Nghiên cứu tổng hợp tạp chất a của terazosin dùng trong kiểm nghiệm

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI -  TRỊNH VĂN MẠNH Mã sinh viên: 1201375 NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP TẠP CHẤT A CỦA TERAZOSIN DÙNG TRONG KIỂM NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2017 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI -  TRỊNH VĂN MẠNH Mã sinh viên: 1201375 NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP TẠP CHẤT A CỦA TERAZOSIN DÙNG TRONG KIỂM NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Đỗ Thị Thanh Thủy Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa Dƣợc HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian nghiên cứu, tìm hiểu thực đề tài với nhiều cố gắng, thời điểm hoàn thành khóa luận lúc xin phép bày tỏ lòng biết ơn chân thành với người dạy dỗ, hướng dẫn giúp đỡ suốt thời gian qua Với lòng biết sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ThS Đỗ Thị Thanh Thủy giảng viên Bộ môn Hóa Dược - trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy trực tiếp hướng dẫn tận tình bảo thời gian thực khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy giáo, cô giáo anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Hóa Dược, Bộ môn Hóa Lý - trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thực khóa luận tốt nghiệp Tôi xin cảm ơn anh chị, bạn em nhóm nghiên cứu kiểm nghiệm tổng hợp môn Hóa Dược giúp đỡ nhiều thời gian thực đề tài Cuối xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến gia đình, bố mẹ, anh chị, bạn bè quan tâm, khích lệ, động viên suốt thời gian học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 18 tháng 05 năm 2017 Sinh viên Trịnh Văn Mạnh MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Terazosin 1.1.1 Một số thông tin chung terazosin 1.1.2 Chỉ định 1.1.3 Một số thành phẩm chứa terazosin thị trường 1.2 Tạp chất A terazosin theo USP 37 1.2.1 Thông tin chung tạp chất A terazosin 1.2.2 Nguyên nhân phát sinh tạp A 1.2.3 Các phương pháp xác định giới hạn tạp chất A terazosin 1.3 Một số phương pháp hóa lý sử dụng nghiên cứu đề tài 1.3.1 Phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) 1.3.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.3.3 Phương pháp sắc ký cột 11 1.3.4 Phương pháp đo phổ hồng ngoại (IR) 12 1.3.5 Phương pháp phân tích khối phổ (MS) 13 1.3.6 Phương pháp đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 13 1.3.7 Phương pháp phân tích nhiệt trọng lượng (TGA) 14 1.4 Tình hình nghiên cứu Việt Nam giới 15 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 15 1.4.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 17 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Nguyên liệu 18 2.2 Thiết bị 18 2.3 Nội dung nghiên cứu 19 2.4 Phương pháp nghiên cứu 19 2.4.1 Tổng hợp tạp chất A terazosin 19 2.4.2 Tinh chế sản phẩm thô 20 2.4.3 Khẳng định cấu trúc sản phẩm 21 2.4.4 Xác định giới hạn tạp chất 21 2.4.5 Xác định hàm ẩm sản phẩm 22 2.4.6 Xác định hàm lượng sản phẩm 22 2.4.7 Xác định giới hạn tạp chất A nguyên liệu terazosin phương pháp HPLC theo USP 37 22 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Tổng hợp tạp chất A terazosin 23 23 3.1.1 Khảo sát lựa chọn dung môi phản ứng 24 3.1.2 Khảo sát nhiệt độ phản ứng 24 3.1.3 Khảo sát tỷ lệ mol phản ứng 25 3.1.4 Khảo sát thời gian phản ứng 26 3.1.5 Quy trình tổng hợp tạp A terazosin 27 3.1.6 Kiểm tra độ tinh khiết IAT thô 28 3.1.7 Tinh chế tạp A terazosin 29 3.2 Kiểm tra độ tinh khiết sản phẩm TLC nhiệt độ nóng chảy 30 3.2.1 Xác định nhiệt độ nóng chảy 30 3.2.2 Kiểm tra độ tinh khiết sản phẩm TLC 31 3.3 Khẳng định cấu trúc sản phẩm 32 3.3.1 Định tính HCl kết hợp 32 3.3.2 Đo phổ IR sản phẩm tạp A 32 3.3.3 Đo phổ khối sản phẩm tạp A 33 3.3.4 Đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân sản phẩm tạp A 33 3.4 Xác định hàm ẩm sản phẩm 35 3.5 Xác định giới hạn tạp chất sản phẩm tạp A 35 3.5.1 Xác định giới hạn tạp chất sản phẩm IAT TLC 35 3.5.2 Xác định giới hạn tạp chất sản phẩm IAT phương pháp HPLC 36 3.6 Xác định hàm lượng sản phẩm 39 3.6.1 Xác định hàm lượng phương pháp chuẩn độ thể tích 39 3.6.2 Xác định hàm lượng sản phẩm phương pháp HPLC 40 3.7 Sử dụng sản phẩm thu làm chất đối chiếu để xác định giới hạn tạp chất A nguyên liệu terazosin phương pháp HPLC theo USP 37 41 CHƢƠNG BÀN LUẬN 45 4.1 Quy trình tổng hợp 45 4.2 Quy trình tinh chế 46 4.3 Khẳng định cấu trúc IAT tinh chế 46 4.4 Xác định giới hạn tạp chất sản phẩm 47 4.5 Xác định hàm lượng sản phẩm 47 4.6 Sử dụng IAT làm chất chuẩn phòng thí nghiệm để xác định tạp chất terasosin 48 4.7 Tính hiệu kinh tế CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 49 5.1 Kết luận 49 5.2 Kiến nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Tiếng Anh PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ACDQ BuOH :4-Amino-2-cloro-6,7dimethoxyquinazolin : n-Butanol CTCT CTPT : Công thức cấu tạo : Công thức phân tử DMF DMSO : N,N- Dimethylformamid : Dimethyl sulfoxid DCM IAM GC (Gas chromatography) : Diclomethan : Isoamyl ancol : Sắc ký khí HPLC (High performance liquid : Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography) HSQC (Heteronuclear multiple quantum correlation) IR (Infrared) IAT : Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết : Hồng ngoại : Impurity A of terazosin KTCL : iểm tra chất lượng MeCN MeOH MS (Mass spectrum) NMR (Nuclear magnetic resonance) PA (Pure analysis) RSD (Relative standard deviation) TB TEZ TLC TLTK TGA USP (United State pharmacopoeia) : Acetonitril : Methanol : Phổ khối lượng : Cộng hưởng từ hạt nhân : Tinh khiết phân tích : Độ lệch chuẩn tương đối : Trung bình : Terazosin : Sắc ký lớp mỏng : Tài liệu tham khảo : Phân tích nhiệt trọng lượng : Dược điển Mỹ DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Công thức cấu tạo terazosin Hình 1.2 Một số biệt dược terazosin Hình 1.3 Công thức cấu tạo tạp chất A terazosin Hình 1.4 Sơ đồ phát sinh tạp A terazosin Hình 1.5 Sơ đồ quy trình phản ứng theo phương pháp 15 Hình 1.6 Sơ đồ quy trình phản ứng theo phương pháp 16 Hình 1.7 Sơ đồ quy trình phản ứng theo phương pháp 16 Hình 2.1 Sơ đồ tổng hợp tạp A terazosin 20 Hình 3.1 Nguyên tắc tổng hợp tạp A terazosin 23 Hình 3.2 Sắc ký đồ khảo sát tỷ lệ mol phản ứng 26 Hình 3.3 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết IAT thô 29 Hình 3.4 Sắc ký đồ phân đoạn trình tinh chế cột 30 Hình 3.5 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết IAT 31 Hình 3.6 Phổ HSQC IAT 34 Hình 3.7 Giản đồ nhiệt TGA IAT 35 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu trắng 37 Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu thử IAT 37 Hình 3.10 Sắc ký đồ mẫu đối chiếu IAT 37 Hình 3.11 Sắc ký đồ mẫu trắng xác định giới hạn tạp chất A terazosin Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu đối chiếu xác định giới hạn tạp chất A terazosin Hình 3.13 Sắc ký đồ mẫu nguyên liệu terazosin 42 43 43 DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số thành phẩm chứa terazosin thị trường Bảng 1.2 Các phương pháp xác định giới hạn tạp chất A terazosin Bảng 1.3 Danh sách số công ty có thiết lập tạp chuẩn A 16 Bảng 3.1 Kết khảo sát dung môi phản ứng 24 Bảng 3.2 Kết khảo sát nhiệt độ phản ứng 25 Bảng 3.3 Hiệu suất phản ứng khảo sát tỷ lệ mol phản ứng 25 Bảng 3.4 Hiệu suất phản ứng khảo sát thời gian tổng hợp 26 Bảng 3.5 Kết xác định hiệu suất tổng hợp sản phẩm thô 28 Bảng 3.6 Kết đo nhiệt độ nóng chảy IAT thô 28 Bảng 3.7 Bảng kết hiệu suất tinh chế toàn trình tổng hợp 30 Bảng 3.8 Kết đo nhiệt độ nóng chảy IAT tinh khiết 31 Bảng 3.9 Kết phân tích phổ hồng ngoại IAT 32 Bảng 3.10 Kết phân tích phổ 1H-NMR 33 Bảng 3.11 Kết phân tích phổ 13C-NMR 34 Bảng 3.12 Kết xác định hàm ẩm IAT 35 Bảng 3.13 Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống sắc ký Bảng 3.14 Một số thông số pic tạp sắc ký đồ xác định giới hạn tạp chất IAT HPLC 36 Bảng 3.15 Kết xác định giới hạn tạp chất IAT HPLC 39 Bảng 3.16 Kết xác định hàm lượng sản phẩm chuẩn độ thể tích 40 Bảng 3.17 Kết xác định hàm lượng IAT phương HPLC 40 Bảng 3.18 Đánh giá tính thích hợp hệ thống sắc ký 42 Bảng 3.19 Kết xác định giới hạn tạp chất A nguyên liệu terazosin 43 38 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, với bệnh khác, bệnh tuổi già nam giới phì đại lành tính tiền liệt tuyến tăng huyết áp vấn đề mà nhà khoa học nước quan tâm Theo thống kê phì đại lành tính tiền liệt tuyến ảnh hưởng đến 50-90% số nam giới độ tuổi từ 50-85 tuổi [12], [30], [33] Terazosin thuốc thuộc nhóm chẹn thụ thể α1-adrenergic đóng vai trò quan trọng chữa bệnh tuổi già nam giới với hai tác dụng dược lí điều trị phì đại lành tính tiền liệt tuyến tăng huyết áp [9], [14], [37] Kiểm tra chất lượng nguyên liệu thành phẩm thuốc yêu cầu bắt buộc để đảm bảo chất lượng thuốc Khi tiến hành kiểm tra chất lượng nguyên liệu terazosin hydroclorid thành phẩm chứa terazosin hydroclorid, dược điển quy định phải xác định giới hạn tạp chất A terazosin [18], [22], [34], [35] Trong trình xác định tiêu phải sử dụng dung dịch tạp chuẩn A terazosin hydroclorid Nhưng tạp chuẩn chưa có sẵn Việt Nam, mà phải đặt mua nước với giá thành cao thời gian đặt hàng lâu Do đó, công tác kiểm tra chất lương nguyên liệu thành phẩm chứa terazosin hydroclorid Việt Nam gặp nhiều khó khăn Nhận thấy khó khăn tiến hành tổng hợp tinh chế tạp A terazosin, để tiến tới thiết lập tạp chuẩn A terazosin, góp phần chủ động công tác kiểm tra chất lượng thuốc Đề tài “Nghiên cứu tổng hợp tạp chất A terazosin dùng kiểm nghiệm” thực với mục tiêu bản: [16 Nghiên cứu phương pháp tổng hợp tinh chế tạp chất A terazosin quy mô phòng thí nghiệm Xác định giới hạn tạp chất, độ ẩm, bước đầu hàm lượng sản phẩm ứng dụng kiểm nghiệm nguyên liệu terazosin Data File C:\CHEM32\1\DATA\THUY_HOADUOC\TAPA000076.D Sample Name: Thu ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial 11 Injection Date : 1/17/2017 5:11:50 PM Inj Volume : 20.0 µl Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\THUY-HOA DUOC.M Last changed : 1/17/2017 5:11:23 PM by THUY (modified after loading) Analysis Method : C:\CHEM32\1\METHODS\THUY-HOA DUOC.M Last changed : 5/17/2017 1:49:06 PM by THUY (modified after loading) ===================================================================== Column Description : Product# : Serial# : Diameter : Particle size : Maximum Pressure : Maximum Temperature: Comment : C8 993967-902 4.6 5.0 400 60 mm µm bar °C Batch#: Length : Void volume : Maximum pH : 250.0 mm 60.0 % 3.590 DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 (C:\CHEM32\1\DATA\THUY_HOADUOC\TAPA000076.D) mAU 120 100 80 60 4.744 6.562 8.230 40 20 -20 10 20 30 40 50 ===================================================================== Area Percent Report with Performance ===================================================================== Multiplier: : 1.0000 Dilution: : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 RetTime k' Area Height Symm Width Plates Resol Select [min] [mAU*s] [mAU] [min] ution ivity -| | | | -| -| -| -| -3.590 0.44 2.57730e4 2567.38745 1.40 0.1578 2869 4.744 0.90 18.15864 2.35055 0.72 0.1080 10689 5.10 2.05 6.562 1.63 27.05251 2.84388 1.01 0.1433 11611 8.50 1.81 8.230 2.30 20.77411 1.93877 1.04 0.1600 14657 6.46 1.41 Instrument 5/17/2017 1:49:39 PM THUY Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\THUY_HOADUOC\TAPA000077.D Sample Name: Thu ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial 12 Injection Date : 1/17/2017 6:15:15 PM Inj Volume : 20.0 µl Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\THUY-HOA DUOC.M Last changed : 1/17/2017 6:14:50 PM by THUY (modified after loading) Analysis Method : C:\CHEM32\1\METHODS\THUY-HOA DUOC.M Last changed : 5/17/2017 1:49:06 PM by THUY (modified after loading) ===================================================================== Column Description : Product# : Serial# : Diameter : Particle size : Maximum Pressure : Maximum Temperature: Comment : C8 993967-902 4.6 5.0 400 60 mm µm bar °C Batch#: Length : Void volume : Maximum pH : 250.0 mm 60.0 % 3.591 DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 (C:\CHEM32\1\DATA\THUY_HOADUOC\TAPA000077.D) mAU 120 100 80 60 4.745 6.561 8.222 40 20 -20 10 20 30 40 50 ===================================================================== Area Percent Report with Performance ===================================================================== Multiplier: : 1.0000 Dilution: : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 RetTime k' Area Height Symm Width Plates Resol Select [min] [mAU*s] [mAU] [min] ution ivity -| | | | -| -| -| -| -3.591 0.44 2.60629e4 2572.17139 1.39 0.1600 2791 4.745 0.90 17.69582 2.31718 0.72 0.1080 10696 5.06 2.05 6.561 1.63 28.57776 3.03345 1.01 0.1433 11606 8.49 1.81 8.222 2.30 21.09006 1.94475 1.01 0.1617 14328 6.40 1.41 Instrument 5/17/2017 1:49:51 PM THUY Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\THUY_HOADUOC\TAPA000079.D Sample Name: Thu ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial 13 Injection Date : 1/17/2017 7:18:54 PM Inj Volume : 20.0 µl Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\THUY-HOA DUOC.M Last changed : 1/17/2017 7:18:17 PM by THUY (modified after loading) Analysis Method : C:\CHEM32\1\METHODS\THUY-HOA DUOC.M Last changed : 5/17/2017 1:49:06 PM by THUY (modified after loading) ===================================================================== Column Description : Product# : Serial# : Diameter : Particle size : Maximum Pressure : Maximum Temperature: Comment : C8 993967-902 4.6 5.0 400 60 mm µm bar °C Batch#: Length : Void volume : Maximum pH : 250.0 mm 60.0 % 3.598 DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 (C:\CHEM32\1\DATA\THUY_HOADUOC\TAPA000079.D) mAU 120 100 80 60 4.750 6.572 8.236 40 20 -20 10 20 30 40 50 ===================================================================== Area Percent Report with Performance ===================================================================== Multiplier: : 1.0000 Dilution: : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 RetTime k' Area Height Symm Width Plates Resol Select [min] [mAU*s] [mAU] [min] ution ivity -| | | | -| -| -| -| -3.598 0.44 2.62671e4 2574.86230 1.39 0.1622 2725 4.750 0.91 18.35725 2.33657 0.68 0.1107 10208 4.96 2.04 6.572 1.64 29.81936 3.17253 1.02 0.1433 11648 8.43 1.81 8.236 2.30 21.37728 1.96600 1.03 0.1617 14378 6.41 1.41 Instrument 5/17/2017 1:50:29 PM THUY Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\THUY_HOADUOC\TAPA000080.D Sample Name: Thu ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial 14 Injection Date : 1/17/2017 8:21:48 PM Inj Volume : 20.0 µl Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\THUY-HOA DUOC.M Last changed : 1/17/2017 8:21:07 PM by THUY (modified after loading) Analysis Method : C:\CHEM32\1\METHODS\THUY-HOA DUOC.M Last changed : 5/17/2017 1:49:06 PM by THUY (modified after loading) ===================================================================== Column Description : Product# : Serial# : Diameter : Particle size : Maximum Pressure : Maximum Temperature: Comment : C8 993967-902 4.6 5.0 400 60 mm µm bar °C Batch#: Length : Void volume : Maximum pH : 250.0 mm 60.0 % 3.593 DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 (C:\CHEM32\1\DATA\THUY_HOADUOC\TAPA000080.D) mAU 120 100 80 60 4.740 6.547 8.204 40 20 -20 10 20 30 40 50 ===================================================================== Area Percent Report with Performance ===================================================================== Multiplier: : 1.0000 Dilution: : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DAD1 A, Sig=254,4 Ref=360,100 RetTime k' Area Height Symm Width Plates Resol Select [min] [mAU*s] [mAU] [min] ution ivity -| | | | -| -| -| -| -3.593 0.44 2.63612e4 2577.15967 1.40 0.1622 2717 4.740 0.90 24.02794 2.46250 0.48 0.1117 9983 4.92 2.04 6.547 1.63 31.14477 3.31805 1.01 0.1417 11834 8.38 1.80 8.204 2.29 21.24541 1.96899 1.02 0.1600 14565 6.45 1.41 Instrument 5/17/2017 1:50:54 PM THUY Page of PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT A TRONG NGUYÊN LIỆU TERAZOSIN ... thuốc - Bước đầu nghiên cứu tổng hợp thiết lập tạp chuẩn captopril disulfid - Nghiên cứu tổng hợp tạp chất A clopidogrel Tuy nhiên, ch a có nghiên cứu tổng hợp tinh chế tạp chất A terazosin để sử... hình nghiên cứu giới 1.4.1.1 Tình hình nghiên cứu tổng hợp tạp chất A dẫn chất tương tự tạp A giới Tham khảo số tài liệu quy trình tổng hợp tạp A terazosin hợp chất có cấu trúc tương tự IAT có... lập tạp chuẩn dùng cho công tác kiểm tra chất lượng thuốc như: - Nghiên cứu tổng hợp acid 7-aminodesacephalosporanic D-phenylglycin dùng làm chất đối chiếu kiểm nghiệm tạp chất liên quan cephalexin