Đề tài nghiên cứu liên cầu khuẩn trên đàn lợn

Bệnh liên cầu khuẩn ở lợn đã được biết đến từ lâu nhưng trước đây chưa được quan tâm nhiều vì bệnh xảy ra lác đác và ít thấy lây nhiễm sang người. Trong những năm gần đây bệnh được biết đến và quan tâm vì khả nămg lây nhiễm sang người và ngày càng có chiều hướng gia tăng, đặc biệt là những người thường xuyên tiếp xúc với lợn và sản phẩm từ lợn như người chăn nuôi, công nhân giết mổ, người ăn sản phẩm sống từ lợn, …. Qua nghiên cứu ở Newzealand, khi xét nghiệm mẫu máu của công nhân giết mổ lợn thì phát hiện 28% số người trong đó có kháng thể với liên cầu khuẩn. Ở nước ta tuy chưa có nghiên cứu nào cụ thể về tỷ lệ này, nhưng tính từ đầu năm 2010 đến tháng 92010 thì cả nước có 43 trường hợp người mắc bệnh liên cầu khuẩn phải nhập viện, trong đó 10 người đã tử vong. Đây là một con số rất đáng lo ngại, gây hoang mang tới tâm lý cũng như sức khoẻ của cộng đồng.

ra giải pháp phù hợp.

Thực hiện Nghị quyết 13 Đảng bộ thành phố, Hải Phòng đang đẩy nhanh tiếntrình chuyển dịch cơ cấu kinh tế nhằm công nghiệp hoá hiện đại hoá nông nghiệpnông thôn Trong đó ngành chăn nuôi nói chung, chăn nuôi lợn nói riêng được coi làngành sản xuất hàng hoá quan trọng nhất và được chú trọng đầu tư phát triển khôngngừng cả về số lượng và chất lượng (tổng đàn lợn hiện nay khoảng 600.000 con, vớinhiều giống nhập ngoại và lai cho năng suất và chất lượng thịt tốt) Tuy nhiên trongnhững năm gần đây, tình hình dịch bệnh trên đàn lợn có nhiều diễn biến phức tạp,

nhiều dịch bệnh xảy ra gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi như: Bệnh Lở mồmlong móng, Tai xanh, Dịch tả lợn và Liên cầu khuẩn,

Liên cầu khuẩn gây bệnh cho lợn có tên Streptococcus suis là một trongnhững loại vi sinh vật gây bệnh ở lợn làm tổn thất lớn về kinh tế Lợn có thể bịnhiễm vi khuẩn ở bất kỳ tuổi nào với tỷ lệ mang trùng cao đến 80% tuỳ theo điềukiện chăn nuôi và cao nhất ở nhóm tuổi sau cai sữa từ 4 đến 10 tuần tuổi Tỷ lệ mắcbệnh lâm sàng phụ thuộc vào tác nhân môi trường như không đủ thông thoáng, mật

độ đàn cao và các stress khác: xáo trộn đàn, vận chuyển lợn, … Bệnh được truyềntrực tiếp từ con mẹ mang trùng cho lợn con, từ lợn con này lại truyền cho lợn conmẫn cảm khác khi nhập đàn hoặc nhốt chung Các biểu hiện bệnh lý của lợn baogồm viêm màng não, viêm khớp, viêm phổi, nhiễm trùng huyết, viêm nội tâm mạc,các ổ áp xe

Nguồn thực phẩm cung cấp từ những con lợn mắc bệnh liên cầu khuẩn khôngđảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm Thịt và phủ tạng của những con vật mắc bệnhnày đều có thể mang mầm bệnh và là nguy cơ làm lây nhiễm bệnh liên cầu khuẩnsang người

Bệnh liên cầu khuẩn ở lợn đã được biết đến từ lâu nhưng trước đây chưađược quan tâm nhiều vì bệnh xảy ra lác đác và ít thấy lây nhiễm sang người Trongnhững năm gần đây bệnh được biết đến và quan tâm vì khả nămg lây nhiễm sangngười và ngày càng có chiều hướng gia tăng, đặc biệt là những người thường xuyêntiếp xúc với lợn và sản phẩm từ lợn như người chăn nuôi, công nhân giết mổ, người

ăn sản phẩm sống từ lợn, … Qua nghiên cứu ở Newzealand, khi xét nghiệm mẫumáu của công nhân giết mổ lợn thì phát hiện 28% số người trong đó có kháng thểvới liên cầu khuẩn Ở nước ta tuy chưa có nghiên cứu nào cụ thể về tỷ lệ này, nhưngtính từ đầu năm 2010 đến tháng 9/2010 thì cả nước có 43 trường hợp người mắcbệnh liên cầu khuẩn phải nhập viện, trong đó 10 người đã tử vong Đây là một con

số rất đáng lo ngại, gây hoang mang tới tâm lý cũng như sức khoẻ của cộng đồng

Chính vì vậy bệnh liên cầu khuẩn không chỉ là mối quan tâm, lo ngại của mộtvài quốc gia đơn lẻ mà là mối lo ngại cho cả cộng đồng thế giới Do hiệu quả điềutrị bằng kháng sinh cũng như hiệu quả tiêm phòng bằng vác-xin chưa cao nên

những hiểu biết cơ bản về bệnh rất quan trọng trong chăm sóc, bảo vệ sức khỏe củađàn lợn và sức khỏe cộng đồng, hạn chế thiệt hại kinh tế do bệnh gây ra

Từ thực tế đó chúng tôi triển khai nghiên cứu nhiệm vụ: “Điều tra liên cầu khuẩn (Streptoccocus suis) và đề xuất một số phác đồ phòng và trị bệnh trên đàn lợn ở Hải phòng”.

II TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới.

Bệnh do Liên cầu khuẩn được coi là một bệnh nguy hiểm vì gây tổn thất lớn

cho ngành chăn nuôi và lây lan sang người, gây ảnh hưởng lớn đến sức khoẻ củacộng đồng Vì vậy mà trên thế giới đã có nhiều công trình nghiên cứu vềStreptococcus như cấu trúc, hình thái, các yếu tố gây độc, kháng nguyên, cơ chế gâybệnh của vi khuẩn để từ đó tìm ra những biện pháp phòng, trị bệnh có hiệu quả, đặcbiệt trong việc sản xuất vac-xin phòng bệnh

Bệnh đã được nghiên cứu từ những thập kỷ đầu của thế kỷ 20 ở Châu Âu vàBắc Mỹ với nhiều dạng bệnh khác nhau

Ở Hoa kỳ năm 1937, Newson lần đầu tiên phân lập được liên cầu khuẩn(Streptocosis suis) trong ổ apxe ở vùng cổ của lợn

Ở Hà Lan năm 1951, Jansen và Van Dorsen phát hiện ổ dịch ở lợn do liên cầukhuẩn với biểu hiện nhiễm trùng huyết, viêm họng và viêm khớp,…

Ở Canada năm 1984, Erickson đã nghiên cứu bệnh viêm đa khớp, bệnh viêm

cơ tim và viêm vòm họng ở lợn do liên cầu khuẩn

Takamatsu và cs (2002) đã nghiên cứu về các yếu tố gây độc và kháng

nguyên của vi khuẩn cho rằng Suilysin là một yếu tố gây dung huyết, có khả năng

gây tổn thương tế bào và làm tăng khả năng xâm nhập của vi khuẩn

Năm 2002 Winterhoff và các cộng sự đã xác định được 2 protein bề mặt vikhuẩn có kích thước 47 kDa và 53 kDa Hai protein này có vai trò trong việc giúp vikhuẩn tồn tại ở độ pH thấp, tăng sức đề kháng của vi khuẩn

Theo Tuomanen (1996) và nhóm nghiên cứu của Nizet (1997), đa số các vikhuẩn gây độc trong não bộ thuộc liên cầu khuẩn nhóm B (như Streptococcuspneumoniae và E.coli) có cơ chế xâm nhập và gây bệnh bằng cách tiếp xúc, thâm

nhập qua tổ chức gian bào, đồng thời làm tăng tính thẩm thấu của các mao mạch.

Thí nghiệm in vitro cho thấy tác động của chúng tương tự nhau trên các tế bào nội

mạc của lợn và của người Tuy vậy, các tế bào của lợn mẫn cảm hơn dòng tế bàocủa người Nếu vi khuẩn xâm nhiễm thành công chúng có thể gây viêm màng não ở

cả lợn và người (Vanier và cs 2004)

Ở Trung Quốc, ổ dịch lợn do liên cầu khuẩn lợn thuộc tuýp 2 xảy ra ở tỉnh TứXuyên từ cuối tháng 6/2005 đến đầu tháng 8/2005 gây thiệt hại lớn cho ngành chănnuôi và làm cho 214 người bị nhiễm liên cầu khuẩn lợn, gây tử vong 44 người

2 Tình hình nghiên cứu trong nước.

Từ những năm 1960 - 1961, Hoàng Tuấn Lộc và Lê Văn Phan đã phát hiệnbệnh liên cầu khuẩn kết hợp với bệnh tụ huyết trùng gây hội chứng viêm phổi, thốiloét da thịt làm chết và phải huỷ bỏ hơn 2000 lợn tại trại lợn Cần Thị - Hà Tây cũ

Năm 1981 - 1983, Võ Tiến Thoại, Khương Bích Ngọc đã nghiên cứu các ổdịch viêm đường hô hấp, nhiễm trùng huyết ở lợn do liên cầu khuẩn ở Hà Nội, HàTây cũ, Nam Hà

Năm 1979, Nguyễn Danh Ngô, Phạm Sỹ Lăng, Lê Hồng Căn đã xác nhận ổdịch lợn viêm phổi và viêm phúc mạc có mủ ở trại lợn giống Cầu Diễn, trại chănnuôi Mễ Hạ (Hà Nội) là do liên cầu khuẩn và tụ cầu vàng gây ra

Năm 1979 1985, Chi cục Thú y Hà Nội phối hợp với Bộ môn Vi trùng Viện thú y điều tra bệnh liên cầu khuẩn ở lợn các cơ sở chăn nuôi tập trung thuộccác huyện ngoại thành với các hội chứng: viêm đường hô hấp, nhiễm trùng huyết và

-đã chế tạo một loại autovacxin và canh khuẩn (Bacterin) phòng bệnh cho lợn

Năm 2007 bệnh liên cầu khuẩn ở lợn xảy ra ở các tỉnh Miền Bắc, Miền Trungnước ta, làm 42 người nhiễm bệnh với triệu chứng sốt cao, viêm phổi, viêm màngnão, gây tử vong 03 người

* Ở Hải Phòng: Đến nay chưa có nghiên cứu nào cụ thể về sự lưu hành của

vi khuẩn Streptococcus suis, khả năng gây bệnh, độc lực của vi khuẩn cũng nhưthực trạng bệnh do liên cầu khuẩn gây ra ở đàn lợn trên địa bàn thành phố

III SỰ CẦN THIẾT PHẢI THỰC HIỆN NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI.

Bệnh liên cầu khuẩn do Streptoccocus suis xảy ra ở những nơi nuôi lợn trên

khắp thế giới Lợn có thể bị nhiễm vi khuẩn ở bất kỳ tuổi nào Khả năng nhiễm và

gây bệnh của vi khuẩn ở lợn con cao hơn ở lợn trưởng thành Streptoccocus suis típ

2 gây ra nhiều ổ dịch viêm màng não lợn con 10 – 14 ngày sau cai sữa Gần đây,bệnh hay xảy ra ở lợn sau cai sữa chăn nuôi tập trung với mật độ cao Tỷ lệ mangtrùng ở lợn cao đến 80% và cao nhất ở nhóm tuổi sau cai sữa từ 4 đến 10 tuần tuổi

Tỷ lệ chết tùy thuộc vào lứa tuổi của đàn, tình trạng vệ sinh chuồng trại và các biệnpháp can thiệp Tuy nhiên với điều kiện thực tế chăn nuôi ở nước ta: vệ sinh chuồngtrại kém, sự hiểu biết về căn bệnh và biện pháp chữa trị còn hạn chế thì tỷ lệ chết dobệnh là không nhỏ, gây thiệt hại lớn cho ngành và người chăn nuôi

Hơn thế nữa, bệnh có thể lây nhiễm sang người chăn nuôi, người bán thịt lợn

và công nhân giết mổ lợn, người tiêu dùng qua vết thương xây sát trên da khi tíêpxúc với lợn và sản phẩm từ lợn mắc bệnh Bệnh thường gây ra viêm màng não,nhiễm trùng huyết kèm theo viêm khớp, nội võng mạc và viêm tắc mạch máu Khichữa trị khỏi thì rất dễ để lại những biến chứng như điếc, mù mắt Tỉ lệ tử vong ởngười 7 - 18%

Hiện tại, chưa có biện pháp đặc hiệu để phòng viêm não do nhiễm

Streptoccocus suis típ 2 ở lợn con đang bú sữa Do đó khả năng để xảy ra dịch bệnh

trên đàn lợn, gây thiệt hại lớn về kinh tế và làm lây nhiễm sang người, gây ảnhhưởng nghiêm trọng đến sức khoẻ và tính mạng con người là rất lớn

Vì vậy, nghiên cứu và xác định tỷ lệ nhiễm Streptoccocus suis trên đàn lợn là mộtvấn đề cấp thiết để từ đó xây dựng các kế hoạch phòng chống bệnh do liên cầu khuẩngây ra, làm giảm thiệt hại về kinh tế và ngăn ngừa khả năng lây nhiễm sang người

IV MỤC TIÊU CỦA NHIỆM VỤ

- Điều tra tình hình bệnh do liên cầu khuẩn, xác định tỷ lệ mang trùng trênđàn lợn nuôi tại Hải Phòng

- Xây dựng một số phác đồ phòng và trị bệnh liên cầu khuẩn cho đàn lợn nuôitrên địa bàn thành phố Hải Phòng

V PHẠM VI, QUI MÔ NGHIÊN CỨU

- Thu thập thông tin, tài liệu có liên quan đến bệnh liên cầu khuẩn và biệnpháp phòng và điều trị bệnh.

- Triển khai 400 phiếu điều tra, đánh giá tình hình, xác định tỷ lệ nhiễm bệnh

do liên cầu khuẩn ở đàn lợn nuôi tại Hải Phòng theo phiếu điều tra mẫu

- Lấy 135 mẫu dịch mũi lợn, dịch họng gửi Viện Thú y Quốc gia xét nghiệmkiểm tra sự lưu hành của vi khuẩn Streptococus suis

- Làm kháng sinh đồ, đưa ra một số phác đồ phòng và trị bệnh liên cầu khuẩn

ở lợn

- Địa điểm thực hiện: xã Tân Viên, An Thái huyện An Lão; xã Lê Lợi, HồngPhong huyện An Dương; Xã Tân Phong, Tú Sơn huyện Kiến Thuỵ của thành phốHải Phòng và phòng thí nghiệm Viện Thú y Quốc gia - Hà Nội

VI ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

- Vi khuẩn Streptococcus

- Đàn lợn tại một số huyện của thành phố Hải Phòng

- Mẫu dịch mũi, dịch họng của lợn

VII NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

1

Thu thập thông tin, tài liệu: qua sách báo, tài liệu,

phỏng vấn chuyên gia

Chuyên đề 1: Thực trạng bệnh liên cầu khuẩn trên đàn lợn của Hải Phòng

Đánh giá tình hình bệnh liên cầu khuẩn qua mẫu

phiếu điều tra:

- Tỷ lệ nhiễm bệnh

- Lứa tuổi nhiễm bệnh

- Phương thức lây nhiễm

- Triệu chứng

2 Lấy 135 mẫu dịch mũi, dịch họng của lợn gửi

Viện Thú y Quốc gia xét nghiệm kiểm tra sự lưu

hành của vi khuẩn Streptococus suis:

- Tỷ lệ mang trùng

- Sự lưu hành của vi khuẩn

Chuyên đề 2: Kết quảphân lập, xác định sự lưuhành của vi khuẩnStreptococcus suis trênđàn lợn nuôi tại Hải

IIX PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Phương pháp thu thập thông tin

- Thu thập thông tin qua các tài liệu, sách, báo có liên quan

- Lấy ý kiến các chuyên gia: Phỏng vấn trực tiếp hoặc gián tiếp qua văn bản

Phương pháp điều tra

- Xây dựng 01 mẫu phiếu điều tra với 31 chỉ tiêu

- Triển khai 400 phiếu điều tra

- Phương pháp điều tra: dựa theo phương pháp điều tra dịch tễ học củaNguyễn Như Thanh (2001) Cán bộ điều tra đến từng hộ chăn nuôi phỏng vấn theomẫu phiếu, thu thập đầy đủ các chỉ tiêu trong mẫu phiếu

Phương pháp lấy mẫu:

- Cố định lợn, dùng tăm bông lấy mẫu ngoáy vào xoang mũi lợn để lấy dịchmũi hoặc cuống họng để lấy dịch họng, cho mẫu dịch vừa lấy vào ống đựng dungdịch bảo quản mẫu Bảo quản mẫu trong hộp bảo ôn, gửi lên Viện Thú y Quốc giaxét nghiệm

Phương pháp xét nghiệm:

Phương pháp nuôi cấy, phân lập và giám định vi khuẩn: Các phương phápnuôi cấy và giám định vi khuẩn được thực hiện theo quy trình nghiên cứu thườngquy của Viện Thú y, Cục thú y, FAO, Carter G.R (1995)

- Nuôi cấy phân lập: Mẫu sau khi thu thập về được nuôi cấy trên các môitrường thông thường, môi trường giám định đặc hiệu như: Môi trường nước thịt,môi trường thạch thường, môi trường thạch máu, v.v

Căn cứ vào đặc tính mọc trên môi trường thông thường, môi trường phân lập

và giám định đặc hiệu để chọn riêng các loại khuẩn lạc, nuôi cấy riêng để tiến hànhxác định Các loại vi khuẩn sau khi được phân lập và xác định được nuôi cấy, giữgiống cho các thí nghiệm tiếp theo

Qui trình xét nghiệm phân lập vi khuẩn tại Bộ môn Vi trùng – Viện Thú y

Mẫu bệnh phẩm



Nuôi cấy trong các môi trường:

Nước thịt, thạch máu, thạch thường



Phân lập, thuần khiết khuẩn lạc trên các môi trường thích hợp

 Nhuộm Gram kiểm tra hình thái

- Môi trường nước thịt thường: Vi khuẩn hình thành hạt hoặc những bông rồilắnh xuống đáy ống Vì vậy sau 24 giờ nuôi cấy, môi trường trong, đáy ống nghiệm

có cặn

- Môi trường thạch máu: Bao quanh khuẩn lạc là một vòng tan máu hoàn toàntrong suốt có bờ rõ ràng (Liên cầu thuộc týp này gọi là liên cầu dung huyết nhómbêta, độc lực của vi khuẩn nhóm này cao)

- Môi trường thạch thưòng: Vi khuẩn hình thành khuẩn lạc dạng S, khuẩn lạcnhỏ, tròn, lồi, bóng, màu hơi xám

* Giám định vi khuẩn

- Kiểm tra hình thái vi khuẩn từ môi trường nuôi cấy:

Lấy que cấy chấm vào khuẩn lạc trên đĩa thạch rồi hoà vào giọt nước sinh lýtrên phiến kính hoặc lấy 1 vòng que cấy canh trùng đã nuôi cấy vi khuẩn giàn mỏngtrên phiến kính, để khô, rồi cố định tiêu bản trên ngọn lửa đèn cồn

Tiêu bản sau khi đã được cố định, nhuộm bằng phương pháp Gram Xem tiêubản vật kính dầu 100X: Liên cầu khuẩn có hình cầu, bắt màu Gram dương (màutím), xếp thành chuỗi

+ Giám định khả năng lên men đường glucose, lactose, sinh H2S:

Dùng thạch nghiêng chế từ Kligler: Thạch màu đỏ có 2 phần: phần thạchđứng bên dưới để kiểm tra khả năng lên men đường glucose, sinh hơi, sinh H2S,phần thạch nghiêng để kiểm tra khả năng lên men đường lactose

Lấy khuẩn lạc nghi ngờ cấy thẳng (chính giữa phần thạch đứng) sâu xuốngđáy ống nghiệm, rút dần que lên cấy tiếp trên bề mặt nghiêng, nuôi cấy ở 370C trongđiều kiện hiếu khí.

Kiểm tra sau 24 giờ nuôi cấy: vi khuẩn lên men đường Lactose nên mặtnghiêng có màu vàng, lên men đường Glucose làm môi trường ở phần thạch đứng(phần chân ống) có màu vàng Vi khuẩn Streptococcus không sinh H2S nên đáy ốngnghiệm không có màu đen

+ Khả năng sinh Indol:

Cấy khuẩn lạc nghi ngờ vào môi trường nước thịt peptone, nuôi cấy ở 370C.Kiểm tra sau 24 giờ nuôi cấy: nhỏ dung dịch Kowac vào môi trường, lắc nhẹ, vòngmàu đỏ không xuất hiện phía trên (tại nơi tiếp giáp giữa thuốc thử và môi trường(Phản ứng âm tính)

+ Phản ứng đông vón huyết tương: Lấy máu thỏ chế huyết tương Lấy khuẩnlạc điển hình làm phản ứng với huyết tương thỏ Phản ứng âm tính khi không cóhiện tượng đông vón huyết tương

Phương pháp thử kháng sinh đồ

Theo phương pháp của Kirby- Bauer (1966)

Các chủng vi khuẩn phân lập được cấy vào môi trường nước thịt BHI, bồidưỡng ở 370C/ 24giờ Chuẩn bị thạch BHI trên đĩa, để tủ ấm 10-20 phút trước khidùng Lấy 0,1-0,2 ml canh khuẩn cần kiểm tra, nhỏ vào đĩa thạch và láng cho đều,sau đó để đĩa thạch từ 3-5 phút cho khô nhưng không để quá 25 phút Sau đó dùng

panh đặt và ấn nhẹ các đĩa giấy đã tẩm các loại kháng sinh đặt cách nhau khoảng 15

mm Sau khi đặt các đĩa giấy trên mặt thạch trong vòng 15 phút, lật úp đĩa thạch vàđặt vào tủ ấm 37oC

Đọc kết quả sau 16-18 giờ bằng cách đo đường kính vòng vô khuẩn

Kết quả được đánh giá:

- Đường kính trung bình của vòng vô khuẩn từ 20 mm trở lên, vi khuẩn đạttiêu chuẩn rất mẫn cảm với thuốc

- Đường kính trung bình của vòng vô khuẩn từ 15 - 19 mm, vi khuẩn đạt tiêuchuẩn mẫn cảm trung bình với thuốc

- Đường kính trung bình của vòng vô khuẩn từ 10 - 14 mm, vi khuẩn ít mẫncảm với thuốc.

Bảng tiêu chuẩn đánh giá kết quả đường kính vòng vô khuẩn:

Số thứ tự Loại kháng sinh

kiểm tra

Đường kính vòng vô khuẩn

(mm) Kháng

IX Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA NHIỆM VỤ

1 Hiệu quả kinh tế - kỹ thuật

Khi nghiên cứu và đưa ra được phác đồ phòng và điều trị giúp người chănnuôi giảm chi phí do việc điều trị bệnh, và chi phí do điều trị không hiệu quả, đồnglàm giảm tỷ lệ lợn chết, giảm thiệt hại về kinh tế, góp phần làm tăng đàn lợn trênđịa bàn thành phố

2 Hiệu quả xã hội

+ Cung cấp một nguồn thực phẩm dồi dào có chất lượng cho nhu cầu tiêu

dùng trong nước và xuất khẩu

+ Không gây hoang mang và tạo niềm tin trong nhân dân khi có bệnh dịchxảy ra

+ Tạo công ăn việc làm, nâng cao thu nhập cho người nông dân

+ Cải thiện môi trường đầu tư từ bên ngoài vào thành phố trong thời kỳ hộinhập kinh tế quốc tế

+ Ngăn ngừa khả năng lây nhiễm sang người

3 Khả năng ứng dụng của nhiệm vụ

Phòng và trị bệnh liên cầu khuẩn cho đàn lợn, hạn chế thấp nhất thiệt hại dodịch bệnh gây ra đang là vấn đề cấp thiết cho các hộ, cơ sở chăn nuôi lợn tại các địaphương của Hải Phòng Do đó kết quả nghiên cứu của nhiệm vụ sớm được triểnkhai ứng dụng rộng rãi vào các địa phương của Hải Phòng và khu vực

X ĐỊA ĐIỂM THỰC HIỆN

Để nghiên cứu thực trạng lợn bệnh liên cầu khuẩn ở lợn trên địa bàn thànhphố Hải Phòng, chúng tôi tiến hành điều tra 400 phiếu (theo phiếu điều tra tự thiếtkế) trên địa bàn huyện An Lão, An Dương, Kiến Thụy - là 3 huyện điển hình, có sốlượng chăn nuôi lợn lớn của thành phố Hải Phòng

PHẦN 2: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

1 THU THẬP THÔNG TIN

Qua thu thập thông tin từ Viện Thú y Quốc gia, trung tâm chẩn đoán Thú yTrung ương, những nghiên cứu trong và ngoài nước về vi khuẩn Streptococcus vàbệnh liên cầu khuẩn ở lợn Ban chủ nhiệm nhiệm vụ đã thu được những kết quả sau:

1 Vi khuẩn Streptococcus

Liên cầu khuẩn là những vi khuẩn hình cầu, bầu dục, xếp thành chuỗi dàingắn khác nhau Trong tự nhiên, liên cầu khuẩn có ở khắp nơi: đất, nước, không khí,

có cả trong cơ thể gia súc và người Trên cơ thể động vật và người, liên cầu khuẩnthường ký sinh trên da, niêm mạc đường tiêu hoá, hô hấp

Hình thái vi khuẩn:

Streptococcus là loại vi khuẩn hình cầu hoặc bầu dục, bắt màu Gram(+),không di động, thường đứng thành chuỗi từ hai vi khuẩn trở lên Chiều dài củachuỗi tuỳ thuộc vào môi trường nuôi cấy:

- Trong bệnh phẩm, vi khuẩn đứng thành chuỗi ngắn, thường có từ 2- 8 đơnvị

- Nếu nuôi cấy trong môi trường lỏng, vi khuẩn hình thành chuỗi dài Ví dụ:Streptococcus agalactiae và Streptococcus equi có chuỗi từ 10-100 đơn vị

- Ở môi trường đặc, liên cầu có chuỗi ngắn

Tính chất mọc trên các môi trường nuôi cấy:

Streptococcus là loại vi khuẩn hiếu khí hay yếm khí tuỳ tiện, mọc tốt ở cácloại môi trường nuôi cấy thông thường, nhiệt độ thích hợp là 37OC

Trong môi trường nước thịt, vi khuẩn mọc tốt, sau 24h nuôi cấy ở 37oC, vikhuẩn hình thành những hạt hoặc những cụm bông lắng xuống đáy ống nên môitrường bên trên trong và đáy ống có cặn

Trên môi trường thạch thường, vi khuẩn mọc tạo thành khuẩn lạc dạng S,màu hơi xám

Trên môi trường thạch máu, Streptococcus mọc tốt, gây dung huyết hoặckhông Dựa vào mức độ dung huyết, người ta phân ra làm 3 type khuẩn lạc:

- Type : khuẩn lạc được bao quanh một vòng hồng cầu còn nguyên hìnhnhưng màu xanh, xa khuẩn lạc một chút có vòng tan máu

Liên cầu thuộc type này gọi là liên cầu dung huyết nhóm , độc lực của nhómnày không cao

- Type : Khuẩn lạc được bao quanh bởi một vòng tan máu hoàn toàn trongsuốt, có bờ rõ ràng.

Liên cầu nhóm này gọi là liên cầu dung huyết nhóm , nhóm vi khuẩn này cóđộc lực cao

- Type : Xung quanh khuẩn lạc không có vòng tan máu, hồng cầu vẫn giữnguyên màu hồng

Liên cầu khuẩn thuộc type này không có khả năng làm dung huyết thạch máu,thường là vi khuẩn không gây bệnh

Đặc tính sinh hoá:

Vi khuẩn Streptococcus gây bệnh ở lợn có khả năng lên men một số loạiđường như: Glucose, Lactose, Saccarose, Trehalose, Maltose, Fructose , không lênmen đường dulciton, mannit, Innulin Tính chất không lên men đường Innulin làtính chất quan trọng vì nhờ nó, chúng ta phân biệt được các chủng gây bệnh(Nguyễn Vĩnh Phước, 1970)

Vi khuẩn không có men oxydaza và men catalaza nên phản ứng oxydaza,catalaza âm tính

Phản ứng sinh Indon: âm tính

Phản ứng sinh H2S: âm tính

Các enzim

Theo Nguyễn Như Thanh, Streptococcus có khả năng sinh các loại men: + Streptokinaza: Có tác dụng làm tan tơ huyết, men này có tính kháng nguyêncao, kích thích cơ thể hình thành kháng thể

+ Streptodonaza: Có tác dụng làm lỏng mủ đặc, hoạt động của chúng chỉ cótác dụng khi có mặt Ion Mg++

+ Hyaluronidaza: Men này có tác dụng phân huỷ axit Hialuronic gây nhão

mô, giúp vi khuẩn tăng khả năng lan tràn

Ngoài ra Streptococcus còn có khả năng sinh men Nucleotidaza (làm chết bạch cầu), Proteinaza (có tác dụng phân huỷ Protein, nếutiêm liều cao cho động vật sẽ gây nên các tổn thương ở tim)

Diphotpho-Pyridin-Tính gây bệnh

Streptococcus là loại vi khuẩn thường xuyên có mặt trong một số khí quancủa cơ thể gia súc, gia cầm và cả ở con người Khi cơ thể gặp các yếu tố Stress thìStreptococcus trỗi dậy và là nguyên nhân chính hoặc kết hợp với các loại vi khuẩnkhác gây nên một số bệnh khá nghiêm trọng Nó có thể gây bệnh thể bại huyết dẫnđến chết hoặc gây nhiễm trùng tại chỗ như viêm não, viêm khớp, viêm nội tâm mạc

ở lợn Nhóm vi khuẩn này gồm Streptococcus suis type 1 và đôi khi kết hợp vớiStreptococcus suis type 2, lây nhiễm từ lợn mẹ qua đường không khí, qua tiêu hoá

do tiếp xúc trực tiếp hoặc qua bơm, kim tiêm nhiễm trùng

2 Bệnh liên cầu khuẩn

a Bệnh liên cầu khuẩn ở lợn

Đặc điểm dịch tễ

Lợn là loài mẫn cảm và dễ mắc bệnh Ngoài ra bệnh có thể lây sang các loạigia súc khác như bò, cừu, chó, dê, hươu, nai, … Người cũng có thể bị nhiễm vikhuẩn

Lứa tuổi: Lợn mắc bệnh ở mọi lứa tuổi, nhưng tập trung chủ yếu ở giai đoạn4-10 tuần tuổi

Tỷ lệ mang trùng cao đến 80% Tỷ lệ mắc có biểu hiện lâm sàng từ 0 - 15%

Tỷ lệ chết tùy thuộc vào lứa tuổi của đàn, tình trạng vệ sinh chuồng trại và các biệnpháp can thiệp

Mùa mắc: Bệnh xảy ra quanh năm

Nơi cư trú:

Trong cơ thể động vật, vi khuẩn thường cư trú ở đường hô hấp trên đặc biệt làxoang mũi và hạch hạnh nhân Tuy nhiên, vi khuẩn cũng có thể có mặt trong đườngtiêu hóa và đường sinh dục của lợn

Đường truyền lây:

Lợn mang trùng là nguồn lây nhiễm chính Bệnh lây lan qua đường hô hấp,tiêu hoá, qua đường sinh dục, từ mẹ sang con Vi khuẩn có thể tồn tại ở xoang mũi,hạch hạnh nhân, hạch amidan, máu, dịch tử cung, âm đạo

Vi khuẩn từ con khoẻ này truyền cho lợn không bị nhiễm có thể xảy ra trongvòng 5 ngày sau khi nhốt chung Việc đưa những con nái hậu bị từ đàn nhiễm bệnh

có thể gây bệnh cho lợn con theo mẹ và lợn choai ở đàn tiếp nhận Những con mangtrùng đã cai sữa sẽ truyền vi khuẩn cho những con không bị nhiễm khác khi nhậpđàn Phân, chất độn chuồng, các loại thức ăn và nước uống trong chuồng nuôi cóthể trở thành nguồn bệnh thứ cấp

Các động vật có khả năng truyền bệnh bao gồm ruồi, chuột Ruồi nhà có thểmang vi khuẩn ít nhất 5 ngày có thể gây nhiễm vào thức ăn ít nhất 4 ngày

Bệnh có thể lây sang người Những người tiếp xúc với lợn bệnh có nguy cơmắc bệnh cao hơn Người có thể bị lây nhiễm qua vết thương trên da, niêm mạc,qua đường tiêu hoá

Bệnh viêm màng não do Streptococcus ở lợn cai sữa và lợn vỗ béo xảy ra saukhi chúng được nuôi, nhốt chung, có thể gây chết lợn đột ngột, sốt, triệu chứng thầnkinh, gây viêm khớp ở lợn con

Lợn sống sót có thể trở thành vật bệnh ở thể mãn tính hoặc vật mang mầm bệnh + Thể mãn tính: có các biểu hiện như viêm tai giữa, què

+ Hạch bạch huyết sưng to và sung huyết

+ Tim: màng bao tim có thể bị viêm tơ huyết; viêm van tim và nội tâm mạc

Kiểm tra vi thể có thể giúp phát hiện viêm màng não hóa mủ, viêm nội mạchuyết quản với sự tập trung một lượng lớn các tế bào viêm, sợi huyết Dịch viêm cóthể xuất hiện trong các buồng não Các đại thực bào (có vi khẩn) có thể được pháthiện trong dịch não tủy

Chẩn đoán:

Dựa vào đặc điểm dịch tễ học, các biểu hiện lâm sàng và bệnh tích

Các phương pháp chẩn đoán thường quy trong phòng thí nghiệm: Kiểm tradưới kính hiển vi các cơ quan hay máu bị nhiễm vi khuẩn

Phản ứng huỳnh quang tại chỗ có thể giúp phát hiện vi khuẩn tại các mô bị nhiễm.Dùng PCR để xác định týp huyết thanh

b Bệnh liên cầu khuẩn và sự lây nhiễm trên người:

Bệnh do Streptococcus suis trên người xuất hiện ở nhiều nước châu Âu, châuÁ… gần đây là Trung Quốc, Việt Nam Người nhiễm phổ biến với Streptococcussuis típ 2 và thường xảy ra với người tiếp xúc với lợn hoặc sản phẩm tươi sống củachúng: người chăn nuôi, công nhân giết mổ, chế biến thịt, người bán thịt, nhân viênthú y, người ăn tiết canh và thịt lợn tái sống,… Lợn nhiễm khuẩn không thể hiệnlâm sàng đưa vào lò giết mổ là nguồn lây nhiễm tiềm tàng cho công nhân giết mổ;những người xử lý nội tạng, cắt bỏ phổi và thanh quản có nguy cơ cao hơn so vớicông nhân giết mổ khác

Bệnh lây truyền chủ yếu qua vết thương xây sát trên da, niêm mạc Biểu hiệnlâm sàng ở người bao gồm sốt cao, mệt mỏi, mê man, đau họng, đau nhức cơ, xuấthuyết dưới da và các triệu chứng thần kinh, viêm màng não, nhiễm trùng huyết kèm

theo viêm khớp, viêm nội võng mạc, viêm tắc mạch máu, viêm nội tâm mạc, viêm

dạ dày ruột cấp tính Các triệu chứng có thể thấy sau 2 đến 3 ngày ủ bệnh Ngườikhỏi bệnh có thể bị điếc Tỷ lệ nhiễm không thể hiện lâm sàng cao đến 28% Tỉ lệ tửvong 7 - 15%

3 Thiệt hại do bệnh gây ra:

* Đối với con người:

Theo thống kê của Tổ chức y tế Thế giới (WHO) đưa ra ngày 23/10/2008 ngộđộc thực phẩm làm thiệt hại 200 triệu USD/năm Tổ chức y tế thế giới cũng chỉ rarằng, lương thực, thực phẩm chính là nguyên nhân đã gây ra khoảng 50% cáctrường hợp tử vong đối với con người trên thế giới hiện nay Ngay cả với các nướcphát triển, việc ngộ độc do lương thực, thực phẩm luôn là vấn đề bức xúc và hết sứccấp bách

Hàng năm ở Việt Nam bệnh do liên cầu khuẩn vẫn xảy ra và gây thiệt hại chocon người: gây tử vong hoặc để lại di chứng nặng nề (điếc, mờ mắt, ) Theo Bệnhviện Bệnh nhiệt đới TPHCM, từ năm 2001 đến 2009, mỗi năm bệnh viện chỉ tiếpnhận khoảng 30-35 ca bệnh liên cầu khuẩn lợn, thế nhưng, trong vòng chín thángđầu năm 2010, số ca liên cầu khuẩn lợn đã lên đến 43 người Riêng trong tháng 8(cao điểm dịch lợn tai xanh), Bệnh viện đã tiếp nhận 17 ca Theo thống kê của CụcThú y, hầu hết các trường hợp nhiễm bệnh liên cầu khuẩn ở lợn đều có tiếp xúc vớilợn mắc bệnh như chăn nuôi lợn bệnh, giết mổ, xử lý, tiêu huỷ lợn bệnh, ăn thịt lợnbệnh, ăn tiết canh lợn

Như vậy một thực tế cho thấy số người bị ngộ độc thực phẩm cũng như bị lâynhiễm mầm bệnh nguy hiểm từ động vật sang ngày một tăng Do đó những biện

pháp, chính sách áp dụng cho phòng, trị bệnh cho động vật cần được quan tâm chútrọng.

4 Kháng sinh và cách sử dụng

a Khái niệm:

Kháng sinh còn được gọi là Trụ sinh là những chất có khả năng tiêu diệt vikhuẩn hay kìm hãm sự phát triển của vi khuẩn một cách đặc hiệu Nó có tác dụnglên vi khuẩn ở cấp độ phân tử, thường là một vị trí quan trọng của vi khuẩn hay mộtphản ứng trong quá trình phát triển của vi khuẩn

b Phân loại kháng sinh:

* Nhóm β lactam các penicilin: (Penicilin, Methicilin, Ampicilline, Amoxicilline,

Cloxacilline, Sultamicillin, Piperacilline, Imipenem)

Các penicillin là nhóm kháng sinh đầu tiên được phát hiện ra Ban đầu penicillinđược chiết xuất từ nấm penicillin Bây giờ penicillin được tổng hợp nhiều từ một sốloại hóa chất khác Các dòng penicillin gồm có :

- Penicillin G và penicillin V : là 2 loại được tổng hợp lần đầu tiên

- Aminopenicillin : là penicillin bán tổng hợp gồm có ampicillin, amoxillin

- Các penicillin kháng enzyme penicillinase : như oxacillin, methicillin,

chloxacillin

- Penicilin chuyên dùng để điều trị vi khuẩn nhóm pseudomonas : như

piperacillin, cacbercillin, ticarcillin

Các Tetracyclin có hoạt phổ rộng (các vi khuẩn Gram(+) và Gram(-),Rickettsia, Xoắn khuẩn, ) Chỉ định điều trị bằng cách kết hợp với các kháng sinhkhác để điều trị các bệnh: Brucella, tả, sốt định kỳ, lậu cầu, giang mai, viêm đườngtiêu hoá, sốt rét,

* Nhóm aminosid: (Amikacin, Tobramycin, Neomycin, Gentamycin, Kanamycin,

- Thuốc chiết xuất từ Microspora: Gentamicin, Sisimicin,

Sau này, khi thay đổi cấu trúc của các hợp chất tự nhiên nói trên, người ta thuđược các thuốc bán tổng hợp như: Amikacin, Netilmicin, Dibekacin,

* Nhóm macrolid: (Azithromycin, Roxithromycin, Erythromycin, rovamycin,

Clarithromycin, Spiramycin)

Các Macrolide là kháng sinh có hoạt phổ kháng khuẩn rộng, tác dụng mạnhhơn trên gram âm, nhóm này hầu hết được thải trừ qua thận Độc tính trên thận (gâyhoại tử ống thận cấp) và thính giác (gây ù tai, điếc) nếu dùng kéo dài Các thuốc củanhóm như: gentamycin, novomycin các thuốc này hầu hết không hấp thu quađường tiêu hóa, nếu dùng điều trị nhiễm khuẩn toàn thân thì phải dùng dạng tiêm

Sulfaguanidin, Sulfamethoxazol, Sulfadiazin, Sulfasalazin

* Nhóm Phenicol:

Nhóm này bao gồm 02 kháng sinh:

- Chloramphenicol: thường được gọi là Chlorocid, được phân lập từ nấmStreptomyces Venezaclae, nay sản xuất bằng phương pháp tổng hợp toàn phần Cótác dụng điều trị bệnh thương hàn và sốt phát ban do Rickettsia (là tác nhân truyềnbệnh rận, chấy)

- Thiamphenicol: là dẫn chất của Chloramphenicol, khi thay thế gốc Nitrobằng gốc Metylsulfon, dung nạp tốt hơn Chloramphenicol

c Cơ chế tác động của kháng sinh

- Ức chế quá trình tổng hợp vách của vi khuẩn (vỏ) của vi khuẩn Các nhómkháng sinh gồm có penicillin, bacitracin, vancomycin Do tác động lên quá trìnhtổng hợp vách nên làm cho vi khuẩn dễ bị các đại thực bào phá vỡ do thay đổi ápsuất thẩm thấu

- Ức chế chức năng của màng tế bào Các nhóm kháng sinh gồm có : colistin,

polymyxin, gentamicin, amphoterricin Cơ chế làm mất chức năng của màng làmcho các phân tử có khối lượng lớn và các ion bị thoát ra ngoài

- Ức chế quá trình sinh tổng hợp protein

+ Nhóm aminoglycosid gắn với receptor trên tiểu phân 30S của ribosome

làm cho quá trình dịch mã không chính xác

+ Nhóm chloramphenicol gắn với tiểu phân 50S của ribosome ức chế

enzyme peptidyltransferase ngăn cản việc gắn các acid amin mới vàochuỗi polypeptide

+ Nhóm macrolides và lincoxinamid gắn với tiểu phân 50S của ribosome

làm ngăn cản quá trình dịch mã các acid amin đầu tiên của chuỗi

polypeptide

- Ức chế quá trình tổng hợp acid nucleic

+ Nhóm refampin gắn với enzyme RNA polymerase ngăn cản quá trình

sao mã tạo thành mRNA (RNA thông tin)

+ Nhóm quinolone ức chế tác dụng của enzyme DNA gyrase làm cho haimạch đơn của DNA không thể duỗi xoắn làm ngăn cản quá trình nhân đôicủa DNA

+ Nhóm sulfamide có cấu trúc giống PABA (p aminobenzonic acid) có tácdụng cạnh tranh PABA và ngăn cản quá trình tổng hợp acid nucleotid + Nhóm trimethoprim tác động vào enzyme xúc tác cho quá trình tạo nhânpurin làm ức chế quá trình tạo acid nucleic

Mỗi ngày lại có rất nhiều loại kháng sinh được các dược sĩ bào chế ra bởi vìquá trình kháng kháng sinh của vi khuẩn

- Dùng đủ thời gian: trên cơ thể nhiễm khuẩn, vi khuẩn ở nhiều giai đoạnkhác nhau với kháng sinh Nếu sau 2 ngày dùng kháng sinh, sốt không giảm, cầnthay hoặc phối hợp kháng sinh Khi điều trị đã hết sốt, vẫn cần cho thêm kháng sinh

2 - 3 ngày nữa

- Nói chung, các nhiễm khuẩn cấp, cho kháng sinh 5 - 7 ngày Các nhiễmkhuẩn đặc biệt, dùng lâu hơn, như: viêm nội tâm mạc, nhiễm khuẩn tiết niệu (viêm

bể thận): 2 - 4 tuần; nhiễm lao: 9 tháng

- Chọn thuốc theo dược động học (hấp thu, phân bố, chuyển hóa, thải trừ) phụthuộc vào nơi nhiễm khuẩn và tình trạng bệnh súc

- Cần phối hợp với biện pháp điều trị khác: khi nhiễm khuẩn có ổ mủ, hoại tử

mô, vật lạ (sỏi) thì cho kháng sinh phải kèm theo thông mủ, phẫu thuật

* Những nguyên nhân thất bại trong việc dùng kháng sinh

- Chọn kháng sinh không đúng phổ tác dụng

- Kháng sinh không đạt được tới ngưỡng tác dụng tại ổ nhiễm khuẩn, do liềulượng không hợp lý, do dược động học không thích hợp, do tương tác thuốc làmgiảm tác dụng của kháng sinh

- Do vi khuẩn đã kháng thuốc Cần thay kháng sinh khác hoặc phối hợpkháng sinh

* Vi khuẩn kháng kháng sinh:

Kháng tự nhiên: vi khuẩn đã có tính kháng từ trước khi tiếp xúc với khángsinh, như sản xuất β lactamase, cấu trúc của thành vi khuẩn không thấm với khángsinh

Kháng mắc phải: vi khuẩn đang nhậy cảm với kháng sinh, sau một thời giantiếp xúc, trở thành không nhậy cảm nữa, do: Đột biến hoặc kháng qua nhiễm sắcthể

Mọi vi khuẩn đều có "protein đích" để gắn với kháng sinh cụ thể tại ribosom,DNA gyrase, RNA polymerase Do đột biến, các "protein đích" đã thay đổi, khônggắn kháng sinh nữa Kháng qua plasmid: có nhiều dạng Thường là sản xuất cácenzym làm bất hoạt kháng sinh, hoặc giảm ái lực của kháng sinh với " protein đích",hoặc thay đổi đường chuyển hóa Vi khuẩn kháng kháng sinh có thể phát triển sựkháng chéo với kháng sinh trong cùng họ Qua plasmid có thể kháng nhiều loạikháng sinh một lúc Người lần đầu nếu nhiễm vi khuẩn đã kháng kháng sinh, mặcdầu chưa dùng kháng sinh bao giờ đã có kháng kháng sinh ngay Loại kháng mắcphải thường là do dùng kháng sinh không đúng liều hoặc lạm dụng thuốc, đang gâymột trở ngại rất lớn cho việc điều trị

* Phối hợp kháng sinh

Chỉ định phối hợp kháng sinh

Nhiễm 2 hoặc nhiều vi khuẩn một lúc Nhiễm khuẩn nặng mà nguyên nhânchưa rõ Sử dụng tác dụng hiệp đồng làm tăng hoạt tính kháng sinh trong một sốnhiễm khuẩn đặc biệt:Viêm nội tâm mạc: penicilin + streptomycin, Trimethoprim +sulfamethoxazol, Kháng sinh β lactam + chất ức chế lactamase Phòng ngừa xuấthiện vi khuẩn kháng kháng sinh

Nhược điểm của phối hợp kháng sinh:

Khi không hiểu rõ và phối hợp không đúng sẽ: Dễ gây kháng do sự chọn lựacủa vi khuẩn Tăng độc tính của kháng sinh Hiệp đồng đối kháng Giá thành điều trịcao Nói chung, nên hạn chế phối hợp vì đã có kháng sinh phổ rộng

II ĐIỀU TRA ĐÁNH GIÁ THỰC TRẠNG BỆNH LIÊN CẦU KHUẨN TRÊN ĐÀN LỢN CỦA HẢI PHÒNG

1 Đánh giá tình hình bệnh liên cầu khuẩn trên đàn lợn tại Hải Phòng:

Bệnh liên cầu khuẩn đã xuất hiện và gây thiệt hại kinh tế rất lớn cho các trại chănnuôi lợn tập trung của nhà nước và hợp tác xã trên cả nước từ những năm 1960, điểnhình là trại lợn Cần Thị - Hà Tây cũ Trên địa bàn thành phố Hải Phòng chưa có nghiêncứu, đánh giá nào cụ thể về ảnh hưởng của bệnh liên cầu khuẩn đối với đàn lợn Tuychưa có sự điều tra đầy đủ về bệnh nhưng theo báo cáo của các đơn vị trên địa bànthành phố mỗi năm có hàng chục ngàn lợn ở giai đoạn trước và sau cai sữa bị mắcbệnh không rõ nguyên nhân, trong đó có hàng ngàn con chết bệnh, đây là một trongnhững nguyên nhân gây thiệt hại nặng nề cho sản xuất chăn nuôi trên địa bàn thành phố

Để nghiên cứu thực trạng bệnh liên cầu khuẩn trên đàn lợn của Hải Phòng, Banchủ nhiệm nhiệm vụ tiến hành điều tra 400 phiếu với không gian dịch tễ là 03 huyện đạidiện của Hải Phòng (Kiến Thụy, An Dương, An Lão là 3 huyện chăn nuôi lợn với sốlượng lớn)

2 Kết quả điều tra:

Điều tra là phương pháp nghiên cứu dịch tễ học, qua đó đánh gia được tìnhhình lợn nghi nhiễm bệnh liên cầu khuẩn ở lợn tại Hải Phòng Là tiền đề và là luận

cứ khoa học định hướng cho các bước nghiên cứu tiếp theo của Nhiệm vụ Kết quảđược cụ thể ở các bảng phân tích phiếu điều tra như sau (từ bảng 1- bảng 9):