómchuộtđượctheodõitrongvòng8tuần,trọnglượngcủacácconc h u ộtđượckiểmtrahàngtuần.Vàotuầncuốicùngthờigianthínghiệm,saukhix á c địnhtrọnglượng,chúngtôitiếnhànhlựa

chọnngẫunhiêntừmỗinhómra10c o n chuột,lấymáutổngsốvàphântíchmộtsốchỉsốlipidmáu.Cácsốliệuđượcthuthậpvàtiếnhànhxửlýthốngkê

Ngày đăng: 13/02/2018, 14:23

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w