Tạp chí Khoa học 2011:17b 232239 Trường Đại học Cần Thơ232XÁC ĐỊNH TÍNH CHỐNG OXY HÓA CỦA VITAMIN C VÀMỘT SỐ CAO ETHANOL THÔ CHIẾT TỪ THỰC VẬTBẰNG PHƯƠNG PHÁP FERRIC THIOCYANATE (FTC)Trần Thị Bé Lan và Lê Thanh Phước1ABSTRACTCrude ethanolic extracts of corkroot bark, fighaulm bark, and areca seed were used todetermine antioxidation activity by Ferric Thiocyanate Method (FTC), and ascorbic acidwas used as a standard agent. The results show that the antioxidation activity of ascorbicacid is (88.09 ± 0.27) %, corkroot bark crude ethanolic extract is (41.99 ± 0.07) %,fighaulm bark crude ethanolic extract is (36.65 ± 0.07) %, and areca seed crudeethanolic extract is (79.16 ± 0.13) %. Comparing the obtained result with theantioxidation activity of vitamin C and standard ascorbic acid reveals the deviation of+8.37 %. Antioxidation activity results using DPPH (α,αdiphenylβpicrylhydrazyl)method show that the antioxidation activity percent of ascorbic acid, corkroot, fighaulm, and areca seed crude ethanolic extracts in DPPH system by different SC50 values(μgmL) are (91.0 ± 0.3) % by 9.37 (μgmL), (77.9 ± 0.3) % by 32.28 (μgmL), (82.9 ±0.3) % by 27.3 (μgmL), and (89.9 ± 0.2) % by 25.83 (μgmL), respectively. Compared tothe DPPH method, the results from FTC method indicate that the deviation of ascorbicacid is +2.06 %, corkroot bark is +25.09 %, fighaulm bark is +32.70 %, and arecaseed is +7.59 %.Keywords: Cork tree root, figtree haulm, areca seed, Ferric Thiocyanate, oleic acid,antioxidant activityTitle: Determination of antioxidation activity of vitamin C and some vegetable crudeethanolic extracts by Ferric Thiocyanate method (FTC)TÓM TẮTDịch chiết ethanol thô từ vỏ rễ bần, vỏ thân sung, và hạt cau được dùng để xác định khảnăng chống oxy hóa bằng phương pháp Ferric Thiocyanate (FTC) với acid ascorbic đượcdùng làm chất chuẩn. Kết quả cho thấy hoạt tính chống oxy hóa của acid ascorbic là(88,09 ± 0,27) %, cao ethanol vỏ rễ cây bần là (41,99 ± 0,07) %, vỏ thân sung là (36,65 ±0,07) %, và hạt cau là (79,16 ± 0,13) %. So sánh kết quả đạt được với kết quả chống oxyhóa của vitamin C với acid ascorbic chuẩn cho thấy độ lệch là 8,37 %. Kết quả xác địnhhoạt tính chống oxy hóa theo phương pháp DPPH (α,αdiphenylβpicrylhydrazyl) chothấy phần trăm hoạt tính chống oxy hóa của acid ascorbic, cao ethanol thô vỏ rễ bần, vỏthân sung, hạt cau trên hệ DPPH ở các giá trị SC50 (μgmL) khác nhau lần lượt là (91,0± 0,3) % ở 9,37 (μgmL), (77,9 ± 0,3) % ở 32,28 (μgmL), (82,9 ± 0,3) % ở 27,3 (μgmL),và (89,9 ± 0,2) % ở 25,83 (μgmL). Đối chiếu kết quả chống oxy hóa của phương phápFTC với phương pháp DHHP cho thấy độ sai lệch của acid ascorbic là 2,06 %, vỏ rễ câybần là 25,09 %, vỏ thân cây sung là 32,7 %, và hạt quả cau là 7,59 %.Từ khóa: rễ bần, thân sung, hạt cau, Ferric Thiocyanate, acid oleic, hoạt tính chống oxy hóa1 Khoa Khoa học Tự nhiên, Trường Đại học Cần ThơTạp chí Khoa học 2011:17b 232239 Trường Đại học Cần Thơ2331 ĐẶT VẤN ĐỀCây bầnSonneratiaceae caseolaris (L.), họ bần (Sonneratiaceae) nay là họ trânchâu (Lythraceae), cây sungFicus racemosa, họ dâu tằm (Moraceae), câycauAreca catechu L., họ Cau (Arecaceae) (Penpun et al., 2006), là 3 loài thực vậtkhá phổ biến ở miền Nam, Việt Nam, đặc biệt là ở đồng bằng sông Cửu Long. Tuyba loài cây này được dùng làm thuốc chữa bệnh theo phương pháp dân gian kháphổ biến nhưng hiệu quả chống oxy hóa chưa được quan tâm nhiều. Chính vì vậy,việc xác định hoạt tính chống oxy hóa tự nhiên của 3 loại cây này là rất cần thiếtvà quan trọng cho sự thay thế chất chống oxy hóa tổng hợp, giúp cân bằng hệthống chống oxy hóa bên trong và ngoài cơ thể.Có nhiều phương pháp khác nhau để xác định hoạt tính chống oxy hóa. Trong bàinghiên cứu này, hoạt tính chống oxy hóa được xác định bằng phương pháp FerricThiocyanate (FTC) với acid oleic thay acid linoleic cho sự hình thànhhydroperoxide (Hoàng Kim Anh, 2005 và Olga and Eiji, 2003).2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP2.1 Chuẩn bị nguyên liệuNguyên liệu là vỏ rễ bần, vỏ thân sung, hạt cau được thu hái, sau đó rửa sạch, loạibỏ tạp, cắt nhỏ và phơi khô trong bóng râm. Nguyên liệu sau khi phơi khô đượcxay nhỏ và ngâm trong cồn tuyệt đối. Sau đó chiết lấy cao và đem cô quay chânkhông. Nguyên liệu sau khi cô quay chân không đem trữ vào tủ lạnh cho đến khisử dụng (Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007)2.2 Điều chế cao ethanol thôCác bước điều chế ethanol thô từ vỏ rễ bần, vỏ thân sung và hạt trái cau như sau: Vỏ rễ bần (2700 g) chiết kiệt với 3 lít cồn 95° cô quay 72 g cao kýhiệu cao EtOH (I). Vỏ thân sung (3800 g) chiết kiệt với 3 lít cồn 95° cô quay 76 g cao ký hiệu cao EtOH (II). Hạt trái cau (2650 g) chiết kiệt với 3 lít cồn 95° cô quay 86 g cao kýhiệu cao EtOH (III).2.3 Phương pháp nghiên cứuHoạt tính chống oxy hóa được xác định bằng phương pháp Ferric Thiocyanate(FTC) và α,αdiphenylβpicrylhydrazyl (DPPH). Thực nghiệm bằng phương phápFerric Thiocyanate FTC. Các số liệu được xử lý và trình bày dưới dạng bảng biểuvà biểu đồ trên phần mềm Microsoft Excel.Trong khảo nghiệm này, hydroperoxide sinh ra bởi acid oleic thêm vào hỗn hợpphản ứng bị oxy hóa bởi không khí và nhiệt độ kèm trong thời gian thử nghiệmđược đo gián tiếp. Sắt (II) clorua và ammonium thiocyanate phản ứng với nhau đểtạo ra ferric thiocyanate (màu đỏ) nhờ hydroperoxide. Hỗn hợp thí nghiệm gồm có:0,1 mL mẫu chất chống oxy hóa, 1 mL acid oleic 200 mgmL, 5 mL đệm phosphat0,04 M; 5 mL EtOH 75%, 2 mL nước cất và giữ ở 45°C, trong bóng tối. Hỗn hợpnày cũng được chuẩn bị thêm phản ứng không có acid oleic để làm đối chứng. SauTạp chí Khoa học 2011:17b 232239 Trường Đại học Cần Thơ234mỗi 24h lấy ra 1 mL mẫu, thêm 5 mL EtOH 75%, 0,5 mL NH4SCN 30%, 0,5 mLFeCl2 0,02M trong HCl 3,5% tương ứng. Sau khi mẫu có màu đỏ, độ hấp thu đượcđo ngay lập tức ở bước sóng 500 nm (Trần Thị Việt Hoa et al., 2007). Sử dụngethanol để hiệu chỉnh máy quang phổ về vạch 0.Quá trình được thực hiện theo sơ đồ ở hình 1 (Akito Nagatsu, 2004).Hình 1: Sơ đồ phương pháp FTC3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN3.1 Kết quả xác định tính chống oxy hóa bằng phương pháp FTCAcid oleic và acid linoleic là 2 acid béo không no dễ bị oxy hóa sinh ra cáchydroperoxide. Vì vậy, qui trình tiến hành được thay đổi bằng cách sử dụng acidloeic thay cho acid linoleic của phương pháp FTC (Kikuzaki và Nakatani, 1993 vàKikuzaki et al., 2002) nhằm giảm kinh phí thực hiện và phù hợp điều kiện phòngthí nghiệm. Thực hiện theo qui trình chỉnh sửa vẫn thu được kết quả độ hấp thucủa mẫu có vitamin C, cao ethanol vỏ rễ bần, cao ethanol vỏ thân sung, và caoethanol hạt cau lần lượt được thể hiện trong các bảng 1, 2, 3 và 4. Độ hấp thu tổnghợp của 5 mẫu theo ngày ở bước sóng 500 nm được thể hiện trong bảng 5 và hình2. Độ hấp thu tổng hợp của 4 mẫu theo nồng độ ở bước sóng 500 nm được thể hiệntrong bảng 6 và hình 3. Phần trăm chống oxy hóa của 4 mẫu theo nồng độ được thểhiện trong bảng 7 và hình 4.Tạp chí Khoa học 2011:17b 232239 Trường Đại học Cần Thơ235Bảng 1: Độ hấp thu của mẫu có vitamin CNgàyNồng độ (mgmL) 0 10 20 40 602 0,348 0.174 0.342 0.424 0.3274 0,517 0.247 0.418 0.441 0.3576 0,974 0.751 0.526 0.318 0.1168 0,462 0.595 0.794 0.73 0.713Bảng 2: Độ hấp thu của mẫu có cao ethanol vỏ rễ bầnNgàyNồng độ (mgmL) 0 10 20 40 602 0,348 0,278 0,267 0,250 0,2554 0,517 0,282 0,277 0,266 0,2616 0,974 0,734 0,669 0,603 0,5658 0,462 0,848 0,732 0,726 0,643Bảng 3: Độ hấp thu của mẫu có cao ethanol vỏ thân sungNgàyNồng độ (mgmL) 0 10 20 40 602 0,348 0,255 0,253 0,295 0,2204 0,517 0,376 0,213 0,293 1,0356 0,974 0,765 0,725 0,662 0,6178 0,462 0,802 0,812 0,801 0,738Bảng 4: Độ hấp thu của mẫu có cao ethanol hạt cauNgàyNồng độ (mgmL) 0 10 20 40 602 0,348 0,194 0,257 0,247 0,2304 0,517 0,302 0,255 0,244 0,2386 0,974 0,497 0,325 0,224 0,2038 0,462 0,560 0,468 0,450 0,442Bảng 5: Độ hấp thu tổng hợp của 5 mẫu theo ngày ở bước sóng 500 nmChất chống oxy hóaNgàyĐối chứngAVitamin CAEtOH (I)AEtOH (II)AEtOH (III)A2 0,348 0,174 0,278 0,255 0,1944 0,517 0,247 0,282 0,376 0,3026 0,974 0,751 0,634 0,765 0,4978 0,462 0,595 0,848 0,802 0,560 Chú thích: EtOH (I): cao ethanol vỏ rễ bần, EtOH (II): cao ethanol vỏ thân sung, EtOH (III): cao ethanol hạt tráicau.Tạp chí Khoa học 2011:17b 232239 Trường Đại học Cần Thơ236Hình 2: Độ hấp thu theo ngàyNhư thể hiện trên hình 2, theo thời gian (ngày), mẫu đối chứng đạt hư hỏng nhanhhơn (độ hấp thu cực đại) vào ngày thứ 6.Bảng 6: Độ hấp thu tổng hợp của 4 mẫu theo nồng độ ở bước sóng 500 nmChất chống oxy hóaC (mgmL)Vitamin CAEtOH (I)AEtOH (II)AEtOH (III)A10 0,751 0,734 0,765 0,49720 0,526 0,669 0,725 0,32540 0,318 0,603 0,662 0,22460 0,116 0,565 0,617 0,203 Chú thích: EtOH (I): cao ethanol vỏ rễ bần, EtOH (II): cao ethanol vỏ thân sung, EtOH (III): cao ethanol hạt tráicau.Hình 3: Độ hấp thu theo nồng độNhư thể hiện trên hình 3, nồng độ chất chống oxy hóa càng cao thì khả năng chốngoxy hóa càng mạnh trong hệ acid oleic.Tạp chí Khoa học 2011:17b 232239 Trường Đại học Cần Thơ237Bảng 7: Phần trăm chống oxy hóa của 4 mẫu theo nồng độChất chống oxy hóaC (mgmL)Vitamin C % EtOH (I)%EtOH (II)%EtOH (III)%10 22,90 24,64 21,46 48,9720 46,00 31,31 25,56 66,6340 67,35 38,09 32,03 77,0060 88,09 41,99 36,65 79,16SD (%) 0,27 0,07 0,07 0,13 Chú thích: EtOH (I): cao ethanol vỏ rễ bần, EtOH (II): cao ethanol vỏ thân sung, EtOH (III): cao ethanol hạt tráicau.Chú thích: 1: Vitamin C, 2: EtOH (I), 3: EtOH (II), 4: EtOH (III).Hình 4: Phần trăm chống oxy hóa theo nồng độNhư thể hiện trên hình 4, phần trăm chống oxy hóa tăng theo nồng độ và tăngnhanh nhất là trường hợp 1 (Vitamin C).3.2 Kết quả xác định tính chống oxy hóa bằng phương pháp DPPHCác mẫu có biểu hiện khả năng bẫy các gốc tự do SC% ≥ 50% (dương tính) sẽđược thử nghiệm tiếp để tìm giá trị SC50 (SC50 là % hoạt động của chất chống oxyhóa theo nồng độ (µgmL) trung hòa 50% gốc tự do DPPH) (Philip Molyneux,2004).Kết quả xác định hoạt tính chống oxy hóa của các cao chiết được thể hiện trongbảng 8. Theo bảng 8, khả năng bẫy gốc tự do của mẫu cao tinh chế (vitamin C) caonhất ở nồng độ 50 (µgmL) và 3 mẫu cao chiết có khả năng bẫy gốc tự do ở nồngđộ 200 (µgmL). Vì vậy, nồng độ để trung hòa 50% gốc tự do DPPH của vitaminC thấp hơn chục lần so với các mẫu cao chiết.Tạp chí Khoa học 2011:17b 232239 Trường Đại học Cần Thơ238Bảng 8: Kết quả xác định hoạt tính chống oxy hóa của các cao chiếtSTT Kí hiệu mẫu Nồng độ mẫu(gmL) SC%SC50(gmL) Kết quả1 Chứng (+) 50 86,09 ± 0,4 13,85 Dương tính2 Chứng () 0,00 ± 0,0 Âm tính3 Cao tinh chế 50 91,00 ± 0,3 9,37 Dương tính4 PhướcLanRắn (I) 200 77,90 ± 0,3 32,28 Dương tính5 PhướcLanRắn (II) 200 82,90 ± 0,3 27,30 Dương tính6 PhướcLanRắn (III) 200 89,90 ± 0,2 25,83 Dương tính Chú thích: Cao tinh chế là Vitamin C, chứng (+) cũng là Vitamin C. PhướcLanRắn (I): cao ethanol vỏ rễ bần,Phước LanRắn (II): cao ethanol vỏ thân sung, Phước LanRắn (III): cao ethanol hạt cau.Kết quả so sánh giá trị vitamin C chuẩn giữa 2 phương pháp được thể hiện trongbảng 9. Kết quả cho thấy hoạt tính chống oxy hóa của vitamin C đã được xác địnhbằng phương pháp DPPH với % chống oxy hóa rất cao (99,93 %) và kết quả nàyphù hợp với kết quả nghiên cứu của Deore et al. (2009).Kết quả so sánh giá trị % chống oxy hóa các cao chiết giữa 2 phương pháp đượcthể hiện trong bảng 10. Theo bảng 10, % chống oxy hóa của các mẫu theo phươngpháp FTC thấp hơn so với phương pháp DPPH và vitamin C luôn cao hơn các mẫucao chiết ở cả 2 phương pháp.Bảng 9: So sánh giá trị vitamin C chuẩn giữa 2 phương phápPhương pháp DPPH Phương pháp FTC SD (%)Nồng độ (mgmL) 60 60%Chống oxy hóa 99,93 % 88,09 % 8,37Bảng 10: So sánh giá trị % chống oxy hóa các cao chiết giữa 2 phương phápPhương pháp DPPH Phương pháp FTC SD (%)Cao tinh chế 91,0 % 88,09 % 2,06PhướcLanRắn (I) 77,9 % 41,99 % 25,39PhướcLanRắn (II) 82,9 % 36,65 % 32,07PhướcLanRắn (III) 89,9 % 79,16 % 7,59 Chú thích: Cao tinh chế là Vitamin C.Từ các kết quả và thảo luận ở trên cho thấy bước đầu thực hiện nên phương phápcó sự sai lệch rất lớn so với phương pháp DPPH. Vì vậy, nếu muốn khẳng địnhchính xác độ lệch và khả năng ứng dụng của phương pháp thực hiện thì cần phảicó những nghiên cứu sâu hơn ở những điều kiện nhiệt độ, nồng độ mẫu khác nhau.4 KẾT LUẬNTừ kết quả thu được của bài nghiên cứu này, một số kết luận có thể rút ra như sau: Có thể dùng acid oleic thay cho acid linoleic trong phương pháp ferricthiocyanate (FTC).
Tạp chí Khoa học 2011:17b 232-239 Trường Đại học Cần Thơ XÁC ĐỊNH TÍNH CHỐNG OXY HĨA CỦA VITAMIN C VÀ MỘT SỐ CAO ETHANOL THÔ CHIẾT TỪ THỰC VẬT BẰNG PHƯƠNG PHÁP FERRIC THIOCYANATE (FTC) Trần Thị Bé Lan Lê Thanh Phước1 ABSTRACT Crude ethanolic extracts of cork-root bark, fig-haulm bark, and areca seed were used to determine antioxidation activity by Ferric Thiocyanate Method (FTC), and ascorbic acid was used as a standard agent The results show that the antioxidation activity of ascorbic acid is (88.09 ± 0.27) %, cork-root bark crude ethanolic extract is (41.99 ± 0.07) %, fig-haulm bark crude ethanolic extract is (36.65 ± 0.07) %, and areca seed crude ethanolic extract is (79.16 ± 0.13) % Comparing the obtained result with the antioxidation activity of vitamin C and standard ascorbic acid reveals the deviation of +8.37 % Antioxidation activity results using DPPH (α,α-diphenyl-β-picrylhydrazyl) method show that the antioxidation activity percent of ascorbic acid, cork-root, fighaulm, and areca seed crude ethanolic extracts in DPPH system by different SC50 values (μg/mL) are (91.0 ± 0.3) % by 9.37 (μg/mL), (77.9 ± 0.3) % by 32.28 (μg/mL), (82.9 ± 0.3) % by 27.3 (μg/mL), and (89.9 ± 0.2) % by 25.83 (μg/mL), respectively Compared to the DPPH method, the results from FTC method indicate that the deviation of ascorbic acid is +2.06 %, cork-root bark is +25.09 %, fig-haulm bark is +32.70 %, and areca seed is +7.59 % Keywords: Cork tree root, fig-tree haulm, areca seed, Ferric Thiocyanate, oleic acid, antioxidant activity Title: Determination of antioxidation activity of vitamin C and some vegetable crude ethanolic extracts by Ferric Thiocyanate method (FTC) TÓM TẮT Dịch chiết ethanol thô từ vỏ rễ bần, vỏ thân sung, hạt cau dùng để xác định khả chống oxy hóa phương pháp Ferric Thiocyanate (FTC) với acid ascorbic dùng làm chất chuẩn Kết cho thấy hoạt tính chống oxy hóa acid ascorbic (88,09 ± 0,27) %, cao ethanol vỏ rễ bần (41,99 ± 0,07) %, vỏ thân sung (36,65 ± 0,07) %, hạt cau (79,16 ± 0,13) % So sánh kết đạt với kết chống oxy hóa vitamin C với acid ascorbic chuẩn cho thấy độ lệch 8,37 % Kết xác định hoạt tính chống oxy hóa theo phương pháp DPPH (α,α-diphenyl-β-picrylhydrazyl) cho thấy phần trăm hoạt tính chống oxy hóa acid ascorbic, cao ethanol thô vỏ rễ bần, vỏ thân sung, hạt cau hệ DPPH giá trị SC50 (μg/mL) khác (91,0 ± 0,3) % 9,37 (μg/mL), (77,9 ± 0,3) % 32,28 (μg/mL), (82,9 ± 0,3) % 27,3 (μg/mL), (89,9 ± 0,2) % 25,83 (μg/mL) Đối chiếu kết chống oxy hóa phương pháp FTC với phương pháp DHHP cho thấy độ sai lệch acid ascorbic 2,06 %, vỏ rễ bần 25,09 %, vỏ thân sung 32,7 %, hạt cau 7,59 % Từ khóa: rễ bần, thân sung, hạt cau, Ferric Thiocyanate, acid oleic, hoạt tính chống oxy hóa Khoa Khoa học Tự nhiên, Trường Đại học Cần Thơ 232 Tạp chí Khoa học 2011:17b 232-239 Trường Đại học Cần Thơ ĐẶT VẤN ĐỀ Cây bần-Sonneratiaceae caseolaris (L.), họ bần (Sonneratiaceae) họ trân châu (Lythraceae), sung-Ficus racemosa, họ dâu tằm (Moraceae), cau-Areca catechu L., họ Cau (Arecaceae) (Penpun et al., 2006), loài thực vật phổ biến miền Nam, Việt Nam, đặc biệt đồng sông Cửu Long Tuy ba loài dùng làm thuốc chữa bệnh theo phương pháp dân gian phổ biến hiệu chống oxy hóa chưa quan tâm nhiều Chính vậy, việc xác định hoạt tính chống oxy hóa tự nhiên loại cần thiết quan trọng cho thay chất chống oxy hóa tổng hợp, giúp cân hệ thống chống oxy hóa bên ngồi thể Có nhiều phương pháp khác để xác định hoạt tính chống oxy hóa Trong nghiên cứu này, hoạt tính chống oxy hóa xác định phương pháp Ferric Thiocyanate (FTC) với acid oleic thay acid linoleic cho hình thành hydroperoxide (Hoàng Kim Anh, 2005 Olga and Eiji, 2003) NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Chuẩn bị nguyên liệu Nguyên liệu vỏ rễ bần, vỏ thân sung, hạt cau thu hái, sau rửa sạch, loại bỏ tạp, cắt nhỏ phơi khơ bóng râm Nguyên liệu sau phơi khô xay nhỏ ngâm cồn tuyệt đối Sau chiết lấy cao đem cô quay chân không Nguyên liệu sau cô quay chân không đem trữ vào tủ lạnh sử dụng (Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007) 2.2 Điều chế cao ethanol thô Các bước điều chế ethanol thô từ vỏ rễ bần, vỏ thân sung hạt trái cau sau: - Vỏ rễ bần (2700 g) chiết kiệt với lít cồn 95° cô quay 72 g cao ký hiệu cao EtOH (I) - Vỏ thân sung (3800 g) chiết kiệt với lít cồn 95° quay 76 g cao ký hiệu cao EtOH (II) - Hạt trái cau (2650 g) chiết kiệt với lít cồn 95° quay 86 g cao ký hiệu cao EtOH (III) 2.3 Phương pháp nghiên cứu Hoạt tính chống oxy hóa xác định phương pháp Ferric Thiocyanate (FTC) α,α-diphenyl-β-picrylhydrazyl (DPPH) Thực nghiệm phương pháp Ferric Thiocyanate FTC Các số liệu xử lý trình bày dạng bảng biểu biểu đồ phần mềm Microsoft Excel Trong khảo nghiệm này, hydroperoxide sinh acid oleic thêm vào hỗn hợp phản ứng bị oxy hóa khơng khí nhiệt độ kèm thời gian thử nghiệm đo gián tiếp Sắt (II) clorua ammonium thiocyanate phản ứng với để tạo ferric thiocyanate (màu đỏ) nhờ hydroperoxide Hỗn hợp thí nghiệm gồm có: 0,1 mL mẫu chất chống oxy hóa, mL acid oleic 200 mg/mL, mL đệm phosphat 0,04 M; mL EtOH 75%, mL nước cất giữ 45°C, bóng tối Hỗn hợp chuẩn bị thêm phản ứng khơng có acid oleic để làm đối chứng Sau 233 Tạp chí Khoa học 2011:17b 232-239 Trường Đại học Cần Thơ 24h lấy mL mẫu, thêm mL EtOH 75%, 0,5 mL NH4SCN 30%, 0,5 mL FeCl2 0,02M HCl 3,5% tương ứng Sau mẫu có màu đỏ, độ hấp thu đo bước sóng 500 nm (Trần Thị Việt Hoa et al., 2007) Sử dụng ethanol để hiệu chỉnh máy quang phổ vạch Quá trình thực theo sơ đồ hình (Akito Nagatsu, 2004) Hình 1: Sơ đồ phương pháp FTC KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết xác định tính chống oxy hóa phương pháp FTC Acid oleic acid linoleic acid béo khơng no dễ bị oxy hóa sinh hydroperoxide Vì vậy, qui trình tiến hành thay đổi cách sử dụng acid loeic thay cho acid linoleic phương pháp FTC (Kikuzaki Nakatani, 1993 Kikuzaki et al., 2002) nhằm giảm kinh phí thực phù hợp điều kiện phòng thí nghiệm Thực theo qui trình chỉnh sửa thu kết độ hấp thu mẫu có vitamin C, cao ethanol vỏ rễ bần, cao ethanol vỏ thân sung, cao ethanol hạt cau thể bảng 1, 2, Độ hấp thu tổng hợp mẫu theo ngày bước sóng 500 nm thể bảng hình Độ hấp thu tổng hợp mẫu theo nồng độ bước sóng 500 nm thể bảng hình Phần trăm chống oxy hóa mẫu theo nồng độ thể bảng hình 234 Tạp chí Khoa học 2011:17b 232-239 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 1: Độ hấp thu mẫu có vitamin C Ngày/Nồng độ (mg/mL) 10 20 40 60 0,348 0,517 0,974 0,462 0.174 0.247 0.751 0.595 0.342 0.418 0.526 0.794 0.424 0.441 0.318 0.73 0.327 0.357 0.116 0.713 Bảng 2: Độ hấp thu mẫu có cao ethanol vỏ rễ bần Ngày/Nồng độ (mg/mL) 10 20 40 60 0,348 0,278 0,267 0,250 0,255 0,517 0,282 0,277 0,266 0,261 0,974 0,734 0,669 0,603 0,565 0,462 0,848 0,732 0,726 0,643 Bảng 3: Độ hấp thu mẫu có cao ethanol vỏ thân sung Ngày/Nồng độ (mg/mL) 10 20 40 60 0,348 0,517 0,974 0,462 0,255 0,376 0,765 0,802 0,253 0,213 0,725 0,812 0,295 0,293 0,662 0,801 0,220 1,035 0,617 0,738 Bảng 4: Độ hấp thu mẫu có cao ethanol hạt cau Ngày/Nồng độ (mg/mL) 10 20 40 60 0,348 0,517 0,974 0,462 0,194 0,302 0,497 0,560 0,257 0,255 0,325 0,468 0,247 0,244 0,224 0,450 0,230 0,238 0,203 0,442 Bảng 5: Độ hấp thu tổng hợp mẫu theo ngày bước sóng 500 nm Chất chống oxy hóa Đối chứng Ngày A 0,348 0,517 0,974 0,462 Vitamin C EtOH (I) A A 0,174 0,247 0,751 0,595 0,278 0,282 0,634 0,848 EtOH (II) A EtOH (III) A 0,255 0,376 0,765 0,802 0,194 0,302 0,497 0,560 * Chú thích: EtOH (I): cao ethanol vỏ rễ bần, EtOH (II): cao ethanol vỏ thân sung, EtOH (III): cao ethanol hạt trái cau 235 Tạp chí Khoa học 2011:17b 232-239 Trường Đại học Cần Thơ Hình 2: Độ hấp thu theo ngày Như thể hình 2, theo thời gian (ngày), mẫu đối chứng đạt hư hỏng nhanh (độ hấp thu cực đại) vào ngày thứ Bảng 6: Độ hấp thu tổng hợp mẫu theo nồng độ bước sóng 500 nm Chất chống oxy hóa C (mg/mL) 10 20 40 60 Vitamin C A 0,751 0,526 0,318 0,116 EtOH (I) A EtOH (II) A EtOH (III) A 0,734 0,669 0,603 0,565 0,765 0,725 0,662 0,617 0,497 0,325 0,224 0,203 * Chú thích: EtOH (I): cao ethanol vỏ rễ bần, EtOH (II): cao ethanol vỏ thân sung, EtOH (III): cao ethanol hạt trái cau Hình 3: Độ hấp thu theo nồng độ Như thể hình 3, nồng độ chất chống oxy hóa cao khả chống oxy hóa mạnh hệ acid oleic 236 Tạp chí Khoa học 2011:17b 232-239 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 7: Phần trăm chống oxy hóa mẫu theo nồng độ Chất chống oxy hóa C (mg/mL) 10 20 40 60 SD (%) Vitamin C % EtOH (I) % EtOH (II) % EtOH (III) % 22,90 46,00 67,35 88,09 0,27 24,64 31,31 38,09 41,99 0,07 21,46 25,56 32,03 36,65 0,07 48,97 66,63 77,00 79,16 0,13 * Chú thích: EtOH (I): cao ethanol vỏ rễ bần, EtOH (II): cao ethanol vỏ thân sung, EtOH (III): cao ethanol hạt trái cau *Chú thích: 1: Vitamin C, 2: EtOH (I), 3: EtOH (II), 4: EtOH (III) Hình 4: Phần trăm chống oxy hóa theo nồng độ Như thể hình 4, phần trăm chống oxy hóa tăng theo nồng độ tăng nhanh trường hợp (Vitamin C) 3.2 Kết xác định tính chống oxy hóa phương pháp DPPH Các mẫu có biểu khả bẫy gốc tự SC% ≥ 50% (dương tính) thử nghiệm tiếp để tìm giá trị SC50 (SC50 % hoạt động chất chống oxy hóa theo nồng độ (µg/mL) trung hòa 50% gốc tự DPPH) (Philip Molyneux, 2004) Kết xác định hoạt tính chống oxy hóa cao chiết thể bảng Theo bảng 8, khả bẫy gốc tự mẫu cao tinh chế (vitamin C) cao nồng độ 50 (µg/mL) mẫu cao chiết có khả bẫy gốc tự nồng độ 200 (µg/mL) Vì vậy, nồng độ để trung hòa 50% gốc tự DPPH vitamin C thấp chục lần so với mẫu cao chiết 237 Tạp chí Khoa học 2011:17b 232-239 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 8: Kết xác định hoạt tính chống oxy hóa cao chiết STT Kí hiệu mẫu Chứng (+) Chứng (-) Cao tinh chế Phước-Lan-Rắn (I) Phước-Lan-Rắn (II) Phước-Lan-Rắn (III) Nồng độ mẫu (g/mL) SC% SC50 (g/mL) Kết 50 50 200 200 200 86,09 ± 0,4 0,00 ± 0,0 91,00 ± 0,3 77,90 ± 0,3 82,90 ± 0,3 89,90 ± 0,2 13,85 9,37 32,28 27,30 25,83 Dương tính Âm tính Dương tính Dương tính Dương tính Dương tính * Chú thích: Cao tinh chế Vitamin C, chứng (+) Vitamin C Phước-Lan-Rắn (I): cao ethanol vỏ rễ bần, Phước Lan-Rắn (II): cao ethanol vỏ thân sung, Phước Lan-Rắn (III): cao ethanol hạt cau Kết so sánh giá trị vitamin C chuẩn phương pháp thể bảng Kết cho thấy hoạt tính chống oxy hóa vitamin C xác định phương pháp DPPH với % chống oxy hóa cao (99,93 %) kết phù hợp với kết nghiên cứu Deore et al (2009) Kết so sánh giá trị % chống oxy hóa cao chiết phương pháp thể bảng 10 Theo bảng 10, % chống oxy hóa mẫu theo phương pháp FTC thấp so với phương pháp DPPH vitamin C cao mẫu cao chiết phương pháp Bảng 9: So sánh giá trị vitamin C chuẩn phương pháp Nồng độ (mg/mL) %Chống oxy hóa Phương pháp DPPH Phương pháp FTC 60 60 99,93 % 88,09 % SD (%) 8,37 Bảng 10: So sánh giá trị % chống oxy hóa cao chiết phương pháp Cao tinh chế Phước-Lan-Rắn (I) Phước-Lan-Rắn (II) Phước-Lan-Rắn (III) Phương pháp DPPH Phương pháp FTC SD (%) 91,0 % 77,9 % 82,9 % 89,9 % 88,09 % 41,99 % 36,65 % 79,16 % 2,06 25,39 32,07 7,59 * Chú thích: Cao tinh chế Vitamin C Từ kết thảo luận cho thấy bước đầu thực nên phương pháp có sai lệch lớn so với phương pháp DPPH Vì vậy, muốn khẳng định xác độ lệch khả ứng dụng phương pháp thực cần phải có nghiên cứu sâu điều kiện nhiệt độ, nồng độ mẫu khác KẾT LUẬN Từ kết thu nghiên cứu này, số kết luận rút sau: - Có thể dùng acid oleic thay cho acid linoleic phương pháp ferric thiocyanate (FTC) 238