Nghiên cứu đặc tính hoá sinh dược của cây cam thảo đất (Scoparia dulcis L.) (LV00645)

1 MỞ ĐẦU 1. Lý do chọn đề tài Do sự phát triển của xã hội hiện nay kéo theo nhịp sống công nghiệp hiện đại của con người, sự không phù hợp về thay đổi lối sống, các chế độ ăn uống mất cân đối dinh dưỡng là nguyên nhân dẫn đến nhiều căn bệnh nguy hiểm như: bệnh đái tháo đường (Diabetes mellitus), bệnh béo phì (Obesity), ung thư, tim mạch. Trong đó đái tháo đường (ĐTĐ) là căn bệnh phát triển nhanh nhất hiện nay của xã hội. Đái tháo đường là một bệnh rối loạn chuyển hóa gây tăng đường huyết mãn tính do thiếu insulin tương đối hay tuyệt đối của tuyến tụy, nếu không kiểm soát tốt sau một thời gian tiến triển kéo dài có thể gây nhiều biến chứng nguy hiểm. Bệnh có tính chất dân tộc, chủng tộc đã và đang trở thành vấn đề mang tính xã hội, bởi sự bùng phát nhanh chóng, mức độ nguy hại đến sức khỏe, tốn kém cho người bệnh và kinh tế cộng đồng. Theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO): năm 1994, thế giới có 98.9 triệu người mắc bệnh đái tháo đường, cuối năm 2002 có khoảng 177 triệu người, con số này đã tăng lên 300 triệu người vào năm 2025. Riêng châu Á, số liệu công bố tại hội nghị đái tháo đường quốc tế tổ chức vào tháng 12 năm 1997 tại Singapo: Năm 1995 châu Á có khoảng 62 triệu người mắc bệnh ĐTĐ, cuối năm 2002 con số này là 89 triệu người. Theo đánh giá của Hiệp hội ĐTĐ quốc tế (IDF) năm 2005 số người mắc bệnh đái tháo đường tại châu Á tăng lên 1.7 lần.WHO đã cảnh báo có thể xuất hiện đại dịch ĐTĐ ở châu Á vào thế kỷ 21 [4], [2]. Việt Nam, năm 1990 tỷ lệ mắc bệnh ĐTĐ ở Hà Nội là 1.2%, Huế là 0.96% và thành phố Hồ Chí Minh là 2.5%, năm 2000 Viện Nội tiết Trung ương điều tra tại khu vực nội thành Hà Nội tỷ lệ ĐTĐ là 4% dân số và 7% ở tuổi > 35 tuổi. Cuộc điều tra do Viện Nội tiết tiến hành năm 2001 tại 4 thành phố Hà Nội, Hải Phòng, Đà Nẵng và thành phố Hồ Chí Minh đã cho thấy tỷ lệ ĐTĐ trong độ tuổi 30- 64 tuổi là 4.9% [4], [2]. Sự gia tăng nhanh chóng tỷ lệ người mắc bệnh làm cho ĐTĐ trở thành một vấn đề lớn cho sức khỏe vì bệnh có tỷ lệ mắc, chết trầm trọng trong quá trình trị 2 liệu lâu dài, đặc biệt là ĐTĐ type 2 một trong những bệnh phổ biến nhất trong bệnh ĐTĐ. ĐTĐ có thể mang nhiều biến chứng nguy hiểm như: biến chứng võng mạc, suy thận, biến chứng mạch máu lớn, tổn thương bàn chân dẫn đến cụt Vì vậy đại đa số người bệnh đều có nhu cầu chữa bệnh một cách an toàn. Mỗi năm nước Mỹ đã phải chi hàng tỉ đô la cho điều trị ĐTĐ bằng các thuốc do tổ chức an toàn thực phẩm và dược phẩm Mỹ phê chuẩn (Food and Drug Aministration - FDA) như: Metformin, Orlistat, Sibutramin, Ephedrin, Fenfluramin. Song hầu hết các thuốc này đều có nguồn gốc tổng hợp, thường có tác dụng phụ và đắt tiền. Trước tình hình đó ủy ban chuyên gia của (WHO) đã khuyến nghị nên sử dụng các thuốc có nguồn gốc thảo dược sẵn có, giá thành rẻ và ít độc tính [4], [2], [23], [39]. Từ thực tế đó, nhằm góp phần tìm kiếm và nghiên cứu thuốc điều trị đái tháo đường và thành phần hóa học cơ bản của cây Cam thảo đất (Scoparia dulcis L. ) trên chuột nhắt gây bệnh ĐTĐ bằng streptozotocin (STZ), chúng tôi quyết định chọn đề tài nghiên cứu “Nghiên cứu đặc tính hóa sinh dược của cây cam thảo đất (Scoparia dulcis L. ) ” 2. Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu đặc tính hóa sinh, tác dụng hạ đường huyết của một số phân đoạn dịch chiết từ cây Cam thảo đất trên mô hình chuột đái tháo đường type 2 thực nghiệm. 3. Nhiệm vụ nghiên cứu 1. Khảo sát sơ bộ thành phần các hợp chất tự nhiên có trong cây Cam thảo đất ( Scoparia dulcis L.) 2. Định lượng polyphenol tổng số theo phương pháp Folin – Ciocalteau. 3. Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết của các phân đoạn dịch chiết cây Cam thảo đất ( Scoparia dulcis L.) trên mô hình chuột ĐTĐ mô phỏng type 2. 3 4. Đóng góp mới của đề tài Đánh giá được khả năng hạ glucose huyết và tác dụng chống rối loạn trao đổi lipid của các phân đoạn dịch chiết từ lá cây cam thảo đất (Scoparia dulcis L.) trên mô hình chuột ĐTĐ mô phỏng type 2. 4 Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Cây Cam thảo đất ( Scoparia dulcis L.) 1.1.1. Thực vật học Cam thảo đất có tên khoa học: Scoparia dulcis L., thuộc Họ Hoa mõm chó (Scrophulariaceae). Thân cỏ nhỏ, mọc thẳng đứng, cao 30-80 cm. Thân tròn, màu xanh, có 4-6 sọc lồi, nhẵn, mang theo cuống lá còn lại. Lá đơn, mọc vòng 3 lá không bằng nhau hay mọc đối (những lá ở dưới), hình mác, đầu hơi nhọn, dài 2,5-4 cm, không có lá kèm. Bìa lá có răng ở 2/3 phía trên, răng cưa tù, không đều, sâu 1-2 mm. Phiến lá kéo dài men dọc theo 2 bên cuống lá, mặt trên sẫm, mặt dưới nhạt. Không có lá kèm. Gân lá hình lông chim lồi ở mặt dưới; 4-5 cặp gân phụ hơi lồi ở mặt dưới. Cuống lá dài 5-7 mm. Cụm hoa mọc riêng rẻ hay thành đôi ở nách lá. Hoa gần đều, lưỡng tính, mẫu 4 đôi khi gặp mẫu 5, màu trắng. Cuống hoa mảnh, dài 4-6 mm, màu xanh. Lá đài 4, rời, đôi khi gặp 5 lá đài, màu xanh, hình bầu dục, dài khoảng 2,5 mm, có 3 gân nổi ở mặt ngoài, mép có lông, tồn tại và đồng trưởng với quả. Cánh hoa 4, dính nhau ở dưới (đôi khi gặp 5) thành ống rất ngắn, màu trắng phớt tím; trên chia thành 4 phiến hình bầu dục, gần như đều nhau, dài khoảng 2 mm, uốn cong ngược ra bên ngoài khi hoa nở, nhiều lông màu trắng, dạng sợi, dài gần bằng nhị đính ở miệng ống tràng. Tiền khai: 1 cánh hoa ở ngoài cùng, 1 cánh ở trong cùng, 2 cánh hoa còn lại xen kẽ nhau. Nhị 4, rời, đính trên miệng ống tràng, xen kẽ cánh hoa; chỉ nhị hình sợi màu trắng, đỉnh hơi tím, dài khoảng 1,5 mm. Bao phấn hình mũi tên, 2ô, đính giữa, hướng trong, khai dọc. Hạt phấn hình bầu dục, có rãnh. 2 lá noãn ở vị trí trước-sau, dính liền thành bầu trên 2 ô, mỗi ô đựng nhiều noãn, đính noãn trung trụ. 1 vòi nhụy dài khoảng 1,5 mm đính ở đỉnh bầu. Đầu nhụy màu xanh, dành điểm có 2 thùy, có chất dính. Quả nang hủy vách, hình cầu, trong chứa nhiều hạt nhỏ màu đen. Hoa thức và Hoa đồ: 5 Đặc điểm giải phẫu: Rễ bần gồm 2-3 lớp tế bào, bị bong, nứt nhiều. Tế bào mô mềm vỏ hình tròn hay bầu dục, xếp tạo những khuyết rất lớn. Nội bì khung Caspary rõ. Trụ bì 1-2 lớp , một vài tế bào bị hóa mô cứng. Libe 2 tế bào bị ép dẹp, vách uốn lượn. Gỗ 2 chiếm tâm. Mô mềm gỗ vách rất dày. Mạch gỗ kích thước lớn, phân bố đều và nhiều hơn ở thân. Tia tủy 1-2 dãy tế bào. Thân: Vi phẫu gần như vuông. Các mô gồm: biểu bì là 1 lớp tế bào xếp đều đặn, cutin có răng cưa, mang lỗ khí và rải rác lông tiết chân đa bào hay đơn bào, đầu đa bào. Ở thân già, 2-3 lớp bần xuất hiện ngay dưới lớp biểu bì. Mô dày góc tập trung ở 4 góc thân, ở cạnh rất ít, thỉnh thoảng gặp sợi trong mô dày. Ở thân già, mô dày ở 4 góc bị hóa mô cứng. Mô mềm vỏ là mô mềm khuyết, 3-6 lớp tế bào hình tròn hay bầu dục, kích thước không đều. Nội bì khung Caspary rõ. Trụ bì 1-2 lớp tế bào, hóa mô cứng riêng lẻ hay thành đám nhỏ. Libe 2-gỗ 2 thành vòng liên tục. Gỗ 1 phân bố đều. Mô mềm gỗ vách rất dày. Tia tủy 1-2 dãy tế bào, vách mỏng hơn mô mềm gỗ. Mô mềm tủy hình tròn, kích thước không đều. Lá: Gân giữa: Lồi rõ ở mặt dưới, mặt trên phẳng. Biểu bì trên và biểu bì dưới tế bào xếp không đều, mang lông tiết chân đa bào và đơn bào, đầu đa bào. Biểu bì dưới mang lỗ khí. Lớp cutin có răng cưa. Dưới biểu bì là 1-2 lớp mô dày góc. Mô mềm tế bào hình cầu, kích thước không đều, xếp chừa những khuyết nhỏ. Các bó libe-gỗ xếp thành hình vòng cung. Phiến lá: biểu bì trên tế bào lớn hơn biểu bì dưới, kích thước 6 không đều, nhiều tế bào nhô lên thành đỉnh nhọn tù. Lông tiết chân ngắn, đầu đa bào và lỗ khí ở cả 2 biểu bì. Lớp cutin có răng cưa cạn. Mô mềm giậu gồm 1 lớp tế bào kích thước không đều. Mô mềm khuyết tế bào vách mỏng, kích thước không đều. 1.1.2. Phân loại, nguồn gốc và phân bố cây Cam thảo đất Phân bố, sinh học và sinh thái: Gốc ở nhiệt đới Châu Mỹ, được thuần hóa trong tất cả các vùng nhiệt đới của thế giới. Ở nước ta, cây mọc khắp nơi từ Bắc vào Nam. Thường gặp trên đất hoang, dọc bờ đường, trên các dải cát của các sông và trong các ruộng khô, ở vùng thấp. 1.1.3. Thành phần hóa học Cây chứa một alcaloid và một chất đắng; còn có nhiều acid silicic và một hoạt chất gọi là amellin. Phần cây trên mặt đất chứa một chất dầu sền sệt, mà trong thành phần có dulciol, scopariol, (+) manitol, glucose. Rễ chứa (+) manitol, tanin, alcaloid, một hợp chất triterpen. Vỏ rễ chứa hexcoxinol,  sitosterol và (+) manitol. 1.1.4. Một số tác dụng Sinh - Dược và công dụng của cây Cam thảo đất Thường dùng trị: cảm cúm, sốt, nóng nhiều, ho khan, ho có đàm. Lỵ trực trùng. Tê phù, phù thủng, giảm niệu. Dùng ngoài, ép lấy dịch từ cây tươi trị mụn nhọt, lở ngứa, eczema. Hoạt chất amellin trong cam thảo đất có thể làm giảm đường máu và các triệu chứng của bệnh đái tháo đường type2, khiến cho quá trình giảm nồng độ đường máu và nước tiểu diễn ra dần dần. Nó còn làm tăng mức dự trữ kiềm bị hạ thấp ở người bệnh nhân và giảm hàm lượng các chất tạo ceton trong máu. 1.2. Giới thiệu về một số hợp chất tự nhiên ở thực vật * Các chất thứ sinh thực vật (plant secondary metabolites) 7 Ở thực vật, ngoài protein, saccarid, lipid, vitamin, còn có những chất khác có vai trò quan trọng trong đổi chất của cây được gọi là các chất thực vật thứ sinh (plant secondary metabolites). Căn cứ vào tính chất hóa học, các hợp chất thực vật thứ sinh được chia thành một số nhóm chính như: nhóm phenolic, nhóm terpen và nhóm alkaloid. Nhiều công trình nghiên cứu gần đây đã cho thấy các hợp chất polyphenol (thuộc nhóm hợp chất phenolic) ngày càng ứng dụng rộng rãi trong điều trị một số bệnh nan y như: ung thư, béo phì, tiểu đường … a. Các hợp chất phenolic từ thực vật Hợp chất phenolic là nhóm các chất khác nhau rất phổ biến trong thực vật. Đặc điểm chung của chúng là trong phân tử có vòng thơm (benzene) mang một, hai hay ba nhóm hydroxyl (-OH) gắn trực tiếp vào vòng benzene. Dựa vào thành phần và cấu trúc người ta chia hợp chất phenolic thành 3 nhóm nhỏ [41]:  Nhóm hợp chất phenolic đơn giản: Trong phân tử chỉ có một vòng benzene và một vài nhóm hydroxyl. Tùy thuộc vào số lượng nhóm OH mà chúng được gọi là các monophenol (phenol), diphenol (pyrocatechin, hydroquynone), triphenol (pyrogalol, oxyhydroquynol…).  Nhóm hợp chất phenolic phức tạp: Trong thành phần cấu trúc phân tử của chúng ngoài vòng thơm benzene (C 6 ) chúng còn có dị vòng, mạch nhánh. Đại diện nhóm này có axid cyamic, axid ceramic.  Nhóm hợp chất phenolic đa vòng: Là nhóm đa dạng nhất trong các hợp chất phenol, có cấu trúc phức tạp do sự liên kết hoặc trùng hợp của các đơn phân. Ngoài gốc phenol còn có các nhóm phụ dị vòng mạch nhánh hoặc đa vòng. Nhóm này có flavonoid, tannin và coumarin. Hợp chất phenolic được hình thành một cách dễ dàng trong tất cả các cơ quan thực vật từ những sản phẩm đường phân và chu trình pentose phosphate qua acid sikimic hay theo con đường acetate manolate qua acetyl – SCoA. Trong số các chất polyphenol tự nhiên, flavonoid là nhóm chất quan trọng nhất vì chúng phổ biến ở hầu hết các loài thực vật và mang nhiều hoạt tính sinh dược học có giá trị. 8 b. Flavonoid Flavonoid là những sắc tố, phần lớn có màu vàng (flavus - nghĩa là màu vàng). Tuy nhiên một số sắc tố khác như xanh, đỏ, tím,…hoặc không màu cũng xếp vào nhóm flavonoid vì chúng có chung đặc điểm cấu tạo. • Cấu tạo hóa học và phân loại Về cấu tạo hóa học, khung cacbon của flavonoid là C 6 - C 3 - C 6 , gồm 15 nguyên tử cacbon, hai vòng benzene A và B nối với nhau qua dị vòng C, trong đó A kết hợp với C tạo khung chroman 9 10 8 5 7 6 2 3 O 1 4 1' 5'6' 4' 3' 2' A C B Flavan (2-phenyl chroman ) Tùy theo mức độ oxy hóa vòng pyran, sự có mặt hay không có mặt của nối đôi giữa C 2 với C 3 và nhóm cacbonyl ở C 4 mà có thể phân biệt flavonoid thành các nhóm phụ sau: Flavon và flavonol, flavanol (đihidro flavon), chalcol, aurol, leucoantoxianidin, catechin, isoflavonoid, rotenoid và neoflavonoid. • Hoạt tính sinh học của flavonoid * Tác dụng chống oxy hóa (antioxidant) Flavonoid có khả năng kìm hãm các quá trình oxy hóa dây truyền gây ra bởi các gốc tự do hoạt động. Tuy nhiên hoạt tính này mạnh hay yếu còn phụ thuộc vào đặc điểm của từng flavonoid cụ thể. Gốc tự do sinh ra trong quá trình sinh lý bình thường của cơ thể hay do tác động bên ngoài là nguyên nhân gây phá hủy ADN, protein, lipid làm phát sinh nhiều bệnh tật nguy hiểm và sự lão hóa cho cơ thể. Flavonoid có bản chất polyphenol nên dễ dàng biến đổi dưới tác động của các enzyme có trong tế bào động, thực vật. Đặc biệt flavonoid có nhóm hyđroxyl ở vị trí ortho dễ dàng bị oxy hóa bởi xúc tác của enzyme polyphenoloxydase và peroxydase tạo semiquynol hoặc quynol [27]. Đây là các gốc tự do bền vững chúng có thể nhận điện tử và trở thành dạng hidroquynol. Bởi vậy các chất này có khả năng phản ứng với các gốc 9 tự do hoạt động và loại chúng ra khỏi cơ thể. Quá trình được tóm tắt qua sơ đồ sau: O 2 + Flavonoid (khử) Flavonoid (oxy hoá) (Hiđroquynol) (semiquynol hoặc quynol) Ngoài ra flavonoid còn có tác dụng bảo vệ các hệ thống sinh học nhờ khả năng tạo phức với các kim loại chuyển tiếp như Fe +2 , Cu +2 … hoạt hóa enzyme chống oxy hóa và ức chế sự oxy hóa. * Tác dụng kháng khuẩn Nhiều công trình nghiên cứu trong nước và thế giới đã chứng tỏ tác dụng chống viêm nhiễm (anti-inflamatory) chống vi khuẩn (anti-bacterial) và virut (antiviral) [5], [12]. * Tác dụng làm bền thành mạch máu Các dẫn xuất đường của flavonoid có hoạt tính của vitamin P như rutin, hesperidin… có tác dụng làm tăng sức bền và tính đàn hồi của thành mao mạch, giảm sức thẩm thấu của hồng cầu qua thành mao mạch. Hoạt tính này được ứng dụng trong chữa trị các rối loạn chức năng tĩnh mạch, giãn hay suy yếu tĩnh mạch, trĩ, rối loạn tuần hoàn tĩnh mạch [21]. * Tác dụng giảm béo phì và lipid máu Theo kết quả nghiên cứu của các nhà khoa học Nhật cho thấy khi chuột béo phì được điều trị bằng dịch chiết giàu flavonoid từ lá Bằng lăng (Lagerstroemia specciosa L.) thì có trọng lượng giảm đáng kể (~ 10% ) [62]. Thí nghiệm tương tự với flavonoid từ lá Kim ngân (Lonicera japonica Thunb.) đối với chuột cống trắng uống cholesterol cũng cho thấy có tác dụng làm giảm các chỉ số cholesterol, triglycerid, LDL-c đồng thời tăng HDL-c [35]. Naringin (C 17 H 32 O 4 ) và hesperidin (C 28 H 34 O 15 ) là những flavonoid có hàm lượng cao trên họ cam chanh (Rutaceae) đã được nhiều nhà nghiên cứu chiết xuất và thử tác Polyphenoloxydase P eroxydase Polyphenoloxyase Peroxydase 10 dụng trên mô hình chuột béo phì cho kết quả tốt trong việc làm hạ các chỉ số lipid máu [36], [40]. * Tác dụng hạ glucose huyết O O OH OH OH OH OH O OH OH OH CH 3 O O O OH OH H 3 OC O O OH OH OH O OH OH OH OH OH Quercetin Hesperidin Epicatechin Một số flavonoid được tách chiết từ nguyên liệu thực vật đã được chứng minh là có tác dụng điều hòa glucose huyết như: Quercetin có trong Đỗ trọng (Eucommia ulmoides Oliver.) [54], Hesperidin và Naringin có trong các cây thuộc họ Rutaceae [39], Genistein và Daidzein có trong Đậu nành (Glycine max L.) [18], Myricetin có trong cây Vông vang (Abelmoschus moschatus) [18]. c. Tannin thực vật Tannin là các hợp chất phenolic có trọng lượng phân tử cao có chứa các nhóm hydroxyl và các nhóm chức khác như có khả năng tạo phức với protein và các phân tử lớn khác trong điều kiện môi trường đặc biệt. Tannin thường là các hợp chất vô định hình, có màu trắng, màu vàng nhạt hoặc gần như không màu, có hoạt tính quang học, vị chát, dễ bị oxy hóa khi đun nóng hay khi để ngoài ánh sáng. Tác dụng sinh học của tannin là chất bảo vệ cây trồng trước sự tấn công của vi sinh vật gây bệnh và côn trùng ăn lá [42], [50]. Trong y học, tannin được sử dụng làm thuốc cầm máu, chữa đi ngoài, ngộ độc kim loại nặng, chữa trĩ, viêm miệng, viêm xoang, điều trị cao huyết áp và đột quỵ [1]. [...]... công thức: Rf = a/b Trong đó a là khoảng di chuyển của chất nghiên cứu, b là khoảng di chuyển của dung môi 2.2.3 Nghiên cứu tác dụng của dịch chiết các phân đoạn cây Cam thảo đất (Scoparia dulcis L) lên trọng lượng và một số chỉ số hóa sinh máu của chuột béo phì thực nghiệm 2.2.3.1 Thử độc tính cấp, xác định LD50 Xác định LD50 của dịch chiết cây Cam thảo đất bằng đường uống theo phương pháp Lorke [49]... Thành phần Tỉ lệ % Hydratcacbon 41 Lipid 32 Protein 20 Cholesterol 1 Chất khoáng 4 Vitamin & acid amin 2 2.2.4 Phương pháp nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết của các phân đoạn dịch chiết cây Cam thảo đất (Scoparia dulcis L) trên mô hình chuột đái tháo đường mô phỏng type 2 Để tìm hiểu tác dụng của dịch chiết cây Cam thảo đất lên đường huyết, trước tiên chúng tôi tiến hành gây mô hình chuột đái tháo... nghiệm định tính và định lượng 3.2 Kết quả khảo sát thành phần các hợp chất tự nhiên có trong các phân đoạn dịch chiết cây Cam thảo đất Nhằm góp phần đánh giá thành phần các hợp chất tự nhiên cơ bản có trong cao các phân đoạn từ dịch chiết cây Cam thảo đất, chúng tôi tiến hành các phản ứng định tính, định lượng và sắc kí lớp mỏng 3.2.1 Định tính một số hợp chất tự nhiên có trong cây Cam thảo đất Sử dụng... PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Mẫu thực vật Cây Cam thảo đất (Scoparia dulcis L) Được thu tại huyện Mê Linh - tỉnh Vĩnh Phúc, do Bộ môn Thực vật học - Trường ĐH Sư phạm Hà Nội 2 phân loại Thời gian thu mẫu: tháng 10/2010 Rửa sạch và tiến hành sấy khô ở 500C sau đó nghiền thành bột mịn Hình 2.1 Hình thái cây Cam thảo đất (Scoparia dulcis L) 24 2.1.2 Mẫu động vật Chuột nhắt trắng... Cao phân đoạn nước Hình 3.1 Mô hình chiết rút các phân đoạn hợp chất tự nhiên từ cây Cam thảo đất [20], [23] 34 Với quy trình chiết rút như trên, chúng tôi thu được hiệu suất chiết rút các phân đoạn hợp chất tự nhiên từ 3000 gam bột mịn cây Cam thảo đất như bảng 3.1 Bảng 3.1 Hiệu suất chiết rút các phân đoạn từ cây Cam thảo đất Mẫu ban Khối khô Hiệu suất chiết rút đầu (g) tuyệt đối (g) (% nguyên liệu... sát thành phần hóa học của cây Cam thảo đất 2.2.2.1 Định tính Cao các phân đoạn được hòa tan trong dung môi thích hợp với từng loại phản ứng định tính Các nhóm phản ứng được trình bày tóm tắt trong bảng sau: Bảng 2.1 Bảng các phản ứng định tính đặc trưng Nhóm hợp chất Flavonoid Phản ứng Shinoda Thuốc Dấu hiệu nhận biết thử Mg/HCl Màu đỏ, hồng, da cam xuất hiện chứng tỏ sự có mặt của flavon, flavonol... hydro của chúng Diazo hoá Dung dịch kiềm Diazo Phản ứng cho màu da cam là dương tính NaOH Phản ứng có kết quả dương tính khi xuất 10% hiện màu vàng cam Phản ứng cho mầu vàng đậm cho thấy sự Acid H2SO 4 có mặt của favon và flavonol, mầu đỏ hay sulfuric 10% nâu cho thấy sự có mặt của chalcon và auron Màu đỏ son xuất hiện chứng tỏ sự có mặt Vanilin/HCl của catechin Vanilin/H2SO4 Phản ứng dương tính nếu... VÀ THẢO LUẬN 3.1 Qui trình tách chiết các phân đoạn từ cây Cam thảo đất Phương pháp chiết có một ảnh hưởng quan trọng đến việc phân lập các hợp chất Để tìm hiểu các thành phần hợp chất tự nhiên có trong cây Cam thảo đất, chúng tôi tiến hành chiết các hợp chất trong các dung môi có độ phân cực tăng dần, n - hexan, chloroform, ethylacetate, nước Quy trình được trình bày trên hình 3.1 sau: 3000g bột cây. .. tiên sau khi sinh Với chuột nhắt có thể nuôi với chế độ dinh dưỡng giàu lượng mỡ sau đó tiêm STZ với liều 50 - 100mg/kg STZ được nhận biết và xâm nhập vào tế bào β qua kênh vận chuyển glucose LLUT2 Hoạt động của nó trong tế bào làm tổn thương và alkyl hóa ADN và cuối cùng dẫn tới hoại tử tế bào Hoạt tính alkyl hóa của STZ do hoạt động của nhóm nitrosourea của nó, đặc biệt là ở vị trí O 6 của guanine... insulin của tế bào β, [47] STZ NO DNA alkylation Aconitase MIT ATP XOD O 2- H2O2 OH- ONOO NO Poly (ADP - ribosylation) NDA damage NAD + ATP Hình… Cơ chế Hình 1.1 Cơ chế gây độc gây tySTZXOD tếxanthinecủa của tụy đảo chuột của ộc của STZ lên tế β oxidase đảo chuột lên – bào bào β tụy MITthể, (MIT – Ty thể, XOD – xanthine oxidase) [47] Chương 2 23 Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên . bản của cây Cam thảo đất (Scoparia dulcis L. ) trên chuột nhắt gây bệnh ĐTĐ bằng streptozotocin (STZ), chúng tôi quyết định chọn đề tài nghiên cứu Nghiên cứu đặc tính hóa sinh dược của cây cam. dược của cây cam thảo đất (Scoparia dulcis L. ) ” 2. Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu đặc tính hóa sinh, tác dụng hạ đường huyết của một số phân đoạn dịch chiết từ cây Cam thảo đất trên mô hình. 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Cây Cam thảo đất ( Scoparia dulcis L. ) 1.1.1. Thực vật học Cam thảo đất có tên khoa học: Scoparia dulcis L. , thuộc Họ Hoa mõm chó (Scrophulariaceae). Thân cỏ nhỏ,