Nghiên cứu điều chế cao đặc ngũ vị tiêu độc và khảo sát một số chỉ tiêu chất lượng

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG THỊ HẢO MSV: 1201163 NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO ĐẶC NGŨ VỊ TIÊU ĐỘC VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI 20

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

HOÀNG THỊ HẢO MSV: 1201163

NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO ĐẶC NGŨ VỊ TIÊU ĐỘC VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI 2017

HOÀNG THỊ HẢO MSV: 1201163

NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ CAO ĐẶC NGŨ VỊ TIÊU ĐỘC VÀ KHẢO SÁT MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Người hướng dẫn:

TS Bùi Hồng Cường Nơi thực hiện:

LỜI CẢM ƠN

Với lòng biết ơn sâu sắc, tôi xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới:

TS Bùi Hồng Cường- Bộ môn Dược học cổ truyền, Trường đại học Dược Hà Nội,

người thầy đã luôn quan tâm, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện cho tôi được học hỏi, luôn giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực hiện và hoàn thành khóa luận

Tôi xin gửi lời cảm ơn tới các Thầy cô giáo, các chị kỹ thuật viên, cán bộ đang công tác tại bộ môn Dược học cổ truyền, đã tạo điều kiện để tôi hoàn thành khóa luận này

Tôi xin chân thành cảm ơn chị Nguyễn Thị Hương Thảo, Lê Hà Phương - Công ty

CPPT Dược liệu Anvy đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong thời gian làm thực nghiệm nghiên cứu của đề tài này

Nhân dịp n y tôi c ng xin gửi lời cảm ơn đến an gi m hiệu c ng to n thể c c Thầy

Cô gi o Trường đại học Dược Nội đã dạy d v tạo mọi điều iện thuận lợi cho tôi trong suốt thời gian tôi học tập tại trường

Cuối cùng tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè đã động viên, khích lệ tôi trong suốt quá trình học tập của mình

Do thời gian l m thực nghiệm c ng như iến thức của bản thân c n c hạn, h a luận

n y c n c nhiều thiếu s t Tôi rất mong nhận được sự g p của c c thầy cô, bạn b để

h a luận được ho n thiện hơn

Tôi xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày 18 th ng 5 năm 2017

Sinh viên Hoàng Thị Hảo

MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN

DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

Trang

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1 TỔNG QUAN 2

1.1 Tóm lược về bệnh mụn nhọt, trứng cá, mẩn ngứa, dị ứng: 2

1 1 1 Theo quan điểm y học hiện đại: 2

1 1 2 Theo quan điểm y học cổ truyền: 2

1 2 Phương thuốc Ng vị tiêu độc: 3

1.2.1 Thành phần: 3

1 2 2 Công năng, chủ trị của phương thuốc: 3

1 3 Thông tin cơ bản về các vị thuốc: 4

1.3.1 Kim ngân hoa: 4

1.3.2 Bồ công anh: 6

1.3.3 Sinh địa 8

1.3.4 Cúc hoa 11

1.3.5 Cam thảo 13

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ P ƯƠNG P ÁP NG IÊN CỨU 16

2.1 Nguyên liệu, phương tiện nghiên cứu: 16

2 1 1 Dược liệu: 16

2.1.2 Thiết bị, máy móc: 16

2.1.3 Hóa chất, chất chuẩn: 17

2.2 Nội dung nghiên cứu 17

2.2.1 Nghiên cứu điều chế cao đặc bài thuốc: 17

2.2.2 Nghiên cứu định tính một số thành phần của cao đặc bài thuốc v dược liệu:17 2 3 Phương ph p nghiên cứu: 17

2.3.1 Bào chế cao đặc bài thuốc: 17

2 3 2 Định tính một số thành phần hóa học của cao đặc Ng vị tiêu độc v dược liệu: 18

2 3 3 Định lượng catalpol trong các mẫu cao bằng HPLC 26

Chương 3 T ỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 28

3.1 Bào chế cao đặc 28

3.1.1 Cao chiết nước: 28

3.1.2 Cao chiết ethanol 70% 29

3 2 Định tính một số thành phần hóa học của cao đặc Ng vị tiêu độc v dược liệu 31

3 2 1 Định tính các nhóm chất chính trong cao v dược liệu bằng phản ứng hóa học: 31

3 2 2 Định tính bằng phương ph p SKLM: 32

3 3 Định lượng catalpol bằng HPLC: 37

3.4 BÀN LUẬN 41

3.4.1 Về điều chế dạng cao đặc: 41

3.4.2 Về thành phần hoá học: 42

3.4.3 Định lượng catalpol: 44

Chương 4 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48

4.1 Kết luận 48

4.2 Kiến nghị: 49

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

ALT Aspartate amino transferase,

̅, Hiệu suất trung bình, Độ ẩm trung bình

HIV Hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải ở người

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 3.1 Hiệu suất bào chế, độ ẩm và cảm quan của cao chiết nước 29

Bảng 3.2 Hiệu suất bào chế, độ ẩm và cảm quan của cao chiết Et70% 30

Bảng 3.3 Kết quả định tính thành phần hóa học trong cao và các vị thuốc 31

Bảng 3.4 Kết quả SKLM định tính cắn EtOAc từ cao và Kim ngân hoa, 33

Bảng 3.5 Kết quả SKLM định tính cắn EtOAc từ cao và Bồ công anh, Cúc hoa ở bước sóng 254nm 34

Bảng 3.6 Kết quả SKLM định tính cắn n-buthanol từ cao và Kim ngân hoa, Cam thảo ở bước sóng 254 nm 35

Bảng 3.7 Kết quả SKLM định tính cao v Sinh địa sau khi phun thuốc thử hiện màu 36

Bảng 3 8 Tính tương thích của hệ thống sắc ký 39

Bảng 3.9 Kết quả định lượng catalpol trong các mẫu cao 40

Bảng 3.10 Một số chỉ tiêu đề xuất trong tiêu chuẩn ĩ thuật của cao đặc 46

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

ình 2 1 Phương thuốc Ng vị tiêu độc 16

Hình 2.2 Hệ thống thiết bị sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao Linomat 5 16

Hình 3.1 Sắc đồ DT cắn EtOAc từ cao và KN, CT ở bước sóng 254 nm 33

Hình 3.2 Sắc đồ DT cắn EtOAc từ cao và BCA, CH ở bước sóng 254 nm 34

Hình 3.3 Sắc đồ DT cắn n-buthanol từ cao và KN, CT ở bước sóng 254 nm 35

Hình 3.4 Sắc đồ DT cắn methanol từ cao và SD sau khi phun TT hiện màu 36

Hình 3.5.Sắc đồ của catalpol chuẩnở bước s ng 210 nm……… 38

Hình 3.6 Sắc đồ của cao placebo ở bước s ng 210 nm……… 38

Hình 3.7 Sắc đồ của cao chiết nước ở bước sóng 210 nm………38

Hình 3.8 Sắc đồ của cao chiết ethanol ở bước sóng 210 nm……… 39

ĐẶT VẤN ĐỀ

M a h đến l thời điểm m rất nhiều người gặp phiền to i do hiện tượng n ng trong người hoặc dị ứng gây nên như mụn nhọt, mẩn ngứa, nổi mề đay, Theo phân tích của Đông y, nóng trong người có 3 nguyên nhân thường gặp Thứ nhất là hỏa độc, nhiệt độc: do trúng phải nhiệt độc từ bên ngo i như nắng n ng, hoặc ăn uống nhiều chất cay n ng, uống nhiều rượu bia hỏa độc, nhiệt độc tích tụ trong cơ thể v biểu hiện ra bên ngo i th nh mụn nhọt, mẩn ngứa, rôm sẩy… Thứ hai do chức năng tạng phủ qu yếu hông đủ sức thanh thải chất độc trong qu trình chuyển h a sinh ra v ngưng tích lại (chức năng gan, thận, đại tr ng) Thứ 3 do yếu tố nội tiết

Để điều trị cần l m thanh m t cơ thể, dùng thuốc kháng viêm, chống dị ứng Việc

sử dụng thuốc tân dược có tác dụng nhanh, mạnh nhưng c nhiều tác dụng phụ Điều trị bằng thuốc cổ truyền có tác dụng tốt và có thể khắc phục những nhược điểm của tân dược, đã c nhiều sản phẩm ra đời dựa trên các bài thuốc và những nguyên tắc điều trị của Y học cổ truyền như Tiêu độc PV (CTCP Dược thảo Phúc Vinh); Thanh nhiệt giải độc Thất Diệp Nhất Chi Hoa (Công ty Thảo mộc Tuệ Minh)…Phương thuốc Ng vị tiêu độc gồm 5 vị Kim ngân hoa, Bồ công anh, Cúc hoa, Sinh địa, Cam thảo có tác dụng thanh nhiệt giải độc cơ thể, điều trị các chứng mụn nhọt, mẩn ngứa, dị ứng Tuy nhiên, việc sử dụng dạng thuốc sắc hông được tiện dùng

Nhằm góp phần nghiên cứu điều chế dạng cao đặc từ phương thuốc làm bán thành phẩm để tiếp tục nghiên cứu bào chế dạng hiện đại và tiêu chuẩn hóa cao này,

đề tài “ Nghiên cứu điều chế cao Ngũ vị tiêu độc và khảo sát một số chỉ tiêu chất lượng” được thực hiện với các mục tiêu cụ thể:

- Điều chế cao đặc Ng vị tiêu độc bằng phương ph p chiết nóng với dung môi nước

Chương 1 TỔNG QUAN 1.1 Tóm lược về bệnh mụn nhọt, trứng cá, mẩn ngứa, dị ứng:

1.1.1 Theo quan điểm y học hiện đại:

Nhọt là tình trạng viêm cấp tính gây hoại tử nang lông và tổ chức xung quanh [2] thường xuất hiện đột ngột như một vết sưng, rồi trong một vài ngày vết thương đầy

mủ, lớn hơn v đau hơn Nhọt xảy ra ở bất cứ mô n o trên da, nhưng chủ yếu ở cổ, nách, mông, khu vực lông, tóc Nhọt và nhọt mủ l đau, sưng đầy mủ hình th nh dưới

da khi vi khuẩn lây nhiễm và bùng lên một hoặc nhiều nang tóc Nhọt thường bắt đầu như đỏ, thành khối Các cục u nhanh ch ng đầy mủ, phát triển lớn hơn v đau đớn hơn cho đến khi bị vỡ và chảy nước Nhọt độc là một nh m c c b ng nước đã hình th nh một khu vực kết nối của nhiễm trùng da [10]

Trứng cá là bệnh da thông thường gây nên do tăng tiết chất bã nhờn và viêm của

hệ thống nang lông tuyến bã [2] Viêm nang lông, tuyến bã, do đ c c chất nhờn tích

tụ lại trong nang lông không bài tiết ra ngo i được, m theo tăng tiết mồ hôi Sự gia tăng b i tiết mồ hôi và chất bã nhờn làm tích tụ ngày một nhiều trong l chân lông tạo thành các mụn [10]

Biểu hiện sẩn ngứa là tổn thương nốt nhỏ hoặc sẩn kèm theo cảm giác ngứa Sẩn ngứa là phản ứng viêm xuất tiết, xuất hiện ở lớp trung bì nông Phản ứng có sự tăng thâm nhiễm của tế bào lympho và bạch cầu đa nhân trung tính [6]

1.1.2 Theo quan điểm y học cổ truyền:

Đinh nhọt độc sinh ra một phần l do ăn cao lương mĩ vị, lại thêm dinh vệ hư yếu cho nên hỏa độc ph t t n ra ngo i m th nh Căn cứ vào tên gọi thì có nhiều loại, mà

ch mọc c ng hông nhất định Có 5 loại nhọt độc do tâm, phế, can, tỳ, thận Nhọt

m u đỏ l tâm đinh, m u trắng là phế đinh, m u xanh hoặc tía l can đinh, m u v ng l

tỳ đinh, m u đen l thận đinh [5]

Phân loại bệnh mụn trứng c lâm s ng thường gặp trong Trung y:

- Phế nhiệt huyết nhiệt: mụn trứng cá dạng phế nhiệt huyết nhiệt là do phế vệ bất cố, ngoại cảm phong nhiệt gây nên, đặc điểm là mặt đỏ bừng, mụn sưng đau hoặc có

- Can uất huyết ứ: là do tâm trạng không thoải mái, can khí ứ kết, khí trệ huyết ứ, ứ lâu hóa nhiệt, ứ kết tại da gây nên mụn, đặc điểm là mụn m u tím đỏ, trước khi hành kinh thì mụn nổi nhiều hơn, thường đi m theo triệu chứng tức ngực, kinh nguyệt trước kì, máu có cục, lưỡi đỏ, nấm lưỡi trắng, mạch huyền [11]

1.2 Phương thuốc Ngũ vị tiêu độc:

Theo s ch “Dược học cổ truyền”, phương thuốc Ng vị tiêu độc gồm các thành phần như dưới, tuy nhiên do điều kiện đề tài nên thay Cam thảo đất thành Cam thảo bắc

1.2.2 Công năng, chủ trị của phương thuốc:

- Công năng: thanh nhiệt giải độc, tiêu t n đinh sang

- Chủ trị: nhiệt độc, huyết nhiệt gây ra mụn nhọt, mẩn ngứa, viêm tuyến sữa, tắc tuyến sữa [13]

- Giải thích phương thuốc:

Phương thuốc này Kim ngân hoa là chủ dược (vị quân), có tác dụng thanh nhiệt, giải độc, tiêu sưng ung nhọt Bồ công anh có tác dụng thanh can nhiệt, giải độc, Cúc hoa có tác dụng giải biểu nhiệt, thanh can nhiệt là thần dược Sinh địa đ ng vai tr l m

t dược, với tác dụng thanh nhiệt lương huyết, sinh tân dịch Cam thảo tính trung hòa, tác dụng điều bổ do vậy dùng với thuốc độc thì giải độc, dẫn thuốc v điều hòa tính vị các vị thuốc h c trong phương thuốc, là sứ dược

Phương thuốc gồm các nhóm tác dụng chính:

- Thanh nhiệt giải độc: Kim ngân hoa, Bồ công anh

- Giải biểu nhiệt: Kim ngân hoa, Cúc hoa

- Thanh nhiệt lương huyết: Sinh địa

1.3 Thông tin cơ bản về các vị thuốc:

1.3.1 Kim ngân hoa:

1.3.1.1 Tên khoa học: Flos Lonicerae [1], [4], [7], [15], [13]

1.3.1.2 Bộ phận dùng: Hoa kim ngân- là nụ hoa lẫn hoa đã nở được phơi sấy của cây

Kim ngân- Lonicera japonica Thunb., họ Kim ngân- Caprifoliaceae [1], [9], [13], [19]

1.3.1.3 Thành phần hóa học:

- Thành phần chính là flavonoid: các flavonoid trong nụ bao gồm rutin; β-D-galactosid [1], [8], [18], [35], [36], [43] ; lonicerin, hyperosid, luteolin-7-O-neohesperidosid, tricin-7-O-β-D-glucospyranosid, ochna-flavon L, chrisoeirol-7-β-D-hesperi-dosid, avicularin và quercetin [1]; luteolin-7-O-β-D-glucosid, quercetin-3- O-β-D-glucospyranosid [35], [36], [43]

luteolin-7-O Iridoid glycosid: loniceracetalid A, B, swerosid, centaurosid [1], [43] và secoxyloganin [1], [18], [43], loniceraflavon, vogelosid, epivogesid [18], [43]; 7-O-ethyl swerosid, ketologanin, lonijaposide A,B,C,D,E,F,G [36], [43], secologanin [18], [35], [43]; 7-epi-loganin, 7-epi-vogeloside, loganin acid, secologanoside-7-methyl ester [35]

- Saponin: lonicerosid A-C, marcanthoidin B [1], [36]; (1→2)-α-L-arabinopyranosyl hederagenin-28-O-β-d-xylpyranosyl (1→6)-β-D-glucopyranosyl ester; macranthoidin A, B; hederagenin-28-O-β-d-glucopyranosyl ester, acid oleanoic [35], [43]

3-O-α-L-rhamnopyranosyl Tinh dầu [36]: gồm α3-O-α-L-rhamnopyranosyl pinen; hex3-O-α-L-rhamnopyranosyl 13-O-α-L-rhamnopyranosyl en; hex3-O-α-L-rhamnopyranosyl 33-O-α-L-rhamnopyranosyl en3-O-α-L-rhamnopyranosyl 13-O-α-L-rhamnopyranosyl ol; α3-O-α-L-rhamnopyranosyl terpineol; carvacrol; eugenol [18]

- Acid hữu cơ: acid caffeic; acid chlorogenic; methyl chlorogenate; caffeoylquinic acid butyl ester; 3-O-caffeoylquinic acid methyl ester; acid 3,5-O-dicaffeoylquinic; acid 3-O-dicaffeoylquinic [35], [36], [43]

3-O Một số chất carotenoid: β3-O cryptoxanthin và auroanthin [1]

- Một số chất khác: 1-O-methyl-myo-inositol; β-sitosterol; sucrose; glucose [36], [43]

1.3.1.4 Tác dụng sinh học:

- Kháng khuẩn: có tác dụng kháng khuẩn trên một số vi khuẩn như tụ cầu vàng, liên cầu khuẩn, trực khuẩn lị, trực khuẩn thương h n [1], [7], [8], [15], [18], [30], [43],

và một số loại virus [8], [15], virus influenza pneumonia, virus influenza A, virus

hô hấp [30], phế cầu, bạch hầu [8], [30], [43]

- Chống viêm, làm giảm chất xuất tiết v l m tăng t c dụng thực bào của bạch cầu [7], [43], ức chế hình thành histamin, nitric oxid, và bài xuất TNF-α [24], [30]

- Ngăn cản sự tích tụ mỡ ở bụng [1] làm hạ cholesterol trong máu [7], tăng cường chuyển hóa chất béo [18]

- Tác dụng trên đường huyết: nước sắc hoa kim ngân cho uống l m tăng đường huyết trên thỏ, tác dụng kéo dài 5-6 h [8], [18]

- Tăng b i tiết dịch vị và mật [7]

- Tác dụng lợi tiểu [7]

- Ngoài ra Kim ngân hoa còn có tác dụng in vitro và in vivo trong điều trị COPD với

t c động ức chế sản xuất các cytokine tiền viêm [34]

- Swerosid được chứng minh có tác dụng bảo vệ gan [1], nghiên cứu khác cho thấy Kim ngân hoa có tác dụng bảo vệ khi tế bào gan tổn thương cấp tính [37]

 Giải biểu: Kim ngân hoa có thể chất nhẹ, tính tuyên tán, có thể dùng trong trường hợp cảm sốt mới phát [4], [7], [8], [13], [15], [18] đau đầu, họng khô

h t nước (ngoại cảm phong nhiệt, ôn nhiệt sơ hởi, thường kết hợp với Liên kiều, Bạc hà, Kinh giới) [4], [7], [13], [15]

 Thanh thấp nhiệt ở vị tràng: trị kiết lị [1], [4], [7], [13], [18] đau chướng bụng,

ỉa ra máu mủ, ỉa chảy, phân bọt chua lổn nhổn [15]

 Viêm gan siêu vi tr ng giai đoạn đầu kèm sốt, do thấp nhiệt [15]

 Ngoài ra còn chữa viêm tắc tia sữa, vú sưng rắn phát sốt, đ i rắt buốt [15]

 Lương huyết chỉ huyết: chữa tiểu tiện ra máu [13]

- Dùng bộ phận trên mặt đất, thường d ng l tươi hoặc phơi, sấy khô của cây

Bồ công anh- Lactuca indica L., họ Cúc- Asteraceae [8], [13], [18]

1.3.2.3 Thành phần hóa học:

- Bồ công anh chứa 91,8% l nước; 3,4% protid; 1,1% glucid; 2,9% xơ; 2 chất đắng chính là lactucin [4], [18] , và lactucopicrin; ngo i ra c n c β-amyrin; taraxasterol [7], [18], germanicol [18]

- Terpen: 3β-hydroxyglutin-5-ene; 11β-13-dihydrolactucin ; 2-phenylethyl glucopyranoside [27]; lactucain A, B, C; cichoriosides B [23]

β-D Dẫn chất của acid quinic: caffeic acid; 3,5-di-O-caffeoylquinic acid; 3,5-di- caffeoyl- muco-quinic acid; 4,5-di- O-caffeoylquinic acid; 5- O-caffeoylquinic acid; 3- O-caffeoylquinic acid; 5- O-(E)-p-coumaroylquinic acid; acid chlorogenic [23]

O Flavonoid: quercetin 5O OO βO DO glucopyranoside; 5,2’O dihydroxyO 7O OO βO DO glucuronylflavone ; quercetin 3- O- α-L-rhamnopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside [26] quercetin; quercetin 3-O-glucoside; rutin; apigenin; luteolin [23], luteolin 7- O- β-D-glucuronide, quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside [26], [38] 1.3.2.4 Tác dụng sinh học:

β-D Bồ công anh được thử nghiệm với phương ph p lồng cử động thử nghiệm đã thể hiện tác dụng an thần [18]

- Flavonoid của Bồ công anh đã được nghiên cứu tác dụng sinh học thấy có tác dụng

ức chế men oxy hóa khử peroxydase và catalase máu chuột cống trắng Những thử nghiệm với huyết thanh người c ng cho t c dụng khá rõ rệt [18]

- Thuốc có tác dụng kháng khuẩn [13]: thuốc sắc Bồ công anh ức chế chế các loại vi khuẩn như tụ cầu vàng, liên cầu khuẩn dung huyết, phế cầu, não mô cầu, trực khuẩn bạch hầu, trực khuẩn lỵ, trực khuẩn mủ xanh, leptospira hebdomadia [7]

- Tác dụng nhuận tràng [7], [13], tác dụng chống oxy hóa [38]

- Có tác dụng lợi mật, bảo vệ gan, lợi tiểu [7], cao chiết methanol của Bồ công anh có

tác dụng in vitro chống lại HBV [26]

- Bồ công anh ngoài tác dụng lợi tiểu c n t c động trực tiếp lên các tế bào biểu mô có thể bảo vệ chống lại nhiễm trùng E.coli, từ đ c thể phát triển các chiến lược thay thế trong điều trị nhiễm tr ng đường tiết niệu [31]

 Thanh can nhiệt: d ng đối với bệnh đau mắt đỏ [13]

 Thanh nhiệt giải độc: chữa mụn nhọt, đặc biệt là nhọt vú, nhọt trong ruột [4], [8], [9], [13], [15], [18] , sang lở, viêm ruột (trường ung), viêm tiết niệu (nhiệt lâm), tiểu buốt, tiểu rắt, ph th ng, đau họng (hầu tý) [4]

 Lợi sữa, giảm đau: d ng đối với phụ nữ sau đẻ ít sữa, bị tắc tia sữa gây sưng tuyến vú, đau đớn [4], [13], [15]

- Liều dùng: 20-40g l tươi [8], [18], hoặc 10-15g lá khô hay cành và lá khô [8] hoặc 8-30g cây khô sắc uống [7], [18]; 8-20g, tươi c thể lên đến 60g [13]

- Kiêng kị: trường hợp âm hư hoặc tràng nhạc, ung nhọt đã vỡ mủ [4], [13], [18]

1.3.3 Sinh địa

1.3.3.1 Tên khoa học : Radix Rehmanniae glutinosae [7], [13]

1.3.3.2 Bộ phận dùng:

Rễ củ của cây Địa hoàng-Rhemannia glutinosa (Gaertn.) Libosch.,

họ Hoa mõm sói –Scrophulariaceae [4], [8], [13], [18]

1.3.3.3 Thành phần hóa học:

- Iridoid glycosid : catalpol [1], [7], [8], [18] rehmaniosid A; rehmaniosid B; rehmaniosid C; rehmaniosid D ; ajugol; aucubin; melitosid Ngoài ra còn có các iridoid rehmaglutin A; rehmaglutin B; rehmaglutin C; rehmaglutin D và một iridoid glucosid có nguyên tố Cl là glutinosid [18]; jioglutoside A, B; geniposide;

ajugoside; α-L-rhamnopyranosyl-(1 → 6)-D-glucopyranose, acid 8-epi-loganic, các 6-0-acylated ajugol [32]; 6’-O-α-D-galactosylcatalpol; 6-O-α-D-galactosylcatalpol; 8-O-α-D-galactosylleonuride và 5-O-β-sophorosylmonomelittoside [33]

Catalpol là iridoid glycosid được phân lập đầu tiên, Phạm Xuân Sinh và cộng sự (1998) đã chứng minh rễ củ Địa ho ng c h m lượng catalpol 0.3% lúc mới thu hoạch, 1.09% sau khi chế biến sơ bộ và ủ ẩm 3 ngày, ở giai đoạn thành phẩm Sinh địa h m lượng giảm xuống còn 0,58% và 0.1% sau khi chế biến thành Thục địa [13], [18]

- Ionon glucosid: rehmaionosid A; rehmaionosid B; rehmaionosid C ngoài ra còn có monoterpen glucosid là rehmapicrosid [18], frehmaglutoside G, frehmaglutoside H , rehmapicroside, acid sec-hydroxyaeginetic rehmapicroside, dihydroxy-β-ionone, trihydroxy-β-ionone, rehmaionoside A, rehmaionoside C [22]

- Cacbohydrat: gồm D-glucose; D-fructose; sucrose; maninotriose; rafinose; vesbascose; stachyose; D-manitol, trong đ stachyose l th nh phần chính của dịch chiết nước rễ củ [1], [8], [18], [42], ngoài ra còn có 1-ethyl-β-D-galactopyranosid [18]

- Các thành phần khác :

Các acid amin 0,15-6,15% (ít nhất 15 acid amin tự do) [8], [18], ester của acid béo 0,01% (methyl linolcat, methyl palmitat); β-sitosterol; daucosterol; acid palmitic; acid sucinic; campesterol [7], [18]

đường huyết giảm xuống, sau 4h lượng đường huyết giảm xuống thấp nhất rồi dần dần trở lại bình thường, sau 7h đường huyết trở lại mức bình thường [8]

Catapol có tác dụng hạ đường huyết rõ rệt đã được thí nghiệm trên súc vật [1]

- Tác dụng trên huyết quản: thuốc có tác dụng cường tim, hạ áp [7]

- Tác dụng lợi tiểu [7], [18]: thử nghiệm trên chó gây mê bằng cloral hydrat được tiêm tĩnh mạch thuốc Sinh địa bằng phương ph p đếm giọt nước tiểu thì thấy số lượng nước tiểu tăng lên [8]

- Tác dụng cầm máu [7]: khả năng rút ngắn thời gian đông m u của thỏ [8]

- Tác dụng chống viêm:trên thực nghiệm nước sắc Sinh địa có tác dụng chống viêm [7]

- Catapol có tác dụng bảo vệ các tế bào thần kinh khỏi c c độc tính thần kinh, là một chất chống viêm đầy hứa hẹn trong liệu pháp phòng ngừa hoặc điều trị các bệnh thoái hóa thần inh liên quan đến phản ứng viêm như Alzheimer [44]

- Sinh địa có tác dụng ức chế miễn dịch kiểu corticoid nhưng hông l m ức chế hay teo vỏ thượng thận Thực nghiệm đã chứng minh Sinh địa có thể làm giảm tác dụng

ức chế vỏ tuyến thượng thận của corticoid [7]

- Tác dụng kháng khuẩn: Sinh địa có thể ức chế sự sinh trưởng kén một số vi trùng [8]

- Tác dụng chữa lành tổn thương do đ i th o đường (loét dạ dày, loét bàn chân) [28]

- Oligosaccharid trong Sinh địa có tác dụng ức chế tổn thương do CCl4 gây ra trên gan chuột, thông qua giảm ALT, AST huyết thanh; tăng nồng độ glutathion gan, glutathion peroxidase superoxid dismutase và giảm nồng độ malonaldehyd gan so với lô chứng [42]

- Tác dụng chống dị ứng: tác dụng ức chế phản ứng dị ứng trên in vivo và in vitro,

mức độ ức chế phụ thuộc liều, dịch chiết nước Sinh địa làm giảm nồng độ histamin huyết thanh, ức chế phản ứng dị ứng da do anti-dinitrophenyl (DNP) IgE [25]

m u, suy nhược cơ thể, viêm họng [7], [18]

 Chỉ h t: sinh địa c n d ng điều trị đ i đường có kết quả, thường phối hợp với Huyền sâm , C t căn, o i sơn, Tang diệp [13], [15]

- Liều dùng: 12-40g [4], [13]; sinh địa tươi 20-120g [7], 12-30g [18]

- Kiêng kị: thận trọng với người tỳ hư, đầy bụng, đại tiện lỏng, dương hư [4], [7], [13], [15] nhiều đ m, thấp nhiệt [4], [13]

germacren D; γ-cadinen; nerolidol; caryophyllen oxyd; cadinol; chrysanthenol [18]

- Sesquiterpen: angelyol cumambrin B; arteglasin A; angeloylajadin; chrysetunon; tuncfulin; cumambrin A [18]

- Flavonoid: chrysanthemin [4], [7], [8], [18]; acacetin [7], [18], [29]; luteolin 7- O- β-D-glucopyranosid; acacetin-7-O-β-D-galactopyranosid [18]; apigenin; luteolin; linarin [29]

- Adenin; cholin; stachydrin [7], [8], [18], acid amin [18], vitamin A [4], [8], [18]

- Một số thành phần khác: coptiside I; chrysandiol; B chrolochrymorin [7] indicumenon; α-amyrin; β-amyrin; sesamin [18]

1.3.4.4 Tác dụng sinh học:

- Cúc hoa có tác dụng dãn mạch v nh, tăng lưu lượng máu ở mạch vành làm giảm thiếu m u cơ tim, hạ huyết áp, ức chế độ thẩm thấu mao mạch, hạ sốt Hoạt tính hạ huyết áp của Cúc hoa có thể là hiệu quả của tác dụng ức chế vận mạch có nguồn gốc trung tâm và tác dụng ức chế adrenalin [7]

- Cúc hoa có tính chống viêm, chống oxy hóa, và chống cao huyết áp [29]

- Từ cao chiết ethanol Cúc hoa phân đoạn ethyl acetat, người ta phân lập được 4 flavonoid: acacetin, apigenin, luteolin, linarin có tác dụng chống loãng xương trên chuột cắt bỏ buồng trứng, trong đ linarin c t c dụng hiệu quả nhất trên bảo vệ chống lại sự mất xương, tăng mật độ xương, từ đ có thể đề nghị là một phương pháp thay thế tự nhiên để điều trị loãng xương [29]

- Tác dụng ức chế một số loại vi khuẩn như tụ cầu vàng, liên cầu khuẩn dung huyết beta, nhiều loại trực khuẩn gây bệnh và nấm ngoài da [7]

- Có hiệu quả bảo vệ thần kinh khỏi sự tổn thương do thiếu máu cục bộ có thể liên quan tới sự tăng c c cyto ine chống viêm [39], có tiềm năng điều trị Parkinson dựa trên cơ chế ức chế sự chết tế bào thần kinh dopaminergic thông qua ức chế sự chết theo chương trình [46]

 Thanh nhiệt giải độc, chữa mụn nhọt, đinh độc, ngoài ra còn chữa các bệnh da tê

bì, chứng mất cảm giác của da, cơ [4], [7], [13], [18]

 Nữ bế kinh, huyết tích, đau bụng kinh [15]

Rễ phơi hay sấy khô của cây Cam thảo bắc Glycyrrhiza glabra L hoặc

Glycyrrhiza uralensis Fisch ex DC [1]

Họ Đậu (Fabaceae) [3], [4], [8], [13], [18]

1.3.5.3 Thành phần hóa học:

- Các saponin: saponin quan trọng nhất là acid glycyrrhizic ( còn gọi là acid glycyrrhizinic) saponin nhóm olean, h m lƣợng từ 10-14% [1], 6-12% [18] trong dƣợc liệu khô hoặc h m lƣợng 6-14%, có khi tới 23% [8] Các dẫn chất triterpenoid

h c nhƣ acid liquiritic; acid 18-α-hydroxy-glycyrrhetic; acid hydroxyglycyrrhetic; glabrolid; desoxyglabrolid; isoglabrolid; acid liquiridiolic…[1]

24 C c flavonoid: h m lượng flavonoid trong rễ cam thảo là 324 4% trong đ liquiritin [1], [8], [18], [20] và isoliquiritin là hai flavonoid quan trọng [1]

Ngoài ra còn có nhiều flavonoid thuộc các nhóm khác: isoflavan (glabridin) [40], [41], isoflavon (glabron); isoflaven (glabren) [1]

- Các dẫn chất coumarin: umbelliferon; herniarin; liqcoumarin [1]

- Các hợp chất estrogen có nhân sterol với h m lượng thấp [18]

- Ngoài ra trong rễ cam thảo còn có 20-25% tinh bột; 3-10% glucose và saccharose [1]

1.3.5.4 Tác dụng sinh học:

- Cam thảo có tác dụng chống loét dạ dày [1], [7], [8], [13], [18], [21], ức chế tác

dụng gây tăng tiết dịch vị của histamin, chống co thắt cơ trơn ruột (đối kháng với

histamin, acetycholin), do thành phần flavonoid [1], [8], [13], [18]

- Cam thảo có tác dụng long đờm [1], [7], [21], giảm ho [18]

- Tác dụng gây trấn tĩnh, ức chế thần inh trung ương, giảm vận động tự nhiên, hạ sốt, giảm hô hấp [18]

- Các flavonoid có trong Cam thảo có tác dụng chống oxy h a, ngăn ngừa xơ vữa động mạch, giảm tích l y mỡ bụng, hạ đường huyết [1]

- Tác dụng ức chế enzym monoaminoxydase (MAO) của liquiritigenin và isoliquiritigenin [1]

- Tác dụng kháng khuẩn: cao chiết ethanol Cam thảo có tác dụng ức chế các loại tụ cầu vàng, trực khuẩn E.Coli và trùng roi, còn có tác dụng chống viêm [7], [13], [21]

- Cam thảo chứa chất glycyrrhizin có tác dụng giải độc nhất định với ngộ độc thức ăn hoặc trúng độc một số thuốc khác: morphin; cocain; strychnin; atropin; độc tố bạch hầu, uốn v n (cơ chế: glycyrrhizin thủy phân thành acid glucuronic kết hợp với chất độc) [8], [13], [21]

- Tác dụng oestrogen, tác dụng tương tự cortison của glycyrrhizin trên chuyển hóa

chất điện giải, giữ natri và clorid, bài tiết kali, chống viêm, chữa táo bón [18]

- Nghiên cứu gần đây c n cho thấy Cam thảo có tác dụng nâng cao khả năng miễn dịch của cơ thể, acid glycyrhizic còn có hiệu quả trong điều trị một số bệnh do virus như virus herpes simplex, IV-1 và SARS [1]

- Glabridin trong Cam thảo cho thấy hiệu quả in vivo và in vitro trong bảo vệ tế bào

thần kinh thông qua nhiều con đường bao gồm điều chỉnh quá trình chết theo chương trình v tổn thương tế bào thần kinh [40], ngo i ra c n được dùng phổ biến trong điều trị bệnh tim mạch [41]

1.3.5.5 Tác dụng theo y học cổ truyền:

- Tính vị: vị ngọt, tính bình [8], [13], [18] Quy kinh: thông hành 12 kinh [3], [13], [18]

- Công năng, chủ trị:

 Ích hí, dưỡng huyết: trị bệnh khí huyết hư nhược, mệt mỏi thiếu máu [3], [13]

 Nhuận phế, chỉ ho: trị bệnh đau hầu họng, viêm họng cấp, mạn tính, viêm

amidan, ho mất tiếng, ho nhiều đ m [3], [4], [9], [13], [15], [16], [20]

 Tả hỏa giải độc: trị mụn nhọt đinh độc sưng đau [3], [7], [9], [13], [15]

 Hoãn cấp chỉ thống: dùng trị đau dạ d y, đau bụng, gân mạch co rút [3], [4], [13], [15]

 Điều hòa các vị thuốc trong phương thuốc: dung hòa các vị thuốc, để chúng phối hợp với nhau chữa bệnh tốt hơn [7], [15], [16]

- Liều dùng: ngày dùng 4 – 20g, dưới dạng bột, thuốc hãm, nước sắc, cao mềm [3], [18]; 4-12g [4], [7]

- Kiêng kị: Tỳ vị có thấp trệ, sôi bụng, đầy bụng; dùng lâu dễ bị phù nề [4], [13], [15]

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu, phương tiện nghiên cứu:

+ Máy siêu âm

+ Cân kỹ thuật Precisa (Switzeland)

+ Máy ảnh Canon 10.0 mega pixels

Hình 2.2 Hệ thống thiết bị sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao Linomat 5

Hình 2.1 Phương thuốc Ng vị tiêu độc

(1) Thiết bị phun mẫu Linomat 5

(2) Thiết bị chụp ảnh Camag

2.1.3 Hóa chất, chất chuẩn:

- Hóa chất đạt tiêu chuẩn phân tích, được mua tại Công ty TNHH Sela, 48 dốc Thọ Lão, phường Đống Mác, quận ai Trưng, Nội: ethanol tuyệt đối, n-hexan, cloroform, ethyl acetat, n-buthanol, acid formic, toluen, acid acetic, aceton, methanol…

- Chất chuẩn catalpol:

Xuất xứ : Shanghai Yuan Mu Biological Technology Co Ltd (Trung Quốc)

Số lô: Z-005-160408; m lượng nguyên trạng: 99 48 %

- Bản sắc ký lớp mỏng Silica gel 60 F254 của Merck

2.2 Nội dung nghiên cứu

2.2.1 Nghiên cứu điều chế cao đặc bài thuốc:

Chiết xuất bằng nước v ethanol, điều chế dạng cao đặc

2.2.2 Nghiên cứu định tính một số thành phần của cao đặc bào thuốc và dược liệu:

- Định tính các nhóm chất trong cao đặc v dược liệu bằng phản ứng hóa học

- Định tính bằng sắc ký lớp mỏng so sánh giữa cao đặc v dược liệu

2.2.3 Nghiên cứu định lượng catalpol trong cao đặc bài thuốc

2.3 Phương pháp nghiên cứu:

2.3.1 Bào chế cao đặc bài thuốc:

- Sắc 5 mẻ, m i mẻ sắc 3 lần, m i lần 1h (kể từ lúc sôi) Gộp dịch chiết 3 lần, cô cách thủy đến hi th nh cao đặc có hàm ẩm dưới 20%

2.3.1.2 Cao chiết ethanol 70%:

- Cao được bào chế từ dược liệu Kim ngân hoa, Bồ công anh, Cúc hoa, Sinh địa, Cam thảo

- Phương ph p b o chế: chiết nóng ở 800C

- Dụng cụ: bình nón 2000 mL

- Dung môi: ethanol 70%

- Chiết 5 mẻ, m i mẻ 3 lần, m i lần 1h (kể từ lúc đạt nhiệt độ 800C) Gộp dịch chiết 3 lần, cô cách thủy đến hi th nh cao đặc có hàm ẩm dưới 20%

2.3.1.3 Cảm quan, hiệu suất bào chế v độ ẩm cao đặc

- Cảm quan về màu sắc, mùi, vị…bằng phương ph p quan s t, ngửi, nếm trực tiếp

- Hiệu suất bào chế: được tính theo công thức:

H (%) = Khối lượng cao khô tuyệt đối

Khối lượng dược liệu khô tuyệt đối × 100 % Khối lượng (g) Độ ẩm (%)

- Hàm ẩm: x c định bằng phương ph p mất khối lượng do làm khô theo phụ lục 9.6 trong DĐVN IV [3]

2.3.2 Định tính một số thành phần hóa học của cao đặc Ngũ vị tiêu độc và dược liệu:

2.3.2.1 Định tính một số nhóm chất chính bằng phản ứng hóa học:

Định tính một số nhóm chất chính: alcaloid, flavonoid, saponin, coumarin… trong cao đặc v dược liệu bằng phản ứng hóa học với các thuốc thử chung và thuốc thử đặc hiệu của từng nhóm [1], [3], [12], [14], [20]

 Định tính alcaloid:

 Mẫu nghiên cứu:

Dược liệu: 2 g m i dược liệu cho vào bình nón dung tích 50 mL có nút mài, thêm 20 mL dung dịch H2SO4 1N, đun đến sôi, để nguội, lọc lấy dịch lọc Cho dịch lọc vào bình gạn 50 mL, kiềm hóa dịch lọc bằng dd amoniac đặc đến pH =

9 - 10 (thử bằng chỉ thị màu vạn năng) Lắc với CHCl3 (3 lần x 10 mL), gạn lấy lớp CHCl3, bốc hơi đến cách thủy tới hô, thu được cắn Hòa tan cắn bằng 3 mL

H2SO4 1N, chia dịch chiết này vào 3 ống nghiệm

Cao đặc: 2 g m i loại cao, hòa tan vào 10 mL nước cất đun n ng để hòa tan

ho n to n, cô đến cắn, rồi hòa tan lại trong nước cất và tiến h nh như trên

 Tiến hành:

- Ống 1: Nhỏ 1 - 2 giọt TT Mayer Phản ứng dương tính hi xuất hiện kết tủa trắng

- Ống 2: Nhỏ 2 - 3 giọt TT Dragendorff Phản ứng dương tính hi xuất hiện tủa da cam

- Ống 3: Nhỏ 2- 3 giọt TT Bouchardat Phản ứng dương tính hi xuất hiện tủa nâu đỏ

 Định tính saponin

 Mẫu nghiên cứu:

Cao đặc: 2 g m i cao cho vào cốc có mỏ, pha loãng bằng 20 mL nước cất Đun trên bếp cách thủy cho tan hết, để lắng, lọc Dịch lọc được cô thành cắn rồi hòa tan lại trong nước cất, đem lắc với n-hexan để loại tạp, lắc 3 lần, m i lần 10 mL n-hexan Lấy lớp nước, đem lắc 3 lần với n-butanol, bốc hơi đến cắn Cắn hòa tan trong 10 mL ethanol 90% để l m định tính

Dược liệu: 2 g m i dược liệu cho vào các bình nón, thêm 20 mL ethanol 90%, đậy nắp đun c ch thủy khoảng 15 phút Dịch chiết cô đến cắn rồi hòa tan trong nước cất, để lắng, lọc Dịch lọc được lắc với n-hexan (3 lần ×10mL) để loại tạp

DC nước được lắc với dd n- butanol (3 lần × 15mL) Gộp các DC n- butanol lại, bốc hơi dung môi, cắn thu được h a tan trong 10mL ethanol để làm các phản ứng định tính

 Tiến hành:

- Hiện tượng tạo bọt:

Cho một ít MNC vào ống nghiệm to, thêm vào m i ống 10 mL nước cất, lắc mạnh theo chiều dọc ống nghiệm trong 10 phút Kết quả dương tính hi sau 10 phút cho cột bọt bền vững

- Phản ứng Salkowski:

Lấy 1 mL DC vào ống nghiệm, bốc hơi đến cắn, hòa tan cắn trong 1mL CHCl3 Nghiêng ống nghiệm 450, nhỏ từ từ đồng lượng dung dịch H2SO4 đặc (TT) theo thành ống Phản ứng dương tính hi xuất hiện v ng m u đỏ tím giữa hai lớp

- Phản ứng Rosenthaler:

Lấy 1mL DC cho vào ống nghiệm, thêm 2 giọt vanilin 1% trong ethanol, thêm 1 giọt dd Cl đặc (TT), hơ nóng Phản ứng dương tính hi lắc nhẹ thấy dung dịch xuất hiện m u v ng đậm

 Định tính flavonoid:

 Mẫu nghiên cứu:

Cao đặc bài thuốc: 2 g cao đặc m i loại cho vào cốc có mỏ, pha loãng bằng 50

mL nước cất Đun trên bếp cách thủy cho tan hết, để lắng, lọc Dịch lọc đem lắc với n-hexan để loại tạp, lắc 3 lần, m i lần 15 mL n-hexan Dịch chiết nước thu được lắc với EtOAc 3 lần, m i lần 15 mL Gộp các dịch chiết EtOAc lại, bốc hơi dung môi, cắn thu được hòa tan trong 10 mL ethanol 90% để làm phản ứng định tính

Dược liệu: 2 g dược liệu m i loại cho vào các bình nón, thêm vào 50mL ethanol 90%, đậy nắp đun c ch thủy khoảng 30 phút Dịch chiết cô đến cắn rồi hòa tan trong nước cất, để lắng, lọc Dịch lọc được lắc với n-hexan (3 lần× 15mL) để loại tạp DC nước được lắc với dd EtOAc (3 lần ×15mL) Gộp các DC EtAOc lại, bốc hơi dung môi, cắn thu được h a tan trong 10mL ethanol để làm các phản ứng định tính

 Tiến hành:

- Phản ứng Cyanidin:

Cho 2mL DC vào một ống nghiệm, thêm một ít bột magnesi kim loại, thêm 3 giọt

Cl đặc, lắc đều, đun c ch thủy 5 phút Phản ứng dương tính hi xuất hiện màu vàng nâu

- Phản ứng với hơi amoniac (N 3):

Nhỏ 1-2 giọt DC lên một tờ giấy lọc, sấy nhẹ đến hô ơ lên miệng lọ có chứa amoniac đặc đã mở nắp Phản ứng dương tính hi thấy m u v ng đậm dần lên

- Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%:

Cho vào ống nghiệm 2mL dịch chiết, thêm 2-3 giọt dd FeCl3 5% Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa m u xanh đen

 Định tính coumarin:

 Mẫu nghiên cứu:

Đun c ch thủy m i bình nón chứa 5 g cao đặc bài thuốc và 5g bột dược liệu với 30mL ethanol 90%, lọc nóng qua giấy lọc, dịch thu được đem l m c c phản ứng định tính

 Tiến hành:

- Phản ứng mở-đ ng v ng lacton:

Cho vào 2 ống nghiệm, m i ống 2 mL DC:

Ống 1: thêm 0,5 mL dung dịch NaOH 10%

Thêm vào ống 1 vài giọt dd Cl đặc, ống 1 sẽ đục trở lại như ống 2 (phản ứng dương tính)

- Phản ứng Diazo hóa:

Cho vào ống nghiệm 1mL DC, thêm 2mL dd NaO 10% Đun c ch thủy 10 phút,

để nguội Thêm vài giọt TT Diazo mới pha Phản ứng dương tính hi xuất hiện màu

đỏ gạch

 Định tính acid hữu cơ, đường khử, acid amin:

 Mẫu nghiên cứu:

Cho 5g cao bài thuốc hoặc 5g bột dược liệu vào các ống nghiệm, thêm 15mL nước cất Đun sôi trực tiếp 10 phút, để nguội, lọc, lấy dịch lọc để làm phản ứng

 Tiến hành:

- Định tính acid hữu cơ:

Cho 2 mL dịch lọc vào 2 ống nghiệm, thêm vào ít bột Na2CO3 Phản ứng dương tính khi có bọt khí bay lên

2.3.2.2 Định tính so sánh mẫu cao đặc và các vị thuốc bằng SKLM:

 Định tính cắn ethyl acetat từ cao và Kim ngân hoa, Bồ công anh, Cúc hoa, Cam thảo:

 Mẫu nghiên cứu:

Cúc hoa 8 (g) Cao Et 70% 5 (g)

Cho MNC vào bình nón Thêm ethanol 90%, số mL ethanol tỉ lệ với khối lượng các thành phần(1g – 10 mL), đậy nắp đun c ch thủy khoảng 30 phút Lọc nóng, dịch lọc đem cô c ch thủy thành cắn Hòa tan cắn trong 15 mL nước cất, lọc qua giấy lọc

Riêng cao đặc bài thuốc, hòa vào 15mL nước cất (đun n ng để hoà tan hoàn toàn), thêm ethanol 90% (30 mL × 3 lần), đun n ng, để lắng, gạn lấy dịch trong Dịch lọc đem cô c ch thủy thành cắn Hòa tan trong 15 mL nước cất, lọc qua giấy lọc

Các dịch lọc từ cao v dược liệu được lắc loại tạp với n-hexan (10 mL × 3 lần) Dịch chiết nước được lắc với ethyl acetat (10 mL × 3 lần) Dịch chiết ethyl acetat được cô cách thủy đến cắn

Hòa tan cắn trong 2 mL ethanol để chấm sắc ký

 Điều kiện sắc ký:

- Pha tĩnh: ản mỏng Silica gel 60 F254, 5×10 cm, hoạt hóa ở 1100C trong 60 phút

- Pha động: khảo sát trên các hệ dung môi sau:

(I) EtOAc : CHCl3 : HCOOH (3:2,5:1)

(II) toluen : EtOAc : HCOOH (6:6:1,5)

(III) CHCl3 : methanol : HCOOH (7:2:1)

(IV) toluen: CHCl3 : aceton (8:5:7)

(V) toluen : CHCl3 : aceton : HCOOH (8:5:7:0,2)

(VI) toluen : CHCl3 : aceton : HCOOH (6 :5 :7 :0,2)

- Triển khai:

- Bão hòa bình triển khai 10×10 trong 30 phút (giấy lọc) bằng 10 mL dung môi pha động Dung môi để khai triển bản mỏng là 5 mL Lấy bản mỏng ra và làm khô

 Phát hiện: Soi UV ở bước s ng 254 nm, 366 nm, v hơi amoniac đặc

 Định tính cắn cắn n-buthanol của cao, Kim ngân hoa, Cam thảo :

 Mẫu nghiên cứu:

Kim ngân hoa 8 (g)

Riêng cao đặc bài thuốc, hòa vào 15mL nước cất (đun n ng để hoà tan hoàn toàn), thêm ethanol 90% (30 mL × 3 lần), đun n ng, để lắng, gạn lấy dịch trong Dịch lọc đem cô c ch thủy thành cắn Hòa tan trong 15 mL nước cất, lọc qua giấy lọc

Các dịch lọc từ cao v dược liệu được lắc loại tạp với n-hexan (10 mL × 3 lần) Dịch chiết nước được lắc với n-buthanol (10 mL × 3 lần) Dịch chiết n-buthanol được cô cách thủy đến cắn

Hòa tan cắn n-buthanol của cao v dược liệu trong 2 mL ethanol để chấm sắc ký

 Điều kiện sắc ký:

- Pha tĩnh: ản mỏng Silica gel 60 F254, 5×10 cm, hoạt hóa ở 1100C trong 60 phút

- Pha động: khảo sát trên các hệ dung môi sau:

(I) n-buthanol : CH3COOH : H2O (5:1:1)

(I) EtOAc : CH3COOH : HCOOH :H2O (10:1:1:1)

(II) toluen : EtOAc : HCOOH (5:4:1)