Nghiên cứu tính đa dạng loài của chi aspergillus fr fr trên các vị thuốc mã tiền (semen strychni) và khiếm thực (semen euryales) đang lưu hành trên địa bàn hà nội

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ HẠNH MÃ SINH VIÊN: 1201165 NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA DẠNG LOÀI CỦA CHI ASPERGILLUS FR.: FR TRÊN CÁC VỊ THUỐC MÃ TIỀN (SEMEN STRYCHNI) VÀ KHIẾM THỰC (SEMEN EURYALES) ĐANG LƯU HÀNH TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2017 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ HẠNH MÃ SINH VIÊN: 1201165 NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA DẠNG LOÀI CỦA CHI ASPERGILLUS FR.: FR TRÊN CÁC VỊ THUỐC MÃ TIỀN (SEMEN STRYCHNI) VÀ KHIẾM THỰC (SEMEN EURYALES) ĐANG LƯU HÀNH TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Trần Trịnh Công Nơi thực hiện: Bộ môn Vi Sinh Sinh Học HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lòng kính trọng chân thành biết ơn sâu sắc đến người thầy TS Trần Trịnh Công – Giảng viên Bộ môn Vi sinh Sinh học trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy tận tình bảo, động viên, giúp đỡ tạo điều kiện để thực hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy giáo, cô giáo, chị kĩ thuật viên Bộ môn Vi sinh Sinh học toàn thể thầy cô trường Đại học Dược Hà Nội – người thầy chia sẻ giúp có kiến thức quý báu học tập hành trang trình thực khóa luận Qua đây, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến bạn em sinh viên nghiên cứu khoa học Bộ môn Vi sinh Sinh học người động viên, giúp đỡ nhiều từ khóa luận bắt đầu tiến hành hoàn thành Cuối cùng, muốn gửi đến gia đình tôi, nơi sinh tôi, nuôi dưỡng lớn lên bên cạnh động viên suốt năm tháng qua, lời cảm ơn chân thành sâu sắc Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 18 tháng năm 2017 Sinh viên Bùi Thị Hạnh MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN Một vài nét chi Aspergillus Fr.: Fr Tình hình nghiên cứu chi Aspergillus độc tố thảo dược nước Tình hình nghiên cứu chi Aspergillus độc tố thảo dược nước 10 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 11 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 11 2.1.2 Môi trường phân lập xác định nấm mốc 11 2.1.3 Thiết bị thí nghiệm 11 2.1.4 Hóa chất 12 2.2 Nội dung nghiên cứu 12 2.3 Phương pháp nghiên cứu 12 2.3.1 Phương pháp xác định hàm ẩm dược liệu 12 2.3.2 Phương pháp phân lập nấm mốc 13 2.3.3 Phương pháp phân loại nấm mốc 13 2.3.4 Các số đánh giá mức độ nhiễm nấm 13 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 15 3.1 Mức độ nhiễm loài chi Aspergillus mẫu vị thuốc mã tiền 15 3.1.1 Hàm ẩm mẫu vị thuốc mã tiền nghiên cứu 15 3.1.2 Mức độ nhiễm loài chi Aspergillus mẫu vị thuốc mã tiền nghiên cứu 15 3.1.3 Một số ý kiến bàn luận 23 3.2 Mức độ nhiễm loài chi Aspergillus mẫu vị thuốc khiếm thực 24 3.2.1 Hàm ẩm mẫu vị thuốc khiếm thực nghiên cứu 24 3.2.2 Mức độ nhiễm loài chi Aspergillus mẫu vị thuốc khiếm thực nghiên cứu 24 3.2.3 Một số ý kiến bàn luận 32 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 34 Kết luận 34 1.1 Vị thuốc mã tiền 34 1.2 Vị thuốc khiếm thực 34 Đề xuất 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADM : Aspergillus Differentiation Medium Base BGYF test : Bright greenish-yellow fluorescence test DĐVN IV : Dược điển Việt Nam IV DGM : Dichloran Glycerol Medium Base HPLC : Sắc kí lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) HPLC-MS/MS : Sắc kí lỏng hiệu cao kết hợp detector khối phổ lần (High performance liquid chromatography - tandem mass spectrometry) LÔ : Phố Lãn Ông MEA : Malt Extra Agar PDA : Potato Dextrose Agar TLC : Sắc kí lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) UPLC-MS/MS : Sắc kí siêu hiệu kết hợp detector khối phổ lần (Ultra performance liquid chromatography - tandem mass spectrometry) DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Hàm ẩm mẫu vị thuốc mã tiền nghiên cứu 15 Bảng 3.2 Các loài số lượng chủng chi Aspergillus phân lập từ 10 mẫu mã tiền nghiên cứu 16 Bảng 3.3 Một số đặc điểm khuẩn lạc loài thuộc chi Aspergillus phân lập từ mẫu mã tiền nghiên cứu 17 Bảng 3.4 Một số đặc điểm vi học loài thuộc chi Aspergillus phân lập từ mẫu mã tiền nghiên cứu 18 Bảng 3.5 Hàm ẩm mẫu vị thuốc khiếm thực nghiên cứu 24 Bảng 3.6 Các loài số lượng chủng chi Aspergillus phân lập từ 10 mẫu khiếm thực nghiên cứu 24 Bảng 3.7 Một số đặc điểm khuẩn lạc loài thuộc chi Aspergillus phân lập từ mẫu khiếm thực nghiên cứu 26 Bảng 3.8 Một số đặc điểm vi học loài thuộc chi Aspergillus phân lập từ mẫu khiếm thực nghiên cứu 27 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hin ̀ h 1.1 Cấu trúc sinh conidi chi Aspergillus Hin ̀ h 3.1 Loài A niger nhiễm vị thuốc mã tiền 19 Hin ̀ h 3.2 Loài A flavus nhiễm vị thuốc mã tiền 20 Hin ̀ h 3.3 Loài A tamarii nhiễm vị thuốc mã tiền 21 Hin ̀ h 3.4 Loài A ochraceus nhiễm vị thuốc mã tiền 22 Hin ̀ h 3.5 Loài A flavus nhiễm vị thuốc khiếm thực 28 Hin ̀ h 3.6 Loài A niger nhiễm vị thuốc khiếm thực 29 Hin ̀ h 3.7 Loài A fumigatus nhiễm vị thuốc khiếm thực 30 Hin ̀ h 3.8 Loài A terreus nhiễm vị thuốc khiếm thực 31 ĐẶT VẤN ĐỀ Thảo dược sử dụng chế biến phương thuốc gia truyền làm nguồn nguyên liệu thô cho ngành công nghiệp dược ngày tăng Tuy nhiên, thực tế theo đánh giá nhà khoa học, nguồn nguyên liệu chưa đáp ứng yêu cầu chất lượng, độ an toàn tính hiệu [13], [17], [25] Trong trình thu hoạch, vận chuyển, bảo quản phân phối, thảo dược mục tiêu lây nhiễm nhiều loại nấm mốc khác (đặc biệt loài chi Aspergillus) nguyên nhân gây hư hỏng tạo thành mycotoxin [14] Mã tiền (Semen Strychni) khiếm thực (Semen Euryales) vị thuốc dùng phổ biến đông y Mã tiền, việc dùng để chiết strychnin tây y, dùng nhiều đông y để chữa tê thấp, bại liệt bán thân bất toại [9] Khiếm thực dùng phổ biến đông y để làm thuốc bổ, điều trị bệnh đau nhức dây thần kinh, tê thấp, đau đầu gối, di tinh, tiểu tiện nhiều, phụ nữ khí hư bạch đới [9] Tuy nhiên, nước chưa có công trình nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc, đặc biệt loài chi Aspergillus mycotoxin thảo dược Để góp phần nâng cao hiệu sử dụng, độ an toàn thảo dược nói chung, vị thuốc mã tiền khiếm thực nói riêng, đề tài “Nghiên cứu tính đa dạng loài chi Aspergillus Fr.: Fr vị thuốc mã tiền (Semen Strychni) khiếm thực (Semen Euryales) lưu hành địa bàn Hà Nội” thực với mục tiêu sau: Phân lập chủng nấm nhiễm mẫu hai vị thuốc nghiên cứu Phân loại chủng nấm thuộc chi Aspergillus phân lập đến cấp loài CHƯƠNG TỔNG QUAN Một vài nét chi Aspergillus Fr.: Fr Chi Aspergillus Micheli mô tả lần đầu năm 1729, sau đến năm 1832 Fries chấp nhận theo luật quốc tế danh pháp thực vật, chi Aspergillus thức mang tên Aspergillus Micheli ex Fries Sau Fries lại xem xét bổ sung nên mang tên Aspergillus Fries ex Fries Chi Aspergillus đặc trưng đặc điểm sau: Hệ sợi nấm gồm sợi có vách ngăn, phân nhánh, không màu, màu nhạt số trường hợp trở thành màu nâu hay màu sẫm, số ngả màu xanh khác vùng định khuẩn lạc Cấu trúc mang bào tử trần phát triển từ tế bào có đường kính lớn hơn, thành tế bào dày Giá bào tử trần (conidiophore) cấu tạo cuống (stipe) không phân nhánh, với phần đỉnh phồng to gọi bọng (vesicle) hình chùy, hình elip, hình cầu nửa cầu Bọng mang thể bình Các thể bình (phialide) gọi thể bình tầng (uniseriate phialide), cuống thể bình (metula) thể bình hai tầng (biseriate phialide) Conidi (conidium) tạo thành nối tiếp từ thể bình Conidi gồm tế bào, bề mặt nhẵn xù xì, có gai, không màu có màu Bọng, thể bình, cuống thể bình (nếu có) conidi hình thành khối conidi (conidial head) (hình 1.1) Khối conidi hình thành dạng cột (columnar), dạng phóng xạ (radiate) dạng cầu (globose) Một số loài có bào tử túi (ascosporum) thể kín (cleitothecium), thể nằm đệm nấm dạng hạch cứng (sclerotium) khối sợi thường có dạng hình cầu, cứng Hình thức hữu tính: Eurotium, Emericella, Neosartorya số chi khác Nhiều loài nấm mốc thuộc chi Aspergillus phân bố rộng rãi chất tự nhiên, đặc biệt lây nhiễm loại hạt lương thực, loại chất chết có nguồn gốc thực vật [6], nhiều vùng địa lí khác giới Ở Bảng 3.6 Các loài số lượng chủng chi Aspergillus phân lập từ 10 mẫu vị thuốc khiếm thực nghiên cứu Tên loài (Aspergillus) 69A LÔ 24 LÔ 30 LÔ A flavus A parasiticus A niger 36 LÔ 27 A terreus Tổng 55 LÔ 57 LÔ 65 2 A ustus 50 LÔ 5 A fumigatus A tamarii 32 LÔ 5 63 LÔ 28 LÔ Tổng Tỷ lệ (%) 70 36,65 4,71 16 65 34,03 21 10,99 3,66 15 7,85 2,09 100 (%) 14 13 32 73 11 26 191 Với kết thu từ bảng 3.6 cho thấy: Từ 10 mẫu khiếm thực nghiên cứu phân lập 191 chủng nấm thuộc loài chi Aspergillus gồm A flavus, A parasiticus, A niger, A fumigatus, A tamarii, A terreus A ustus Trong đó, loài A flavus (hình 3.5) chiếm tỷ lệ cao số chủng phân lập (chỉ số có nhiều), với tỷ lệ 36,65% (70/191) Tuy nhiên, tỷ lệ mẫu nghiên cứu có mặt loài mức 40% (4/10 mẫu nghiên cứu) Xếp thứ loài A niger (hình 3.6) có tỷ lệ số chủng phân lập 34,03% (65/191), với số có mặt 80% (8/10 mẫu nghiên cứu) Xếp thứ loài A fumigatus (hình 3.7), với số có nhiều có mặt 10,99% (21/191) 50% (5/10) Xếp thứ 4, thứ 5, thứ thứ loài A terreus (hình 3.8), A parasiticus, A tamarii A ustus với số có nhiều số có mặt theo thứ tự là: 7,85% (15/191) 40% (4/10); 4,71% (9/191) 40% (4/10); 3,66% (7/191) 40% (4/10); 2,09 (4/191) 20% (2/10) 25 b) Một số đặc điểm khuẩn lạc vi học quan trọng loài phân lập từ 10 mẫu khiếm thực nghiên cứu Để khảo sát đặc điểm sinh học (khuẩn lạc, vi học, ), chủng nấm cấy đơn điểm đĩa Petri chứa môi trường Czapek Dox Agar ủ 25oC sau ngày Bảng 3.7 số đặc điểm khuẩn lạc quan trọng loài phân lập từ mẫu khiếm thực nghiên cứu Bảng 3.7 Một số đặc điểm khuẩn lạc loài thuộc chi Aspergillus phân lập từ mẫu khiếm thực nghiên cứu (môi trường Czapek Dox, 25oC, ngày tuổi) Mặt phải Mặt trái Đường kính khuẩn lạc (cm) Xanh vàng Không màu 3-5,5 Xanh Trắng xám 2,5-4 A niger Nâu tím Không màu 3,5-5,5 A fumigatus Xanh tối Xám tối 3-5 A tamarii Nâu vàng Trắng xám 3-5,5 A terreus Nâu quế Xám vàng 3-5 Kem, vàng Hơi vàng tối 4-5,5 Tên loài A flavus A parasiticus A ustus Màu sắc khuẩn lạc Một số đặc điểm vi học loài thuộc chi Aspergillus phân lập trình bày bảng 3.8 26 Bảng 3.8 Một số đặc điểm vi học loài thuộc chi Aspergillus phân lập từ mẫu khiếm thực nghiên cứu (môi trường Czapek Dox, 25oC, ngày tuổi) Tên loài Cấu trúc sinh conidi (conidial head) Dạng Tầng Đường kính bọng (µm) Cuống thể bình (µm) 6-11 x 2,5-5 A flavus R 22-47 A parasiticus R 18-36 A niger R 45-105 A fumigatus C 18-32 A tamarii R-C 25-55 A terreus C 9-21 A ustus R 6-17 5,5-10 x 4-6 6,5-9,5 x 2,5-4 14-27 x 6-10 x 4-6,5 2,5-4 5,5-8,5 x 2-3,5 6,5-10 x 9-16 x 3,5-6 3,5-8,5 4,5-7,5 x 4,5-7 x 2-3 1,5-2,5 5-7,5 x 4-7,5 x 2,5-3,5 3-4,5 (Ghi R: dạng phóng xạ; C: dạng cột) 27 Thể bình (µm) Conidi (µm) 3-4 3,5-6 3-5 2-3,5 5-8 1-3 3-5 (a) (b) (c) (d) (e) (f) Hin ̀ h 3.5 Loài A flavus nhiễm vị thuốc khiếm thực: (a): Loài A flavus nhiễm mẫu 55LÔ (môi trường phân lập PDA); (b) (c): Mặt trước sau khuẩn lạc loài Czapek Dox (25oC, ngày); (d): Conidi, cấu trúc sinh conidi tầng loài (e) (f): Mặt trước sau khuẩn lạc môi trường ADM (25oC, 48 giờ) 28 (a) (b) (c) (d) Hin ̀ h 3.6 Loài A niger nhiễm vị thuốc khiếm thực: (a): Loài A niger nhiễm mẫu 50LÔ (môi trường phân lập PDA); (b) (c): Mặt trước sau khuẩn lạc loài Czapek Dox (25oC, ngày); (d): Conidi cấu trúc sinh conidi tầng loài 29 (a) (b) (c) (d) Hin ̀ h 3.7 Loài A fumigatus nhiễm vị thuốc khiếm thực: (a): Loài A fumigatus nhiễm mẫu 28LÔ (môi trường phân lập DGM); (b) (c): Mặt trước sau khuẩn lạc loài Czapek Dox (25oC, ngày); (d): Conidi cấu trúc sinh conidi tầng loài 30 (a) (b) (c) (d) Hin ̀ h 3.8 Loài A terreus nhiễm vị thuốc khiếm thực: (a): Loài A terreus nhiễm mẫu 32LÔ (môi trường phân lập DGM); (b) (c): Mặt trước sau khuẩn lạc loài Czapek Dox (25oC, ngày); (d): Conidi cấu trúc sinh conidi tầng loài 31 3.2.3 Một số ý kiến bàn luận Từ kết xác định hàm ẩm mẫu khiếm thực nghiên cứu (bảng 3.5) kết phân lập, phân loại (bảng 3.6) cho thấy: Trong 10 mẫu nghiên cứu, có mẫu 32LÔ, 50LÔ 55LÔ có hàm ẩm đạt yêu cầu DĐVN IV (≤ 13%) [2], mẫu lại có hàm ẩm không đạt yêu cầu (˃ 13%), dao động từ 13,5 – 15,88% Tất 10 mẫu nghiên cứu bị nhiễm nấm mốc, với số chủng phân lập mẫu dao động từ - 73 chủng Trong số này, điều đáng ý là, mẫu có số chủng phân lập cao (55LÔ) với 73 chủng mẫu có hàm ẩm thấp số mẫu có hàm ẩm đạt yêu cầu DĐVN IV (10,43%) Giải thích cho kết này, theo mẫu thu thập để nghiên cứu, không kiểm soát nguồn gốc, xuất xứ Các mẫu dược thảo bị nhiễm nấm trước thời điểm thu thập hiệu thuốc đông dược (có thể bị nhiễm trước đồng ruộng, trang tại, trình thu hoạch, vận chuyển, chế biến bảo quản) Mặt khác, khiếm thực chứa nhiều tinh bột – thành phần chất thích hợp cho phát triển nấm mốc, điều kiện thuận lợi cho nấm Aspergillus lây nhiễm phân lập nhiều vị thuốc Với kết phân lập, phân loại nấm từ 10 mẫu khiếm thực trình bày bảng 3.6 cho thấy: • Loài A flavus phân lập nhiều (36,65%), số có mặt mẫu khiếm thực nghiên cứu không cao (40%) Đây hai loài nấm có khả sinh độc tố aflatoxin [6], [16], [24], cho thấy mẫu vị thuốc khiếm thực nghiên cứu có nguy cao bị nhiễm độc tố gây ung thư Kết nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu Sinha cộng 2002 [30], cho thấy nhóm loài A flavus nhiễm mẫu khiếm thực nghiên cứu Trong đó, 30% mẫu bị nhiễm độc tố aflatoxin, hàm lượng aflatoxin B1 lên tới 12 µg/g 32 • Loài A niger phân lập với tỷ lệ chủng thứ (nhưng số có mặt mẫu nghiên cứu cao gấp đôi so với loài A flavus), cho thấy mẫu vị thuốc có khả cao bị nhiễm độc tố gây hại thận ochratoxin, A niger có khả sinh ochratoxin [16] Kết phù hợp với nghiên cứu Sinha cộng 2002 [30], với 30% mẫu khiếm thực nghiên cứu bị nhiễm độc tố gây hại thận ochratoxin • Loài A fumigatus phân lập tỷ lệ xếp thứ (chỉ số có mặt 50%, số có nhiều 11%) Đây loài nấm chi Aspergillus có khả gây bệnh hội phổ biến người, cần lưu ý kiểm soát [32] • Các loài A terreus, A parasiticus, A tamarii A ustus có tỷ lệ chủng phân lập 7,85; 4,71; 3,66 2%, có khả sinh độc tố patulin, citrinin, citreoviridin, aflatoxin, acid cyclopiazonic austamid, austdiol [16], [24] 33 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Quá trình phân lập, phân loại nấm nhiễm 10 mẫu vị thuốc mã tiền 10 mẫu vị thuốc khiếm thực, rút số kết luận sau 1.1 Vị thuốc mã tiền • Mười mẫu vị thuốc mã tiền nghiên cứu, có hàm ẩm dao động từ 5,92 16,35% bị nhiễm nấm mốc với số chủng phân lập dao động từ 442 chủng/mẫu • Từ 10 mẫu mã tiền nghiên cứu phân lập 199 chủng nấm, thuộc loài chi Aspergillus gồm A flavus, A niger, A fumigatus, A ochraceus, A tamarii A terreus • Loài A niger chiếm tỷ lệ cao số chủng phân lập (chỉ số có nhiều) với tỷ lệ 52,26% (104/199) tỷ lệ xuất mẫu nghiên cứu (chỉ số có mặt) 80% (8/10 mẫu nghiên cứu) • Xếp thứ loài A flavus có tỷ lệ số chủng phân lập 20,1% (40/199), số có mặt 60% (6/10) • Xếp thứ loài A fumigatus, với số có nhiều có mặt 11,06% (22/199) 60% (6/10) • Các loài A tamarii, A ochraceus A terreus xếp thứ 4, thứ thứ với số có nhiều có mặt là: 10,05% (20/199) 30% (3/10); 4,52% (9/199) 50% (5/10); 2,01% (4/199) 30% (3/10) 1.2 Vị thuốc khiếm thực • Mười mẫu vị thuốc khiếm thực, có hàm ẩm dao động từ 10,43 – 15,88% bị nhiễm nấm mốc với số chủng phân lập dao động từ 4-73 chủng/mẫu 34 • Từ 10 mẫu khiếm thực nghiên cứu phân lập 191 chủng nấm thuộc loài chi Aspergillus gồm A flavus, A parasiticus, A niger, A fumigatus, A tamarii, A terreus A ustus • Loài A flavus chiếm tỷ lệ cao số chủng phân lập được, với tỷ lệ 36,65% (70/191) tỷ lệ có mặt loài mẫu nghiên cứu 40% (4/10 mẫu nghiên cứu) • Loài A niger xếp vị trí thứ 2, có tỷ lệ số chủng phân lập 34,03% (65/191) số có mặt 80% (8/10 mẫu nghiên cứu) • Xếp thứ loài A fumigatus, với số có nhiều có mặt 10,99% (21/191) 50% (5/10) • Xếp thứ 4, thứ 5, thứ thứ loài A terreus, A parasiticus, A tamarii A ustus với số có nhiều số có mặt theo thứ tự là: 7,85% (15/191) 40% (4/10); 4,71% (9/191) 40% (4/10); 3,66% (7/191) 40% (4/10); 2,09 (4/191) 20% (2/10) Đề xuất • Tiếp tục nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc, loài có khả sinh độc tố aflatoxin ochratoxin vị thuốc mã tiền khiếm thực việc mở rộng phạm vi nghiên cứu số mẫu vùng địa lý • Triển khai nghiên cứu khả nhiễm độc tố aflatoxin ochratoxin vị thuốc 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Mai Thị Ánh (2008), Nghiên cứu khả sinh độc tố aflatoxin loài Aspergillus flavus chất hạt sen điều kiện phòng thí nghiệm, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Bộ Y Tế (2009), Dược Điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội Trần Trịnh Công (2003), Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc khả sinh aflatoxin B1 nhóm Aspergillus flavus số vị thuốc đông dược lưu hành địa bàn Hà Nội, Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Trần Trịnh Công cộng (2003), Nghiên cứu mức độ nhiễm loài Aspergillus flavus aflatoxin hạt sen số địa điểm Hà Nội, Tạp chí Dược học, Hà Nội Trần Trịnh Công cộng (2005), Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc aflatoxin hạt sen số địa điểm thuộc tỉnh Hà Nội, Hà Tây Bắc Ninh, Tạp chí Y học thực hành, Hà Nội Trần Trịnh Công cộng (2008), Phân lập nghiên cứu khả sinh độc tố số nấm mốc số vị thuốc đông dược Việt Nam, Đề NCKH cấp Bộ Y tế, Hà Nội Trần Trịnh Công cộng (2010), Nghiên cứu tính đa dạng loài chi Aspergillus Mich ex Fr Trên vị thuốc bách lưu hành hiệu thuốc đông dược thuộc địa bàn Hà Nội, Tạp chí thông tin Y-Dược, Hà Nội Trần Trịnh Công cộng (2011), Nghiên cứu tính đa dạng loài chi Aspergillus Mich ex Fr vị thuốc tục đoạn thạch xương bồ lưu hành hiệu thuốc đông dược thuộc địa bàn Hà Nội, Tạp chí nghiên cứu Dược thông tin thuốc, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, tr 529-530 tr 846-847, Nhà xuất Y học, Hà Nội 10 Nguyễn Thi Lý (2008), Nghiên cứu tính đa dạng loài chi Aspergillus aflatoxin vị thuốc ý dĩ, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội 11 Nguyễn Thị Hoài Thu (2010), Nghiên cứu đa dạng loài thuộc chi Aspergillus vị thuốc hạt cau cát sâm lưu hành hiệu thuốc đông dược thuộc địa bàn Hà Nội, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội 12 Phan Thị Bích Vân (2009), Nghiên cứu đa dạng loài chi Aspergillus vị thuốc bách hòe hoa lưu hành hiệu thuốc đông dược thuộc địa bàn Hà Nội, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ Đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Tiếng Anh 13 Ashiq S., et al (2014), “Natrural occurrence of mycotoxins in medicinal plants: A review”, Fungal genetics and biology 66, pp.1-10 14 Aziz N H et al (1998), “Contamination of some common medicinal plant samples and spices by fungi and their mycotoxins”, Bot Bull Acad Sin., Vol 39, pp.279-285 15 Chen A J et al (2015), “Mycobiota and mycotoxins in traditional medicinal seeds from China”, Toxins 7, pp.3858-3875 16 Didwania N and Joshi M (2013), “Mycotoxins: A critical review on occurrence and significance”, Int Pharm Pharm Sci., Vol 5, Issue 3, pp 1014-1019 17 Gautam A K., et al (2016), “Mycotoxins: the silent killers inside herbal drugs A critical review of the literature”, Bio bulletin, Vol 2(1), pp.26-39 18 Gonzalez H H L et al (1999), “Relationship between Fusarium and Alternaria alternata contamination and deoxynivalenol occurrence on Argentinian durum”, Mycopathologia, Vol.144, pp.97-102 19 Pitt J.I and Hocking A.D (2009), “Fungi and Food Spoilage”, Academic Press 20 Raper K.B and Fennell D.I (1965), “Genus Aspergillus”, Baltimo, Williams and Wilkins, USA 21 Rashidi M and Deokule S S (2013), “Natural occurrence of fungal and aflatoxins contamination in some genuine and market herbal drugs”, Int J Pharm Sci Rev Res., Vol 18(1), pp.121-125 22 Rawat A et al (2014), “Detection of toxigenic fungi and mycotoxins in some stored medicinal plant samples”, Int J Appl Sci Biotechnol., Vol 2(2), pp.211-216 23 Rizzo I., et al (2004), “Assessment of toxigenic fungi on Argentinean medicinal herbs”, Microbiological Research 159, pp.113-120 24 Samson R A et al (1995), “Introduction to food-borne fungi”, Fourth edition, CBS press 25 Santos L et al (2013), “Mycotoxin in medical/aromatic herbs – a review”, Boletín Latinoamericano y del Caribe de plants medicales y aromáticas 12(2), pp.119-142 26 Sareen A et al (2010), “Fungal contamination of some common medicinal plant samples of Himachal Pradesh”, Sci & Cult 76 (3-4), pp.118-120 27 Sharma S et al (2016), “Natural occurrence of diverse fungal species and their toxin in dried fruits of Emblica officinalis, Terminalia chebula and T bellerica – constituents of triphala, an important Ayurvedic preparation of India”, IOSR journal of pharmacy and biological sciences, Vol 11, Iss 1, ver.III, pp.06-13 28 Sharma et al (2013), “Investigation on the mycoflora and mycotoxin contamination of dried medicinal leaves of Azadirachta indica A Juss., and Justicia adhatoda Linn., from Jammu and Kashmir state (India)”, International Journal of advanced research, Vol 1, Iss 4, pp.131-138 29 Siddique N A et al (2013), “Determination of aflatoxins in medicinal plants by high-performance liquid chromatography - tandem mass spectometry”, J Pharam Sci., Vol 16(2), pp.321-330 30 Sinha B K et al (2002), “Mycotoxins, mycotoxigenic fungi and the biochemical changes in makhana (Euryale ferox Salisb) puffs of North Bihar”, Journal of food science and technologry (Mysore), Vol 39, No 1, pages 3841 31 Tosun H et al (2016), “Occurrence of aflatoxins (B1, B2, G1, G2) in herbal tea consumed in Turkey”, Journal of consumer protection and food safety, pp.1-5 32 Walsh T J., et al (2008), “Treatment of aspergillosis: clinical practice guidelines of the infectous diseases society of America”, Clin Infect Dis., 46, pp 327-360 ... DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ HẠNH MÃ SINH VIÊN: 1201165 NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA DẠNG LOÀI CỦA CHI ASPERGILLUS FR. : FR TRÊN CÁC VỊ THUỐC MÃ TIỀN (SEMEN STRYCHNI) VÀ KHIẾM THỰC (SEMEN EURYALES) ĐANG LƯU HÀNH TRÊN... khiếm thực nói riêng, đề tài Nghiên cứu tính đa dạng loài chi Aspergillus Fr. : Fr vị thuốc mã tiền (Semen Strychni) khiếm thực (Semen Euryales) lưu hành địa bàn Hà Nội thực với mục tiêu sau: Phân... Aspergillus mẫu vị thuốc khiếm thực 24 3.2.1 Hàm ẩm mẫu vị thuốc khiếm thực nghiên cứu 24 3.2.2 Mức độ nhiễm loài chi Aspergillus mẫu vị thuốc khiếm thực nghiên cứu 24 3.2.3