ky thuat khang sinh do

Tài liệu ppt Giới thiệu một số phương pháp làm kháng sinh đồ. hướng dẫn làm Phương pháp làm kháng sinh dồ kháng sinh khuyếch tán. chủ yếu những bước thực hành. một số điểm chú ý khi làm kháng sinh đồ...

KỸ THUẬT KHÁNG SINH ĐỒ

Đối tượng: Kỹ thuật viên xét nghiệm

Thời gian: 1 tiết

Alexander Fleming (1881-1955)

Năm 1929, Fleming tìm ra penicillin

Theo em tại sao lại phải làm kháng sinh đồ?

Các phương pháp xác định MIC

MIC

Phương pháp pha lỗng kháng sinh trong tube

Phương pháp E-test

Thử nghiệm tìm men  - lactamase Thử nghiệm tìm men  - lactamase

Là thử nghiệm đơn giản, nhanh, cho lâm sàng hướng điều trị kháng sinh trước khi có kết quả KSĐ nhờ ý nghĩa: Vk tiết  - lactamase đa số kháng

đa kháng sinh, vi khuẩn không tiết  - lactamase nhạy cảm với nhiều kháng sinh thông dụng

Dùng vòng cấy, lấy khúm vk quệt lên đĩa giấy nitrocefin đã tẩm ướt nhẹ Đọc kết qủa sau 1 – 5 phút

Aâm tính: quệt không đổi màu

Dương tính: quệt đổi màu đỏ hồng

KỸ THUẬT KHOANH GIẤY KHÁNG SINH KHUẾCH TÁN

1 Mục đích:

 Các phòng thí nghiệm vi sinh trong các bệnh viện

và cho các trung tâm y tế dự phòng tuyến tỉnh

 Đánh giá tính nhạy cảm với kháng sinh của vi

khuẩn gây bệnh để giúp cho lựa chọn các thuốc kháng sinh phù hợp cho bệnh nhân

 Sử dụng để giám sát dịch tễ học nhằm đánh giá về tình hình kháng thuốc của vi khuẩn

kháng sinh với các vi khuẩn kỵ khí do những vi

khuẩn này phát triển chậm và nghèo trên thạch

Meuler-hinton.

2 Nguyên lý:

Kháng sinh ở trong khoanh giấy sẽ khuếch tán vào

thạch Meuler-hinton có chứa các chủng vi khuẩn thử

nghiệm và mức độ nhạy cảm của vi khuẩn với kháng sinh được biểu hiện bằng đường kính các vòng vô khuẩn

xung quanh khoanh giấy kháng sinh

Các phương tiện cần thiết Chuẩn bị các dụng cụ:

Các phương tiện cần thiết Chuẩn bị các hoá chất:

Lưu ý: - Khoanh giấy kháng sinh bảo quản – 20 độ C

- Khoanh giấy làm hàng ngày bảo quản 0 – 8 độ C

- Để ở nhiệt độ phòng 30 phút trước khi làm *

Các phương tiện cần thiết Chuẩn bị môi trường:

Lưu ý: - Các đĩa môi trường phải có độ dày khoảng 4mm, dầy đều *

- Các đĩa thạch được dùng trong vòng 7 ngày kể từ khi pha chế

- Các đĩa thạch kiểm tra vô khuẩn trước khi tiến hành.*

Chuẩn bị các đĩa thạch Mueller-Hinton

- Cân thạch một cách chính xác theo hướng dẫn của hãng sản xuất và hòa tan vào nước cất 2 lần

- Đun sôi để hòa tan hoàn toàn thạch.

- Kiểm tra pH và chỉnh pH từ 7.2 – 7.4.

- Hấp tiệt trùng ở 121 0 C/15 phút, để nguội môi trường tới

50 0 C.*

- Đổ môi trường vào đĩa petri dày khoảng 4mm.

- Kiểm định chất lượng của mỗi lô thạch (dùng chủng

chuẩn E coli ATCC 25922).

- Kiểm tra pH của môi trường trước khi đổ đĩa, pH = 7,4

7,2-Các phương tiện cần thiết Chuẩn bị vi khuẩn:

Lưu ý: - Vi khuẩn nuôi cấy thuần chủng

- Không được lấy vi khuẩn trên môi trường có chất ức chế *

Tiến hành:

1 Dùng tăm bông vô khuẩn nhúng vào dung dịch III, ép

tăm bông vào thành ông nghiệm bỏ bớt dịch thừa.

2 Ria cấy tăm bông đều khắp mặt thạch.

3 Dùng kẹp vô khuẩn gắp từng khoanh giấy kháng sinh

khác nhau đặt lên mặt thạch, mỗi khoanh cách thành l

cm, cách nhau 2 cm

4 Để ở nhiệt độ phòng 30 phút rồi để tủ ấm 37°C 18- 24

giờ.*

Láng vi khuẩn lên đĩa thạch

- Sử dụng ngay huyền dịch nồng độ 106 vi khuẩn/ml (trong vòng 15 phút) láng đều lên mặt thạch

Cách đặt các khoanh giấy kháng sinh

Cách đặt khoanh giấy kháng sinh

Đọc và phân tích kết quả

- Đo và ghi lại kích thước vòng vô khuẩn (dùng thước đo từ mặt sau của đĩa và không được mở nắp) của chủng chuẩn

- So sánh kết quả của chủng chuẩn với bảng chuẩn

- So sánh kích thước vòng vô khuẩn của chủng thử nghiệm với vòng ức chế chuẩn:

nghiệm lại tính nhạy cảm với kháng sinh

Chọn khoanh giấy khán sinh:

- Dùng cho các loại cầu khuẩn:

Phần mềm hỗ trợ WHONET 5.6

Qui trình thử nghiệm tính nhạy cảm kháng sinh bằng kỹ thuật khoanh giấy

kháng sinh khuếch tán

Tại sao phải cấy chuyển vào môi trường không chọn lọc?

Nêu cách điều chỉnh huyền dịch vi khuẩn từ 108 vi khuẩn/ml thành 106 vi khuẩn/ml?

Các yếu tố ảnh hưởng đến kết quả

- Môi trường sử dụng không phù hợp với hướng dẫn của các nhà sản xuất

- Huyền dịch vi khuẩn làm thử nghiệm không thuần, nồng độ vi khuẩn không đúng với nồng độ Mcfarland chuẩn

- Bảo quản khoanh giấy kháng sinh không đúng hoặc khoanh giấy quá hạn, hoạt tính kháng sinh có thể đã giảm Điều này thường dễ nhận thấy thông qua sự giảm đường kính vòng ức chế của các chủng chuẩn.

- pH của thạch Mueller-Hinton phải được kiểm tra khi chuẩn bị pH phải nằm trong khoảng 7,2 -7,4 sau khi đông Nếu pH quá thấp sẽ làm giảm hoạt tính của

kháng sinh