3.5. Tác dụng hạ glucose huyết của cây Cam thảo đất trên mô hình chuột đái tháo đường type 2
3.5.1. Kết quả tạo mô hình chuột đái tháo đường type 2 thực nghiệm
Với nguyên tắc kết hợp giữa chế độ ăn béo trong thời gian dài và tiêm màng bụng STZ (pha trong đệm Citrat 0,01M, pH 4,5) với liều đơn 110 mg/kg thể trọng, chúng tôi đã thành công trong việc gây ĐTĐ type 2 thực nghiệm. Kết quả được trình bày trong bảng 3.8 và có so sánh với các lô chuột chỉ ăn thường tiêm STZ, chuột thường và chuột béo chỉ tiêm đệm (Citrat 0,01M, pH 4,5).
Bảng 3.8. Nồng độ glucose huyết lúc đói của các lô chuột trước và sau khi tiêm STZ
Các lô chuột Nồng độ glucose huyết (mmol/l) Trước khi tiêm Sau khi tiêm 72 giờ
Chuột thường tiêm đệm 6.5 ± 0.66 6.56 ± 0.68
Chuột thường tiêm STZ (110mg/ kg) 6.82 ± 0.79 6.93 ± 0.79 Chuột béo phì tiêm đệm 7.74 ± 0.61 7.86 ± 0.54 Chuột béo phì tiêm STZ (110mg/ kg) 8.2 ± 0.64 21.3 ± 0.33 p < 0.00001
Ghi chú: p: là mức ý nghĩa so với thời điểm trước khi tiêm; mỗi giá trị thể hiện trong bảng và hình là trung bình của 6 con chuột.
Nhận xét:
- Giữa chuột béo và chuột thường có tăng nhẹ về mức glucose huyết (trước khi tiêm). Với số liệu trên chúng tôi xác định được mức glucose ở chuột nuôi chế độ ăn béo trong thời gian 8 tuần có mức glucose huyết tăng 19% so với chuột thường. Điều này chứng tỏ, những rối loạn về chuyển hóa lipid rất dễ dẫn đến rối loạn chuyển hóa glucid. Các quá trình chuyển hóa trong cơ thể luôn có mối quan hệ biện chứng chặt chẽ.
- Với liều tiêm 110mg/kg thể trọng, nồng độ glucose huyết của chuột thường tiêm STZ không khác một cách có ý nghĩa so với nồng độ glucose huyết của chuột thường tiêm đệm (tương ứng là 6.56mmol/l và 6.93mmol/l, p>0.05).
- Không thấy có sự khác nhau ở nồng độ glucose huyết lúc đói giữa chuột thường tiêm đệm và chuột béo phì tiêm đệm (tương ứng là 6.56mmol/l và 7.86mmol/l, mức ý nghĩa p > 0.1).
- Ở lô béo phì tiêm STZ, nồng độ glucose huyết tăng một cách rõ rệt so với các lô thường và so với trước khi tiêm. Nồng độ glucose huyết của các con chuột béo sau tiêm STZ 72 giờ là 21.3mmol/l. Kết quả thu được phù hợp với nghiên cứu của GS.TSKH Đỗ Ngọc Liên và cộng sự (2006), Phùng Thanh Hương, Trần Thị Chi Mai và nhiều nghiên cứu khác [18], [20], [21] khi tiến hành gây ĐTĐ bằng STZ trên mô hình chuột béo, đều có glucose huyết tăng cao trên 18mmol/l.
Điều này chứng tỏ: hiện tượng cơ chế béo phì, rối loạn trao đổi lipid khi bi nhiễm chất độc vào cơ thể (chuột béo phì nhiễm chất độc STZ từ xạ khuẩn Streptomyces achromogens) sẽ chuyển sang trạng thái đái tháo đường type 2 bền vững, khó phục hồi ( Lenzen, S. 2008) [47].
6.5 6.56 6.82 6.93 7.74 7.86 8.2 21.3
0 5 10 15 20 25
1 2 3 4
Trước khi tiêm Sau khi tiêm
1 - Chuột thường tiêm đệm 2 - Chuột thường tiêm STZ (100mg/1kg) 3 - Chuột béo phì tiêm đệm 4 - Chuột béo phì tiêm STZ (100mg/1kg) Hình.3.5. Nồng độ glucose huyết lúc đói của các lô chuột thí nghiệm trước và
sau khi tiêm 72 giờ
Hiện nay, có rất nhiều mô hình ĐTĐ mô phỏng type 2, như mô hình ĐTĐ di truyền, chuột thường ĐTĐ, nhưng mô hình chuột béo phì ĐTĐ vẫn được ưa chuộng nhất bởi vì nó nhiều đặc điểm bệnh lý giống với ĐTĐ type 2 ở người [47], [62], [64]. Tuy nhiên, khả năng gây đái tháo đường type 2 ở chuột tuỳ thuộc nhiều yếu tố như dòng chuột lựa chọn thời gian và chế độ nuôi béo, liều tiêm STZ. Nhiều công trình khác nhau công bố về hiệu quả mô hình này [18], [21], [54], [47], [49], [53], [56], [57], [60], [64].
Qua tham khảo và thử nghiệm chúng tôi thấy rằng: Đối với dòng chuột chủng Swiss, để có thể gây ĐTĐ với hiệu suất cao cần có thời gian nuôi béo dài hơn thông thường từ 4- 6 tuần, kết hợp với tiêm STZ liều thấp. Căn cứ vào liều STZ gây ĐTĐ type 2 ở chuột cống của Reed và cộng sự (thường 50mg/kg thể trọng), chúng tôi thấy rằng ở chuột nhắt trắng cần tiêm liều cao hơn thông thường từ 90 – 120mg/kg thể trọng. Kế thừa những nghiên cứu
Glucose huyết lúc đói (mmol/l) mmol/l
trước đây [17], [18], [23]…, chúng tôi quyết định chọn tiêm liều 110mg/kg thể trọng. Với liều tiêm như vậy, chúng tôi đã đạt được hiệu suất gây đái tháo đường là 85% chuột có đường huyết ≥ 18mmol/l.
Lô chuột thường tiêm STZ với liều như trên, nồng độ glucose huyết lúc đói có tăng nhẹ sau khi tiêm nhưng nhanh chóng trở về mức bình thường (nồng độ glucose lúc đói trước và sau 72 giờ tiêm tương ứng 6.82 và 6.93 mmol/l). Đối với lô chuột béo phì tiêm STZ nồng độ glucose sau 72 giờ tiêm tăng một cách rõ rệt (từ 8.2 mmol/l trước khi tiêm lên 21.3 mmol/l sau khi tiêm 72 giờ).
Chúng tôi nhận thấy phần lớn những con chuột càng béo có khả năng bị đái tháo đường càng, điều này phù hợp với nghiên cứu của Reed - chế độ nuôi béo ảnh hưởng rõ rệt đến khả năng gây ĐTĐ. Từ đó cho thấy có một mối liên hệ chặt chẽ giữa hiện tượng béo phì, nhiễm độc lipid máu, nhiễm độc hóa chất (mà ở đây là STZ) và hiện tượng kháng insulin [60]. Việc nuôi béo phì đơn thuần hay tiêm STZ liều thấp đơn thuần ít có khả năng dẫn đến hiện tượng kháng insulin và ĐTĐ type 2. Từ kết quả trên, có thể suy luận là: những người béo phì, rất nhạy cảm với các chất độc từ môi trường (STZ là một đại diện tiêu biểu trong thí nghiệm), dễ phát triển bệnh ĐTĐ type 2. Đây có thể là tác dụng cộng gộp giữa nhiễm độc lipid máu và hóa chất độc từ môi trường bên ngoài.
Kết quả thử nghiệm gây ĐTĐ với liều 110mg/kg thể trọng đã góp phần làm phong phú và hoàn thiện hơn nữa mô hình ĐTĐ của chúng tôi. Từ đó đưa ra được quy trình gây ĐTĐ sử dụng cho nghiên cứu sau này.