Hoàn thiện công đoạn tinh chế lutein tách chiết từ hoa cúc vạn thọ (tagetes erecta l )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM BÙI THỊ CỦA HOÀN THIỆN CÔNG ĐOẠN TINH CHẾ LUTEIN TÁCH CHIẾT TỪ HOA CÚC VẠN THỌ (Tagetes erecta L.) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (Ngành: Công nghệ Kỹ thuật Hóa Học) Nha Trang – Năm: 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM BÙI THỊ CỦA HOÀN THIỆN CÔNG ĐOẠN TINH CHẾ LUTEIN TÁCH CHIẾT TỪ HOA CÚC VẠN THỌ (Tagetes erecta L.) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (Ngành: Công nghệ Kỹ thuật Hóa Học) CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: TS GVC Hoàng Thị Huệ An Nha Trang – Năm: 2017 PHIẾU ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG ĐỀ TÀI Họ tên sinh viên: Bùi Thị Của Lớp: 55CNHH Chuyên ngành: Công nghệ kỹ thuật hóa học Đề tài: “Hoàn thiện công đoạn tinh chế lutein tách chiết từ hoa cúc vạn thọ (Tagetes erecta L.).” Số chương: Số trang: Tài liệu tham khảo: Hiện vật: NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN Kết luận Điểm phản biện Bằng số Bằng chữ CÁN BỘ PHẢN BIỆN (Ký ghi rõ họ tên) Nha Trang, ngày… tháng… năm 2017 _ Điểm phản biện Bằng số Bằng chữ Nha Trang, ngày… tháng… năm 2017 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký ghi rõ họ tên) NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Họ tên sinh viên: Bùi Thị Của Lớp: 55CNHH Chuyên ngành: Công nghệ kỹ thuật hóa học Đề tài: “Hoàn thiện công đoạn tinh chế lutein tách chiết từ hoa cúc vạn thọ (Tagetes erecta L.).” Số trang: Số chương: Tài liệu tham khảo: Hiện vật: NHẬN XÉT Kết luận Nha Trang, ngày… tháng… năm 2017 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Ký ghi rõ họ tên) i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài nghiên cứu thực Các số liệu kết luận nghiên cứu trình bày luận văn chưa công bố nghiên cứu khác Sinh viên thực BÙI THỊ CỦA ii LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Ban Giám hiệu trường Đại học Nha Trang, Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Thực Phẩm Giảng viên Bộ môn Công nghệ Kỹ thuật Hóa học hết lòng giảng dạy truyền đạt kiến thức kĩ cần thiết cho suốt thời gian học trường, trang bị cho hành trang tri thức, vững tin bước vào đời Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc cán Trung tâm Thí nghiệm - Thực hành tạo điều kiện thuận lợi sở vật chất, trang thiết bị để hoàn thành tốt nội dung đề tài Đặc biệt, xin gửi lời biết ơn chân thành sâu sắc đến TS Hoàng Thị Huệ An dành nhiều thời gian tâm huyết giúp nâng cao kiến thức chuyên ngành, hướng dẫn tiếp cận phương pháp nghiên cứu đại, rèn luyện kĩ thực nghiệm, đồng thời hỗ trợ vật tư phương tiện nghiên cứu cho Xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ suốt trình học tập hoàn thành đồ án tốt nghiệp Do kiến thức chuyên môn kinh nghiệm nghiên cứu kĩ soạn thảo văn khoa học hạn chế nên đề tài tránh khỏi thiếu sót Rất mong nhận góp ý quý thầy cô bạn sinh viên để hoàn thiện báo cáo tốt nghiệp Nha Trang, ngày 04 tháng năm 2017 Sinh viên thực BÙI THỊ CỦA Lớp 55CNHH iii MỤC LỤC Trang bìa phụ Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan hoa cúc vạn thọ 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Nguồn gốc - Phân loại 1.1.2.1 Nguồn gốc 1.1.2.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Đặc điểm sinh trưởng chung 1.1.4 Ứng dụng 1.2 Tổng quan lutein 1.2.1 Cấu tạo phân tử lutein 1.2.2 Tính chất vật lý hóa học lutein 1.2.2.1 Tính chất vật lý 1.2.2.2 Tính chất hóa học 1.2.3 Chức sinh học lutein 1.2.4 Ứng dụng lutein 10 iv 1.2.5 Các nguồn lutein tự nhiên 12 1.3 Tình hình nghiên cứu liên quan đến đề tài 13 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 13 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 16 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Nguyên liệu 20 2.2 Hóa chất 20 2.3 Dụng cụ- Thiết bị 21 2.3.1 Dụng cụ 21 2.4 Phương pháp nghiên cứu 22 2.4.1 Phương pháp thu oleoresin từ hoa CVT 22 2.4.2 Nghiên cứu hoàn thiện công đoạn xà phòng hóa lutein ester dựa theo phương pháp Swaminathan (2009) 24 2.4.2.1 Cách tiến hành xà phòng hóa: 24 2.4.2.2 Phương pháp sắc ký mỏng hỗn hợp xà phòng hóa: 25 2.4.3 Nghiên cứu phương pháp tinh chế lutein thô 25 2.4.3.1 Xác định chế độ rửa lutein thô nước cất nóng 25 2.4.3.2 Phương pháp tinh chế lutein với nước cất dung môi hữu 27 2.4.4 Thử nghiệm quy trình- Đánh giá chất lượng sản phẩm 29 2.4.4.1 Thử nghiệm quy trình 29 2.4.4.2 Phương pháp đánh giá chất lượng sản phẩm 29 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết xà phòng hóa theo phương pháp Swaminathan (2009): 31 v 3.2 Kết nghiên cứu tinh chế lutein thô phương pháp rửa 32 3.2.1 Chế độ tối ưu rửa lutein thô nước cất nóng 32 3.2.2 Chế độ rửa lutein thô dung môi hữu 38 3.3 Đề nghị quy trình thu nhận lutein thô từ lutein oleoresin 40 3.4 Thử nghiệm quy trình- Đánh giá chất lượng sản phẩm 43 3.4.1 Thử nghiệm quy trình 43 3.4.2 Đánh giá chất lượng sản phẩm 43 3.4.2.1 Phân tích số tiêu chất lượng sản phẩm 43 3.4.2.2 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa sản phẩm 45 3.5 Đánh giá hiệu kinh tế sản phẩm lutein tinh phòng thí nghiệm 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮC TIẾNG ANH TIẾNG VIỆT Abs Absorbance Độ hấp thụ BHT Butylated Hydroxyltoluene Chất chống oxy hoa BHT CQ Certificate of quality Giấy chứng nhận chất lượng CVT Marigold Cúc vạn thọ D Dilution factor Hệ số pha loãng DAD Diode-Array Detector Detector dãy diode DNA Acid Deoxyribonucleic ADN GC-MS Gas Chromatography-Mass Phương pháp sắc ký ghép khối Spectrometry phổ High performance liquid Phương pháp sắc ký lỏng hiệu chromatography cao LDL Low density lipoprotein Chất béo có tỉ trọng thấp LOD Limit of detection Giới hạn phát nm Nanometer Nanomet R2 Correlation coefficient Hệ số tương quan ROS Reactive Oxygen Species Các loại oxy hoạt tính rpm Round per minute Vòng/phút SKBM Thin layer chromatography Sắc ký mỏng UV-Vis Ultraviolet-visible Tử ngoại-khả kiến v/v Volume/volume Thể tích/thể tích v/w Volume/weight Thể tích/khối lượng w/v Weight/volume Khối lượng/thể tích w/w Weight/weight Khối lượng/khối lượng max Wavelength of maximum Bước sóng hấp thụ cực đại HPLC absorption 46 Đường chuẩn xác định hoạt tính chống oxy hóa tổng Vitamin C 0,200 C(Vit C) = 0,233A - 0,0072 (R = 0,9897) C (Vit C) ug/mL 0,150 0,100 0,050 0,000 0,000 0,200 0,400 0,600 0,800 1,000 A Hình 3.10 Đường chuẩn hoạt tính chống oxy hóa tổng vitamin C Bảng 3.11 Kết đo hoạt tính chống oxy hóa lutein tinh Lutein V pha V V pha (g) loãng mẫu loãng V đo (D1) (ml) D2 (ml) A 0,0200 2500 0,25 chống oxy hóa tổng 0,0200 2500 1 (mg/mL) Vit C (g/100 g) 0,444 0,2613 32,66 0,422 0,0911 11,39 Vit C Năng lực khử sắt (III) Hoạt tính Kết cho thấy sản phẩm lutein tinh chế có hoạt tính chống oxy hóa cao: - Năng lực khử Fe (III) mạnh vitamin C khoảng 32 lần - Hoạt tính chống oxy hóa tổng mạnh vitamin C khoảng 11 lần Như vậy, sản phẩm dùng làm nguồn hoạt chất chống oxy hóa bổ sung cho người 47 3.5 Đánh giá hiệu kinh tế sản phẩm lutein tinh chế quy mô phòng thí nghiệm Bảng 3.12 Ước tính chi phí nguyên vật liệu để thu nhận lutein tinh từ 11kg hoa CVT tươi Khoản chi phí Lượng Đơn vị Đơn giá Thành tiền sử dụng tính (VNĐ) (VNĐ) 11 Kg 180.000 1.980.000 Viscozym 0,0191 Lít 2.000.000 38.200 EtOH 96o 0,330 Lít 20.000 6.660 EtOH tuyệt đối 0,700 Lít 25.000 17.500 3,5 Lít 28.000 98.000 KOH 0,048 Kg 30.000 1.440 Axetat etyl* 1,947 Lít 36.000 70.092 CH3COOH 0,03 Lít 30.000 0.900 Na2SO4 khan 0,022 Lít 30.000 0.660 Nước cất 11 Lít 2.000 22.000 Công lao động 7,5 Ngày 300.000 Điện 67,5 Kw/h 4.000 Cánh hoa CVT tươi Hexan* Tổng cộng *: Xem hiệu suất thu hồi dung môi 95% 2.250.000 270.000 4.755.452 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu đề tài, rút kết luận sau: 1/ Thời gian thích hợp để xà phòng hóa lutein este từ cánh hoa CVT theo phương pháp Swaminathin 3h, đó: - Sử dụng dung dịch KOH 15% w/v etanol - Tỷ lệ dung dịch KOH/oleoresin = 2/1 (v/w) - Nhiệt độ xà phòng hóa: 75-80oC 2/ Để thu nhận lutein có độ tinh khiết cao, cần rửa lutein thô với chế độ rửa sau: - Dung môi rửa: EtOH-H2O/EtOH/Hx/EtOH với số lần rửa tương ứng 4/1/2/3 (lần) - Tỉ lệ dung môi rửa/lutein thô: 1/1 (v/w) Khi đó, sản phẩm lutein thu có hàm lượng carotenoit tổng số 96%, lutein tổng số 84% đạt yêu cầu làm chất màu thực phẩm KIẾN NGHỊ 1/ Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện công đoạn tinh chế lutein từ lutein thô để thu sản phẩm với độ tinh khiết cao ứng dụng công nghiệp mỹ phẩm, dược phẩm 2/ Nên chưng cất thu hồi dung môi để tái sử dụng Ngoài ra, cần tận dụng bã thải hoa CVT để sản xuất sản phẩm khác (phân bón vi sinh, biogas,…) để hạn chế ô nhiễm môi trường, nâng cao hiệu kinh tế trình sản xuất 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt: Hoàng Thị Huệ An (2007), Xây dựng quy trình tách chiết tinh chế lutein từ hoa CVT(Tagetes erecta L.) trồng Diên Khánh tỉnh Khánh Hòa, Báo cáo đề tài NCKH cấp Bộ, Bộ Giáo dục Đào tạo Hoàng Thị Huệ An cs (2015), Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu khoa học tỉnh Khánh Hòa năm 2012-2014: Xây dựng quy trình công nghệ quy mô phòng thí nghiệm thu nhận lutein từ hoa cúc vạn thọ (Tagetes erecta L.), ứng dụng làm chất màu thực phẩm Tiếng Anh Alison, D., Paul, C (2000), Colouring our foods in the last and next millennium, J Food Sci & Tech., 35, p.5-22 Ausich, R L., Sanders, D J (1997), Process for the formation, isolation and purification of comestible xanthophyll crystals from plants, US Patent: 5,648,564 Britton, G., Liaaen-Jensen, G., Pfander H (2005), Carotenoid 1A: Isolation and Analysis, Birkhäuser Verlag Basel EFSA (2010), Scientific opinion on the re-evaluation of lutein (E 161b) as a food additive EFSA panel on food additives and nutrient sources added to food (ASN), European Food Safety Authority Journal, Parma, Italy, pp 1–39 FAO (2004), Lutein from Tagetes erecta, Chemical and Technical Assessment (CTA), 63, pp.1–3 Hugo J I., José Luis N B., Enrique B A., Ramir R M., Octavio P L., (2004), An optimization study of solid-state fermentation: Xanthophylls 50 extraction from marigold flowers, J Appl Microbiol Biotechnol, 65: 383–390 Khachik F (1995), Process for isolation, purification and recrystallization of lutein from marigold oleoresin and uses thereof, US Patent: 5382714 10 Kumar, S T K., Abdnlkadir; S.P., Sebastian, S (2004), Process for the preparation of xanthophyll crystals, US Patent: 6,743,953 B2 11 Rice-Evans CA, Sampson J, Bramley PM, Holloway DE (1997), Why we expect carotenoids to be antioxidants in vivo?, Free Radic Res 26, pp 381-398 12 Richard Cantrill (2004), Lutein from Tagetes erecta: Chemical and Technical Assessment, 63rd, JECFA 13 Rymbai, H., Sharma, R.R., Srivasta, M (2011), Biocolorants and its implications in Health and Food Industry: A review, Inter J Pharm.Tech Res CODDEN (USA), 3(4) 14 Shao, A (2001), “The role of Lutein in Human Health”, J American Nutraceutical Association, 4(2), 8-19 15 Swaminathan, S., Madavalapil, K P (2009), Isolation and purification of carotenoits from Marigold flowers, US Patent: 7,622,599 B2 16 Thorne Research, Inc (2005), Lutein and Zeaxanthin, Alternative Medicine Review 17 Wang, M., Tsao, R., Zhang, S., Dong, Z., Yang.R., Gong, J., Pei, Y (2006), Antioxidant activity, mutagenicity/ anti- mutagenicity, and clastogenicity/ anticlastogenicity of lutein from marigold flowers, J Food & Chem Toxic., 44, 1522-1529 51 Internet: 18 http://happyskin.vn/review/vien-uong-chong-nang-sunsafe-rx 19 http://thanhnien.vn/suc-khoe/bo-sung-lutein-cho-tre-trong-nhung-namdau-doi-47009.html 20 https://thoibao.today/paper/dinh-duong-tu-con-ga-1717768 21 http://vietlinkplus.com/chi-tiet/lutein bao-ve-mat-tu-bentrong/242/1254.html 22 http://vi.wikipedia.org/wiki/Chi_Cúc_vạn_thọ 23 http://vtc.vn/cac-nuoc-cu-xu-voi-chat-tao-mau-e102-the-naod43936.html 24 http://www.baomoi.com/pham-mau-hoa-hoc-huy-hoai-suc-khoe-connguoi-nhu-the-nao/c/20006495.epi 25 http://www.chinhphu.vn/portal/page/portal/chinhphu/hethongvanban?cl ass_id=1&_page=312&mode=detail&document_id=23856 26 http://www.sch.vn/luu-tru/310-tin-tuc/4942-ung-dung-lipase-trong-doisong A PHỤ LỤC Phụ lục Phương pháp định lượng carotenoit tổng số % lutein, % zeaxanthin sản phẩm lutein tinh chế Cân xác khoảng 20 - 30 mg mẫu sản phẩm lutein cho vào bình định mức 100 ml, thêm vài giọt diclorometan cho tan pha loãng định mức đến vạch etanol (có chứa 0,1% BHT), lắc 10 phút, thu dung dịch A a) Định lượng % catotenoid tổng số Lấy ml dung dịch A cho vào bình định mức 100 ml pha loãng etanol (chứa 0,1% BHT), đảo trộn 20 s Đo độ hấp thụ dung dịch 446 nm, cuvet cm (dùng etanol 0,1% BHT làm dung dịch nền) Tính kết quả: A x 1000 %Toal carotenoids (%)  446nm G x 2550 đó: 1000: hệ số pha loãng; 2550: độ hấp thụ dung dịch carotenoit 1% đo etanol với cuvet cm b) Định lượng %lutein %zeaxanthin Hút ml dung dịch A cho vào bình định mức 100 ml pha loãng hexan: axetat 70:30 v/v, đảo trộn 20 sec, lọc qua màng lọc PTFE 0,45 um bơm vào máy HPLC với detector PDA - Điều kiện chạy HPLC: Cột bảo vệ: C18; - Cột phân tích: C18 (3 m, 4,6 mm x 250 mm) - Nhiệt độ cột: 300C Pha động: hexan/axetat etyl 70:30 (v/v) - Tốc độ dòng: 1,5 ml/min - Thể tích tiêm mẫu: l - Bước sóng phát hiện: 445 nm Thời gian phân tích: 40 B Phát peak lutein zeaxanthin dựa vào phổ hấp thụ đặc trưng chúng cho detector DAD % Lutein = % Carotenoit tổng số x %Diện tích peak lutein % Zeaxanthin = % Carotenoit tổng số x %Diện tích peak zeaxanthin Phụ lục Xác định độ ẩm mẫu lutein tinh chế Cách tiến hành: - Chuẩn bị cốc sấy : đem cốc rửa để ráo, sau sấy 105÷110o C đến khối lượng không đổi Để nguội bình hút ẩm đem cân xác định khối lượng cốc sấy - Chuẩn bị mẫu: Mẫu lutein thô đem cân xác định khối lượng G (g) cho mẫu (khoảng g/mẫu) cho vào cốc sấy (đã xác định khối lượng trên) Cân cốc có chứa mẫu để xác định khối lượng G1 Đưa cốc có chứa mẫu sấy tủ sấy chân không 50o C, 70mbar sấy vòng 2h (thỉnh thoảng trộn đều) Lấy mẫu ra, để nguội bình hút ẩm đem cân Lặp lại trình sấy vài lần đến chênh lệch khối lượng lần cân liên tiếp không 0,2 mg Ghi khối lượng cuối (G2) Hàm lượng nước nguyên liệu tinh theo công thức sau: %H O  G1  G2 100% G đó: G: khối lượng mẫu(g); G1: khối lượng mẫu trước sấy(g); G2: khối lượng mẫu sau sấy(g) Phụ lục Phân tích dư lượng dung môi hữu sản phẩm lutein tinh chế phương pháp GC-FID a) Chuẩn bị mẫu phân tích: Cân xác 100 mg mẫu, hòa tan 1000 µL dung môi DMSO, lọc qua màng lọc 0,2 µm bơm trực tiếp vào buồng tiêm thiết bị GC C b) Chuẩn bị mẫu chuẩn: Pha dung dịch chuẩn gốc 5000 µg/mL ethanole, axetate etyle, n-hexane (loại tinh khiết cho sắc ký) dung môi DMSO Từ dung dịch chuẩn gốc pha loãng thành dung dịch chuẩn 10; 20; 50; 100; 200; 500; 1000 µg/mL Bơm vào injector GC Định lượng phương pháp đường chuẩn c) Điều kiện chạy sắc ký: Thiết bị sắc ký khí: GC-FID Cột sắc ký: cột mao quản SPB-1701 (30 m.L 0,32 mm i.d, 0,25 µm dp ) Khí mang: N2 Chế độ tiêm mẫu: kiểu tiêm chia dòng (tỷ lệ 1:15) ; thể tích tiêm mẫu: µL (tiêm trực tiếp vào injector); nhiệt độ buồng tiêm: 2300C Detector: Ion hóa lửa (FID) trì nhiệt độ 2500C; Lưu lượng H2: 3,2 mL/phút Chương trình nhiệt: 400C (giữ phút); 40  550C (tăng 100C/phút); 550C (giữ phút); 55 2000C (tăng 100C/phút); 2000C (giữ phút) Phụ lục Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa lutein tinh chế Hoạt tính chống oxy hóa lutein đánh giá qua phương pháp: - Năng lực khử sắt (III): xác định theo phương pháp Oyaizu (1986) - Hoạt tính chống oxy hóa tổng (Prieto et al., 1999) Sử dụng vitamin C (L-Ascorbic acid) làm mẫu chuẩn Tiến hành: a) Xác định hoạt tính khử Fe(III): * Chuẩn bị dung dịch mẫu: Cân xác khoảng 0,02g lutein tinh, cho vài giọt diclorometan để hòa tan định mức đến 25 mL EtOH tuyệt đối có 0,1% BHT Dùng micropipet hút 250 μL dung dịch thu pha loãng (lần 1) thành 100 ml D EtOH tuyệt đối (có 0,1% BHT) Lấy 2,5 ml pha loãng (lần 2) EtOH tuyệt đối thành 25 ml để có dung dịch mẫu Hút ml dung dịch mẫu, thêm vào 2,5 ml dung dịch đệm phosphate 0,2 M (có pH = 6,6) 2,5 ml K3(Fe[CN]6) 1% Hỗn hợp ủ 50oC 20 phút Sau đó, lấy thêm 2,5 ml dung dịch acid trichloroacetic 10% vào hỗn hợp ly tâm 3000 rpm 10 Lấy dung dịch bên (2,5 ml) thêm 2,5 ml nước cất 0,5 ml FeCl3 0,1% Đo độ hấp thụ dung dịch 700 nm Chuẩn bị dung dịch so sánh dung dịch mẫu thay lượng dung dịch mẫu EtOH * Dựng đường chuẩn vitamin C: Pha dãy chuẩn vitamin C với nồng độ dãy chuẩn là: 0,0; 0,05; 0,10; 0,15; 0,20 mg/ml Tiến hành đo với dung dịch mẫu Ghi độ hấp thụ (A) mẫu chuẩn Dựng đường chuẩn biểu diễn nòngđộ Vitamin C (mg/ml) theo độ hấp thụ Dùng đường chuẩn để tính lực khử Fe(III) mẫu lutein đem phân tích (quy số g vitamin C/g mẫu phân tích) b) Hoạt tính chống oxy hóa tổng (Prieto et al., 1999): * Chuẩn bị mẫu phân tích: Lấy 0,3 ml dung dịch lutein không pha loãng lần 2, thêm vào ml dung dịch thuốc thử (gồm: H2SO4 0,6 M; NaH2PO4: 28 mM; (NH4)2MoO4: mM) Hỗn hợp ủ 950C 90 phút Sau để nguội mẫu nhiệt độ phòng, đo độ hấp thụ dung dịch 695 nm Mẫu trắng dung dịch gồm 0,3 nước cất + ml dung dịch thuốc thử, tiến hành đo giống mẫu phân tích * Dựng đường chuẩn vitamin C: Pha dãy chuẩn vitamin C với nồng độ dãy chuẩn là: 0,0; 0,05; 0,10; 0,15; 0,20 mg/ml Tiến hành đo với dung dịch mẫu Ghi độ hấp thụ (A) mẫu chuẩn Dựng đường chuẩn biểu diễn nồngđộ Vitamin C (mg/ml) theo độ hấp thụ Dùng đường chuẩn để tính hoạt tính chống oxy hóa tổng mẫu lutein đem phân tích (quy số g vitamin C/g mẫu phân tích) E Phụ lục Phiếu trả kết thử nghiệm F Phụ lục Phổ UV-Vis lutein tinh chế Hình PL6 Phổ hấp thụ UV-Vis lutein tinh chế hexan Phụ lục Sắc ký đồ HPLC mẫu lutein tinh chế Hình PL7 Sắc ký đồ HPLC mẫu lutein tinh chế G Phụ lục CQ sản phẩm lutein FloraGLO Crystalline Lutein (Kemin, Mỹ) H Phụ lục Một số hình ảnh thí nghiệm Hình PL9.1.Hoa CVT tươi xử lý enzym Hình PL9.2.Lutein thô sau rửa với hệ dung môi EtOH-H2O Hình PL9.3 Lutein kết tinh hỗn hợp xà phòng hóa Hình PL9.5.Thiết bị cô chân không RV 10 Control V (IKA, Đức) Hình PL9.4.Chiết lutein thô AcOEt Hình PL9.6.Quang kế Vis (CECIL, Anh) I Hình PL9.7 Cân phân tích điện tử Hình PL9.8.Máy ly tâm để bàn EBA 21  10-4 (SATORIUS, Nhật) (Hettich, Đức) Hình PL9.9 Quang phổ kế UV-Vis Hình PL9.10.Tủ sấy chân không Cary 50 (Varian, Úc) VO 400 ( Memmert, Đức) ... (gọi lutein oleoresin) - Thủy phân lutein este để thu lutein tự (lutein th ) - Tinh chế lutein thô để thu lutein tinh Hoa CVT Chiết – Cô đặc Lutein oleoresin Thủy phân lutein ester Lutein thô Tinh. .. công đoạn xà phòng hóa lutein este tinh chế lutein thô để thu sản phẩm lutein an toàn có giá thành chấp nhận Đó l đồ án “ Hoàn thiện công đoạn tinh chế lutein tách chiết từ hoa cúc vạn thọ (Tagetes. .. TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM BÙI THỊ CỦA HOÀN THIỆN CÔNG ĐOẠN TINH CHẾ LUTEIN TÁCH CHIẾT TỪ HOA CÚC VẠN THỌ (Tagetes erecta L. ) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (Ngành: Công nghệ Kỹ thuật Hóa Học) CÁN