Đa dạng thành phần loài hải quỳ cộng sinh với cá khoang cổ tại khánh hòa bằng các đặc điểm hình thái và di truyền

x BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG O0O - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐA DẠNG THÀNH PHẦN LOÀI HẢI QUỲ CỘNG SINH VỚI CÁ KHOANG CỔ TẠI KHÁNH HÒA BẰNG CÁC ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ DI TRUYỀN Giảng viên hướng dẫn : Th.S Nguyễn Thị Hải Thanh TS Đặng Thúy Bình Sinh viên thực : Phan Thị Bình An Mã số sinh viên : 55130013 Khánh Hòa, tháng 06/2017 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG BỘ MÔN SINH HỌC O0O - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐA DẠNG THÀNH PHẦN LOÀI HẢI QUỲ CỘNG SINH VỚI CÁ KHOANG CỔ TẠI KHÁNH HÒA BẰNG CÁC ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ DI TRUYỀN GVHD : Th.S Nguyễn Thị Hải Thanh TS Đặng Thúy Bình SVTH MSSV : Phan Thị Bình An : 55130013 Khánh Hòa, tháng 06/2017 i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đồ án tốt nghiệp, em xin gửi lời cảm ơn đến Viện Công nghệ sinh học Môi trường, Trường Đại học Nha Trang tạo môi trường thuận lợi sở vật chất cho em suốt trình thực đồ án Cảm ơn dự án NOHRED hộ trợ kinh phí cho em hoàn thành tốt đồ án Đặc biệt em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến ThS Nguyễn Thị Hải Thanh TS Đặng Thúy Bình tận tình hướng dẫn dạy bảo tạo điều kiện thuận lợi em hoàn thành tốt đồ án Em xin gửi lời cảm ơn đến ThS Trương Thị Oanh, ThS Trần Quang Sáng nhiệt tình giúp đỡ em việc hoàn thành đồ án Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Sinh học Công nghệ sinh học giảng dạy cung cấp kiến thức cho em bốn năm học qua Gửi lời cảm ơn đến ctv làm việc phòng nuôi viện công nghệ sinh học môi trường Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, anh chị, bạn bè người thân quan tâm, hỗ trợ động viên em hoàn thành tốt đồ án Trong trình thực tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp để đồ án trở nên hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Khánh Hòa, ngày 26 tháng năm 2017 Sinh viên thực Phan Thị Bình An ii TÓM TẮT Khánh Hòa tỉnh duyên hải Nam Trung Bộ Việt Nam với 200 đảo quần đảo cộng với khí hậu ôn hòa nơi thích hợp cho nhiều loài sinh vật sinh sống phát triển có hải quỳ Là nơi có độ đa dạng loài hải quỳ cao Việt Nam, nghiên cứu thu 9/11 loài hải quỳ tìm thấy Khánh Hòa (Entacmae quadricolor, Macrodactyla doreensis, Heteractis aurora, Heteractis crispa, Heteractis malu, Stichodactyla tapetum, Stichodactyla haddoni, Stichodactyla gigantea, Stichodactyla mertensii) thuộc giống (Entacmae, Macrodactyla, Heteractis, Stichodactyla), họ (Actiniidae Stichodactylidae) Nghiên cứu dựa vào tiêu phân loại (Fautin and Allen, 1992), định danh bổ sung vào nghiên cứu trước ctv Lương Thị Tường Vi loài hải quỳ tìm thấy Khánh Hòa đính lại loài S tapetum ctv nghiên cứu trước Nghiên cứu xây dựng sơ khóa định loại loài hải quỳ Khánh Hòa dựa vào liệu đặc điểm hình thái Đồng thời, nghiên cứu phân tích mối quan hệ tiến hóa loài hải quỳ dựa vào trình tự gen ty thể là: COI 16S rRNA Nghiên cứu cho thấy tốc độ tiến hóa loài hải quỳ hệ gen ty thể thấp dẫn đến thiếu phân tách loài giống, nhiên chúng thể mối quan hệ Do cần có thêm nhiều nghiên cứu di truyền để việc định danh phân tích mối quan hệ loài quỳ trở nên xác đáng tin cậy Dữ liệu nghiên cứu sử dụng làm nguồn liệu đầu vào để nghiên cứu đa dạng sinh học mối quan hệ cộng sinh hải quỳ cá khoang cổ Từ khóa: Hải quỳ, 16S rRNA, COI mtDNA, mối quan hệ tiến hóa, khóa định loại iii MỤC LỤC Đề mục Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH .vi DANH MỤC BẢNG BIỂU VÀ SƠ ĐỒ vii LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vùng nghiên cứu 1.2 Tổng quan đối tượng nghiên cứu (hải quỳ - sea anemones) 1.2.1 Phân loại phân bố 1.2.2 Đặc điểm hình thái sinh học .6 1.3 Tổng quan hệ gen ty thể (mitochondrial DNA-mtDNA) 1.4 Tình hình nghiên cứu phân loại hải quỳ giới Việt Nam 10 1.4.1 Trên giới 10 1.4.2 Việt Nam 12 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.2 Sơ đồ khối nghiên cứu 14 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu hình thái 15 2.3.2 Xây dựng khóa phân loại hải quỳ 16 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu di truyền 16 2.3.4 Phân tích liệu xây dựng phát sinh chủng loại 19 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Thành phần loài hải quỳ Khánh Hòa dựa vào đặc điểm hình thái 21 3.1.1 Thành phần loài hải quỳ thu Khánh Hòa 21 3.1.2 Đặc điểm hình thái số loài hải quỳ Khánh Hòa 22 3.2 Nghiên cứu di truyền loài hải quỳ 33 3.2.1 Tách chiết DNA tổng số 33 3.2.2 PCR khuếch đại đoạn gen 16S rRNA COI mtDNA hải quỳ .33 iv 3.2.3 Xây dựng mối quan hệ phát sinh loài loài hải quỳ Khánh Hòa 34 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 4.1 Kết luận 41 4.2 Kiến nghị 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 PHỤ LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT µl Microliter 12S rRNA 16S Ribosomal Ribonucleic Acid 16S rRNA 12S Ribosomal Ribonucleic Acid ATP Adenosine triphosphat BI Bayesian inferenci Bp Base pairs BT Bootstrap (độ tin cậy) cDNA Cytoplasma Deoxyribinucleic acid COI Cytochrome C oxydase submid I ctDNA Chloroplasts Deoxyribonucleic acid Ctv Cộng tác viên EB Ethidium bromide Endocoel Không gian mạc treo ruột Exocoel Không gian cặp mạc treo ruột GB Gen bank GTR Generalised time reversible ID Identify Kbp Kilogram base pairs M Marker Mg Miligram ML Maximum likelihood Mm Milimeter MP Maximum parsimony mtDNA Mytochondrial Deoxyribonucleic acid Ncht Nghiên cứu NJ Neighbor joining PCR Polymerase Chain Reaction rRNA Ribosomal Ribonucleic Acid TBE Tris-Borate-EDTA Buffer tRNA Transfer Ribonucleic Acid vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 - Bản đồ nơi có mặt hải quỳ vùng biển Khánh Hòa Hình 1.2 - Mô tả cấu trúc hải quỳ Hình 1.3 - Vòng đời hải quỳ sinh sản hình thức hữu tính Hình 1.4 - DNA ty thể người Hình 2.1 - Các tiêu đo hải quỳ (Fautin and Allen, 1992) 15 Hình 2.2 - Chu trình nhiệt phản ứng PCR đoạn gen COI mt DNA 16S rRNA 18 Hình 3.1 - Đặc điểm hình thái hải quỳ Heteractis crispa 24 Hình 3.2 - Đặc điểm hình thái hải quỳ Heteractis malu 25 Hình 3.3 - Đặc điểm hình thái hải quỳ Stichodactyla gigantea 27 Hình 3.4 - Đặc điểm hình thái hải quỳ Stichodactyla mertensii 28 Hình 3.5- Đặc điểm hình thái hải quỳ Stichodactyla tapetum .30 Hình 3.6 - Kết điện di DNA tổng số hải quỳ tách chiết từ Kit Qiagen .33 Hình 3.7 - Kết điện di sản phẩm PCR đoạn gen COI mtDNA 16S rRNA số loài hải quỳ Khánh Hòa 33 Hình 3.8 - Cây phát sinh loài hải quỳ dựa gen COI mtDNA 36 Hình 3.9 - Cây phát sinh loài hải quỳ dựa gen 16S rRNA 39 vii DANH MỤC BẢNG BIỂU VÀ SƠ ĐỒ Bảng 1.1 - Nhiệt độ lượng mưa trung bình tỉnh Khánh Hòa Bảng 2.1 - Trình tự hai đoạn mồi nghiên cứu sử dụng khuếch đại đoạn gen hải quỳ16 Bảng 2.2 – Đặc điểm cặp mồi nghiên cứu sử dụng .17 Bảng 2.3 - Thành phần phản ứng PCR với tổng thể tích 50 µl .17 Bảng 3.1 - Thành phần loài thu Khánh Hòa 21 Bảng 3.2 - Danh sách số loài hải quỳ nhóm nghiên cứu thu Khánh Hòa 21 Bảng 3.3 - Độ tương đồng trình tự gen COI mtDNA 16S rRNA loài hải quỳ Khánh Hòa với liệu Genbank .34 Sơ đồ 2.1 - Sơ đồ nghiên cứu chung 14 LỜI MỞ ĐẦU Rạn san hô môi trường sống quan trọng, ảnh hưởng trực tiếp đến tồn phát triển nhiều loài hệ sinh thái đại dương, có hải quỳ cá khoang cổ Rạn san hô chiếm % hệ sinh thái đại dương, nơi cư trú, sinh sống, sinh sản ươm nuôi ấu trùng 25 % loài sinh vật biển (Johnny, 2014) Hải quỳ (bộ Actiniaria) có thành phần loài đa dạng phân lớp Hexacorallia thuộc lớp Anthozoa (Daly et al., 2008), với 1.200 loài Hải quỳ polyp đơn không xương sống phân bố độ sâu vĩ độ, chúng chiếm hầu hết sinh cảnh rạn san hô (Rodríguez et al., 2014) Tuy nhiên có 10 loài hải quỳ (Cryptodendrum adhaesivum, Entacmae quadricolor, Macrodactyla doreensis, Stichodactyla haddoni, Stichodactyla gigantea, Stichodactyla mertensii, Heteractis crispa, Heteractis malu, Heteractis aurora, Heteractis magnifica) ghi nhận có quan hệ cộng sinh với 28 loài cá khoang cổ (Burke et al., 2016) Nhờ tuyến độc (nematocysts) xúc tu, loài hải quỳ có khả bảo vệ thân, bên cạnh chúng bảo vệ loài tảo cộng sinh với chúng (Trench, 1971b) Ngoài chúng nhà, nơi cư trú, ẩn náu số loài tôm, cua (Mercier and Hamel, 2008; Goodwill et al., 2009; Fautin, 2016) đặc biệt cá khoang cổ (Fautin and Allen, 1992; Burke et al., 2016) Chỉ tiêu hình thái sở ban đầu quan trọng để phân loại sinh vật Tuy nhiên, đặc điểm hình thái tác động môi trường biến dị cá thể gây nhầm lẫn công tác phân loại Đặc biệt, hải quỳ loài đa dạng màu sắc, kích cỡ lại có đặc điểm phân loại Hơn cấu trúc hình thái hải quỳ dễ thay đổi môi trường không thích hợp rời khỏi nước việc phân loại hải quỳ dựa vào hình thái khó khăn Do đó, cần kết hợp phân loại hải quỳ hình thái thị sinh học phân tử để có độ xác cao Nhận thấy đa dạng sinh học hải quỳ rạn san hô tiền đề cho phát triển bền vững, đề tài “Đa dạng thành phần loài hải quỳ cộng sinh với cá khoang cổ Khánh Hòa đặc điểm hình thái di truyền” thực nhằm cung cấp dẫn liệu hình thái di truyền số loài hải quỳ Khánh Hòa, làm sở cho nghiên cứu đa dạng sinh học quan hệ cộng sinh sau việc xây dựng liệu di truyền mã vạch DNA (DNA barcoding) 44 Actiniaria) and Other Sea Anemones Symbiotic ưith Pomacentrid Fish Transactions of the American philosophical society held at hiladelphia for promoting useful knowledge 17 England, K W (1991) ‘Nematocysts of sea anemones (Actiniaria, Ceriantharia and Corallimorpharia: Cnidaria): nomenclature’, Hydrobiologia, 216–217(1), pp 691– 697 18 Fautin, D G (2016) Catalog to families, genera, and species of orders Actiniaria and Corallimorpharia (Cnidaria: Anthozoa), Zootaxa 4145(1) Magnolia Press 19 Fautin, D G and Allen, G R (1992) Field guide to Anemone fishes and their Host Sea Anemones, Perth: West Aust Mus 20 Fautin, D G., Crowther, A L and Wallace, C C (2008) ‘Sea anemones ( Cnidaria : Anthozoa : Actiniaria ) of Moreton Bay’, Memoirs of the Queensland Museum, 54(Lovell 1989), pp 35–64 21 Fautin, D G., Tan, R., Yap, N W L., Tan, S H., Crowther, A., Goodwill, R., Sanpanich, K and Tay, Y C (2015) ‘Sea anemones (Cnidaria: Actiniaria) of Singapore: Shallow-water species known also from the Indian subcontinent’, Raffles Bulletin of Zoology, 2015(31), pp 44–59 22 Fautin, D G., Tan, S H and Tan, R (2009) ‘Sea anemoneS ( Cnidaria : aCtiniaria ) of Singapore : abundant and well-known Shallow-water SpeCieS’, Raffles Bulletin of Zoology, Supplement(22), pp 121–143 23 Gascuel, O & Steel, M 2006, “Neighbor-joining revealed”, Mol Biol Evol., 23 (11), pp 1997–2000 24 Goodwill, R., Fautin, D., Furey, J and Daly, M (2009) ‘A sea anemone symbiotic with gastropods of eight species in the Mariana Islands’, Micronesica, 41(1), pp 117–130 25 Grande, C., Templado, J and Zardoya, R (2008) ‘Evolution of gastropod mitochondrial genome arrangements’, BMC Evolutionary Biology, 8(1), p 61 26 Gudger, E (1946) ‘Pemacentrid fishes symbiotic with giant sea anemones in Indo’ J Roy Asiatic Soc Bengal, science, pp 53–76 27 Hall, T (1999) ‘BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT’, Nucleic Acids Symposium Series, pp 95– 98 45 28 Hassanin, A., An, J., Ropiquet, A., Nguyen, T T and Couloux, A (2013) ‘Combining multiple autosomal introns for studying shallow phylogeny and taxonomy of Laurasiatherian mammals: Application to the tribe Bovini (Cetartiodactyla, Bovidae)’, Molecular Phylogenetics and Evolution, 66(3), pp 766–775 29 Hebert, P D N., Penton, E H., Burns, J M., Janzen, D H and Hallwachs, W (2004) ‘Ten species in one: DNA barcoding reveals cryptic species in the neotropical skipper butterfly Astraptes fulgerator’, Proceedings of the National Academy of Sciences, 101(41), pp 14812–14817 30 Jennison, B L (1981) ‘Reproduction in three species of sea anemones from Key West, Florida’, Canadian Journal of Zoology, 59 (9), pp 1708–171 31 Johnny Langenheim (2014) ‘Coral Triangle could be last bastion for planet’s beleaguered reefs’ Theguardian 32 Krishnamurthy, K P and Francis, R A (2012) ‘A critical review on the utility of DNA barcoding in biodiversity conservation’, Biodiversity and Conservation, 21(8), pp 1901–1919 33 Kumar, S., Stecher, G and Tamura, K (2016) ‘MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 7.0 for bigger datasets.’, Molecular biology and evolution, 33(7), pp 54 34 Mariscal, R N (1966) ‘The Symbiosis Between Tropical Sea Anemones and Fishes: A Review’, The Galapágos, Proceedings of the Symposia of the Galápagos International Scientific Project, pp 157–171 35 Mcfadden, C S and Collins, A G (2007) ‘The Phylum Cnidaria : A Review of Phylogenetic Patterns and Diversity 300 Years After Linnaeus’, 182, pp 127–182 36 McMurrich, J P (1889) ‘A Contribution to the Actinology of the Bermudas’, Proceedings of the Academy of Natural Sciences of Philadelphia Academy of Natural Sciences, 41, pp 102–126 37 Mercier, A and Hamel, J F (2008) ‘Nature and role of newly described symbiotic associations between a sea anemone and gastropods at bathyal depths in the NW Atlantic’, Journal of Experimental Marine Biology and Ecology, 358(1), pp 57–69 38 Nagel, L and Lougheed, S C (2006) ‘A Simple Molecular Technique for 46 Identifying Marine Host Fish by Sequencing Blood‐Feeding Parasites’, Journal of Parasitology American Society of Parasitologists, 92(3), pp 665–668 39 Pantin, C F A and Pantin, A M P (1943) ‘The Stimulus to Feeding in Anemonia Sulcata’, J Exp Biol., 20(1), pp 6–13 40 Robert, G & Ross, I 1996, R-Programming tutorialspoint, University of Auckland, New Zealand 41 Rodríguez, E., Daly, M (2010) Phylogenetic Relationships among Deep-Sea and Chemosynthetic Sea Anemones: Actinoscyphiidae and Actinostolidae (Actiniaria: Mesomyaria) Journal List Plos One 5(6): e10985 42 Rodríguez, E., Barbeitos, M., Daly, M., Gusmao, L C and Häussermann, V (2012) ‘Toward a natural classification: Phylogeny of acontoate sea anemones (Cnidaria, Anthozoa, Actinaria)’, Cladistics, 28, pp 375–392 43 Rodríguez, E., Barbeitos, M S., Brugler, M R., Crowley, L M., Grajales, A., Gusmão, L., Häussermann, V., Reft, A and Daly, M (2014) ‘Hidden among Sea Anemones: The First Comprehensive Phylogenetic Reconstruction of the Order Actiniaria (Cnidaria, Anthozoa, Hexacorallia) Reveals a Novel Group of Hexacorals’, Plos One Public Library of Science, 9(5), pp 1–17 44 Rodríguez, E., Barbeitos, M S., Brugler, M R., Crowley, L M., Grajales, A., Gusmão, L., Häussermann, V., Reft, A and Daly, M (2014) ‘Hidden among Sea Anemones: The First Comprehensive Phylogenetic Reconstruction of the Order Actiniaria (Cnidaria, Anthozoa, Hexacorallia) Reveals a Novel Group of Hexacorals’, Plos One Edited by D J Colgan Public Library of Science, 9(5), pp 1-7 45 Schander, C and Willassen, E (2005) ‘What can biological barcoding for marine biology?’, Marine Biology Research, 1(1), pp 79–83 46 Smith, N and Lenhoff, H M (1976) ‘Regulation of Feequency of Pedal Laceration in a Sea Anemone’, in Mackie, G O (ed.) Coelenterate Ecology and Behavior Boston, MA: Springer US, pp 117–125 47 Swartz, E R., Mwale, M., Hanner, R and Swartz, E R (2008) ‘A role for barcoding in the study of African fish diversity and conservation S Afr J Sci A role for barcoding in the study of African fish diversity and conservation’, South African Journal of Science, 104(March 2016), pp 293–298 47 48 Tautz, D., Arctander, P., Minelli, A., Thomas, R H and Vogler, A P (2003) ‘A plea for DNA taxonomy’, Trends in Ecology & Evolution, 18(2), pp 70–74 49 Taylor, R W and Turnbull, D M (2005) ‘Mitochondrial DNA mutations in human disease’, Nat Rev Genet, 6(5), pp 389–402 50 Trench, R K (1971a) ‘The Physiology and Biochemistry of Zooxanthellae Symbiotic with Marine Coelenterates I The Assimilation of Photosynthetic Products of Zooxanthellae by Two Marine Coelenterates’, Proceedings of the Royal Society of London Series B Biological Sciences, 177(1047), p 225-235 51 Trench, R K (1971b) ‘The Physiology and Biochemistry of Zooxanthellae Symbiotic with Marine Coelenterates II Liberation of Fixed $^{14}$C by Zooxanthellae in vitro’, Proceedings of the Royal Society of London Series B Biological Sciences, 177(1047), p 237-250 52 Wilmer, W.J., Michell, M.L (2008) "A preliminary investigation of the utilyti of ribosomal gens for species identification of sea anemones (Cnidaria, Actiniaria) In Davie, P.J.F., Philips, J.A (2008) Proceedings of Moretion Bay, Queesland Memoirs of the Quessland Museum - Nature, 54 (1) Pp 65-73 Tài liệu Internet www.genecodes.com blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi Pinterest.com Ganfyd.org PHỤ LỤC Phụ lục Nội dung Quy trình tách chiết DNA tổng số Kit Qiagen Số trang Sự khác biệt trình tự COI mtDNA loài hải quỳ Khánh Hòa Sự khác biệt trình tự 16S rRNA loài hải quỳ Khánh Hòa Trình tự bắt cặp đoạn mồi COI_ANE với Genbank Trình tự bắt cặp đoạn mồi 16S_ANE với Genbank Các tiêu đo hình thái hải quỳ Khánh Hòa Các loài hải quỳ nghiên cứu thu Khánh Hòa Phụ lục – Quy trình tách chiết DNA tổng số Kit Qiagen Lấy 30 mg mẫu mô hải quỳ cho vào tube 1,5 ml Thêm 180 µl đệm ATL Thêm 20 µl proteinase K, mix Ủ 56 OC mẫu tan hoàn toàn, mix 15 giây Thêm 200 µl Buffer AL, mix Thêm 200 µl ethanol (96-100 OC), mix Dùng pipet hút toàn dịch chuyển sang tube có cột lọc ml (có sẵn) Ly tâm 8.000 vòng / phút phút, loại bỏ dịch chuyển cột sang tube ml (có sẵn) Thêm 500 µl đệm AW1, ly tâm 8.000 vòng / phút phút, loại bỏ dịch chuyển cột sang tube ml (có sẵn) 10 Thêm 500 µl đệm AW2, ly tâm 13.000 vòng / phút phút, loại bỏ dịch chuyển cột sang tube 1,5 ml (không có sẵn) 11 Thêm 100 µl đệm AE ủ 5, 10, 15 phút nhiệt độ phòng, ly tâm 6.000 vòng / phút phút Thu dịch DNA có độ tinh khác thời gian ủ khác 100 µl dịch DNA thu bảo -20 OC Phụ lục - Trình tự bắt cặp đoạn mồi COI_ANE với Genbank ………………………………………………………… ………………………………………………………… …………………………………………………… Phụ lục – Trình tự bắt cặp đoạn mồi 16S_ANE với Genbank ………………………………………………………… ………………………………………………………… ……………………………………………… Phụ lục – Sự khác biệt trình tự COI mtDNA loài hải quỳ Khánh Hòa STT 1 ID 10 11 12 13 14 15 16 17 18 0,995 ID 18 0,983 0,987 0,976 0,980 0,978 0,974 0,934 0,930 0,944 0,940 0,930 0,925 0,936 0,932 10 0,932 0,927 11 0,949 0,944 12 13 0,949 0,944 0,944 0,940 14 0,949 0,944 15 16 0,942 0,942 0,938 0,938 17 0,959 0,959 0,864 0,864 ID 0,993 0,966 0,942 0,953 0,938 0,944 0,940 0,957 0,957 0,953 0,957 0,951 0,951 0,970 0,872 ID 0,961 ID 0,936 0,936 ID 0,955 0,936 0,595 ID 0,932 0,938 0,993 0,959 ID 0,938 0,930 0,991 0,968 0,991 ID 0,934 0,940 0,995 0,957 0,997 0,989 ID 0,951 0,944 0,957 0,959 0,955 0,959 0,957 0,951 0,938 0,953 0,961 0,949 0,957 0,951 0,947 0,938 0,963 0,959 0,957 0,963 0,959 0,951 0,938 0,963 0,961 0,949 0,957 0,951 0,944 0,949 0,953 0,957 0,963 0,957 0,966 0,944 0,949 0,966 0,957 0,963 0,957 0,966 0,963 0,957 0,953 0,966 0,949 0,957 0,951 0,877 0,860 0,877 0,877 0,872 0,881 0,875 ID 0,993 0,993 0,993 0,987 0,987 0,963 0,879 ID 0,989 ID 0,995 0,989 ID 0,983 0,989 0,983 ID 0,983 0,989 0,983 1,000 ID 0,966 0,963 0,966 0,961 0,961 ID 0,877 0,879 0,881 0,872 0,872 0,881 ID CHÚ THÍCH: 1: Entacmae quadricolor, 2: Entacmae quadricolor GB, 3: Urticinopsis antarctica GB, 4: Cnidaria sp, GB, 5: Macrodactyla doreensis, 6: Macrodactyla doreensis, 7: Anthopleura elegantissima GB, 8: Heteractic crispa, 9: Heteractis crispa GB, 10: Heteractic malu, 11: Stichodactyla haddoni, 12: Stichodactyla haddoni GB, 13: Stichodactyla tapetum, 14: Stichodactyla sp, GB, 15: Stichodactyla mertensii, 16: Stichodactyla gigantea, 17: Anemonia alicemartinae GB, 18: Metridium senile (*) GB Phụ lục – Sự khác biệt trình tự 16S rRNA loài hải quỳ Khánh Hòa STT 10 11 12 13 14 15 16 ID 10 11 12 13 14 15 16 18 0,986 0,993 0,967 0,967 0,967 0,967 0,974 0,970 0,967 0,967 0,974 0,970 0,974 0,974 0,977 0,977 0,910 ID 0,986 0,977 0,970 0,977 0,977 0,983 0,970 0,970 0,970 0,977 0,983 0,983 0,977 0,979 0,986 0,920 ID 0,967 0,974 0,967 0,967 0,974 0,972 0,974 0,974 0,981 0,970 0,974 0,981 0,983 0,977 0,910 ID 0,993 1,000 1,000 0,979 0,993 0,993 0,993 0,972 0,979 0,979 0,972 0,970 0,977 0,917 ID 0,993 0,993 0,972 0,997 1,000 1,000 0,979 0,972 0,972 0,979 0,977 0,970 0,910 ID 1,000 0,979 0,993 0,993 0,993 0,972 0,979 0,979 0,972 0,970 0,997 0,917 ID 0,979 0,993 0,993 0,993 0,972 0,979 0,979 0,972 0,970 0,997 0,917 ID 0,972 0,972 0,972 0,993 0,995 1,000 0,993 0,990 0,997 0,915 ID 0,997 0,997 0,977 0,972 0,972 0,977 0,974 0,970 0,910 ID 1,000 0,979 0,972 0,972 0,979 0,977 0,970 0,910 ID 0,979 0,972 0,972 0,979 0,977 0,970 0,910 ID 0,988 0,993 1,000 0,997 0,990 0,908 ID 0,995 0,988 0,986 0,993 0,910 ID 0,993 0,990 0,997 0,915 ID 0,997 0,990 0,908 ID 0,993 0,908 ID 0,915 17 18 17 ID CHÚ THÍCH: 1: Entacmae quadricolor, 2: Isosicyonis alba GB, 3: Macrodactyla doreensis, 4: Macrodactyla doreensis GB, 5: Heteractic aurora, 6: Heteractis aurora GB, 7: Heteractis crispa GB, 8: Heteractis magnifica GB, 9: Heteractic malu, 10: Heteractic crispa, 11: Heteractic crispa dai, 12: Stychodactyla haddoni, 13: Stchodactyla haddoni GB, 14: Stychodactyla mertensii GB, 15: Stychodactyla mertensii, 16: Stychodactyla gigantea, 17: Stychodactyla gigantea GB, 18: Metridium senile (*) GB Phụ lục – Các tiêu đo hình thái hải quỳ Khánh Hòa Chiều cao (mm) Đường kính đĩa miệng (mm) Đường kính chân bám (mm) Chiều dài xúc tu (mm) 40 62 28 30 170 250 70 30 STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 Tên loài M doreensis 65 75 120 70 65 150 40-170 54 110 46 H crispa H aurora 64 37 59 32 30 23 23-110 21 49 H malu S metensii S gigantea 49 80 75 135 70 60 98 132 127 123 90 220 170 60-220 190 190 190 215 190 144 182 194 105 146 192 130 130-215 170 110 105 80 80-170 320 350 400 320 83 42 59 36 22 70 28-70 72 54 80 35 75 50 39 75 35-80 57 21 21-57 30 100 140 130 30 21 50 23 32 20 55 50 21-55 25 30 30 23 17 21 30 19 10 30 12 5-30 56 11 20 20 11-56 15-35 10 12 18 34 35 36 37 38 39 40 S haddoni 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 S tapetum 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 E quadricolor 63 64 65 66 67 100 45 45-135 40 20 57 20 42 40 15 11 10 20 15 35 40 10-57 20 25 15 25 30 15-30 250 240 110 110-400 180 210 220 240 260 190 180-260 30 35 78 45 65 58 35 22 18 45 40 70 40 18-78 40 230 190 90 62 55 75 60 55-230 70 50 50-140 55 75 80 80 82 70 55-80 25 22 56 32 50 55 17 14 12 31 32 55 40 12-56 34 40 30 25 30 25-40 13 10 7-18 5,5 5 5-6 13 80 70 20 17 15 15 20 13-80 Phụ lục – Các loài hải quỳ nghiên cứu thu Khánh Hòa STT Loài nghiên cứu Macrodactyla doreensis Entacmae quadricolor Heteractis aurora Heteractis crispa Hình ảnh minh họa Heteractis malu Stichodactyla haddoni Stichodactyla gigantea Stichodactyla mertensii Stichodactyla tapetum ... SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG BỘ MÔN SINH HỌC O0O - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐA DẠNG THÀNH PHẦN LOÀI HẢI QUỲ CỘNG SINH VỚI CÁ KHOANG CỔ TẠI KHÁNH HÒA BẰNG CÁC ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ DI. .. QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Thành phần loài hải quỳ Khánh Hòa dựa vào đặc điểm hình thái 21 3.1.1 Thành phần loài hải quỳ thu Khánh Hòa 21 3.1.2 Đặc điểm hình thái số loài hải quỳ Khánh. .. loại hình thái di truyền để dịnh danh loài hải quỳ thu tỉnh Khánh Hòa  Nội dung nghiên cứu o Thu mẫu loài hải quỳ cộng sinh với cá khoang cổ Khánh Hòa o Phân loại loài hải quỳ cộng sinh với cá khoang