Nghiên cứu thành lập tiêu chuẩn kiểm nghiệm một số dược liệu chứa alcaloid

BYT TRNG I HC Dc H NI NGUYN TH THU H jN G ô NGHIấN CU THNH LP TIấU CHUN KIM n gh im m t m m m S Dc LIU CHA ALCALOID m ( KHO LUN TểT NGHIP DUC s KHO 2001-2006) Ngi húng dn: TS Nguyn Vit Thõn TS Bnh Nh Ccttig Ni thc hin: B mụn Xrc liu Trũng i hc Dc H Ni Thi gian thc hin: Thỏng 2-5/20ề6 H NI, THNG 5/2006 Em xin by t lũng kớnh trng v bit n sõu sc thy: TS Nguyn Vit Thỏn TS, Bnh N h Cng ó tn tỡnh hng dn, giỳp tụi thi gian hc p v thc hin khoỏ lun Em cng xin chõn thnh cm n cỏc hy cụ iỏo, cỏc cỏtỡ b nhõn viờn cỏc p h ũ n g ban, c hit t h m ụn D c liu ó giỳp to iu kin v thi gian, trang thit h quỏ trỡnh tụi thc hin khoỏ lun N h õ n d p ny em xin cm n gia inh, bn bố, nhng ngi ó to iu kin, ng viờn tụi rt nhiu su t thi gian qua H Ni, thỏng 5/2006 Nguyn Th Thu Hng MC LC Li cm n Mc lc Chỳ gii ch vit tt T VN PHN I.TNG QUAN 1.1 Tng quan v alcaloid .3 1.2 Tng quan v dc liu nghiờn cu PHN THC NGHIM V KT q u n g h iờ n CU 2.1 Nguyờn liu v phng phỏp nghiờn cu 2.1.1 Nguyờn liu 2.1.2 Phcfng phỏp nghiờn cu .6 2.2 Kt qu thc nghim 2.2.1 Bỏch b 2.2.2 Da cn 15 2.2.3 i 23 2.2.4 Lc tiờ n 32 2.2.5 Mó ti n 39 2.2.6 Hong n n 48 2.2.7 ễ u 54 PHN KT LUN V XUT .62 Ti liu tham kho Phu luc CH GII CHVIT TT HPTLC : Sc ký lp mng hiu nng cao uv 254nm : nh sỏng t ngoi bc súng 254nm uv 366nm : nh sỏng t ngoi bc súng 366nm T VN Ngay t th s khai, nhõn dõn ta ó bit la chn, tỡm hiu cỏc loi cõy c t nhiờn lm thuc cha bnh Tri qua bao th h, vi nhng kinh nghim truyn t i ny sang i khỏc, kho tng dc liu Vit Nam khụng ngng c b sung, hon thin ó tr nờn vụ cựng a dng, phong phỳ Thờm vo ú, s phỏt trin vt bc ca cụng ngh khoa hc hin i giỳp phỏt hin thờm nhiu loi cõy thuc mi, vi nhng tỏc dng cha bnh mi Vic kt hp hi hũa tõn dc v ụng dc to nờn hiu qu cha bnh rt tớch cc, ng thi cng m rng thờm nhiu phng thuc ụng y mi Nhng cng chớnh s phỏt trin nhanh chúng, mnh m ca ngnh dc liu nh hin nay, s a dng, phong phỳ ca cõy thuc, s bin i phc v hỡnh thỏi v thnh phn hoỏ hc quỏ trỡnh ch bin, ó t vic kim nghim, qun lý cht lng trc nhiu khú khn, thỏch thc, ụi dón n tỡnh trng th ni Nht l trc thc trng ngnh kim nghim cũn nhiu thiu thn: trang ihit b, mỏy múc; nhõn lc; thụng tin khụng y , rừ rng d dn n s nhm ln Bi vy, vi mong mun gúp phn nõng cao cht lng kim nghim dc liu, chỳng tụi thc hin ti: N g h iờ n c u th n h l p tiờ u c h u n k i m n g h i m m t sụ d c liu c h a a c a lo id vi mc ớch xõy dng d liu gúp phn hon thin tiờu chun kim nghim mt s dc liu chớỡ aicaloid, giỳp vic kim nghim d dng, thun tin hn Dc liu cha alcaloid chim mt lng rt n, ti ny, chỳng tụi ch la chn nghiờn cu mt sụ' dc liu thụng dng, ph bin, ú l: Bỏch b, Da cn, i, Lc tiờn, Mó tin, Hong nn, ễ u ph t Vi mc ớch nh trờn, ni dung ca ti bao gm: * Chn dc liu chun Chp anh v mụ t c im hỡnh thỏi, c im hin vi cỏc dc liu nghiờn cu * Thc hin cỏc phng phỏp kim nghim theo tiờu chun Dc in Vit Nam * ng dng phng phỏp sc ký lp mng hiu nng cao vo kim nghim dc liu Thnh lp sc ký dch chit cỏc dc liu nghiờn cu mt s iu kin nht nh Phn I TNG QUAN S b v dc liờu cha alcaloid: T xa n nay, nhiu dc liu cha aicaloid luụn c bit n nh nhng v thuc quý, c s dng rng rói Y hc: Reserpin t Ba gc, Vinblastin, Vincistin l Da cn, Morphin t Thuc phin, Aconitin (ễ u), Strychnin (Mó tin) Bi cú tỏc dng iu tr cao v rng, li rl ph bin thc vt nờn alcaloid c chỳ ý nghiờn cu rt nhiu Vit Nam, dự rng hin cỏc alcaloid dựng c Y hc ớt hn rt nhiu so vi cỏc loi alcaloid ó phỏt hin [8], Thc t hm lng alcaloid cõy thng rt thp (Mt dc liu cha 1-3% alcaloid ó c coi l c hm lng alcaloid khỏ cao), nhng hm lng rt thp ú acaloid ó cú th cho hiu qu rừ rt trờn lõm sng, c bit nhng dc liu cú c cao nh: Lỏ ngún, u (2-5mg aconitin ó cú th gõy cht ngi ln), Mó tin Bi vy vic kim nghim cng cn phi cn trng, chớnh xỏc, m bỏo s an ton cho ngi bnh Theo nh ngha ca Pụlụnụpski: "Acaloid l nhng hp cht hu c cú cha nit, a s cú nhõn d \ũng, cú phn ng kim, thng gp thc vt, thng cú dc lc tớnh mnh v cho nhng phn ng húa hc vi mt s thuc th gi l thuc th chung ca alcaloid" Hin nay, nhiu alcaloid ó c tỡm thy ng vt (Bufotenin t nha Cúc, samandarin loi K nhụng Salamandra maculosa ) nhng thc vt l nguyờn liu ch yu sn xut cỏc alcaloid, c bil l thc vt bc cao Thc vt bc cao cha alcaloid chim 15-20% tng s cỏc loi cõy, lp trung mt sụ' h thc vt nh: Apocnaceae (h Trỳc o) vi gn 800 alcaloid, Papaveraceae (h Thuc phin) gn 400 alcacloid, Loganiaceae (h Mó tin) cú 150 alcaloid Trong cõy, alcaloid thng trung mt s b phn nht nh ( ht nh Mó tin, C phờ , c nh ễ u, Bỏch b , v nh i, Hong nn ) v cú th thay i quỏ trỡnh phỏt trin ca cõy c v hm lng ln v trớ, ni to alcaloid khụng phi lỳc no cng l ni tớch t alcaloid: Nhiu alcaloid c to r ti chuyn lờn phn trờn mt t ca cõy, sau thc hin nhng bin i th cp chỳng c tớch ly lỏ, quới, ht õy cng l mt khú khn khụng nh cho vic kim nghim cỏc dc liu cha alcaloid Cỏc alcaloid cõy thng dng hn hp, him ch cú mt loi nht, ú alcaloid cú hm lng cao s c gi l alcaloid chớnh Cỏc alcaloid rt ớt trng thỏi t m dng mui ca cỏc acid hu c nh citrat, tactat, malat, oxalat, acetat (ụi dng mui ca acid vụ c) tan dch t bo, mt s cõy alcaloid kt hp vi tanin hoc vi acid c bit cua chớnh cõy ú nh acid aconitic cú cõy ễ u, acid tropic mt s cõy h C [9] Kim nghim dc liu cha alcaloid thng tin hnh nh sau [9]: - Cỏc c im c trng v hỡnh thỏi cõy thuc, hỡnh nh bt, vi phu c m t t m giỳp nhõn thc cõy thuc, v ihuc - nh tớnh alcaloid, s dng cỏc phn ng to ta v to mu c trng: + Mun xỏc nh xem trờn tiờu bn thc vt cú alcaloid khụng v cú v trớ no ngi ta thng dựng thuc th Bouchardat, nh mt gil ihuc th lờn tiờu bn thc vt mi ct s thy xut hin ta nõu, nhiờn kt lun chc chn, cn lm thờm mt tiờu ban i chng ó loi ht cỏc alcaloid + chng minh l alcaloid gỡ thỡ cũn phỏi lm thờm phn ng to mu c hiu, ngy thng kt hp vi phng phỏp sc ký nht l sc ký lpmng cú alcaloid tinh khit lm cht chun so sỏnh, phng phỏp ph hng ngoi, ph t ngoi, ph - nh lng alcaloid thng cú hai giai on: + Chit riờng alcaloid dc liu: Yờu cu dc liu phi c chit kit tng giai on + nh lcmg: La chn phng phỏp nh lng phự hp tớnh cht tng alcaloid Cỏc phng phỏp hay dựng l ; phng phỏp cõn, phcfng phỏp trung hũa, phng phỏp so mu Tng quan v cỏc dc liờu nghiờn cu: tin cho vic theo dừi v i chiu, tng quan v cỏc dc liu nghiờn cu s c trỡnh by theo tng dc liu cựng vi phn kt qu thc nghim Phn II THC NGHIM V KT QU 2.1 Nguộn liu v phng phỏp nghiờn cu 2.1.1 _Nguyờn liu Cỏc mu nghiờn cu c thu hỏi trc tip, bo qun v s ch theo yờu cu quy nh, Mt s mu c thu inua trờn th trng kim tra, i chiu so sỏnh, tng quỏt húa cỏc c im + Bỏch bừ (Stemona tuherosa Luor ): R c Bỏch b c ly mu ti Vin Dc liu - H Ni * Da can (Catharanhus roseus (L.) G Don.ỡ: Phn trờn mt t ca cõy Da cn c thu hỏi ti Vn thc vt trng H Dc H Ni * (Pmeria rubra L var acutifolia ('Poir.) Bailev): Hoa v v thõn i c thu hỏi ti hoa Thanh niờn - H ụng - H Tõy * Lac tèộn {PassAora toetida L.): Phn trờn mt t ca Lc tiờn c thu mu ti Vn thc vt trng H Dc H Ni * Hong nn iStrychnos walichiana Steud ex D Q : v ũ Hong nn c thu mua ti trung tõm phõn phi dc liu Lón ụ n g - H Ni * Mó tiờn (Strvchns nux ~ vomica L.): Ht Mó tin c thu hỏi ti Vn Bỏch tho - TP H Chớ Minh * ễ ỏu phu t iAconitum fort line i HemsL): Cỏc mu ễu ph t c thu mua ti Sapa - Lo Cai; Lón ụng - H Ni 2.1.1 Phng phỏp nghiờn cu X Iv v bo qun mu Mu dc liu nghiờn cu cú th l dc liu ti hay ó qua ch bin phi khụ Sau thu mu, dc liu c x iý, bo qun theo phng phỏp chung, c th: - Mu dc liu ct vi phu cú th dựng mu ti hoc mu khụ c im mm, bo qun hn hp Cn : Nc : Glycerin (1:1:1) - Mu dc liu dựng soi bt c thỏi nh, sy khụ,nghinihnh bt, bo qun l cú nỳt kớn, ghi nhón, ni khụ rỏo - Mu dc liu nh tớnh c thỏi lỏt mng, sy khụ nhit ! V èE Mnh mụ v Tinh th calci oxalat Mnh mụ v mang tinh th calci oxalat Mnh bn T bo cng Hỡnh 6.1 ;Kt qu:i sỏc ký dch cUiờt Hong nựii quun SI dỳi ỳnh sỏng l im oi bc' súng 2ới4nm M c k (xi 00) 0,5 T io c k Peak M x S ta it S Rf 0 0 Q,068 H E it d Rf H 015 163.6 [-1 Q 085 157.1 1.56 .112 . o. o. U 137.7 1.36 .150 1 2,9 0322 3061 30.24 82 O.Q T 28.44 Q.540 . 887.1 .623 90.4 ,6 10 8 60.9 910 9.5 0.955 105.9 T ta lH e lụ M 0 9 w A M 6.67 155 Q.100 19,2 117.9 .63 1 2,9 07 ,8 0.7 .275 10,5 2 35.92 .435 28.8 6 7 ,4 ,6 8.79 .623 90,4 12 59 6.73 96*9 9.76 0.702 BI 15903.1 e.50 351.7 3.48 0,918 29 2,79 ,9 349.9 5 75 1,75 0.960 136.9 3.47 1.3B 349.5 105.8 0.993 3.7 1 0.63 T o t a lA r e :1 0 S t ib s t 11 ô H N^m e l l u U i , : K l q u a >viL k \ d i d ] c l i i c t IIuLiùợt: u i i ỡ q u a i l s ỏ t o ; m l i s;tùii: l ỳ I it: o i l u r c SUIIU i f i h i i i n (XIOOO) - - M tW T 0.0 01 I .2 0.3 I ' ' 0.5 0e ' ' 0.7 ' oe .9 ' T i.ick P e ik Stiiii Rf 000 052 133 15 .237 398 M