Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên

Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, tinh dầu của cây gừng gió thái nguyên

B ộ Y TẾ TRƯ Ờ NG ĐẠI HỌC Dược H À NỘI

HÀ NỘI THÁNG 05 NĂM 2007

Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Thầy Lê Đình Bích - Giảng viên bộ môn Thực vật dược, cô Đỗ Quyên - Giảng viên bộ môn Dược liệu cùng toàn thể các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược liệu và bộ môn Thực vật dược - Trường Đại học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện và nhiệt tình giúp đỡ để tôi có thể hoàn thành khoá luận cuối cùng tôi xin cảm ơn những người thân, bạn bè sinh viên cùng học tập và nghiên cứu, đã động viên và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian qua.

Hà Nội, ngày 15 tháng 05 năm 2007

Sinh viên

Nguyễn Thị Thu Hằng

Acid Sulfuric Methanol Thuốc thử

Số thứ tư

ĐẶT VẤN ĐỂ

ơiăm sóc sức khoẻ ban đầu và bảo vệ sức khoẻ cộng đồng là công việc cấp bách và cần thiết Công nghiệp hóa càng phát triển nhanh thì môi trường sống càng có nguy cơ bị suy thoái, vì thế việc phòng và chữa bệnh càng trở lên cấp bách Theo tổ chức y tế thế giới (WHO) 80% dân số sử dụng chủ yếu sử dụng các là cây thuốc cổ truyền để phòng và chữa bệnh.

Gừng gió hay còn gọi là Gừng dại là một cây thuốc, được sử dụng theo kinh nghiệm dân gian, mọc phổ biến ở nhiều nơi trên nước ta Nhân dân ta đã

sử dụng rễ củ của cây Gừng gió để chữa nhiều bệnh như làm thuốc kích thích tiêu hoá, bổ dưỡng, chữa đầy hơi, ỉa chảy, gây nôn và sốt rét [1] Đây là nguồn dược liệu có giá trị trong y học, đặc biệt là y học dân gian, đồng thời là nguồn nguyên liệu có chứa tinh dầu có giá trị trong công nghiệp hương liệu Cho đến nay, các công trình nghiên cứu về cây Gừng gió còn rất ít, nên nếu được nghiên cứu đầy đủ, thì gừng gió là một dược liệu có triển vọng Đây là những

lý do để mà chúng tôi quan tâm và chọn cây Gừng gió làm đối tượng đ^ghiên cứu, từ đó đề xuất biện pháp khai thác sử dụng và nuôi trồng thích hợp nguồn dược liệu này Với những mục đích vậ^rên, chúng tôi tiến hành thực hiện khoá luận “Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật và tinh dầu của cây Gừng gió Thái Nguyên”, nhằm mục đích góp phần bổ sung dược liệu cho kho tàng thuốc dân tộc, gồm với những các mục tiêu cụ thể sau;

1 Nghiên cứu xác định tên khoa học, đặc điểm hình thái giải phẫu cây Gừng gió và giám định tên khoa học;

2 Định tính các nhóm chất trong cây Gừng gió;

3 Nghiên cứu thành phần tinh dầu cây gừng gió có trong cây.

Nhằm mục đích góp phần bổ sung dược liệu trong kho tàng thuốc dân tộc.

và trái của bao phấn, ít khi không có hoặc giảm thành 2 răng Cánh môi (3 nhị lép khác) thành dạng bản đối diện với nhị hữu thụ, ít nhiều có thùy Bầu dưới với 3 giá noãn, dính với đỉnh bầu, có 2 ô đính noãn trung trục Hoặc đính trên vách (đính noãn bên) và tạo thành một ô duy nhất; noãn đảo không cuống hoặc gần như không cuống, 1 vòi hình sợi vượt quá những ô của bao phấn; núm nhụy lõm; vòi nhụy lép 2, hoặc thành khối hoặc thành dùi ở bên mỗi

cạnh của gốc vòi, ít khi không có.

Phân bố vùng nhiệt đới châu Á gồm 17 chi Đông Dương có 13 chi.

Globba (22 loài), Gagnepainia (2 loài), Sthalianthus (2 loài), Kaempferia (13

loài), Gastrochỉlus (3 loài), Curcuma (17 loài), Hedychium (5 loài), Siliquamomum (4 loài), Zingiber (13 loài) Alpỉnia (17 loài), Geostachys (1

loàỤ; Amomom (19 loài), Costus (2 loài).

1.1.3 - Chi Riềng (Alpinia)

*Đăc điểm thực vật [3], [16]

Cây thảo mọc đứng, cao đến 2 m, thân rễ khỏe, nạc, phân nhánh, thịt thường có màu, củ ở ngọn rễ, đôi khi thân rễ yếu, không có rễ phồng lên ở ngọn Lá hình giải, hình mũi mác hoặc trái xoan cùng thời với hoa hoặc mọc sau khi cây ra hoa, cán (cụm hoa) có lá ở gốc, bông thường hình trụ với một lá bắc ở ngọn có màu, đôi khi thưa hình trứng và không có chùm màu; lá bắc có màu hoặc màu xanh ít khi dính giữa chúng để tạo ra một túi; hoa vàng hoặc đỏ thường nằm trong lá bắc, đài hình ống có răng, tràng thành ống ngắn; thùy gần như nhau, nhị có các ô phấn song song, đôi khi nhọn ở gốc; trung đới có mào nhỏ, phần phụ ở gốc thành mào hình máng, ít khi không có; chỉ nhị ngắn, rộng, gần giống cánh hoa, nhị lép dạng cánh hoa, gần lófn bằng cánh môi, thường dính với phần gốc của chỉ nhị, cánh môi thường lớn và ngắn, bầu 3 ô; noãn xếp thành nhiều hàng trên góc của ô; vòi lép 2; hình trụ hoặc hình dùi, ít khi không có; vòi hình sợi, núm nhụy thành chén nhỏ Quả nang vỏ quả mỏng, hạch nhiều có cơm hạt.

Phân bố ở châu Á có 40 loài, vùng Đông Dương có 17 loài, còn ở Việt Nam có 24 loài [1].

Đặc điểm thực vật của một số loài thuộc chi Alpinia cỷ Việt Nam

ở Việt Nam, cho đến nay đó phát hiện ra 24 loài thuộc chi Alpinịa, đặc điểm thực vật chúng như sau:

1.2 - THÀNH PHẦN HÓA HỌC

Thân Gừng gió riềng chứa nhiều diaryltheptanoid: 5-hydroxy-3 methoxyphenyl)-1 -phenyl-heptan-3-on; 1,7-diphenylhept-4-en-3-on; 7-(4- hydroxyl-3-methoxyphenyl) -l-phenylheptan-3,5-dion; 7-(4-hydroxy phenyl) - l-phenyl-5-hydroxyhepptan-3-on; 5-methoxy-l,7-diphenyl-heptan-3-on; methoxy-7-(4-hydroxyphenyl)-l-phenylheptan-3-on; 1,7-bis (4-hydroxyl -3- methoxyphenyl)-5-hydroxyl-heptan-3-on [1], [11], [12].

Ngoài ra, còn có flavonoid và tinh dầu Các flavonoid là quercetin và 3- methylether galangin và 3- methylether kaempferol, kaempferid và isohamnetin Tinh dầu chứa thành phần chủ yếu là cineol [11], [12].

1.3 - TÁC DỤNG SINH HỌC

1.3.1 - Tác dụng dược lý

Gừng gió có tác dụng gây giãn mạch trên mạch cô lập và chống co thắt

cơ trơn một gây bởi histamin và acetylcholine trên động vật thí nghiệm các cá thể nhiệt và giảm xuống trong cá thể hàn [1].

Diarylheptanoid trong Gừng gió có tác dụng ức chế sự sinh tổng hợp prostaglandin [11]

1.3.2 - Công dụng

Củ Gừng gió (Riềng) có vị cay, mùi thơm, tính ấm vào hai kinh: tỳ và

vị, có tác dụng ôn trung, tán hàn giảm đau, tiêu thực, tính ấm có tác dụng làm

ấm bụng, chống lạnh, giảm đau, cầm nôn và ợ chua.

Củ Gừng gió dùng để kích thích tiêu hoá, chữa đầy hơi, đau bụng, đi lỏng, nôn mửa, ợ hơi, đau dạ dầy, cảm sốt, sốt rét

Trong y học cổ truyền Trung Quốc và Nhật Bản Gừng gió có tác dụng chữa đau bụng, khó tiêu, nôn mửa, kích thích tiêu hoá, chữa đầy hơi, đau bụng, đi lỏng, nôn mửa, ợ hơi, đau dạ dầy, cảm sốt, sốt rét [1]

Trong kinh nghiệm dân gian thân rễ của Gừng gió từ lâu đã được làm

gia vị trong chế biến thực phẩm ở nhiều địa phương trên đất nước cũng như ở

châu Á.

1.3.3 - Một số bài thuốc có Gừng gió [1].

> Chữa đau bụng nôn mửa

Thành phần

Gừng gió 8g

Đại táo 1 quả

Cách dùng: sắc với 300 ml nước đén khi còn khoảng lOOml chia 2-3 lần uống trong ngày.

^ Chữa tiêu chảy

Thành phần:

Gừng gió 200g

Vỏ vối 80g

Cách dùng: các vị tán qua mỗi lần 12g sắc uống.

> Chữa phong thấp cước khí buồn nôn.

Thành phần:

Gừng gió, vỏ quýt, hạt tô tử lượng bằng nhau, tán nhỏ viên với mật, uống với rượu, mỗi lần uống 5g, ngày 2 lần.

■ Thời gian thu mẫu:

Đợt 1: tháng 11 năm 2006 khi cây chưa ra hoa.

Đợt 2; tháng 1 năm 2007 khi cây đã ra hoa và có quả.

2.1.2 - Phương pháp nghiên cứu

2.1.2.1 - Nghiên cứu về thực vật

- Mô tả hình thái: Quan sát tại nơi cây mọc, chụp ảnh cây, thu thập

mẫu,làm mẫu tiêu bản khô (gồm các bộ phận thân, lá, rễ củ).

- Đặc điểm vi học: Quan sát cấu tạo giải phẫu thân, lá, cuống lá, phân tích

hoa và quả.

- Xâc định tên khoa học: So sánh đối chiếu phân tích mẫu dược liệu với các

tài liệu khóa phân loại [3], [5], [16]

2.1.2.2 - Nghiên cứu về hóa học

Xác định hàm lượng tinh dầu trong dược liệu theo từng bộ phận lá, thân, rễ qua các mùa đông và mùa xuân.

Định tính các nhóm chất thường có trong dược liệu bằng các phản ứng

hóa học theo tài liệu Thực tập Dược liệu (1999) ĐH Dược HN [7].

Định tính tinh dầu bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng.

Phân tích thành phần tinh dầu và xác định hàm lượng tinh dầu.

Phân tích thành phần tinh dầu trên máy trên máy sắc ký khí khối phổ liên hợp GC 17A (GC/MS).

Xác định hàm lượng tinh dầu bằng bộ dụng cụ định lượng tinh dầu cải tiến của Bộ môn Dược liệu trường Đại học Dược Hà Nội do PGS.TS Nguyễn Thị Tâm thiết kế

Thời gian cất: 3 giờ kể từ khi có dịch ngưng chảy vào ống.

- Cân phân tích PRECISA

- Kính hiển vi LEICA CME

- Phân tích dịch chiết của cây bằng máy sắc ký lớp mỏng, sử dụng máy chấm sắc ký CAMAG-Linomat 5.0 với phần mềm điều khiển WE^CATS, bản mỏng tráng sẵn Silicagel GF254 của hãng MERCK (Đức).

* Các bước tiến hành

tích 250ml, thêm 50ml methanol Ngâm trong 48 giờ Lọc lấy dịch chiết, cô lấy cắn, hòa với HjO, đun sôi cách thủy trong 10 phút, lọc qua bông và giấy lọc thu được dịch, đem cô lấy cắn, hòa tan cắn trong methanol đem chấm sắc ký.

- Chất hấp phụ: Bản mỏng tráng sẵn Silicagel GF254 chuẩn của hãng Merck Bản mỏng được hoạt hóa ở 110°c trong 1 giờ cắt bản mỏng thành các

bản 10 X 10 (cm), 20 X 10 (cm).

- Chấm sắc ký: Sử dụng máy chấm sắc ký CAMAG-Linomat 5.0 với phần mềm điều khiển WINCATS.

* Điều khiển quá trình chấm bằng máy vi tính:

Dữ liệu cho mỗi lần chấm được khai báo và lưu trong một file Cần đánh dấu vào các lựa chọn và nhập vào các thông số cần thiết: chế độ vết (sử

dụng dạng vết ngang dài 0,6cm), vị trí vết (có thể chấm một vết hay nhiều vết trong một lần chấm), chế độ thổi khí (dùng không khí nén), thể tích mẫu chấm (có thể điều khiển các thể tích khác nhau của các vết trong một lần chấm để khảo sát) Sau khi nhập dữ liệu, quá trình chấm vết được tự động tiến hành, xilanh di chuyển đều theo chiều ngang vết để phun mẫu, đồng thời có sự thổi khí nén làm khô vết chấm.

Triển khai sắc ký:

* Hệ dung môi triển khai thích hợp.

Quá trình triển khai được tiến hành trong bình sắc ký tiêu chuẩn, dung môi bão hòa đúng cách Bình sắc ký đặt trên mặt phẳng, tránh chấn động Đặt bản sắc ký vào bình đúng kỹ thuật Sau khi triển khai, bản mỏng được lấy ra khỏi bình, sấy nhẹ cho bay hơi hết dung môi.

Phun hiện màu bằng thuốc thử vanillin 5%/ỈỈ2S04 đặc, sấy ngay bản mỏng đã phun ở nhiệt độ 110°c trong 1-2 phút.

* Chụp ảnh sắc kỷ: Hình ảnh sắc ký được chụp khi chưa phun thuốc thử dưới

ánh sáng 254nm và 366nm, và sau khi phun thuốc thử dưới ánh sáng thường bằng máy ảnh CANON 900SI

2.2 - KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT

2.2.1 - Nghiên cứu đặc điểm thực vật

2.2.1.1 - Đặc điểm hình thái (Hình 2.1)

- Cây thảo, cao 0,7-l,2m, sống dai

- Thân rễ dài bò, hình trụ, dài 5-7 cm, đường kính 2-3 cm, màu nâu đỏ, phủ những vảy dai, những vảy này để lại những sẹo hình nhẫn không đều nhau màu trắng nhạt

- Lá mọc so le, dai, nhẵn, hình mũi mác hẹp, giảm dần ở gốc, có mũi nhọn ở đỉnh, dài 20 - 40 cm, rộng 4-7 cm, có bẹ, mép bẹ có màu đỏ có mũi nhọn , dài 15 - 30 mm

- Cụm hoa chùy cỷ ngọn, thẩng, có lông mịn, dài lOcm, hoa rất dài, nằm trong 2 lá bắc (mo) màu xanh

- Lá bắc con nhỏ, dài 1 Imm, tồn tại thời gian ngắn sau hoa Hoa không đều lưỡng tính, lá bắc hẹp, dài, có lông và dài gần bằng hoa Hoa được mang trên những nhánh ngắn của cụm hoa (Hình 2.1)

- Đài hoa hình ống, phình ra về phía ngọn, có ba thùy ngắn, có lông mịn phủ cỷ phía ngoài

- Tràng hình ống có lông ở cả hai măt, thùy thôn dài, tù, dài 15-20 mm, thùy lưng hơi lớn hom

- Nhị còn 1 hữu thụ, chỉ nhị dài 10-12mm d ẹt, bao phấn hình chữ nhật, nhẵn, không có mào ở đỉnh, dài 5-6 mm Nhi lép hình dùi, ngắn, tù, cánh môi trắng, có những vạch, màu đỏ vàng, hình trái xoan, nguyên hoặc hơi lõm, dài

20 mm, rộng 15-18mm

- Ba lá noãn, bầu dưới 3 ô, đính noãn trung trục, phía ngoài có lông; vòi

1 đi qua khe giữa hai ô phấn, vòi lép 2, rãnh bản dày (Hình 2.2)

HÌiứi 2.1: ảiứi cây có hoa và cụm hoa (1-Bụi cây và thân rễ; 2-Cụm hoa và lá

bác (mo); 3-Hoa; 4-Cụm hoa)

HÍnh 2.2: Hoa và các phẩn của hoa

la: Hoa nguyên; Ib: đài Ic: Thùy lung của tràng; Id:

Nhi hữu thụ, vòi và núm nhụy; 2 Bao phấh, một phần

vòi, núm nhụy; Id: Núm nhụy lép; 3 Bầu cắt ngang

thấy rõ hai dãy noãn.

2.2.I.2 Xác định tên khoa học

Sau khi mô tả đặc điểm hình thái, phân tích hoa, và dựa vào khóa phân loại của Lecomte [16], đối chiếu với các tài liệu của võ Văn Chi [4], Phạm Hoàng Hộ [ 5 ], từ điển thực vật [3], được sự giúp đỡ của DS Lê Đình Bích, chúng tôi xác định tên khoa học của loài này là: Alpinm oficinarum Hance,

họ Gừng (Zingiberaceae).

2.2.13 - Đặc điểm giải phẫu

*Thân rễ (hình 2.3 và hình 2.4): cắt ngang thân rễ, tẩy nhuộm kép rồi quan sát dưới kính hiển vi ta thấy từ ngoài vào trong gồm các lớp sau:

11

Ngoài cùng là lớp tế bào biểu bì xếp đều đặn bao phủ toàn bộ thân rễ.

Mô mềm vỏ gồm nhiều lớp tế bào gần tròn và tương đối đều nhau, xen

kẽ giữa chúng đôi khi có tế bào tiết tinh dầu chứa chất tiết màu vàng và có hình dạng và kích thước giống tế bào mô mềm.

Trong phần vỏ thường có hai vòng li be gỗ, các bó vòng trong thường lớn hơn, mỗi bó có vòng mô cứng bao quanh bó li be ở ngoài, bó gỗ ở trong thưòìig có 1, 2 hoặc 3 mạch gỗ.

Một vòng tế bào nội bì, xen kẽ vòng tế bào trụ bì kích thước giống nhau

và nhỏ hơn tế bào nội bì.

Phần trung trục rất nhiều bó li be gỗ xếp thành nhiều vòng và phân bố đều, trong toàn bộ trung trục, các bó vòng ngoài thường lớn hon và có bó li be

ỏ ngoài, các bó vòng trong li be và bó gỗ thường không theo quy luật (bó li be

có thể ở phía trong bó gỗ)

Mô mềm một gồm những tế bào có thiết diện tròn đẳng kính, đều nhau xen kẽ với chúng là những tế bào chứa tinh dầu, có hình dạng và kích thước giống tế bào mô mềm ruột.

HÌnh 2.3: Vi phẫu thân rễ (cắt ngang)

9 8 7 6 3

HÌnh 2.4: Một phần thân rễ (cắt ngang)

1-Biểu bì; 2-Mô mềm vỏ; 3-Tế bào tiết tinh dầu; 4-Bó li be gỗ ở vổ; 5-Bó li be

gỗ ở trung trục; 6-Nội bì; 7-Li be; 8-GỖ; 9-Mô mềm ruột

13

* Cấu tạo của rễ

Cắt ngang rễ, tẩy nhuộm kép rồi quan sát dưới kính hiển vi ta thấy từ ngoài vào trong gồm các Icýp sau (Hình 2.5):

HÌnh 2.5: Cấu tạo của rễ

Nội bì, trụ bì gồm các tế bào nhổ hơn tế bào mô mềm.

Các bó li be gỗ xếp luân phiên tìiành vòng liên tục để lại phần mô mềm ruột ở phía ttong.

* Cấu tạo của bẹ lá

Tiì ngoài vào trong gồm nhímg lớp sau (Hình 2.6):

Biểu bì trên gồm một lớp tế bào.

Mô dậu (ứiông thường cây một lá mầm không có mô dậu).

Mô mềm vổ gồm các tế bào đăng kính đôi khi có tế bào tiết tinh dầu.

HÌnh 2,6: Cấu tạo của bẹ lá

Hình 2.1: Cấu tạo của lá

A Gân lá và phiến lá; B.Một phần phiến lá: 1-Biểu bì; 2-Mô^^u; 3-Mô khuyết; 4-Tiiủi thể canxi oxalat ; C-một bó li be gỗ: 5-Mô cimg; 6-GỖ; 8-Libe

*Phiếnlá

Biểu bì trên, dưcýi

1-2 lớp tế bào hạ bì

Tế bào mô dậu

Tế bào mô khuyết đôi khi có tinh thể canxi oxalat

2.2.2 - Nghiên cứu về hoá học

2.2.2.1 - Định tính các nhóm chất bằng phản ứng trong ống nghiệm

Kết quả định tính các thành phần hoá học bằng phản ứng trong ống nghiệm của củ Gừng gió được trình bày ở bảng 2.1.

Bảng 2.1 Kết quả định tính các nhóm chất trong củ Gừng gió

sri' Nhóm chất Phản ứng định tính Kết quả sơ bộ

1 Glycosid tim Phản ứng Liebermann

Thuố thử Baijet Thuốc thử Legal Thuốc thử Kele-kiliani

10 Flavonoid Phản ứng Cyanidin

Phản ứng NaOH 10%

Phản AICI3 3%/cồn

+ + +

Có

Qiú thích: (-) phản ứng âm tính; (+) phản ứng dương tính

mĩ-VÍENÍ*:

17

* Nhận xét: Qua các Kết quả định tính các nhóm chất bằng phản ứng trong

ống nghiệm trong củ Gừng gió cho thấy phản ứng định tính ở trên chúng tôi nhận xét như sau:

Trong củ Gừng - Dược liệu có nhóm chất iSaponin, Tanin, Flavonoid và, đường khử, không có các nhóm chất chất: Acid hữu cơ, coumarin, Anthranoid, , Alcaloid, Sterol và glycosid tim.

2.2.22 - Định tính bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng

- Dịch chấm sắc ký: củ Gừng gió được thái nhỏ cho vào bình nón có dung tích

500 ml, thêm 200 ml methanol vào bình ngâm trong 48 h, gạn lấy dịch trong, lọc qua phễu lọc để chấm sắc ký.

- Chuẩn bị bản mỏng: Bản mỏng silica gel GF254 (Merck) tráng sẵn, họat hóa ở

110°c/lh.

- Hệ dung môi khai triển: để chọn hệ dung môi có khả năng tách tốt mẫu nghiên cứu, 12 hệ dung môi đã được chọn để thăm dò

Hệ I : Ether dầu : Ether ethylic (9,5 : 0,5)

Hệ II: Chloroform : Methanol (9 : 1) và (97 : 3)

Hệ III: Benzen : aceton ( 9: 1)

Hệ IV: Ethyl acetat: acid formic : nước ( 7 : 5 : 1 )

Hệ V: Toluen : ethyl acetat: acid formic : nước ( 6 : 5 : 1,5 : 1)

Hệ VI: Ethyl acetat: acid formic : nước ( 8 : 8 : 1 )

Hệ VII: Qiloroform : acid acetic ( 9: 1)

Hệ VIII: Toluen : Ethyl acetate (93 : 7)

Hệ IX: Toluen : ethyl acetat: acid formic (95 : 0,5 : 1)

Hệ X Toluen : ethyl acetat: acid formic (5 ; 6 : 1,5 : 1)

Hệ XI: n-Butanol: acid acetic : nước ( 4 : 1 : 5 )

Hệ XII Toluen : ethylacetat (9,8 : 0,5)

- Tiến hành: Bình sắc ký được bão hòa dung môi Bản mỏng sau khi chấm dịch chiết được khai triển từ dưới lên trên.

- Bản sắc ký được quan sát dưới ánh sáng tìiường, đèn tử ngoại ở bước sóng 254 và 366 nm, sau đó phun thuốc hiện màu Vanilin 5 %/ĩỈ 2 ^ 4 và hơ

nhiệt khoảng 1-2 phút ở 110 °c.

- Kết quả: sau khi ừiển khai bản sắc ký với 12 hệ dung môi, chúng tối nhận

tìiấy hệ IX cho kết quả tách tốt nhất (5 vết) Kết quả được ứình bày ở sắc ký

đ ồ ở h ìiứ i2 i

U V 254nm U V 365nm TT Vanilin 5%/H2SƠ4

Hình 2.*^ Sắc ký đồ dịch chiết củ Gừng gió/ MeOH khai ttiểĩi ữong hệ dung

môi Toluen : ethyl acetat: acid fonnic (95 : 0,5 : 1)

* Nhận xét:

Hình ảiứi sắc ký đồ dịch chiết củ Gừng/MeOH cho thấy dịch chiết củ

Gừng gió có rất nhiều chất, được tách đều từ dưới lên trên Điều đó cho thấy

các chất trong dịch chiết củ Gừữg gió gồm cả nhóm không phân cực và phân

cực Thực tế, chúng tôi không quan sát được bản sắc ký lớp mỏng dưói ánh

sáng thường mà phải quan sát dưới đèn tử ngoại hoặc phun ứiuốc hiện màu.

Đối với dịch chiết củ Gừng/MeOH, khi hiện màu bằng TT Vanilin

5%/ỉỉ2S04 cho kết quả rất rõ Và màu các chất hiện ttên bản sắc ký sau khi hơ

19

nóng ở 110 °c trong 1-2 phút cho thấy có 2 vết: 1 vết màu hồng nhạt, 1 vết màu xanh lam.

2.2.23 - Nghiên cứu thành phần tinh dầu

♦> Quy trình chiết xuất tinh dầu

*Phương pháp chiết tinh dầu: bằng phương pháp cất kéo hơi nước.

Quy trình chiết xuất được thực hiện với 3 mẫu dược liệu: thân, lá và rễ

được thu hái vào mùa đông và mùa xuân.

*Cách tiến hành:

Cân chính xác 150 g dược liệu tươi được thái nhỏ cho vào bình cầu cổ mài có dung tích 500 ml, thêm 200 ml nước Cất kéo hơi nước trong 3 giờ kể

từ lúc sôi Tinh dầu bắt đầu chảy ra sau khi sôi được 20 phút.

- Tinh dầu thu được có màu vàng, mùi thơm hắc (mùi đặc trưng của gừng gió), vị cay, nhẹ hơn nước.

❖ Xác định hàm lượng tinh dầu

Quy trình chiết tinh dầu 3 bộ phận lá, thân và thân rễ cây Gừng gió

được thực hiện như trình bày ở trên Mỗi mẫu được tiến hành 3 lần Kết quả là

số liệu trung bình của 3 lần định lượng.

Hàm lượng tinh dầu được tính theo công thức:

x% = V X 100/m X: hàm lượng % tinh dầu (ml/g)

a: thể tích tinh dầu đọc được sau khi cất (ml)

m: khối lượng dược liệu (g)

Hàm lượng tinh dầu trong lá, thân và rễ cây Gừng gió được trình bày ở bảng 2.2.

Bảng 2.2 Hàm lượng tinh dầu trong thân, lá và thân rễ cây Gừng gió

*Nhận xét: Tinh dầu có mầu vàng nhạt, mùi thơm hắc, vị cay tê và nhẹ

hơn nước Nhìn chung hàm lượng tinh dầu trong cả ba bộ phận khi thu hái vào mùa đông cao hơn hàm lượng tinh dầu khi thu hái nguyên liệu vào mùa xuân.

Trong cả 3 bộ phận lá, thân và thân rễ, hàm lượng tinh dầu thân rễ cây gừng gió cao nhất, sau đó đến lá và thấp nhất là trong thân.

Hàm lượng tinh dầu bộ phận thân rễ chiếm: 0,46 % ở mùa đông, và 0,42 % ở mùa xuân, ở lá 0,12 % mùa đông và 0,10 % mùa xuân Cuối cùng là thân có hàm lượng tinh dầu ít nhất, được 0,09 % ở mùa đông và

Kết quả cho thấy hệ XII: Toluen: Ethylacetat (9,8 : 0,5) cho các vết tách

rõ nhất và nhiều vết nhất (5 vết) khi quan sát dưới đèn tử ngoại và phun thuốc

hiện màu Vanillin 5%/ĩÌ2^^4'

Kết quả được trình bày ở bảng 2.3 và sắc ký đồ ở hình 2.8.

21