phương pháp phan tich quinine

CHUYÊN ĐỀ DƯỢC LIỆU CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOID NÓI CHUNG VÀ DƯỢC LIỆU CHỨA QUININE NÓI RIÊNG - MỤC LỤC Lời mở đầu Chương I Tổng quan tài liệu 1.1 Phương pháp đánh giá dược liệu 1.1.1 Cảm quan 1.1.2 Sử dụng kính hiển vi 1.1.3 Phương pháp hóa học 1.1.4 Phương pháp vật lý 1.1.5 Xác định độ ẩm 1.1.6 Định lượng tro 1.1.6.1 Tro toàn phần 1.1.6.2 Tro không tan acid hydrochlorid 1.1.6.3 Tro sulfat 1.1.7 Phương pháp sắc ký 1.2 Phương pháp phân tích Alkaloid 10 1.2.1 Phân tích định tính 10 1.2.1.1 Các phản ứng tạo tủa 10 1.2.1.2 Phản ứng tạo tủa 11 1.2.2 Phân tích định lượng 11 1.2.2.1 Xác định hàm lượng Alkaloid phương pháp phân tích trọng lượng 12 1.2.2.2 Xác định hàm lượng Alkaloid phương pháp không nước 14 Chương II Phân tích dược liệu chứa quinine 15 2.1 Phân tích định tính thuốc trị sốt rét quinine sắc ký mỏng 15 2.1.1 Nguyên tắc 15 2.1.2 Thuốc, dụng cụ, hóa chất 17 2.1.2.1 Thuốc 17 2.1.2.2 Dụng cụ, hóa chất 17 2.1.3 Các bước tiến hành kỹ thuật 17 2.1.3.1 Chuẩn bị dung dịch mẫu 17 2.1.3.2 Chuẩn bị mẫu thử 17 2.1.3.3 Chấm sắc ký 18 2.1.3.4 Chạy sắc ký 18 2.1.3.5 Phát 19 2.1.4 Đọc kết 19 2.1.5 Ưu nhược điểm phương pháp 20 2.2 Phân tích định tính phản ứng tạo màu tạo tủa 20 2.2.1 Phản ứng tạo màu 20 2.2.2 Phản ứng tạo tủa 21 2.3 Phân tích định lượng 22 Chương III Chỉ tiêu chất lượng 23 LỜI MỞ ĐẦU Cây Canhkina có tên phiên âm tiếng Pháp Quinquina Xuất phát từ Nam Mĩ, từ lâu vỏ Canhkina người dân số vùng giới sử dụng với nhiều mục đích khác nhau, đặc biệt hữu hiệu việc trị bệnh sốt rét Ở nước ta, vỏ Canhkina biết đến sử dụng vào đầu kỉ 20 Ngày nay, quinine ứng dụng để điều chế thuốc chống sốt rét Tuy nhiên bị lạm dụng nên chất lượng thuốc bị giảm có bị làm giả Với chuyên đề này, muốn trình bày rõ phương pháp đánh giá dược liệu chứa alkaloid nói chung dược liệu chứa quinine nói riêng CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Phương pháp đánh giá dược liệu: Đánh giá dược liệu nghĩa xác định dược liệu có tiêu chuẩn quy định hay không Tiêu chuẩn dược liệu quy định: đặc chất, độ tro, độ ẩm Những tiêu chuẩn đề để đảm bảo chất lượng thuốc có để giao dịch thị trường Có thể xếp phương pháp đánh sau: 1.1.1 Cảm quan: Phương pháp cảm quan nghĩa dùng cảm quan để đánh nhìn bên hình dáng, kích thước, màu sắc, vài dược liệu cần bẻ để quan sát bên Mùi đặc điểm nhiều dược liệu chứa tinh dầu, nhựa Vị cam thảo, cỏ ngọt; chua dược liệu chứa acid hữu cơ; đắng dược liệu chứa alkaloid, glucosid; cay ớt, gừng… 1.1.2 Sử dụng kính hiển vi: Phương pháp đánh giá dựa vào kính hiển vi bao gồm vi phẩu soi bột Đây phương pháp hay dùng để kiểm nghiệm dược liệu Trong vài trường hợp phương pháp có ưu phương pháp hóa học ví dụ để phân biệt loại tinh bột người ta dựa vào phương pháp hóa học mà phải nhờ vào kính hiển vi Một vài mảnh trúc đào dày tử thi xác định dễ dàng soi vi phẩu làm phản ứng tìm oleandrosid Dùng kính hiển vi không để xác định giả mạo mà ước lượng tỉ lệ chất giả mạo vào số lượng đặc điểm mẫu kiểm nghiệm so sánh với mẫu đối chứng 1.1.3 Phương pháp hóa học: Phần lớn dược liệu có thành phần hoạt chất xác định Các hoạt chất cho phản ứng màu đặc trưng, người ta dựa vào để định tính định lượng Ví dụ anthranoid dựa vào phản ứng Borntraeger, glycoside tim dựa vào phản ứng dẫn xuất nitro thơm Đối với alkaloid dựa vào tính kiềm định lượng phương pháp acid-kiềm Đôi người ta lại dựa vào thành phần hóa học hoạt chất đặc trưng cho dược liệu để đánh giá 1.1.4 Phương pháp vật lý: Trong nhiều trường hợp phát bị pha lẫn hay giả mạo cách soi mặt cắt dược liệu hay bột dược liệu ánh đèn phân tích tử ngoại Có trước soi người ta nhỏ thêm bột dược liệu vài loại thuốc thử (kiềm, acid…) Một số cao dược liệu cho màu sắc khác nhau, hoạt chất vậy, ví dụ aconitin (lơ sáng), berberin (vàng), emetin (đỏ cam) Quinin cho màu xanh lơ dung dịch oxy acid ánh sáng thường rõ đèn tử ngoại Việc ứng dụng số vật lý để đánh giá thường hay tiến hành tinh dầu béo hoạt chất: Độ hòa tan (thường biểu thị sau: 1gam tan …ml nước, …ml cồn ethylic, glycerin…) Tỷ trọng ( đặc biệt tinh dầu dầu béo) ví dụ: tỷ trọng tinh dầu bạc hà 20oC: 0,890-0,922 Tỷ trọng mật ong 20oC không 1,38 Góc quay cực riêng: Đối với chất lỏng tinh dầu, dầu béo [α]D25= α /l.d Đối với hoạt chất rắn [α]D25= α.100/l.c α: Góc quay cực đo l: bề dày lớp chất tình decimet d: tỷ trọng chất c: nồng độ phần trăm chất dung dịch Đo góc quay cực tỷ trọng nhiệt độ, ví dụ 25oC Chỉ số khúc xạ (đặc biệt tinh dầu dầu béo) ví dụ: số khúc xạ tinh dầu hương nhu trắng 20oC 1,510-1,528 Nhiệt độ đông đặc ( Đối với tinh dầu dầu béo) ví dụ nhiệt độ đông đặc tinh dầu hồi phải +15oC Nhiệt độ nóng chảy (Đối với sáp ong hoạt chất alkaloid, glycosid…)ví dụ nhiệt độ nóng chảy sáp ong vàng: 62-66oC 1.1.5 Xác định độ ẩm: Dược liệu thường quy định giới hạn độ ẩm định ví dụ dược điển II tập quy định độ ẩm cao hoa vàng không 13%, độ ẩm dược liệu dễ bị mốc, hư hỏng Song song với việc định lượng hoạt chất cần xác định độ ẩm để quy hàm lượng so với dược liệu khô tuyệt đối Có thể xác định độ ẩm cách sau đây: - Sấy tủ sấy áp xuất bình thường - Sấy tủ sấy áp xuất giảm (do máy hút chân không) - Làm khô bình hút ẩm với chất hút nước mạnh acid sunfuric đậm đặc, phosphorpentoxid áp suất giảm (có máy hút chân không) Hai cách sau thường áp dụng với dược liệu quí dễ hỏng nhiệt độ ta cần thu hồi ví dụ sữa ong chúa, nọc rắn… Đối với dược liệu chứa tinh dầu xác định độ ẩm phương pháp cất lôi đẳng phí, nghĩa lôi nước cách cất với dung môi hữu không trộn lẫn với dung dịch lại cho với nước hỗn hợp đẳng phí có nhiệt độ sôi ổn định Sau ngưng tụ để nguội, nước tách đọc thể tích Dung môi dùng xylem, toluene 1.1.6 Định lượng tro 1.1.6.1 Tro toàn phần: Tro toàn phần khối lượng cặn lại sau nung cháy hoàn toàn dược liệu Để so sánh kết quả, cần phải tiến hành điều kiện định Ví dụ, chén nung sứ, đường kính 35mm, sơ đem nung đỏ, để nguội cân bì, đặt mẫu dược liệu cắt tán nhỏ (1-5gram) cân xác Lúc đầu đốt nhẹ tăng dần nhiệt độ để dược liệu cháy hết Cần theo dõi điều chỉnh nhiệt độ để tránh than không bị thoát khỏi miệng chén Đốt xong xong cho chén vào lò nung nhiệt độ 500oC thu khối lượng không đổi Để tránh dược liệu hóa gỗ tạo than khó đốt cháy, ngừng nung làm ẩm nước cất acid nitric đậm đặc đem nung lại Sau tro không màu đen, người ta để nguội bình hút ẩm đem cân 1.1.6.2 Tro không tan acid hydrochloric: Thêm vào tro toàn phần 5ml HCl 10% Đậy chén vung mặt kính đồng hồ đun cách thủy 10 phút Dùng 5ml nước cất nóng để rửa mặt kính đồng hồ dùng nước rửa để pha loãng dung dịch lại chén Lọc dung dịch qua giấy lọc không tro, rửa cặn giấy lọc nước cất nóng nước rửa không phản ứng ion chlorid Chuyển giấy lọc có cặn vào chén nung trên, sấy khô, đốt nung nhiệt độ 500oC khối lượng không đổi Trừ trường hợp đặc biệt mộc tặc, tro biểu thị chủ yếu cát cấu tạo silic oxyd dược liệu không làm kỹ 1.1.6.3 Tro sulfat: Tro sulfat tro lại sau nhỏ aicd sulfuric dược liệu đem nung Phương pháp cho kết ổn định phương pháp tro toàn phần carbonat oxyd chuyển thành sulfat 1.1.7 Phương pháp sắc ký: Đây phương pháp hữu hiệu áp dụng để định tính, định lượng tách chiết thành phần hóa học dược liệu 1.1.7.1 Sắc kí cột: Sắc kí cột bao gồm sắc kí cột cổ điển sắc kí cột đại hay gọi sắc ký lỏng hiệu cao hay sắc ký lỏng cao áp Trong sắc ký cột cổ điển người ta thường dùng cột thủy tinh đường kính 1-5cm dài 30-100cm Hạt nhồi cột đường kính từ 150-300µm Sau chất tách pha tĩnh ta lấy phần pha tĩnh có mang chất đem chiết lấy chất Nếu dược chất tách pha tĩnh ta hứng lấy phân đoạn dịch rửa có hòa tan chất nhờ phận góp tự động Trang bị cho sắc kí cột cổ điển đơn giản, không tốn nên phương tiện chủ yếu để tách thành phần hóa học dược liệu Trong sắc kí cao áp, chất nhồi cột có cỡ hạt 3-10 µm Vì hạt nhỏ, dung môi chảy khó nên phải dùng bơm để nén Sắc kí lỏng cao áp có khả tách chất tốt Dung môi (pha di động) để rửa phải tinh khiết Cần lọc loại vẩn đuổi hết khí hòa tan siêu âm đun nóng, khuấy hút sục khí trơ Bơm nén phải tạo áp suất cao 200-500atm Cột thép không rỉ có đường kính 4-10mm, dài 10-30cm Có loại nhỏ chiều dài 3-10cm, đường kính 1-4mm Cột thủy tinh dùng áp suất 50atm Khi dung môi hòa tan chất khỏi cột qua detecto hay dùng detecto quang phổ tử ngoại khả biến Tùy theo chất tượng sắc kí người ta chia ta sắc ký hấp phụ, sắc ký phân bố, sắc kí trao đổi ion, sắc kí gel Trong sắc ký hấp phụ, nhôm oxyd, silicagel hay sử dụng Trong trình khai triển rửa giải chất phân cực bị lưu giữ mạnh Về pha động ta sử dụng dung môi với độ phân cực tăng dần: Dung môi Ether dầu 0,1 Hexan 0,1 Heptan 0,1 Cyclo 0,04 Carbon tetrachlorid 0,18 Ether isopropylic 0,28 Toluen 0,29 Benzen 0,32 Ether ethylic 0,38 Chlorofrom 0,40 Methylen chlorid 0,42 Dichlor ethan 0,49 Aceton 0,56 Dioxan 0,56 Butanol 0,56 Ethyl acetat 0,58 Acetonitril 0,65 Pyridin 0,71 Dimethylsulfoxid 0,75 Alcol isopropylic 0,82 Alcol ethylic 0,88 alcolmethylic 0,95 Muốn có dung môi với giá trị trung gian bảng trên, ta dùng hỗn hợp pha với hai dung môi theo tỉ lệ thích hợp Trong sắc kí phân bố, pha tĩnh chia làm loại: Loại thứ nhất, chất lỏng mang bề mặt hạt chất mang, qua trình rửa giải bị dung môi hòa tan, dùng Loại thứ hai, pha tĩnh kết hợp với chất mang Ví dụ chất mang silicagel tạo thành dẫn chất siloxan 10 ... kính hiển vi: Phương pháp đánh giá dựa vào kính hiển vi bao gồm vi phẩu soi bột Đây phương pháp hay dùng để kiểm nghiệm dược liệu Trong vài trường hợp phương pháp có ưu phương pháp hóa học ví... aicd sulfuric dược liệu đem nung Phương pháp cho kết ổn định phương pháp tro toàn phần carbonat oxyd chuyển thành sulfat 1.1.7 Phương pháp sắc ký: Đây phương pháp hữu hiệu áp dụng để định tính,... liệu 1.1 Phương pháp đánh giá dược liệu 1.1.1 Cảm quan 1.1.2 Sử dụng kính hiển vi 1.1.3 Phương pháp hóa học 1.1.4 Phương pháp vật lý