Cuốn tài liệu học tập môn VI SINH KÝ SINH TRÙNG Y HỌC được biên soạn bám sát vào chương trình khung của bộ giáo dục ban hành năm 2010. Biên soạn theo phương châm: Kiến thức cơ bản, hệ thống; nội dung chính xác, khoa học; cập nhật các tiến bộ khoa học, kỹ thuật hiện đại và thực tiễn Việt Nam. Đồng thời là tài liệu học tập chính cho các đối tượng Cao đẳng Điều dưỡng. Cuốn sách được biên soạn thành 3 phần chính: Phần I: Vi sinh y học. Phần II : Ký sinh trùng y học. Phần III : Thực hành vi – ký sinh trùng. Mỗi phần có các bài được cấu trúc thành 3 phần : Mục tiêu, Nội dung, Tự lượng giá.
TRƯỜNG CAO ĐẲNG Y TẾ THÁI BÌNH KHOA Y HỌC CƠ SỞ VI SINH – KÝ SINH TRUNG Y HỌC THÁI BÌNH, NĂM 2012 TRƯỜNG CAO ĐẲNG Y TẾ THÁI BÌNH KHOA Y HỌC CƠ SỞ VI SINH – KÝ SINH TRUNG Y HỌC (TÀI LIỆU LƯU HÀNH NỘI BỘ) THÁI BÌNH, NĂM 2012 Chỉ đạo biên soạn: Trường Cao Đẳng Y Tế Thái Bình Chủ biên: TS Phạm Quang Hòa Biên soạn: Ths Nguyễn Thanh Sơn Ths Bùi Hồng Hoa Ths Nguyễn Thị Thân Bs CKI Đỗ Kim Ninh CN Nguyễn Cao Cường CN Nguyễn Thị Tuyết LỜI GIỚI THIỆU Thực theo đạo Ban giám hiệu, hội đồng giáo dục Trường Cao Đẳng Y tế Thái Bình biên soạn giáo trình, tài liệu học tập cho môn học Bộ môn Y học sở tổ chức thực việc biên soạn tài liệu dạy – học môn sở chuyên môn theo chương trình nhằm bước xây dựng sách đạt chuẩn chuyên môn công tác đào tạo nhân lực y tế Cuốn tài liệu học tập môn VI SINH - KÝ SINH TRÙNG Y HỌC biên soạn bám sát vào chương trình khung giáo dục ban hành năm 2010 Biên soạn theo phương châm: Kiến thức bản, hệ thống; nội dung xác, khoa học; cập nhật tiến khoa học, kỹ thuật đại thực tiễn Việt Nam Đồng thời tài liệu học tập cho đối tượng Cao đẳng Điều dưỡng Cuốn sách biên soạn thành phần chính: Phần I: Vi sinh y học Phần II : Ký sinh trùng y học Phần III : Thực hành vi – ký sinh trùng Mỗi phần có cấu trúc thành phần : Mục tiêu, Nội dung, Tự lượng giá Chúng xin chân thành cảm ơn đồng nghiệp, em học sinh – sinh viên Hội đồng giáo dục nhà Trường đánh giá, góp ý giúp chúng tơi hồn thành sách đáp ứng kịp thời chương trình đào tạo nhà Trường Lần đầu biên soạn sách khó tránh khỏi thiếu sót, chúng tơi mong nhận ý kiến đóng góp đồng nghiệp, bạn sinh viên độc giả để lần tái sau sách hoàn thiện KHOA Y HỌC CƠ SỞ MỤC LỤC LỜI GIỚI THIỆU MỤC LỤC .3 CHƯƠNG TRÌNH CHI TIẾT MÔN HỌC .5 PHẦN I: VI SINH Y HỌC ĐẠI CƯƠNG VI SINH .8 ĐẠI CƯƠNG VIRUS 26 MIỄN DỊCH VI SINH VẬT .33 ỨNG DỤNG CÁC PHẢN ỨNG KẾT HỢP KHÁNG NGUYÊN–KHÁNG THỂ TRONG VI SINH Y HỌC 38 VACXIN VÀ HUYẾT THANH 43 MỘT SỐ CẦU KHUẨN GÂY BỆNH 49 TỤ CẦU VÀNG 49 LIÊN CẦU .52 PHẾ CẦU 55 LẬU CẦU .57 MỘT SỐ VI KHUẨN ĐƯỜNG TIÊU HOÁ 60 VI KHUẨN THƯƠNG HÀN 60 VI KHUẨN LỴ .63 VI KHUẨN ESCHIERICHIA COLI .65 VI KHUẨN TẢ .67 VI KHUẨN HELICOBACTER PYLORI .70 MỘT SỐ TRỰC KHUẨN GÂY BỆNH 72 VI KHUẨN LAO 72 VI KHUẨN BẠCH HẦU 75 VI KHUẨN UỐN VÁN 78 XOẮN KHUẨN GIANG MAI 80 RICKETTSIA, CHLAMYDIA VÀ MYCOPLASMA 83 MỘT SỐ VIRUS GÂY BỆNH 91 VIRUS BẠI LIỆT 91 VIRUS CÚM 96 VIRUS SỞI 99 VIRUS QUAI BỊ 102 VIRUS DENGUE 104 VIRUS VIÊM NÃO NHẬT BẢN .107 CÁC VIRUS VIÊM GAN 110 VIRUS GÂY HỘI CHỨNG SUY GIẢM MIỄN DỊCH Ở NGƯỜI 114 VIRUS DẠI 118 PHẦN II: KÝ SINH TRÙNG 122 ĐẠI CƯƠNG VỀ KÝ SINH TRÙNG Y HỌC .122 ĐƠN BÀO KÝ SINH 146 ENTAMOEBA HISTOLYTICA 147 TRÙNG ROI ĐƯỜNG TIÊU HOÁ, SINH DỤC – TIẾT NIỆU 151 TRICHOMONAS INTESTINALIS / TRICHOMONAS HOMINIS 157 TRÙNG ROI ĐƯỜNG MÁU VÀ NỘI TẠNG 157 BỆNH TOXOPLASMA 161 KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT 166 ĐẠI CƯƠNG VỀ GIUN SÁN 189 MỘT SỐ LOẠI GIUN ĐƯỜNG RUỘT KÝ SINH THƯỜNG GẶP Ở VIỆT NAM 194 GIUN CHỈ BẠCH HUYẾT .210 SÁN LÁ 220 SÁN DÂY LỢN – SÁN DÂY BÒ 231 ĐẠI CƯƠNG VI NẤM Y HỌC 236 PHẦN III: PHẦN THỰC HÀNH 246 CÁCH SỬ DỤNG VÀ BẢO QUẢN KÍNH HIỂN VI 246 HÌNH THỂ VI KHUẨN 249 NHUỘM ĐƠN VÀ NHUỘM GRAM .250 HÌNH THỂ ĐƠN BÀO 254 KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN MÁU ĐÀN VÀ GIỌT ĐẶC 263 KỸ THUẬT NHUỘM MÁU TÌM KÝ SINH TRÙNG 269 HÌNH THỂ KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT 274 HÌNH THỂ TRỨNG GIUN SÁN 284 HÌNH THỂ ẤU TRÙNG VÀ GIUN SÁN TRƯỞNG THÀNH THƯỜNG GẶP .288 KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM PHÂN TÌM KÝ SINH TRÙNG .295 CHƯƠNG TRÌNH CHI TIẾT MƠN HỌC 19 & 20 Tên môn học: Vi sinh - Ký sinh trùng y học Mã số môn học: Số tiết học: 56 - Lý thuyết: 36 - Thực hành: 20 Thời điểm thực môn học: Học kỳ II năm thứ I Thời gian: Số tiết/Tuần: Tổng số: tuần Mục tiêu môn học: 6.1 Mô tả đặc điểm hình thể, cấu tạo hoạt động Vi sinh vật ký sinh trùng 6.2 Trình bầy chu kỳ sống loại ký sinh trùng Y học 6.3 Nêu đặc điểm bệnh học tác hại ký sinh trùng vi sinh vật gây nên 6.4 Nhận biết số tiêu ký sinh trùng thường gặp 6.5 Biết cách làm số kỹ thuật xét nghiệm vi – ký sinh trùng đơn giản 6.6 Phân tích đặc điểm dịch tễ học ký sinh trùng bệnh ký sinh trùng nước ta 6.7 Nêu mối tương tác vi sinh vật, thể, môi trường , chi phối gây bệnh chẩn đoán vi sinh vật 6.8 Trình bày nguyên tắc biện pháp phòng chống bệnh ký sinh trùng Điều kiện tiên quyết: - Học sinh phải có kiến thức môn học: Giải phẫu học, Mô phôi, Dược lý, Hoá sinh, Sinh học đại cương di truyền, Sinh lý, Hoá học đại cương, Sinh lý bệnh miễn dịch Nội dung tóm tắt: - Đại cương vi sinh – ký sinh trùng y học - Một số bệnh vi sinh – ký sinh trùng hay gặp người - Thực hành số xét nghiệm đơn giản vi sinh – ký sinh trùng Kế hoạch lên lớp: Lý thuyết 36 Thực hành 20 Bài tập Tổng 56 10 Phương pháp dạy học: - Thuyết trình ngắn - Nêu vấn đề giải vấn đề - Thực hành bệnh phẩm tiêu mẫu - Các phương pháp khác 11 Đánh giá kết thúc mơn học: - Hình thức đánh giá: Học sinh trả lời câu hỏi trắc nghiệm khách quan máy vi tính - Thang điểm 10 - Số học phần 1, số đơn vị học trình: - Điểm kiểm tra: Điểm thường xuyên: 1, điểm định kỳ: 12 Chương trình chi tiết mơn học TT 10 11 12 13 Tên học Đại cương vi sinh Đại cương vi rút Miễn dịch ứng dụng Một số cầu khuẩn gây bệnh (Tụ cầu, liên cầu, lậu cầu, phế cầu, não mô cầu số cầu khuẩn khác) Một số vi khuẩn đường tiêu hoá (Trực khuẩn thương hàn, trực khuẩn lỵ, phẩy khuẩn tả, ecoli ) Một số trực khuẩn gây bệnh (bạch hầu, uốn ván, lao, hủi, trực khuẩn mủ xanh) Xoắn khuẩn giang mai Vi sinh vật trung gian Một số vi rus gây bệnh: Bại liệt, dại, viêm gan, sốt xuất huyết, viêm não Nhật Bản, HIV, cúm, sởi Một số cầu khuẩn gây bệnh (Tụ cầu, liên cầu, lậu cầu, phế cầu, não mô cầu số cầu khuẩn khác) Một số vi khuẩn đường tiêu hoá (Trực khuẩn thương hàn, trực khuẩn lỵ, phẩy khuẩn tả, ecoli ) Đại cương ký sinh trùng A mip gây bệnh Số tiết Lý Thực thuyết hành 2 2 2 2 14 15 16 17 Trùng roi , trùng lông , trùng hình cung Đặc điểm sinh học ký sinh trùng sốt rét Bệnh học sốt rét – dịch tễ học sốt rét Việt Nam Giun đũa , giun tóc , giun móc, giun kim , giun chỉ, số giun gặp khác 18 Sán , sán dây 19 Đại cương vi nấm y học 20 Qui trình sử dụng kính hiển vi Kỹ thuật làm tiêu giọt dàn , giọt đặc 21 Hình thể ký sinh trùng sốt rét – soi tiêu mẫu 22 Các phương pháp xét nghiệm phân 23 Hình thể loại giun sán đơn bào Tổng cộng 36 20 13 Trang thiết bị dạy học cho mơn học: - Giáo trình Vi sinh y học, ký sinh trùng y học dành cho trường Cao đẳng Y Nhà xuất Y học năm 2007 - Giáo trình, giáo án giáo viên biên soạn - Phòng học lý thuyết thực hành vi sinh – ký sinh trùng thiết bị hỗ trợ (phấn, bảng, máy chiếu, ) 14 Yêu cầu giáo viên: - Chuyên môn: Giảng lý thuyết: Đại học chuyên ngành y kỹ thuật y học, giảng thực hành: Cao đẳng chuyên ngành y kỹ thuật y học - Nghiệp vụ: Có thâm niên giảng dạy điều dưỡng năm 15 Tài liệu Tham khảo để dạy học: Bài giảng Vi sinh y học Trường đại học Y - Hà Nội Tài liệu thực tập Vi sinh Trường đại học Y - Hà Nội Ký sinh trùng y học Trường đại học Y-Dược Tp Hồ Chí Minh Ký sinh trùng y học – Nhà xuất Y học, năm 1996 Bài giảng Ký sinh trùng y học– Nhà xuất Y học, năm 1985 Giáo trình mơn học Vi sinh - Ký sinh trùng nhà trường Một số trang web tham khảo: + http://thuvien.yhvn.vn + http://ykhoa.net + http://vietsciences.net http://xetnghiemdakhoa.com + PHẦN I: VI SINH Y HỌC ĐẠI CƯƠNG VI SINH Mục tiêu Trình bày khái niệm: vi sinh vật học, vi sinh vật y học đối tượng nghiên cứu mốc lịc sử phát triển vi sinh y học Nêu phân bố vi khuẩn thiên nhiên thể người, nêu loại đường truyền bệnh vi sinh vật Nêu thành phần cấu trúc, sinh vi khuẩn mơ tả loại hình thể, kích thước vi khuẩn Trình bày nguồn gốc biện pháp phòng vi khuẩn kháng kháng kháng sinh Nội dung Đối tượng nghiên cứu Vi sinh vật học (Microbiology) môn học nghiên cứu sinh vật nhỏ bé, mắt thường khơng nhìn thấy được; bao gồm nhiều phân môn như: vi sinh vật thổ nhưỡng, vi sinh vật thú y, vi sinh vật thực vật, vi sinh vật công nghiệp vi sinh vật y học Vi sinh vật y học (Medical Microbiology) chuyên nghiên cứu vi sinh vật ảnh hưởng tới sức khoẻ người, mặt có lợi có hại cho sức khoẻ Vi sinh vật y học lại bao gồm tiểu phân môn như: – Vi khuẩn học (Bacteriology): khoa học nghiên cứu vi sinh vật đơn bào khơng có màng nhân – Virus học (Virology): khoa học nghiên cứu vi sinh vật khơng có cấu trúc tế bào, kích thước bé vi khuẩn Các vấn đề trình bày cụ thể mục sau Lịch sử phát triển Có thể sơ lược lịch sử phát triển Vi sinh Y học số mốc số nhân vật bật như: – Antoni Van Leewenhoek (1632 – 1723) người Hà Lan, năm 1676 làm kính hiển vi có độ phóng đại quan sát hình thể vi khuẩn 10 Ấu trùng giun xoắn 1.7 Giun bạch huyết Ở Việt Nam thường gặp loại giun ký sinh người: – Wuchereria bancrofti – Brugia malayi 1.7.1 Hình thể ấu trùng Để phân biệt mặt hình thể ấu trùng loại giun ta dựa vào đặc điểm bảng sau: W bancrofti B malayi Đặc điểm Kích thước Dài khoảng 260 μm Dài khoảng 220 μm Màng bao Dài thân Dài thân nhiều Đầu Có gai Có gai Hạt nhiễm sắc Ít rõ ràng Khơng rõ Hạch phía Khơng tới đoạn đi, thưa thớt Đến tận đi, dày đặc 292 1.7.2 Hình thể giun trưởng thành Giun trưởng thành giống sợi tơ màu trắng sữa Giun đực dài khoảng cm, chiều ngang 0,1 mm Giun dài khoảng –10 cm, chiều ngang 0,25 mm Giun đực thường sống cuộn vào mớ rối hệ bạch huyết Giun đẻ ấu trùng, ấu trùng xuất máu ngoại vi đêm Hình thể sán 2.1 Sán 2.1.1 Đặc điểm chung sán – Thân dẹt, hình (trừ sán máng có hình ống) – Có hấp khẩu: Một hấp ăn thông với ống tiêu hoá Một hấp bám để bám vào nơi ký sinh Khoảng cách hai hấp gần xa tuỳ thuộc loại sán – Ống tiêu hố chia làm đơi ống tắc, khơng thơng với (trừ sán máng); sán khơng có hậu môn – Sán đa số lưỡng giới (trừ sán máng đơn giới) Trong thể sán có phận sinh dục đực tinh hồn, phận sinh dục buồng trứng, tử cung 293 2.1.2 Đặc điểm hình thể loại sán Sán ruột (Fasciolopsis buskii) – Sán ruột có màu đỏ, dài dẹt Đây loài sán lớn loài sán ký sinh người, chiều dài 20 – 70 mm, chiều rộng – 20 mm, chiều dày 0,5 –3 mm Mặt thân có gai nhỏ xếp thành hàng, nhiều gần hấp bám – Hấp bám sát gần hấp ăn Hấp bám to hấp ăn Ống tiêu hố có hai nhánh tới tận cuối – Tinh hồn chia nhánh nhiều chiếm hết phần phần sau thân Tử cung nằm phía trước thân Buồng trứng chia nhánh Trong tử có nhiều trứng Mỗi ngày sán đẻ tới 5000 trứng Sán gan nhỏ (Clonorchis sinensis) – Sán gan nhỏ màu trắng đục, chiều dài 10 – 25 mm, chiều rộng – 4mm, thể không phủ gai 294 – Hấp ăn hấp bám xa nhau, hấp bám vị trí 1/3 trước thân nhỏ hấp ăn – Tinh hồn chia nhánh, khơng chia múi, nằm phía sau buồng trứng Sán phổi (Paragonimus westermani) – Sán có thân dày gần giống hạt cà phê, có mặt dẹt mặt lồi Kích thước sán: chiều dài – 12 mm, chiều ngang – mm, chiều dày 3,5 –5 mm Sán có màu nâu đỏ – Hấp ăn hấp bám có kích thước – Buồng trứng to chia thành thuỳ nằm bên Tinh hồn phân nhánh Lỗ sinh dục gần hấp bụng 2.2 Sán dây 2.2.1 Đặc điểm chung sán dây – Đầu sán tròn, nhỏ có hấp thay rãnh bên tuỳ loại sán Cũng tuỳ loại sán mà có thêm vòng móc – Thân sán dài, dẹt gồm hàng nghìn đốt – Sán dây sinh sản cách nảy chồi – Sán dây lưỡng tính: Tuy nhiên, phát triển phận sinh dục đực, không đồng đốt Đốt non (gần đầu sán): Chỉ có tinh hồn xuất Đốt trung bình (ở thân sán): Tinh hoàn, buồng trứng, tử cung phát triển tương đồng Đốt già (ở cuối thân sán): Tinh hoàn, buồng trứng tiêu biến, tử cung chia nhánh chứa đầy trứng 295 – Sán dây không đẻ trứng Trứng nằm đốt già, đốt già rụng khỏi thân sán theo phân 2.2.2 Đặc điểm hình thể loại sán dây Sán dây lợn (Taenia solium) – Sán dây lợn dài từ – m có tới m, đầu gần hình góc Chiều ngang đầu mm, có phận nhơ vòng móc gồm 25 – 30 móc, hấp tròn Đốt cổ ngắn mảnh Những đốt đầu chiều ngang lớn chiều dài, đốt sau chiều dài chiều ngang nhau, đốt cuối chiều ngang nửa chiều dài – Lỗ sinh dục đốt sán chạy cạnh đốt đốt lỗ sinh dục xen kẽ tương đối chạy sang phải sang trái Những đốt già cuối thân thường rụng thành đoạn ngắn, – đốt liền theo phân Sán dây bò (Taenia saginata) Sán dây bò dài –10 m, đầu có hấp khơng có vòng móc Đốt sán già khơng rụng, đốt rời có khả tự động bò ngồi ống tiêu hố, rơi quần áo giường chiếu, bệnh nhân tự biết mắc bệnh Nang ấu trùng sán dây lợn (Cysticercus cellulosae), nang ấu trùng sán dây bò (Cysticercus bovis) Nang ấu trùng sán dây lợn (Cysticercus cellulosae), nang ấu trùng sán dây bò (Cysticercus bovis) có đường kính 0,7 – 0,8 cm, chiều dài 1,5 cm Bên nang sán đầu sán non, nằm phía Đầu sán non nằm môi trường lỏng, màu trắng đục Lượng giá: Lượng giá dựa vào kết tìm ấu trùng giun sán kính hiển vi (hoặc mắt thường) thời gian quan sát 296 KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM PHÂN TÌM KÝ SINH TRÙNG Mục tiêu Mơ tả quy trình xét nghiệm phân Làm xét nghiệm phân với phương pháp xét nghiệm phân trực tiếp, phương pháp Willis Kato Nội dung Phương pháp lấy bệnh phẩm để xét nghiệm phЬn 1.1 Dụng cụ – Lọ đựng phân: + Tốt lọ thuỷ tinh hình trụ, cao – cm, đường kính miệng lọ – 2,5 cm Có thể dùng lọ nhựa đáy tròn có vai thoải + Lọ phải có nút khơng q kín + Lọ phải khô + Lọ phải dán nhãn để ghi họ, tên, tuổi, địa bệnh nhân ghi ngày, lấy bệnh phẩm – Que xét nghiệm phải sạch, tre, nhựa thuỷ tinh mài nhẵn có đầu lõm (que Rift) để lấy phân từ trực tràng 1.2 Cách lấy phân 1.2.1 Vị trí – Phân lấy khơng dính đất, cát, nước tiểu Có thể lấy chỗ khuôn phân tốt lấy đầu khn phân phân rắn, mật độ trứng giun sán tập trung nhiều – Lấy phân chỗ bất thường máu, nhầy, lỏng, bọt lấy phân trực tràng que Rift để phát đơn bào 1.2.2 Khối lượng Số lượng phân cần lấy thay đổi tuỳ theo mục đích kỹ thuật xét nghiệm – Thường lấy khoảng – 10 gam phân (khoảng hạt lạc) để đủ làm nhiều phương pháp – Để tìm giun, đốt sán phải lấy tồn số lượng phân thải 1.3 Thời gian xét nghiệm Sau thu hồi bệnh phẩm cần xét nghiệm ngay, sớm tốt 297 – Với chẩn đốn giun sán: cần xét nghiệm vòng 12 – 24 Thí dụ, ấu trùng giun lươn ấu trùng giun móc/mỏ hình thể khó phân biệt ấu trùng giun lươn xuất sau phân xuất, ấu trùng giun móc/mỏ xuất 24 sau phân xuất, phân cần xét nghiệm sớm – Với chẩn đoán đơn bào: cần xét nghiệm để phát thể hoạt động đơn bào 1.4 Dung dịch bảo quản phân Trường hợp sau lấy phân mà chưa xét nghiệm cần phải bảo quản phân cách: – Cho phân vào dung dịch bảo quản để trứng giun sán không phát triển, không bị thối hố – Có thể dùng số dung dịch bảo quản sau: + Dung dịch Barbagall gồm phần formol 95 phần nước muối sinh lý 9‰ + Dung dịch formalin 10% pha loãng với phân theo tỷ lệ 1/10 Kỹ thuật xét nghiệm phân 2.1 Quan sát đại thể Quan sát đại thể bước cần thiết Để nhận biết giun, sán, đốt sán thải theo phân Quan sát đại thể giúp cho việc đánh giá tính chất phân, định hướng cho xét nghiệm Có thể quan sát trực tiếp mắt dùng kính lúp tay để quan sát 2.2 Kỹ thuật xét nghiệm phân trực tiếp 2.2.1 Phương tiện – Phiến kính – Lá kính 18 x 18 mm 22 x 22 mm – Que xét nghiệm – Dung dịch nước muối sinh lý 9‰ – Dung dịch lugol kép, thành phần gồm có: + Iơt g + Kali iơtdua g + Nước cất 100 ml Dung dịch lugol kép phải bảo quản chai màu để nơi ánh sáng dễ phai màu Dung dịch cần thiết để nhuộm tươi phân, để phát bào nang đơn bào 2.2.2 Kỹ thuật tiến hành 298 – Trên phiến kính khơ, nhỏ giọt nước muối sinh lý giọt dung dịch Lugol kép Lượng giọt dung dịch vừa đủ, khoảng cách giọt dung dịch khoảng – cm để đậy kính lên dung dịch phân khơng bị bọt khí, khơng bị tràn ra, kính khơng sát vào khơng xa – Dùng que xét nghiệm lấy phân đầu que (khoảng 10 –15 mg phân với kính 18 x 18 mm) hồ vào giọt nước muối sinh lý trước, quấy – Sau lấy thêm phân lần thứ hai hoà vào giọt dung dịch lugol kép quấy – Đậy kính vào giọt – Soi kính hiển vi với vật kính x 10 để phát trứng giun sán, với vật kính x 40 để phát đơn bào Soi tồn bề mặt kính theo hình chữ chi cạnh kính để tránh bỏ sót vi trường trùng 2.2.3 Tiêu chuẩn tiêu tốt – Tiêu không mỏng quá, khối lượng phân q khó phát trứng giun sán 299 – Tiêu không dày nhiều phân làm tiêu đục, tối khó phát ký sinh trùng – Tiêu khơng có bọt khí – Dung dịch phân khơng tràn xung quanh kính – Có thể kiểm tra mức độ dày, mỏng tiêu cách: đặt tiêu lên tờ báo in chữ thường, nhìn thấy chữ in mờ đọc chữ tiêu có độ dày vừa phải Mỗi mẫu phân làm tiêu Nếu soi tiêu thứ không thấy trứng, soi tiêu thứ 2.2.4 Đánh giá – Kỹ thuật xét nghiệm phân trực tiếp đơn giản, nhanh, khơng đòi hỏi dụng cụ, hố chất phức tạp – Kỹ thuật phát loại trứng giun sán có mặt mẫu phân kể ấu trùng, đơn bào thể hoạt động thể bào nang – Tiêu với dung dịch nước muối sinh lý 9‰ giúp thấy nguyên hình ký sinh trùng, đơn bào thấy thể hoạt động Tiêu nhuộm tươi lugol dùng để phát loại bào nang đơn bào – Tuy nhiên, số lượng phân nên trường hợp nhiễm giun sán phương pháp chưa phát 2.3 Kỹ thuật xét nghiệm Kato Đây kỹ thuật soi tiêu phân dày với giấy cellophan dùng thay cho kính Phương pháp tổ chức y tế thới giới coi phương pháp chuẩn để phát trứng giun sán phân, giun đũa, giun móc / mỏ, giun tóc 2.3.1 Phương tiện – Phiến kính – Giấy cellophan ngấm nước dày khoảng 40–50 mm, cắt theo kích thước 26 x 28 mm – Dung dịch nhuộm màu giấy cellophan gồm: + Dung dịch xanh malachit 3%: phần + Glycerine nguyên chất: 100 phần + Nước cất: 100 phần – Nút cao su – Kẹp nhỏ Cho giấy cellophan ngâm vào dung dịch nhuộm 24 trước dùng, không nên nhúng sẵn trước thời gian sử dụng lâu 2.3.2 Kỹ thuật tiến hành 300 – Lấy lượng phân khoảng 50–60 mg (khoảng hạt ngô) đặt lên phiến kính có nhãn ghi tên, tuổi bệnh nhân – Đậy miếng giấy cellophan nhuộm màu lên mẫu phân – Dùng nút cao su ép lên mặt giấy để dàn phân đều, cho mặt giấy tương đối phẳng nhẵn – Để tiêu phòng thí nghiệm 30 phút tủ ấm 37oC 15 – 20 phút – Sau đem soi kính hiển vi 2.3.3 Đánh giá Khả phát trứng giun sán kỹ thuật cao kỹ thuật xét nghiệm phân trực tiếp nước muối sinh lý, số lượng phân xét nghiệm nhiều Kỹ thuật dùng xét nghiệm hàng loạt nhanh, đơn giản tốn Tuy nhiên, hình thể trứng giun sán tiêu Kato khác với tiêu trực tiếp nước muối sinh lý, đặc biệt trứng vỏ mỏng trứng giun móc, trứng sán Để đánh giá sơ mức độ nhiễm giun sán qua xét nghiệm hàng loạt, vào mật độ trứng giun sán (số lượng trứng đếm toàn vi trường), xếp theo nhóm sau: – Từ – trứng: + – Từ 10 – 99 trứng: ++ – Từ 100 – 999 trứng: +++ – Trên 1000 trứng: ++++ 2.4 Kỹ thuật tập trung trứng Willis Kỹ thuật Willis dựa đặc tính trứng giun sán: – Trứng giun sán lên nước muối bão hoà (nước muối bão hoà có tỷ trọng lớn tỷ trọng trứng giun sán) – Trứng giun sán dễ dính vào thuỷ tinh 7.2.4.1 Phương tiện – Dung dịch muối bão hoà (NaCl 30 – 33%), có tỷ trọng 1,15 – 1,2 – Lọ xét nghiệm – Phiến kính, kính – Que xét nghiệm 301 2.4.2 Kỹ thuật tiến hành – Lấy khoảng – g phân cho vào lọ xét nghiệm – Đổ nước muối bão hoà vào khoảng 1/3 lọ – Dùng que xét nghiệm quấy kỹ để làm tan phân nước muối – Cho thêm nước muối bão hoà đến đầy miệng lọ (chú ý quan sát kỹ, đầy nhỏ giọt), mặt nước vồng lên khỏi miệng lọ – Đậy phiến kính lên miệng lọ cho dung dịch phân tiếp xúc vào mặt phiến kính (chú ý đặt phiến kính vị trí cân đối) – Chờ – 10 phút, sau nhấc cẩn thận phiến kính lên lật ngược nhanh phiến kính lại (đảm bảo giữ nguyên dung dịch phân dính vào mặt phiến kính) – Đậy kính lên giọt dung dịch phân đem soi kính hiển vi – Cho thêm nước muối bão hoà đặt thêm phiến kính thứ hai lên miệng lọ, chờ 5–10 phút, nhấc giống quan sát kính hiển vi 2.4.3 Đánh giá Kỹ thuật đơn giản, nhanh chóng phát trứng trường hợp nhiễm Kỹ thuật cho kết tốt với các trứng giun móc, giun đũa, giun tóc song khơng có tác dụng với trứng sán đơn bào Phương pháp muốn đạt hiệu cao cần ý điểm sau: – Dụng cụ: lọ xét nghiệm phải quy cách, phiến kính phải khơng có mỡ – Nước muối phải thật bão hồ – Đánh phân phải kỹ dung dịch muối bão hoà Để phút trứng chưa kịp để lâu trứng chìm trở lại 2.5 Kỹ thuật đếm trứng Kato–Katz Kỹ thuật dùng để đếm số lượng trứng phân hay gọi phương pháp định lượng trứng (tính số lượng trứng gam phân) 302 Mục đích để xác định cường độ nhiễm giun sán đồng thời kỹ thuật dùng để đánh giá kết thuốc điều trị 2.5.1 Phương tiện – Miếng bìa hình chữ nhật kích thước 30 x 40 x 1,37 mm, có lỗ tròn đường kính mm – Lưới lọc – Giấy lọc tròn – Que xét nghiệm – Phiến kính – Giấy cellophan nhuộm màu dùng kỹ thuật Kato 2.5.2 Kỹ thuật tiến hành – Lấy mẫu phân xét nghiệm đặt giấy lọc Đậy miếng lưới lọc lên mẫu phân, dùng que ép miệng lưới lọc để phân lọt lên qua lưới lọc – Miếng bìa hình chữ nhật đặt phiến kính có nhãn – Dùng que gạt phần phân lọc trên lưới đưa sang lỗ miếng bìa hình chữ nhật cho phân đầy lỗ – Nhấc nhẹ miếng bìa khỏi phiến kính lại khối phân phiến kính – Phủ giấy cellophan nhuộm màu, tiến hành kỹ thuật Kato – Tính số lượng trứng g: biết số lượng phân chứa lỗ tròn tương đương 43,7 mg Như vậy, số trứng g phân số trứng đếm tiêu nhân với 23 Tác giả Suzuki dùng miếng bìa có kích thước 30 x 40 x 1,42 mm với lỗ tròn có đường kính mm Như vậy, khối lượng phân 54,5 mg Số lượng trứng g phân số trứng đếm nhân với 18,5 2.5.3 Đánh giá Kỹ thuật đơn giản, nhanh, xác, tiến hành hàng loạt điều tra nghiên cứu Có thể ước lượng số giun ký sinh, dựa vào: – Số lượng trứng giun có phân (khối lượng phân trẻ em thải khoảng 70 gam / 24 giờ, người lớn gấp đơi khối lượng trên) – Số lượng trứng giun đẻ ngày: + Giun đũa: 240.000 trứng / ngày / giun + Giun tóc: 2.000–14.000 trứng / ngày / giun + Giun móc: 10.000–25.000 trứng / ngày / giun + Giun mỏ: 5.000–10.000 trứng / ngày / giun – Tỷ lệ giun đực (giun cái: giun đực): + Giun đũa: 1: + Giun tóc: 1: 1,7 303 + Giun móc: 1: + Giun mỏ: 1: 1,5 Tuy nhiên, việc ước lượng số giun ký sinh có giá trị tương đối giun sán không đẻ theo nhịp độ đặn, trứng không phân bố thật phân Phân lại có nhiều ít, đặc lỏng mà làm sai lệch kết Đánh giá cường độ nhiễm giun đũa, giun tóc giun móc/mỏ theo số lượng giun ký sinh số trứng tính g phân theo quy ước Tổ chức Y tế Thế giới Nhiễm nhẹ Loại giun Giun đũa Số Số trứng/ lượng g phân giun Số lượng giun =, < – 24 Giun tóc Giun móc Nhiễm trung bình < 5.000 < 1.000 Nhiễm cao Số trứng/ g Số lượng Số phân giun trứng/ g phân 5.000– 50.000 > 25 1.000– 10.000 =, < 20 < 3.000 21 – 100 3.000– 10.000 Giun mỏ =, < 50 < 2.000 51 – 200 2.000–7.000 > 50.000 > 10.000 > 100 > 10.000 > 200 > 7.000 BẢNG KIỂM: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM PHÂN TRỰC TIẾP STT Thao tác Yêu cầu phải đạt Chuẩn bị bloc xét nghiệm theo quy định Đúng đủ phương tiện cần thiết… Nhỏ lên phiến kính giọt Giọt dung dịch vừa đủ Hai giọt có nước muối sinh lý giọt khoảng cách vừa phải, không gần xa dung dịch lugol kép Cho phân vào giọt nước muối sinh lý quấy Lượng phân vừa đủ, quấy phân Tiêu không dày quá, không mỏng Cho phân vào giọt dung dịch lugol kép quấy Lượng phân vừa đủ, quấy phân Tiêu không dày quá, không mỏng 304 Đậy kính Khơng có bọt khí, bọt nước, vừa kín dung dịch phân Soi kính hiển vi tìm ký sinh Đúng kỹ thuật Phát ký sinh trùng trùng (nếu có) BẢNG KIỂM: KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM KATO STT Thao tác Yêu cầu phải đạt Chuẩn bị bloc xét nghiệm theo quy Đúng đủ phương tiện cần định thiết… Lấy phân đặt lên phiến kính Đậy giấy cellophan nhuộm màu Đặt vị trí, ngắn lên mẫu phân Dùng nút cao su ép lên mặt giấy cellophan Phân phải dàn đều, mặt giấy tương đối phẳng Để tiêu phòng thí nghiệm tủ ấm Đủ thời gian quy định Soi kính hiển vi Đúng kỹ thuật, phát ký sinh trùng (nếu có) Lượng phân quy định (50–60 mg) BẢNG KIỂM: KỸ THUẬT TẬP TRUNG TRỨNG WILLIS STT Thao tác Yêu cầu phải đạt Chuẩn bị bloc xét nghiệm theo Đúng đủ phương tiện cần thiết… quy định Cho phân vào lọ xét nghiệm Lượng phân quy định (1–2 gam) Đổ nước muối bão hoà vào lọ xét nghiệm Khoảng 1/3 lọ Dùng que xét nghiệm quấy Quấy phân nước muối bão 305 phân hoà Đổ tiếp nước muối bão hoà vào Đầy miệng lọ, mặt nước vồng lọ xét nghiệm lên, khơng tràn dung dịch phân ngồi miệng lọ Đậy phiến kính lên miệng lọ Dung dịch phân tiếp xúc với phiến kính vị trí cân đối thời gian 15 phút Nhấc phiến kính lật ngược lại Lật ngược nhanh phiến kính đảm bảo dung dịch phân Đậy kính Khơng có bọt khí, dung dịch phân phủ kín diện tích kính Soi kính hiển vi Đúng kỹ thuật, phát ký sinh trùng (nếu có) Lượng giá Dựa vài kết học viên làm kỹ thuật xét nghiệm phân trực tiếp 306 ... http://xetnghiemdakhoa.com + PHẦN I: VI SINH Y HỌC ĐẠI CƯƠNG VI SINH Mục tiêu Trình bày khái niệm: vi sinh vật học, vi sinh vật y học đối tượng nghiên cứu mốc lịc sử phát triển vi sinh y học Nêu phân bố vi khuẩn thiên... bào vi khuẩn thường 20 phút đến 30 phút, riêng vi khuẩn lao khoảng 30 hệ Vi sinh vật tự nhiên ký sinh người: 6.1 Vi sinh vật tự nhiên: 6.1.1 Vi sinh vật đất Đất môi trường quan trọng số vi sinh. .. tỷ lệ cao người làm vi c bệnh vi n Vi sinh vật họng mũi Ở hầu vi sinh vật chủng loại số lượng phong phú từ miệng lan truyền phế cầu, S viridans, H influenzae, Nesseria hoại sinh, Vi sinh