ỨNG DỤNG QUECHERS KHẢO sát dƣ LƢỢNG CHLORPYRIFOS TRONG nấm rơm TRÊN địa bàn THÀNH PHỐ cần THƠ BẰNG UPLC MS MS

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN HÓA HỌC  PHẠM THANH TIỀN ỨNG DỤNG QUECHERS KHẢO SÁT DƢ LƢỢNG CHLORPYRIFOS TRONG NẤM RƠM TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ CẦN THƠ BẰNG UPLC-MS-MS LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA HỌC Cần Thơ, 12/2014 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN HÓA HỌC  PHẠM THANH TIỀN ỨNG DỤNG QUECHERS KHẢO SÁT DƢ LƢỢNG CHLORPYRIFOS TRONG NẤM RƠM TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ CẦN THƠ BẰNG UPLC-MS-MS LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA HỌC HƢỚNG DẪN KHOA HỌC ThS NGUYỄN THỊ DIỆP CHI HƢỚNG DẪN THỰC NGHIỆM TRẦN VĂN ĐẢM Cần Thơ, 12/2014 Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi LỜI CẢM ƠN - Để có đƣợc ngày hôm nhờ công ơn Cha, Mẹ vất vả nuôi dạy, lo lắng, động viên cho suốt năm giảng đƣờng đại học Mỗi gặp khó khăn Cha, Mẹ tin tƣởng, an ủi, khuyến khích động viên vƣợt qua, công ơn Cha, Mẹ rộng lớn nhƣ trời biển, cám ơn Cha, Mẹ nhiều Nếu công ơn dạy dỗ, dẫn tận tình Thầy, Cô em đƣợc ngày hôm Em cám ơn Thầy, Cô khoa Khoa Học Tự Nhiên Thầy, Cô cũ dìu dắt, dạy dỗ, truyền đạt học quý giá đạo đức, kỹ sống, kiến thức chuyên môn để em bƣớc vào đời Luận văn hoàn thành hôm nay, nhờ giúp đỡ nhiều Thầy, Cô, Anh, Chị bạn bè Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: Cô Nguyễn Thị Diệp Chi – Khoa Khoa Học Tự Nhiên, Đại Học Cần Thơ, Cô tận tình quan tâm, giúp đỡ, hƣớng dẫn, gởi gắm chỗ thực tập Cô trực tiếp góp ý, dẫn tạo điều kiện tốt để em hoàn thành luận văn tốt nghiệp Cô Lê Thị Thanh Diệp, cô Phƣợng Anh, Chị phòng hóa lý trung tâm y tế dự phòng thành phố Cần Thơ Cô gởi gắm em qua công ty thực tập, tận tình dẫn, quan tâm chia sẽ, động viên suốt trình thực đề tài Cô Lê Thị Bạch (Cố vấn học tập), khoa Khoa học Tự nhiên, Cô hƣớng dẫn, giúp đỡ, dẫn giải đáp thắc mắc em trình thực tập Ban giám đốc công ty TNHH Warrantek tất Anh Chị công ty tạo điều kiện tốt cho em hoàn thành luận văn Em cám ơn chân thành đến tất Anh, Chị phòng sắc ký dẫn tận tình kỹ thực hành, kỹ phòng thí nghiệm trình thực tập Cuối cám ơn tập thể lớp hóa học khóa 37, bạn bè bên cạnh, ủng hộ chia khó khăn, vất vả suốt thời gian qua SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang i Niên khóa 2011-2015 Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN HÓA Độc lập – Tự – Hạnh phúc - - NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƢỚNG DẪN Cán hƣớng dẫn: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi - Đề tài: “Ứng dụng Quechers khảo sát dư lượng chlorpyrifos nấm rơm điạ bàn thành phố Cần Thơ UPLC-MS-MS ” - Sinh viên thực hiện: Phạm Thanh Tiền MSSV: 2111983 - Lớp: Cử nhân hóa học Khóa: 37 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN (đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 Cán hƣớng dẫn SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang ii Niên khóa 2011-2015 Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN HÓA CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc - - NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN Cán hƣớng dẫn: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi - Đề tài: “Ứng dụng Quechers khảo sát dư lượng chlorpyrifos nấm rơm điạ bàn thành phố Cần Thơ UPLC-MS-MS” - Sinh viên thực hiện: Phạm Thanh Tiền MSSV: 2111983 - Lớp: Cử nhân hóa học Khóa: 37 Nội dung nhận xét: e Nhận xét hình thức LVTN: f Nhận xét nội dung LVTN (đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: g Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): h Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 Cán chấm phản biện SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang iii Niên khóa 2011-2015 Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN HÓA CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc - - NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN Cán hƣớng dẫn: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi - Đề tài: “Ứng dụng Quechers khảo sát dư lượng chlorpyrifos nấm rơm điạ bàn thành phố Cần Thơ UPLC-MS-MS” - Sinh viên thực hiện: Phạm Thanh Tiền MSSV: 2111983 - Lớp: Cử nhân hóa học Khóa: 37 Nội dung nhận xét: i Nhận xét hình thức LVTN: j Nhận xét nội dung LVTN (đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: k Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): l Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 Cán chấm phản biện SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang iv Niên khóa 2011-2015 Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi TÓM TẮT - Dƣ lƣợng thuốc trừ sâu nấm rơm đƣợc phân tích phƣơng pháp Quechers Phƣơng pháp Quechers cho thời gian phân tích nhanh, hiệu cao, dễ thực hiện, giảm đƣợc chi phí sử dụng dung môi an toàn cho nhân viên kiểm nghiệm Dƣ lƣợng thuốc trừ sâu nấm rơm đƣợc chiết với acetonitrile MgSO4, làm phƣơng pháp phân tán pha rắn dSPE, dịch chiết đƣợc phân tích hệ thống LC/MS/MS với kỹ thuật ion hóa ESI kỹ thuật ghi phổ MRM Giới hạn phát phƣơng pháp 0,744 ppb giới hạn định lƣợng 2,254 ppb Đƣờng chuẩn có tƣơng quan tuyến tính rõ rệt nồng độ chất phân tích diện tích peak (R > 0,99) Phƣơng pháp có độ lặp (RSD = 6,23%) độ thu hồi (75% đến 114,6%) đạt tiêu chuẩn AOAC 2007, tiêu chuẩn châu Âu EC/657/2002 Phƣơng pháp Quechers đƣợc áp dụng rộng rãi nƣớc tiên tiến phân tích dƣ lƣợng thuốc trừ sâu mẫu khác ngày cải tiến mở rộng cho nhóm kháng sinh, độc tố, chất bảo quản thực phẩm, môi trƣờng… SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang v Niên khóa 2011-2015 Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi ABSTRACT - The pesticide residues in straw mushrooms were analyzed by Quechers The method was known as the quick, easy, cheap, effective, rugged and safe method for pesticide residues in straw mushroom involves the extraction of the sample with acetonitrile (ACN) and simultaneous liquid–liquid partitioning formed by adding anhydrous magnesium sulfate (MgSO4) followed by a simple clean-up step known as dispersive solid-phase extraction (dSPE) The extract was analyzed by Electrospray ionization (ESI) MS/MS liquid chromatography–mass spectrometer Chlorpyrifos was detected in positive ion mode using four multi-reaction monitoring (MRM) The limit of detection was 0,744 ppb in straw mushrooms The limit of quantification was 2,254 ppb The linear calibration curve with the correlation coefficient (r > 0,99) was obtained The repeatability at 10 ppb was lower than 8% (RSD = 6,23%) The percentage recoveries from 75% to 114,6% were observed for chlorpyrifos from straw mushrooms Thus, the present Quechers method is useful for detection of chlorpyrifos in straw mushrooms, water, vegetables, fruits and other products SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang vi Niên khóa 2011-2015 Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi LỜI CAM ĐOAN  Tôi xin cam kết luận văn đƣợc hoàn thành dựa kết nghiên cứu kết nghiên cứu chƣa đƣợc dùng cho luận văn cấp khác Cần Thơ, ngày 27 tháng 11 năm 2014 Phạm Thanh Tiền SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang vii Niên khóa 2011-2015 Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi MỤC LỤC - - Lời cảm ơn i Trang xác nhận hội đồng ii Tóm tắt v Abstract vi Lời cam đoan vii Mục lục viii Danh mục bảng xi Danh mục hình xii Danh mục từ viết tắt xiii Chƣơng 1: Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài Chƣơng 2: Tổng quan 2.1 Tổng quan nấm rơm 2.1.1 Giới thiệu chung nấm rơm 2.1.2 Thành phần dinh dƣỡng nấm rơm 2.1.3 Quy trình sản xuất nấm rơm 2.1.4 Thu hoạch chế biến nấm rơm 2.1.5 Tình hình tiêu thụ xuất nấm rơm 2.2 Khái niệm dƣ lƣợng hóa chất bảo vệ thực vật (HCBVTV) số quy định dƣ lƣợng HCBVTV nấm rơm 2.2.1 Khái niệm dƣ lƣợng HCBVTV 2.2.2 Dƣ lƣợng tối đa cho phép – MRL (Maximum residue limit) 2.3 Chlorpyrifos, quy định MRL phƣơng pháp phân tích chlorpyrifos nông sản 2.3.1 Tổng quan chlorpyrifos 2.3.2 Độc tính chế tác dụng 2.3.3 Tình hình sử dụng chlorpyrifos giới Việt Nam 2.3.4 Quy định số tổ chức quốc tế Việt Nam dƣ lƣợng chlorpyrifos nông sản 10 2.3.5 Một số phƣơng pháp phân tích dƣ lƣợng chlorpyrifos nông sản 11 2.4 Tổng quan phƣơng pháp Quechers 12 2.4.1 Lịch sử hình thành phát triển phƣơng pháp Quechers 12 2.4.2 Ƣu, nhƣợc điểm phƣơng pháp Quechers 13 SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang viii Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 Hình 4.3: Cơ chế phân mảnh (2) chlorpyrifos Bên cạnh nguyên tử P obitan trống liên kết trực tiếp với nguyên tử O, mật độ điện tử nguyên tử O khác dày đặc, phân tử chlorpyrifos dễ dàng phân mảnh theo chế sau Hình 4.4: Cơ chế phân mảnh (3) chlorpyrifos SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 39 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 Hình 4.5: Cơ chế phân mảnh (4) chlorpyrifos 4.1.3.3 Kết Căn vào trình khảo sát chế phân mảnh, mảnh ion m/z = 258 bền nhất, có cường độ mũi cao chọn làm ion định lượng, ion mẹ (ion phân tử) m/z = 350 (M+) hai mảnh ion xác nhận m/z = 198 m/z = 97 Bảng 4.2: Tổng quát lượng phân mảnh ion chlorpyrifos STT Tiền ion Ion định lượng Ion xác nhận (Da) Dwell (s) Điện cone (V) Điện Coll (eV) Delay (s) Compound 349,45 257,87 96,87 0,161 30 30 -1,00 Chlorpyrifos 349,85 257,87 197,85 0,161 30 18 -1,00 Chlorpyrifos SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 40 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 4.2 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH 4.2.1 Khảo sát tính đặc hiệu phƣơng pháp 4.2.1.1 Mục đích Xác định có mặt chất phân tích không bị ảnh hưởng tạp chất khác tiền chất, chất chuyển hóa, chất có chất hóa học tương tự chất phân tích… 4.2.1.2 Thực Phân tích lặp lặp lại nhiều lần 10 mẫu blank cá 10 mẫu blank nấm rơm Xác định có mặt chất phân tích ảnh hưởng nhiễu thời gian lưu chuẩn  Yêu cầu: Mẫu blank phải tín hiệu peak thời gian lưu chuẩn, tỉ lệ S/N < Khảo sát tín đặc hiệu phương pháp thông qua kỹ thuật ghi để xác định điểm IP (identification point) chuẩn chlorpyrifos 1ppb Dùng micropipette lấy 10µl chuẩn chlorpyrifos 1ppm cho vào bình định mức 10 ml, thêm acetonitrile tới vạch dung dịch chuẩn chlorpyrifos 1ppb  Yêu cầu: Số điểm IP ghi nhận phải từ trở lên 4.2.1.3 Kết Phân tích 20 mẫu blank không phát chất phân tích tín hiệu peak thời gian lưu chuẩn Tỷ lệ S/N= 2.15 < Hình 4.6: Phổ đồ mẫu blank nấm rơm SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 41 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 Bảng 4.3: Số điểm IP chuẩn chlorpyrifos 1ppb Mảnh ion Số điểm IP ghi nhận m/z = 349,45 m/z = 257,87 m/z = 197,85 m/z = 96,87  Kết luận : Phương pháp có tính đặc hiệu cao với mẫu nấm rơm 4.2.2 Khảo sát tính tuyến tính đƣờng chuẩn 4.2.2.1 Mục đích Khảo sát tính tuyến tính đường chuẩn làm sở cho việc định lượng mẫu thực Xác định phương trình hồi quy đường chuẩn y = ax + b hệ số tương quan tuyến tính R2 nồng độ chất phân tích diện tích peak chlorpyrifos 4.2.2.2 Thực Theo tiêu chuẩn EC/212/2013 tiêu chuẩn dư lượng chlorpyrifos nông sản nấm rơm nhập vào thị trường Hoa Kỳ, Châu Âu Nhật Bản quy định MRL 10 ppb.Vì 10 ppb xem giới hạn cấm chlorpyrifos nấm rơm xuất Theo tiêu chuẩn ISO 17025 đường chuẩn xây dựng phải có điểm bao gồm blank phải bao trùm khoảng nồng độ quan tâm (giới hạn cấm) từ 100%-150% Vì khoảng tuyến tính đường chuẩn xây dựng khoảng nồng độ 1ppb, ppb, 10 ppb, 20 ppb 100 ppb Đường chuẩn có độ tuyến tính tốt hệ số tương quan R2 > 0.99  Chuẩn bị dung dịch chuẩn Chuẩn gốc Co (100 ppm): cân xác 1.0205 mg chuẩn chlorpyrifos, định mức thành 10 ml acetonitrile (hàm lượng tinh khiết chuẩn gốc 98%) Chuẩn lưu tối, nhiệt độ -18oC, bền vòng tháng Chuẩn trung gian (10 ppm): lấy 1ml chuẩn Co cho vào bình định mức 10 ml, định mức đến vạch acetonitrile Chuẩn lưu tối, nhiệt độ -18oC, bền tháng SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 42 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 Chuẩn làm việc (1ppm): lấy 1ml chuẩn 10 ppm cho vào bình định mức 10 ml định mức đến vạch acetonitrile Chuẩn lưu tối, nhiệt độ -18oC, bền tháng  Chuẩn bị dãy chuẩn Mẫu xử lý đồng nhất, cân 10 g mẫu nấm rơm cho vào ống 50 ml, tiến hành spike chuẩn chlorpyrifos 1ppm Bảng 4.4 Dãy chuẩn chlorpyrifos để xây dựng đường chuẩn Điểm chuẩn S1 S2 S3 S4 S5 Thể tích spike chuẩn chlorpyrifos 1ppm (µl) 10 50 100 200 1000 Nồng độ (ppb) 10 20 100 4.2.2.3 Kết Bảng 4.5: Kết khảo sát khoảng tuyến tính chuẩn chlorpyrifos Nồng độ spike (ppb) 10 20 100 diện tích pick Điểm chuẩn S1 S2 S3 S4 S5 TR diện tích pick 3,71 3,70 3,71 3,71 3,71 368,673 1023,848 2054,988 4140,763 18385,551 Nồng độ S/N thực (ppb) 0,97 254,9 4,56 634,6 10,21 776 21,64 1628,1 99,67 4932,4 y = 182.535x + 191.513 R² = 0.9994 20000 18000 16000 14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000 0 20 40 60 80 100 120 nồng độ thực (ppb) Hình 4.7: Biểu đồ phương trình hồi quy chuẩn chlorpyrifos SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 43 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37  Nhận xét Giá trị P = 6,58.10-9 < 0,05; số b đường thẳng có ý nghĩa Tra chuẩn F (Fischer), Fα = FINV(0.05,1,3) = 10,128 < Flt = 9,26.108 Hệ số góc α, phương trình hồi quy có ý nghĩa R2 = 0,9994 có tương quan tuyến tính rõ rệt nồng độ chuẩn chlorpyrifos diện tích peak 4.2.3 Tìm giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) phƣơng pháp 4.2.3.1 Mục đích Khảo sát LOD để tìm khoảng nồng độ chlorpyrifos nhỏ có mẫu mà máy phát 4.2.3.2 Thực  LOD đƣợc tính dựa vào đƣờng chuẩn Dựa vào đường chuẩn để dự đoán giới hạn phát phương pháp Giới hạn phát (LOD) tính theo công thức LOD= 3,3 Trong đó: α hệ số góc đường chuẩn SD: độ lệch chuẩn nồng độ đo từ đường chuẩn 4.2.3.3 Kết  Thống kê mô tả xử lý số liệu đƣờng chuẩn SD = 41,146, hệ số góc α = 182,535 LOD = 3,3 LOQ = 10 = 3,3 = 0,744 (ppb) = 10 = 2,254 (ppb)  Kết luận: Phương pháp có giới hạn phát giới hạn định lượng thấp, phù hợp để phân tích dư lượng chlorpyrifos nồng độ vi lượng ppb SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 44 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 4.2.4 Khảo sát độ lặp lại phƣơng pháp 4.2.4.1 Mục đích Khảo sát độ lặp lại để xác định độ lệch chuẩn tương đối phương pháp % RSD Theo tiêu chuẩn AOAC 2007, % RSD nồng độ 10 ppb < 21% 4.2.4.2 Thực Thí nghiệm lặp lại 10 lần nồng độ spike chuẩn chlorpyrifos vào mẫu blank, nồng độ mẫu 10 ppb  Cách tiến hành Cân 10 g nấm xay nhuyễn vào ống 50 ml, sau spike 100µl chuẩn chlorpyrifos 1ppm vào mẫu, tiến hành chiết với 10 ml acetonitrile phân tích theo quy trình Nồng độ chuẩn chlorpyrifos mẫu tính công thức m C = Cc Vc Trong m khối lượng mẫu nấm cân (10 g) C nồng độ chất phân tích mẫu (ppb) Cc nồng độ chuẩn chlorpyrifos (1ppm) Vc thể tích chuẩn chlorpyrifos (µl) 4.2.4.3 Kết Bảng 4.6 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp STT TR S/N Area 10 Trung bình 3,71 3,72 3,72 3,71 3,72 3,71 3,72 3,71 3,72 3,71 608,4 648,3 774,2 931,6 706,3 648,8 631,5 485,1 660,9 584,7 1.558,369 1.748,052 1.699,721 1.828,252 1.933,859 1.736,38 1.751,587 1.711,851 1.721,047 1.801,751 SVTH: Phạm Thanh Tiền Nồng độ (ppb) 7,49 8,53 8,26 8,97 9,55 8,46 8,55 8,33 8,38 8,82 8,534 Trang 45 di = |xi1-xi2| 1,04 0,27 0,71 0,58 1,09 0,09 0,22 0,05 0,44 1,91 0,582 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37  Xử lý kết thống kê Nồng độ chuẩn chlorpyrifos mẫu: = 8,534±0,380; SD= 0,531; RSD = 6,23% < 21%  Kết luận Độ lệch chuẩn tương đối RSD = 6,23% đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn AOAC 2007 Phương pháp có độ lặp lại tốt 4.2.5 Khảo sát độ thu hồi phƣơng pháp 4.2.5.1 Mục đích Theo tiêu chuẩn EC/657/2002 khảo sát độ thu hồi dư lượng thuốc trừ sâu điểm 0,5; 1; 1,5 lần giá trị MRL Giá trị MRL chlorpyrifos 10 ppb Khảo sát độ thu hồi chuẩn chlorpyrifos spike vào mẫu blank mức nồng độ ppb, 10 ppb, 20 ppb Tính độ thu hồi nồng độ 4.2.5.2 Thực Cân 10 g mẫu nấm blank cho vào 10 ống nhựa 50ml, tiến hành spike 50 µl chuẩn chlorpyrifos 1ppm vào mẫu cân Nồng độ mẫu ppb Tiến hành tương tự cho mẫu nồng độ 10 ppb, 20 ppb, với thể tích chuẩn chlorpyrifos spike vào mẫu 100µl, 200µl Thực quy trình phân tích xác định độ thu hồi 4.2.5.3 Kết  Công thức tính độ thu hồi sau H% = Ctt nồng độ đo từ máy Cc nồng độ chuẩn spike vào mẫu SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 46 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 Bảng 4.7 Kết độ thu hồi ppb STT 10 TR 3,71 3,72 3,71 3,71 3,72 3,71 3,71 Nồng độ (ppb) 3,75 4,36 4,87 5,73 4,57 4,21 5,17 Area 880,028 990,859 1083,521 1294,283 1029,013 963,605 1138,027 S/N H% 546,8 590,7 632,7 674,8 612,5 578,9 643,2 75 87,2 97,4 114,6 91,4 84,2 103,4  Nhận xét độ thu hồi ppb Nồng độ: x = 4,666±0,606 Hiệu suất thu hồi H% = 93,3±12,12 Hiệu suất thu hồi thuộc khoảng 75% 114,6 % Hiệu suất thu hồi đạt yêu cầu AOAC 2007 (60% 115%), chưa đạt yêu cầu EC/657/2002 (70% 110%) Bảng 4.8 Kết độ thu hồi 10 ppb STT 10 TR 3,71 3,72 3,72 3,71 3,72 3,71 3,72 3,71 3,72 3,71 Area 2057,762 1748,052 1699,721 1828,252 1933,859 1736,38 1751,587 1711,851 1721,047 1801,751 Nồng độ (ppb) 10,73 8,53 8,26 8,97 9,55 8,46 8,55 8,33 8,38 8,82 S/N 776 648,3 774,2 931,6 706,3 648,8 631,5 485,1 660,9 584,7 H% 107,3 85,3 82,6 89,7 95,5 846 85,5 83,3 83,8 88,2  Nhận xét độ thu hồi 10 ppb Nồng độ: x = 8,858±0,545 Hiệu suất thu hồi H% = 88,58±5,45 Hiệu suất thu hồi thuộc khoảng 82,6% 107,3% Có độ thu hồi tốt đạt yêu cầu tiêu chuẩn Châu Âu EC/657/2002 SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 47 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 Bảng 4.9 Độ thu hồi nồng độ 20 ppb SST TR 3,72 3,71 3,71 3,71 3,71 3,71 Area 3289,876 3678,987 4118,657 4235,256 4412,321 3417,874 Nồng độ (ppb) 16,57 18,84 20,89 21,45 21,78 17,32 S/N H% 1431,3 1618,3 1679,5 1684,3 1692,6 1521,4 82,85 94,2 104,45 107,25 108,9 86,6  Nhận xét độ thu hồi 20 ppb Nồng độ: x = 19,475±2,333 Hiệu suất thu hồi H% = 97,4±11,66 Hiệu suất thu hồi thuộc khoảng 82,6% 108,9% Có độ thu hồi tốt đạt yêu cầu tiêu chuẩn Châu Âu EC/657/2002 4.3 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH MỘT SỐ MẪU NẤM RƠM TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ CẦN THƠ 4.3.1 Mục đích Phân tích mẫu nấm rơm địa bàn thành phố Cần Thơ để đánh giá trình trạng nhiễm dư lượng thuốc trừ sâu chlorpyrifos, khuyến cáo, để bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng 4.3.2 Tiến hành Tiến hành thu mua mẫu chợ địa bàn thành phố Cần Thơ Mã hóa code cho mẫu: từ NR01 NR21, 8725, 8726, 10282, 10283,10284,10265,10266,10301,10302 Xử lý mẫu: Mẫu nấm thu mua sau mã hóa code xay nhuyễn, đem phân tích SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 48 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 4.3.3 Kết Bảng 4.10 Kết phân tích mẫu nấm rơm chợ địa bàn thành phố Cần Thơ Mẫu NR1 NR2 NR3 NR4 C(ppb) KPH KPH KPH 10,93 NR5 64,3 NR6 NR7 NR8 KPH KPH KPH NR9 2.800 NR10 KPH Mẫu C(ppb) Mẫu 4.330 NR21 KPH 8725 KPH 8726 KPH 10282 11,2 10283 KPH 10284 KPH 10265 12,4 10266 18,8 10301 11,4 10302 NR11 NR12 NR13 NR14 NR15 NR16 NR17 NR18 NR19 NR20 C(ppb) KPH 7,7 7,2 6,3 9,19 KPH KPH KPH KPH KPH Bảng 4.11 Tổng quát kết phân tích mẫu nấm Mẫu Nấm rơm Phát nhiễm CPR (ppb) < 10 10 C< 50 ≥ 50 Không phát Tổng số mẫu 18 30 Số mẫu không phát chlorpyrifos 18 mẫu chiếm 60% tổng số mẫu khảo sát Số mẫu nhiễm vượt tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5624-2 : 2009 (quy định 50 ppb) mẫu chiếm 10% tổng số mẫu Số mẫu phát có nhiễm chlorpyrifos 12 mẫu chiếm 40% Nấm rơm có số lượng nhiễm dư lượng chlorpyrifos nhiều, nồng độ thấp, phần lớn nằm giới hạn cho phép TCVN, nhiên người tiêu dùng nên cẩn thận sử dụng nấm rơm ngâm nước muối, luộc sơ qua nước sôi để loại bỏ phần lớn dư lượng thuốc trừ sâu trước chế biến sử dụng Với 30 mẫu khảo sát, số lượng mẫu nhiễm chlorpyrifos 10 ppb mẫu, chiếm 27% chưa đạt tiêu chuẩn xuất vào thị trường Châu Âu, Nhật, Hoa Kỳ quy định dư lượng chlorpyrifos không vượt 10 ppb (EC/212/2013) SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 49 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Quá trình khảo sát việc định lượng chlorpyrifos nấm rơm phương pháp Quechers UPLC/MS/MS, đề tài thu kết sau:  Lựa chọn phương pháp Quechers có tính đặc hiệu cao, phân tích nhiều mẫu khoảng thời gian ngắn, an toàn, sử dụng dung môi Phương pháp phù hợp với hệ thống UPLC/MS/MS phòng thí nghiệm, có khả cải tiến, mở rộng phân tích nhiều mẫu khác thủy sản, nước, nông sản  Phương pháp có tính tuyến tính khoảng nồng độ 1ppb đến 100 ppb, có giới hạn phát LOD thấp 0,744 ppb, độ lặp lại độ thu hồi đạt tiêu chuẩn AOAC 2007 EN/657/2002  Phương pháp áp dụng phân tích số mẫu nấm rơm địa bàn thành phố Cần Thơ, 40% số mẫu nấm nhiễm dư lượng chlorpyrifos nồng độ thấp, có 10% số mẫu nấm rơm nhiễm dư lượng chlorpyrifos vượt tiêu chuẩn TCVN 5624-2:2009 5.2 KIẾN NGHỊ Vì thời gian điều kiện phòng thí nghiệm có hạn nên đề tài khảo sát dư lượng chlorpyrifos sắc ký lỏng, có điều kiện kiến nghị: − Áp dụng kỹ thuật Quechers cho hệ thống máy GC/MS/MS, kết hợp với kỹ thuật headspace, HPLC/TOF… để phân tích mẫu nhanh chóng giới hạn phát nồng độ nhỏ − Khảo sát điều kiện tối ưu pH, tỷ lệ PSA C18… để tăng hiệu suất cho trình chiết làm mẫu kỹ thuật Quechers − Áp dụng kỹ thuật Quechers để phân tích thêm loại thuốc trừ sâu nhóm lân hữu khác diazinon, methidazinon,trichlofon,… − Mở rộng cải tiến kỹ thuật Quechers để phân tích số nhóm kháng sinh nhiều mẫu khác thủy sản, nông sản, nước, thực phẩm… SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 50 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 − Khảo sát thêm nhiều mẫu để đánh xác, khách quan tình trạng nhiễm dư lượng thuốc trừ sâu nấm rơm địa bàn thành phố Cần Thơ, từ có biện pháp khuyến cáo, bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 51 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 TÀI LIỆU THAM KHẢO - Phùng Trí Dũng, Nguyễn Việt Hùng, Trần Thị Tuyết Hạnh Nguy sức khỏe phơi nhiễm chlorpyrifos đối tượng nông dân trồng lúa Thái Bình, Việt Nam; Đánh giá nguy sức khỏe phương pháp xác xuất Tạp chí y tế dự phòng, tập XXIII, số 4, trang 140 Nguyễn Duy Trình, Nguyễn Hữu Ngoan Phân tích hiệu kinh tế ngành hàng nấm vùng đồng Sông Hồng.Tạp chí khoa học phát triển 2013, tập 11, số 4, trang 593-601 Ilumtics Viet Nam Báo cáo tóm tắt ngân hàng nấm Quảng Bình, dự án quản lý bền vững nguồn tài nguyên thiên nhiên miền trung Việt Nam (SMRNCV) US Environmental Protection Agency (2007), What is a pesticide epa.gov Retrieved on September 15, 2007 TS Nguyễn Thị Bích Thu, 12/2010 Nghiên cứu ứng dụng sắc ký khí ghép khối phổ để phân tích dư lượng số hóa chất bảo vệ thực vật thường dùng Báo cáo kết nghiên cứu đề tài cấp số 8079, viện dược liệu, y tế FAO/WHO Food standard CODEX alimentarius Pesticide residue in food and feed EFSA Journal 2012 Modification of the existing MRLs for chlorpyrifos in various crops and in products of animal origin European Food Safety Authority (EFSA), Parma, Italy.pp.12-13.79 Tomlin, C D S The Pesticide Manual, A World Compendium, 14th ed.; British Crop Protection Council: Alton, Hampshire, UK, 2006; p 186-187 Kathy A Brzak, Daniel W Harms, Michael J Bartels, and Richard J Nolan ,1998 Determination of chlorpyrifos, chlorpyrifos oxon, and 3,5,6trichloro-2-piridinol in rat and human blood Journal of Analytical Toxicology, Vol, 22, May/June 1998.pp.203-210 10 Satoshi Takatori, Masahiro Okihashi, Yoko Kitagawa, Naoki Fukui,You Kakimoto-Okamoto and Hirotaka Obana Rapid and Easy Multiresidue Method for Determination of Pesticide Residues in Foods Using Gas or Liquid Chromatography– Tandem Mass Spectrometry Osaka Prefectural Institute of Public Health Japan.pp.197-198 11 Th Nguyễn Thị Diệp Chi (2008) Giáo trình thực tập hóa môi trường Đại Học Cần Thơ 12 Sukesh Narayan Sinha, Ramavati Pal, Aruna Dewan, M.M Mansuri, H.N Saiyed, 29 March 2006 Effect of dissociation energy on ion formation and sensitivity of ananalytical method for determination of chlorpyrifos in human SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 52 Niên khóa 2011-2015 GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa học K37 blood, using gas chromatography–mass spectrometer (GC–MS in MS/MS) Sciencedirect, International Journal of Mass Spectrometry 253 (2006) 48–57 13 Anastassiades M, Lehotay SJ, et al.Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe (QuEChERS) approach for the determination of pesticide residues 2002 14 Anastassiades M, Lehotay SJ, Stajnbaher D and Schenck FJ.Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and dispersive solid-phase extraction for the determination of pesticide residues in produce 2003 JAOAC Int 86(2) 412-31 15 Steven J Lehotay , Michelangelo Anastassiades, Ronald E Majors The quechers revolution LCGC europe Volume 23, issue 8, pp.446 16 Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007 Phương pháp cô lập hợp chất hữu Đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Trang 407-450 17.Nguyễn Kim Phi Phụng, 2004 Khối Phổ Đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Trang 13 – 51 18.Ths.Nguyễn Thị Diệp Chi (2008), Các phương pháp phân tích đại,Đại học Cần Thơ 19 EPA,July 31,2006 Reregistration Eligibility Decision for Chlorpyrifos EPA, Washington D.C.pp.3-20 20 Trần Cao Sơn, PGS.TS Phạm Xuân Đà, TS Lê Thị Hồng Hảo, Nguyễn Thành Trung Tháng 8, 2010 Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật Nhà xuất khoa học kỹ thuật.Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia.Trang 19-23,27,28,32-37,55-58 SVTH: Phạm Thanh Tiền Trang 53 Niên khóa 2011-2015 ...TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN HÓA HỌC  PHẠM THANH TIỀN ỨNG DỤNG QUECHERS KHẢO SÁT DƢ LƢỢNG CHLORPYRIFOS TRONG NẤM RƠM TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ CẦN THƠ BẰNG UPLC- MS- MS LUẬN VĂN... lượng cho phép chlorpyrifos thực phẩm dược liệu Để kiểm soát dư lượng thuốc trừ sâu đề tài Ứng dụng Quechers khảo sát dư lượng chlorpyrifos nấm rơm địa bàn thành phố Cần Thơ UPLC/ MS/ MS” nhằm mục... Nguyễn Thị Diệp Chi - Đề tài: Ứng dụng Quechers khảo sát dư lượng chlorpyrifos nấm rơm điạ bàn thành phố Cần Thơ UPLC- MS- MS” - Sinh viên thực hiện: Phạm Thanh Tiền MSSV: 2111983 - Lớp: Cử nhân