Nghiên cứu quá trình lên men bia nồng độ cao sử dụng nấm men cố định trên alginate

Nhữngđónggópmớicủaluậnán - Đãxácđịnhcácthôngsốkỹthuậtcủaquá trìnhcốđịnhnấmmentronggelalginateđểlênmenbia nồngđộcaovàcácgiảiphápkỹthuậtnhằmnângcaohiệuquảlênmentrongtrườnghợpsửdụngnấmmencố

vàolúc giờ,ngày tháng năm201

Cóthểtìmhiểuluậnántại:

- ThưviệnKhoahọcTổnghợpTp.HCM

- ThưviệnTrườngĐạihọcBáchkhoa–ĐHQG-HCM

-1-A PHẦNMỞĐẦU

1 Tínhcấpthiếtcủaluậnán

LượngbiaViệtNamsảnxuấttăngdầntrongnhữngnămqua:từ1,29tỷlíttrongnăm2003tăngđến2,7tỷlíttrongnăm2010.NgànhcôngnghiệpBia-Rượu-

Nướcgiảikhátđãđượcchínhphủquyhoạchpháttriểnthànhmộtngànhkinhtếmạnh.Đểnângcaonăngsuấtbia,nhiềugiảiphápkỹt h u ậtđãđượccácnướctrênthếgiớinghiêncứuvàứngdụng,trongđócókỹthuậtlênmenbianồngđộcao.Ởnướcta,mộtsốcôngtybiađãápdụngkỹthuậtlên

menbianồngđộcaovớinấmmentựdovàhàmlượngchấtkhôtrongdịchnhachỉdaođộngtrongkhoảng13-16oBx

Đềtàiluậnánvềquátrìnhlênmenbianồngđộcaosửdụngnấmmencốđịnhtronggelalginatesẽgópphầnnângcaonăngsuấtsảnxuất,tiếtkiệmnhâncông,nănglượngvàchiphíđầutưchongànhcôngnghiệpsảnxuấtbia

khảnănglênm e n bianồngđộcaocủanấmmen

- Xácđịnhcácgiảiphápkỹthuậtđểnângcaohiệuquảlênmenbia

nồngđộcaovớinấmmencốđịnhtronggelalginate,sửdụngdịchnhacóvàkhôngcóthếliệusyrupmaltose

- Thiếtlậpphươngt r ì n h cânbằngvậtchấtchoquátrìnhl ê n m e n bianồngđộcaosửdụngnấmmentựdovànấmmencốđịnh

4 Nhữngđónggópmớicủaluậnán

- Đãxácđịnhcácthôngsốkỹthuậtcủaquá

trìnhcốđịnhnấmmentronggelalginateđểlênmenbia

nồngđộcaovàcácgiảiphápkỹthuậtnhằmnângcaohiệuquảlênmentrongtrườnghợpsửdụngnấmmencốđịnhtronggelalginateđểlênmendịchnha24oBx

- Đãxácđịnhđượcquyluậtbiếnđổicủacácloạiđườnglênmentrongquátrìnhlênmenbianồngđộcaosửdụngnấmmentựdovànấmmencốđịnh.

- Đãxâydựngđượcphươngtrìnhcânbằngvậtchấtchoquátrìnhlênm e n bianồngđộcaosửdụngnấmmencốđịnhtronggelalginatevànấmmentựdo

5 Bốcụccủaluậnán

Luậnánbaogồm145trang(khôngkểphụlục),24bảng,46hìnhvà211tàiliệuthamkhảo(11tiếngviệt,196tiếnganhvà4trangweb);đượctrìnhbàytrong6phần:mởđầu,tổngquan,nguyênliệuvàphươngpháp,kếtquảvàbànluận,kếtluậnvàkiếnnghị,tàiliệuthamkhảo

B NỘIDUNGLUẬNÁN

Chương1:TỔNGQUAN

1.1 Tìnhhìnhpháttriểncủangànhcôngnghi ệpsảnxuấtbiaViệtNam

tươngđốithấpsovớicácnướctrongkhuvựcvàtrênthếgiới.Tuynhiên,ViệtNamlàquốcgiacódânsốtrẻ,nhiềungườitrongđộtuổisửdụngbiathườngxuyên,ngườitiêudùngnôngthôncóxuhướngthayđổithóiquenuốngrượusanguốngbia.Theođịnhhướngpháttriểncủan g à n h biađếnnăm2025đãđượcBộtrưởngBộCôngthươngphêduyệt,s ảnlượngbiasảnxuấtsẽđạt6,0tỷlít/năm

MứctiêuthụbiabìnhquânđầungườicủaViệtNamhiệnnaylà28lít/năm-1.2 Nấmmenbiacốđịnh

Nấmmencốđịnhlànấmmenđượcgắntrênchấtmanghoặcđượcnhốttrongchấtm a n g hoặccóvịtríhoạtđ ộ ngbịgiớihạnt r o n g mộtvùngk h ô n g giannhấtđịnhcủabìnhlênmennhưngvẫncókhảnăngduytrìđ ư ợ choạttínhtraođổichất.Chấtmangcốđ ị nhnấmm e n phổbiếnthườnglànhữngpolymertựn h i ê n , polymertổnghợphoặccácvậtliệuvôcơcótrongtựnhiên Kỹt h u ậtcốđịnhtếbàonấmmencóthểđược

chiathànhbốnnhómchính:Cốđịnhnấmmentrênbềmặtchấtmangrắn;nhốtnấmmentrongvậtliệu

1.3 Lênmenbianồngđộcao

Lênmenbia

nồngđộcaolàkỹthuậtlênmendịchnhavớinồngđộchấtkhôbanđầurấtcao(>15oPt),sauđóphaloãngsảnphẩmbiathuđượcđểđạtnồngđộethanoltheogiátrịmongmuốn

Nhìnchung,quátrìnhlênmenbianồngđộcaobịảnhhưởngbởi:Nồngđộchấtkhôbanđầutrongdịchnha;thànhphầndinhdưỡngtrongdịchnha;mậtđộnấmmengieocấybanđầu;hàmlượngoxytrongdịchnhabanđầu;nhiệtđộlênmenvànồngđộethanoltrongdịchlênmen

1.4 Ứngdụngnấmmencốđịnhtrongquátrìnhlênmenbia

Việcsửdụngnấmmencốđịnhtrongquátrìnhlênmenbianồngđộcaolàmthayđổitínhchấtsinhlýcủanấm

mencốđịnh;khảnăngsửdụngcơchất;khảnăngchịuđựngnhữngyếutốbấtlợivàkhảnăngsinhtổnghợpcácsảnphẩmtraođổichất

1.5 Chấtmangalginate

guluronicacid,blockMchủyếulàD-

Chuỗipolymeralginateđượctạothànhtừ3loạiblock:blockGchủyếulàL-

mannuronicacidvàblockMGchứahỗnhợpcủaD-mannuronicacidvàL-guluronicacid.ViệcphốitrộndungdịchCaCl2valginatenhanhchóngđ ư ợ chìnhthành

ớidungdịchNa-alginate,gelCa-1.6 Tìnhhìnhnghiêncứutrongvàngoàinướcvềkỹthuậtlênmenbianồngđ

ộcaosửdụngnấmmencốđịnhtronggelalginate

TạiViệtNam,cáckếtquảnghiêncứuvềlênmenbianồngđộcaosửdụngnấmmencốđịnhtronggelalginatehầunhưchưađượccôngbố.Tuynhiên,khisửdụngnấmmentựdođểlênmenbianồngđộcao,cácnghiêncứutậptrungvàonhữngvấnđềnhư:bổsungchấtdinhdưỡngvàodịchnhacósửdụngthếliệu;lựachọnchủngnấmmenthíchhợp;sửdụngmậtđộgiốngcấycao;ứngdụngkỹthuậtlênmentĩnhcóbổsungcơchất.Đốivớinấmmencốđịnhtronggelalginate,nhiềunghiêncứukhảosát:điềukiệncốđịnhnấmmentronggelalginateđểlênmendịchnha12oBx;

ứngdụngnấmmencốđịnhtronggelđểlênmensảnxuấtethanoltheophươngphápliêntụcvàtheophươngpháptĩnh,ảnhhưởngcủastresspH,t a n i n , sulfuredioxidevàáplựcthẩmthấuđếnhoạttínhcủanấmmencốđịnh.

Cáccôngtrìnhnghiêncứungoàinướcchothấynấmmencốđịnhtronggelalginatelàmgiảmthờigianlênmenbianồngđộcao,làmtănghàmlượngethanoltrongbianonkhisosánhvớinấmmentựdo

chếtbằngxanhmethylen;quansáthìnhtháitếbàonấmmenbằngkínhhiểnviđiệntửquét(SEM)

2.3.2 Phươngphápphântíchhóalý

Sửdụngkhúcxạkếđểxácđịnhhàmlượngchấtkhô;phươngphápq u a n g phổs

om à u đểxácđịnhlượngđườngkhửvànitơamintựdo;phươngphápsắckýlỏngcaoápđểđịnhlượngglucose,fructose,saccharose,maltosevàmaltotriose,phươngphápquangphổUVđểxác

địnhdiacetyl;phươngphápsắckýkhíđểđịnhlượngethanolvàcácchấtdễbayhơitrongbianon;phươngphápchuyểnhóamẫusinhkhốinấmmenthànhcácnguyêntốcơbảndướidạngkhítrongbuồngkínởnhiệtđộcaođểđịnhlượngcácnguyêntốcơbảnC,H,NvàO trongsinhkhốinấmmen.

2.4 Phươngphápxửlýsốliệuthựcnghiệm

Tấtcảcácthínghiệmđượcthựchiện2-3lầnlặplạiđểtínhkếtquảt r u n g bình,xửlýthốngkêbằngphươngphápphântíchphươngsaiAnalysisofVariancetrênphầnmềmStatgraphicsplus(version3.2)

2.5 Côngthứctínhtoán

Luậnáncósửdụngcôngthứctínhđộlênmen;tốcđộsửdụngcơchất( đườngkhửvànitơamintựdo)vàtốcđộsinhtổnghợpethanolcủanấmm e n ; tỷlệphaloãngcủadịchnhatrongquátrìnhlênmenliêntục;côngthứcphântửcủanấmmen,cơchấtvàsảnphẩmlênmen

Chương3:KẾTQUẢVÀBÀNLUẬN

3.1 Ảnhhưởngcủaviệccốđịnhtếbàotronggelalginatetớihìnhtháivàkhản ănglênmenbianồngđộcaocủanấmmen

3.1.1 Sosánhhoạttínhlênmencủanấmmentựdovànấmmencốđịnhkhin

ồngđộdịchnhathayđổi

Chúngtôikhảosátả nhhưởngcủanồngđộc h ấtkhôdịchnha( 1 2

-28oBx)đếnđộnghọcquátrìnhlênmenchính,sửdụngnấmmencốđịnht r o n g gelalginatevànấmmentựtovớitỷlệgiốngcấylà1,0x107tb/mL

Kếtquảthựcnghiệmchothấysựpháttriểnsinhkhốinấmmen,tốcđộsửdụngđườngkhửvànitơamintựdo,tốcđộsinhtổnghợpethanolcủanấmmencốđịnhtronggelalginateluôncaohơnsovớinấmmentựdolầnlượttừ18,8-35,7%;39,0-85,4%và114,2-377,3%;35,9-55,3%.Đồng

thời,thờigianlênmencủanấmmencốđịnhluônthấphơnkhoảng26,2-46,2%sovớinấmmentựdođốivớitấtcảnồngđộchấtkhôkhảosát

3.1.2 Quansáthìnhtháicủanấmmentrongđiềukiệnstressáplựcthẩmthấ

uvàstressethanoltăngcao

Tếbàonấmmencốđịnhvàtựdođượcngâmtrongdungdịchsorbitol(24oBx)vàdungdịchethanol(10%v/

v)trongthờigian30phút;sauđósửdụngSEMđểquansáthìnhtháinấmmen.Đốivớis t r e ss á p lựcthẩmthấu,s a u 30phúttiếpxúcvớid u n g dịchs o r b i t o

l 24oBx,nấmmentựdocóbềmặttrởnênnhănnheovàcorút,mộtsốtếbàocóbềmặtlõmsâuvàobêntrong(hình3.10A2).Tuynhiên,đốivớicáctếbàođượcgắntrênbềmặthạtgelhoặcđượccốđịnhbêntr o n g hạtgelalginatethìkhôngxảyrahiệntượngnày(hình3.10B2,C2)

Đốivớistressethanol,sau30phútngâmtrongdungdịchethanol10%(v/v),tếbàonấm

mentựdovàtếbàocốđịnhtrênbềmặthạtgelalginatecũngbịcorút,nhănnheo,bềmặttếbàocũngbịlõmsâuvàobêntrong( h ì n h 3.10A3,B3).Ngượclại,hìnhdạngtếbàonấmmencốđịnhb ê n t r o n g h ạtgelh ầunhưk h ô n g bịthayđổitrướctácđộngcủadungdịchethanol(hình3.10C3)

-7-Nhưvậy,chấtmangalginateđãhạnchếnhữngbiếnđổivềhìnhdạngcủanấmmencốđịnhsovớinấmmentựdokhibịtácđộngstressáplựcthẩmthấuvàstressethanol

Bảng3.3:Ảnhhưởngcủamậtđộtếbàonấmmentrong1mLgelđếnhoạttínhlênmencủanấmmencốđịnhvớidịchnh

Mậtđộtếbàotronghạtgelalginate(1,0x107tb/mLgel) Thôngsốkhảosát

a3 

0,00 0,65b30,00 0,49c30,00 0,45d30,00 Tỷlệhạtvỡởchukỳcuốicùng d4

(%) 5,51 0,02 7,40 0,00 10,53 0,00 12,19 0,00

Cácký tựkhácnhauthểhiệncácgiátrịtrongcùng1hàngcósựkhácbiệtcónghĩatạimứcP = 0 , 0 5

Dựavàonhữngphântíchởtrên,chúngtôichọnmậtđộtếbàonấmment r o n g hạtgellà5,0x107tb/mLgelđểlênmendịchnha24oBx

3.1.3.2 Xácđịnhnồngđộalginatetrong1mLgel

0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 Sốchukỳđãlênmen

Thờigianl ê n men

Chúngtôikhảosátảnhhưởngcủanồngđộalginatetronghạtgel(0,5-3 , 0 %(w/v))đếnđộnghọcquátrìnhlênmenbianồngđộcao

Bảng3.4:Ảnhhưởngcủanồngđộalginatetrong1mLgelalginate-nấmmenđếnkhảnăngl ê n mencủanấmmencốđịnhvớidịchnha24oBx

Nồngđộalginatetronghạtgel(%w/v) Thôngsốkhảosát

trungb ì n h củamỗichu

kỳ(giờ) 165,7

c1

0,89165,7c10,47122,7b10,17122,7b10,24116,3a10,73116,3a10 ,56

Tỷlệhạtvỡởchukỳ f4

e4 d4

cuốicùng(%)

45,040,0234,42

0,02 7,05 0,006,87 0,045,81 0,024,90 0,02

Cáckýtựkhácnhauthểhiệncácgiátrịtrongcùng1hàngcósựkhácbiệtcónghĩatạimứcP=0,05

a Trườnghợpnồngđộalginatetronghạtgellà0,5-1,0%(w/v)

Hạtgelvớinồngđộalginatequáthấpsẽdễdàngbịvỡvàkhôngthíchhợpchoquátrìnhlênmenbianồngđộcao(Bảng3.4)

b Trườnghợpnồngđộalginatetronghạtgellà1,5-3,0%(w/v)

Kếtquảtrongbảng3.4chothấykhităngnồngđộalginatetrong hạtgeltừ1,5–2,0%(w/v)lên2,5–3,0%(w/v),thờigianlênmentrungbìnhcủacácchukỳgiảmnhẹnhưngnồngđộethanoltrongbianonvàtốcđộsinhtổnghợpethanoltrungbìnhcủacácchukỳtănglầnlượttừ9,59lên10,22%(v/v)vàtừ0,66lên0,72g/

L.h.N g o à i r a , tỷlệh ạtvỡtạithờiđiểmkếtt h ú c thínghiệmlênmen sẽgiảmtừ6,87-7,05%xuống4,90-5,81%

Dựavàokếtquảthựcnghiệmởtrên,chúngtôichọnnồngđộalginatet r o n g hạtgellà2,5%(w/v)choquátrìnhlênmenbianồngđộcao

3.1.4 Quansáthìnhtháihạtgeltrongquátrìnhlênmenbianồngđộ

caotheophươngphápchukỳ

3.11(c1)).Cácbiếnđổivềhìnhtháihạtgelchủyếulàdosựkhuếchtáncơchấtvàsảnphẩmtraođổichấtdonấmmentiếtra,đặcbiệtlàdokhíCO2đ ư ợcnấmmensinhraliêntụctrongthờigiandài.

menbianồngđộcao).

Chúngtôichorằngchếphẩmnấmmencốđịnhvẫncóthểđượctáisửdụngtiếpchomộtsốchukỳlênmennữa

3.1.5 Sosánhhoạttínhlênmencủanấmmencốđịnhvànấmmentựdot r o n

g quátrìnht á i sửdụngđểlênmenbian ồngđộcaotheophươngphápchukỳ

Kếtquảtrênbảng3.5chothấyvới5chukỳlênmenliêntiếp,nấmmencốđịnht r

o n g gelalginate(nghiệmthứcA)cóthờigianl ê n mentrungbìnhcủamỗichukỳlà110,4giờthấphơn120,3%sovớithờigianlênmentrungbìnhcủamỗichukỳcủanghiệmthứcB(243,2giờ)vàthấphơn42,0%sovớithờig i a n l ê n mentrungbìnhcủam ỗichukỳcủanghiệmthứcC(156,8giờ)

Bảng3.5:Thờigianl ê n menvàhàmlượngethanoltrongbianontheop h ươngpháplênmenchukỳkhisử dụngnấmmencốđịnhvànấmmentựdo

Chukỳl

ên men Thờigianlênmen(giờ) Nồngđộethanol(%v/v)

Nấmmencố định

Kếtquảnàykhẳngđịnhlànấmmencốđịnhtronggelalginatecóhoạttínhlênmencaohơnsovớinấmmentựdotrongquátrìnhtáisửdụngđểl ê n menbianồngđộcao

3.2 Nghiêncứuứngdụngnấmmencốđịnhđểlênmendịchnha24 o Bxtừma ltđạimạch

3.2.1 Khảosátảnhhưởngcủatỷlệgiốngcấyđếnkhảnănglênmencủanấm

mencốđịnh

1.96 0.98

Chúngtôikhảosátảnhhưởngcủatỷlệgiốngcấy(từ1,0x107tb/mLđến4,0x107tb/

mL)

đếnđộnghọccủaquátrìnhlênmenchínhvớinấmmencốđịnhtronggelalginate

Khităngtỷlệgiốngcấybanđầuthìsốtếbàocựcđạitrongcanhtrườngsẽtăngtừ6,1x107tb/mLlên2,3x108tb/

mL(hình3.12),khảnăngsửdụngđườngkhửvàFANtănglầnlượttừ1 , 9 6 g/

L.hl ê n 3,87g/L.hvà0,98mg/L.hlên 9, 8 7 mg/

L.h(hình3.15),thờigianlênmenrútngắnlà108giờ.Tuynhiên,hàmlượngethanoltrongbianongiảmtừ8,52%(v/v)x u ống4,53%(v/v)

(hình3.17)vàhàmlượngdiacetyltrongbianontăngtừ0,99mg/Llên2,96mg/L(hình3.18)

Hình3 1 5 : Tốcđộtrungbìnhsửdụngcơchấtcủanấmme ncố

địnhkhitỷlệgiốngcấythayđổitừ1,0x 1 07tb/mLđến4,0 x107tb/mL

Hình3 1 7 : Tốcđộsinhethanolvàn ồngđộethanoltrongbi anonkhimậtđộtếbàogieocấythayđổitừ1 , 0 x107tb/

mL đến4,0x107tb/mL

Hình3.18:Sựb i ếnđổinồngđộdiacetyltrongb i a nonkhit ỷlệgiốngcấythayđổitừ1,0x 1 07tb/ m Lđ ế n4,0x107tb/mL

Từcácsốliệuthựcnghiệm,chúngtôinhậnthấytỷlệgiốngcấy1,0x107t b /

m L

làgiátrịthíchhợpchoquátrìnhlênmenbianồngđộcaovớinấmmencốđịnhtronggelalginate

3.2.2 Đánhgiáảnhhưởngcủathờigiansụckhítronggiaiđoạnđầucủaquá

trìnhlênmenđếnkhảnănglênmencủanấmmencốđịnh

2.37 1.97

1.95

1.66 1.66 1.36

0.95 1.15 1.14 1.27

Chúngtôikhảosátảnhhưởngcủathờigiansụckhôngkhítronggiaiđoạnđầucủaquátrìnhlênmen(0,4,8,12,16và20giờ)đếnsựsinhtrưởng,sửdụngcơchấtvàhìnhthànhsảnphẩmcủanấmmen.Nồngđộoxytrongdịchlênmenđượchiệuchỉnhổnđịnhở7,5ppmtrongsuốtgiaiđoạnsụckhí

2.6

1.3

0

01224364860728496108120132144 Thờigianlênmen(giờ)

1.8

0.9

1.2

0.6 0.47 0.54 0.54 0.60

Cungcấpoxyvàodịchnhasauthờiđiểmcấygiốngsẽmanglạimộtsốtácđộngtíchcựclẫntiêucựcchoquátrìnhlênmenbianồngđộcaovớinấmmencốđịnhtronggelalginate.Nếuthờigiansụckhôngkhíkéodàitừ0đến20giờsauthờiđiểmcấygiốngthìlượngsinhkhốicựcđạithuđ ư ợ ctăng90,2%

(hình3.19);tốcđộsửdụngđườngkhửvàFANlầnlượtt ăng74,0%và122,8%(hình3.21);tốcđộsinhtổnghợpethanolcủanấmmencốđịnhsẽtăng55,5%

(hình3.24)vàthờigianlênmenchínhđượcrútngắnlà60giờ.Tuynhiên,hàmlượngethanoltrongbianongiảm9 , 5 %

(hình3.24)vànồngđộdiacetyltrongbianontăng20%(hình3.25)

NồngđộN

-a m i n cótrongbi-anon(mg/

a2 ± 6,39 227,06b2±4,35 172,91c2±7,49 125,64d2±7,86

w)thìmậtđộtếbàocựcđạitrongcanhtrườngkhôngkhácbiệtcónghĩa.Tuynhiên,khitỷlệthếliệutrongdịchnhatăngtừ30%lên45%(w/

w)thìmậtđộtếbàocựcđạitrongcanhtrườnggiảm16,7%

Khităngtỷlệthếliệutrongdịchnhatừ0%lên30%(w/

w)thìtốcđộtrungbìnhsửdụngđườngkhửcủanấmmencốđịnhhầunhưkhôngthayđổivàđạtgiátrịkhoảng1,27-1,29g/

L.h.Tuynhiên,khitỷlệthếliệut r o n g dịchnhatăngtừ30%lên45%(w/

w)thìtốcđộsửdụngđườngkhử

%,sau132giờlênmen,độlênmenchỉđạtđược71,7%,thấphơngiátrịyêucầulà75%.Trongkhiđó,khitỷlệthếliệutrongdịchnhathayđổilầnlượttừ0%(w/

w)tănglên15%;30%và45%(w/

w)thìtốcđộsửdụngFANcủanấmmengiảmtươngứng8,9%;20,5%và40,5%sovớimẫuđốichứngkhôngsửdụngthếliệu

Hàmlượngethanoltrongbianonkhôngthayđổikhitỷlệthếliệusửdụngtừ0%tănglên30%(w/w)vàdaođộngkhoảng8,39-8,52%(v/

v).Nếutăngtỷlệthếliệusửdụngtừ30lên45%(w/

w)thìhàmlượngethanoltrongbianonvàtốcđộsinhtổnghợpethanollầnlượtgiảmtươngứ ng8,7%và7,6%

Ngoàira,hàmlượngcácsảnphẩmphụnhưdiacetyl,ethylacetate,propanolvàisoamylalcoholtrongbianoncóxuhướnggiảmdầnkhităngtỷlệsyrupmaltosetrongdịchnha,đặcbiệtlàởnghiệmthứcsửdụngthếliệuvớitỷlệcaonhất(45%w/w)(Bảng3.9)

Bảng3 9 Nồngđộcủamộtsốsảnphẩmphụtrongbian o n (mg/

L)khilênmendịchnha2 4oBx,sửdụngthếliệumaltosesyrupvớicáctỷlệkhácnhau

Sảnphẩmphụ(mg/L) Mứcthếliệu(%w/w)

3.3.2 ĐánhgiáảnhhưởngcủaphươngphápbổsungTween80vàodịchn hađếnhoạttínhlênmencủanấmmencốđịnh

ChúngtôikhảosátảnhhưởnghàmlượngTween80bổsung(0%-mẫuđốichứng;0,12;0,24;0,36và0,48%v/

v)vàodịchnha24oBx(sửdụng30%syrupmaltose)đếnđộnghọccủaquátrìnhlênmenbia

(mẫubổsung0,24và0,36%v/vTween80)và13,9%(mẫubổsung0,48%v/vTween80)

Chúngtôichọnh à m lượngTween80cầnbổsungvàodịchnhalà0,24%v/vđểthựchiệnthínghiệmtốiư uhóatheophươngphápquyh o ạchthựcnghiệmởphần3.3.4

Bảng3.10.ẢnhhưởngcủaviệcbổsungTween80vàodịchnhađếnquátrìnhlênmenbianồngđộcaos ửdụngnấmm encốđịnhtronggelalginate(Dịchnha24oBxcósửdụng30%thếliệusyrupmaltose).

Trongthínghiệmnày,hàmlượngergosterolbổsungvàodịchnhađượcthayđổilầnlượtlà0%(mẫuđốichứng),12,24và36mg/L.

96b1±1,39 7,7b2±0,84

96b1±0,98 7,8ab2±0,96

96b1±1,05 7,9a2±0,87

Tốcđộsửdụngđườngkhử(g/L.h) 1,32b3±0,02 1,48a3±0,02 1,49a3±0,02 1,50a3±0,02

TốcđộsửdụngFAN(mg/L.h)

Nồngđộethanoltrongbianon(%v/v)

2,61b4±0,02 8,41a5±0,04

2,82a4±0,06 8,36a5±0,08

2,82a4±0,01 8,33a5±0,05

2,87a4±0,02 8,33a5±0,09

Tốcđộsinhtổnghợpethanol(g/L.h) 0,62b6±0,01 0,69a6±0,01 0,69a6±0,01 0,68a6±0,01

Cácký tựkhácnhauthểhiệncácgiátrịtrongcùng1hàngcósựkhácbiệtcónghĩatạimứcp=0,05

Khilượngergosterolđượcbổsungvàodịchnhalà12mg/

L,sốtếbàocựcđại,tốcđộsửdụngcơchấtvàtốcđộsinhtổnghợpethanolcủanấmmencốđịnhđềutăngcaohơnsovớimẫuđốichứng.Điềunàylàmchothờigia nlê

n menchínhgiảm11,1%.Bêncạnhđó,hàmlượngethanolt r o n g bianonởmẫucóbổsungergosterollà12mg/

Lthìtươngtựnhưởmẫuđốichứng(Bảng3.11).Kếtquảởbảng3.11cũngchothấycáchàmmụctiêukhảosátkhôngcósựkhácbiệtkhihàmlượngergosterolb ổsungvàodịchnhagiatăngtừ12mg/Llên36mg/L

Nhưvậy,hàmlượngergosterolbổsung12mg/

Lsẽđượcchọnđểthựchiệntrongthínghiệmtốiư uhóatheophươngphápquyhoạchthựcnghiệmởphần3.3.4

3.3.3.

ĐánhgiáảnhhưởngcủaphươngphápbổsungkếthợpTween80vàergoste rolđếnhoạttínhlênmencủanấmmencốđịnh

3.3.4.1 TốiưuhóahàmlượngTween80vàergosterolkhibổsungkếthợpvà

odịchnhabằngphươngphápquyhoạchthựcnghiệm

Thínghiệmđượcbốtrítheophươngpháptrựcgiaobậchai,haiyếutố(vớiα=±

21/2),4thínghiệmlặplạiởtâm.ChúngtôisửdụngphầnmềmthựcnghiệmMoode-

Design(Version5.0)đểthiếtkếthínghiệmvàxửlýsốliệu.HaiyếutốđượckhảosátlàhàmlượngTween80-X1(%v/v)vàergosterol-X2(mg/

L)đượcbổsungvàodịchnha.HàmmụctiêuY(E%v/

v)làhàmlượngethanoltrongbianonkhiđộlênmencủacanhtrườngđạt75%