ky thuat khang sinh do

Tài liệu ppt Giới thiệu một số phương pháp làm kháng sinh đồ. hướng dẫn làm Phương pháp làm kháng sinh dồ kháng sinh khuyếch tán. chủ yếu những bước thực hành. một số điểm chú ý khi làm kháng sinh đồ...

KỸ THUẬT KHÁNG SINH ĐỒ Đối tượng: Kỹ thuật viên xét nghiệm Thời gian: tiết Alexander Fleming (1881-1955) Năm 1929, Fleming tìm penicillin Cơ chế tác động KS Ức chế thành lập vách tế bào Ức chế nhiệm vụ màng tế bào Ức chế tổng hợp protein Ức chế tổng hợp acid nucleic Đại cương KS đặc hiệu : tác động lên loại VK hay nhóm VK định KS phổ rộng : có hoạt tính nhiều loại VK khác KS phổ hẹp : có hoạt tính hay số VK Theo em lại phải làm kháng sinh đồ? Một số phương pháp kháng sinh đồ  Phương pháp định lượng tìm MIC (nồng độ tối thiểu kháng sinh ức chế vi khuẩn)  Phương pháp phát men phá huỷ kháng sinh (men beta-lactamase)  Phương pháp định tính khuếch tán kháng sinh thạch (Kirby Bauer)… Các phương pháp xác định MIC MIC Phương pháp pha loãng kháng sinh tube Phương pháp E-test Thử nghiệm tìm men β - lactamase Là thử nghiệm đơn giản, nhanh, cho lâm sàng hướng điều trị kháng sinh trước có kết KSĐ nhờ ý nghóa: Vk tiết β - lactamase đa số kháng đa kháng sinh, vi khuẩn không tiết β lactamase nhạy cảm với nhiều kháng sinh thông dụng Dùng vòng cấy, lấy khúm vk quệt lên đóa giấy nitrocefin tẩm ướt nhẹ Đọc kết qủa sau – phút m tính: quệt không đổi màu Dương tính: quệt đổi màu đỏ hồng KỸ THUẬT KHOANH GIẤY KHÁNG SINH KHUẾCH TÁN  1 Mục đích:   Các phịng thí nghiệm vi sinh bệnh viện cho trung tâm y tế dự phịng tuyến tỉnh  Đánh giá tính nhạy cảm với kháng sinh vi khuẩn gây bệnh để giúp cho lựa chọn thuốc kháng sinh phù hợp cho bệnh nhân.   Sử dụng để giám sát dịch tễ học nhằm đánh giá tình hình kháng thuốc vi khuẩn  Khơng áp dụng để thử nghiệm tính nhạy cảm kháng sinh với vi khuẩn kỵ khí vi khuẩn phát triển chậm nghèo thạch Meuler-hinton Nguyên lý: Kháng sinh khoanh giấy khuếch tán vào thạch Meuler-hinton có chứa chủng vi khuẩn thử nghiệm mức độ nhạy cảm vi khuẩn với kháng sinh biểu đường kính vịng vơ khuẩn xung quanh khoanh giấy kháng sinh Tiến hành: Dùng tăm vô khuẩn nhúng vào dung dịch III, ép tăm vào thành ông nghiệm bỏ bớt dịch thừa Ria cấy tăm khắp mặt thạch Dùng kẹp vô khuẩn gắp khoanh giấy kháng sinh khác đặt lên mặt thạch, khoanh cách thành l cm, cách cm Để nhiệt độ phòng 30 phút để tủ ấm 37°C 18- 24 giờ.* Láng vi khuẩn lên đĩa thạch -  Sử dụng huyền dịch nồng độ 106 vi khuẩn/ml (trong vòng 15 phút) láng lên mặt thạch MuellerHinton -  Hút huyền dịch vi khuẩn thừa bỏ -  Để khô mặt đĩa thạch cách đặt chúng vào tủ ấm 15 phút trước đặt kháng sinh Cách đặt khoanh giấy kháng sinh Cách đặt khoanh giấy kháng sinh Đĩa petri D = 9cm Đĩa petri D = 15cm Đọc phân tích kết -   Đo ghi lại kích thước vịng vơ khuẩn (dùng thước đo từ mặt sau đĩa không mở nắp) chủng chuẩn -   So sánh kết chủng chuẩn với bảng chuẩn -   So sánh kích thước vịng vơ khuẩn chủng thử nghiệm với vòng ức chế chuẩn: S (Susceptible):Nhạy cảm I (Intermediate):Trung gian      R (Resistant):Kháng    -   Nếu có tượng khuẩn lạc mọc vịng ức chế xuất thay đổi tính kháng vi khuẩn huyền dịch vi khuẩn bị trộn lẫn vào với Các khuẩn lạc nên nuôi cấy, phân lập thử nghiệm lại tính nhạy cảm với kháng sinh Bảng giới hạn đường kính vùng ức chế STT Tên kháng sinh Hàm lượng (µg/1 khoanh) R Amikacin 30 Ampicilin thử với + Enterobacteriaceae + Enterococcus faecalis 10 Đường kính vùng ức chế(mm) I S ≤14 15-16 ≥17 ≤13 14-15 ≥17 ≤16 ≥17 ≥19 Benzyl penicilin thử với tụ cầu 10 ≤18 Ceftriaxon 30 ≤13 14-20 ≥21 Cefalothin 30 ≤14 15-17 ≤18 Cloramphenicol 30 ≤12 13-17 ≥18 Giải thích từ ngữ:  CLSI : Clinical and Laboratory Standard Institute: Viện tiêu chuẩn xét nghiệm lâm sàng Hoa Kỳ (tên cũ NCCLS = National Committee for Clinical Laboratory Standard Amox/Clav Amox/Clav Cefotaxim Ceftriaxon Ceftriaxon Cefotaxim Ceftazidim Ceftazidim Chọn khoanh giấy khán sinh: - Dùng cho loại cầu khuẩn: Penicilin Erythromycin Oxacilin Cephalothin Gentamycin Cotrimoxazol - Dùng cho trực khuẩn gram (-): Ampicilin Cotrimoxazol Gentamycin TetracyclinCloramphenicol Sulfonamid - Dùng cho Haemophilus influenzae Ampicilin Cotrimoxazol Cloramphenicol Tetracyclin Phần mềm hỗ trợ WHONET 5.6 Qui trình thử nghiệm tính nhạy cảm kháng sinh kỹ thuật khoanh giấy kháng sinh khuếch tán Tại phải cấy chuyển vào môi trường không chọn lọc? Nêu cách điều chỉnh huyền dịch vi khuẩn từ 108 vi khuẩn/ml thành 106 vi khuẩn/ml? Các yếu tố ảnh hưởng đến kết -   Môi trường sử dụng không phù hợp với hướng dẫn nhà sản xuất -   Huyền dịch vi khuẩn làm thử nghiệm không thuần, nồng độ vi khuẩn không với nồng độ Mcfarland chuẩn -   Bảo quản khoanh giấy kháng sinh khơng khoanh giấy q hạn, hoạt tính kháng sinh giảm Điều thường dễ nhận thấy thơng qua giảm đường kính vịng ức chế chủng chuẩn -   pH thạch  Mueller-Hinton phải kiểm tra chuẩn bị pH phải nằm khoảng   7,2 -7,4 sau đông Nếu pH thấp làm giảm hoạt tính kháng sinh ... lại phải làm kháng sinh đồ? Một số phương pháp kháng sinh đồ  Phương pháp định lượng tìm MIC (nồng độ tối thiểu kháng sinh ức chế vi khuẩn)  Phương pháp phát men phá huỷ kháng sinh (men beta-lactamase)... sàng hướng điều trị kháng sinh trước có kết KSĐ nhờ ý nghóa: Vk tiết β - lactamase đa số kháng đa kháng sinh, vi khuẩn không tiết β lactamase nhạy cảm với nhiều kháng sinh thông dụng Dùng vòng... THUẬT KHOANH GIẤY KHÁNG SINH KHUẾCH TÁN  1 Mục đích:   Các phịng thí nghiệm vi sinh bệnh viện cho trung tâm y tế dự phòng tuyến tỉnh  Đánh giá tính nhạy cảm với kháng sinh vi khuẩn gây bệnh