Nghiên cứu thành phần hóa học của vỏ hạt đậu xanh

Sau đó là một loạt các công trình nghiên cứu về tác dụng sinh học của Flavonoid trong vỏ đậu xanh có tác dụng bảo vệ cơ thể chống phóng xạ, chống đột biến nhiễm sắc thể, thanh nhiệt, ức

NGUYỄN THỊ HƯƠNG

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC

CỦA VỎ HẠT ĐẬU XANH (Vigna radiata

(L).Wilczeck), họ Đậu (Fabaceae)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thu Hằng

Nơi thực hiện: Bộ môn dược liệu

Trường Đại Học Dược Hà Nội

Thời gian thực hiện : từ 08/2010 – 05/ 2011

MỤC LỤC

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH

ĐẶT VẤN ĐỀ

CHƯƠNG 1:TỔNG QUAN 3

1.1 VỀ THỰC VẬT 3

1.1.1 Vị trí phân loại chi Vigna 3

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố chi Vigna 3

1.1.3 Một số đặc điểm của loài Vigna radiata (L.) Wilczeck 4

1.2 VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 5

1.2.1 Đậu xanh toàn hạt 5

1.2.2 Vỏ hạt đậu xanh 6

1.3 VỀ TÁC DỤNG SINH HỌC 7

1.3.1 Tác dụng bảo vệ cơ thể chống phóng xạ 7

1.3.2 Tác dụng chống đột biến 8

1.3.3 Tác dụng điều trị tại chỗ tổn thương bỏng thực nghiệm trên thỏ 8

1.3.4 Tác dụng chống u thực nghiệm trên chuột nhắt trắng 8

1.3.5 Tác dụng dược lý của toàn hạt đậu xanh 8

1.3.6 Tác dụng hạ đường huyết của dịch chiết Vỏ đậu xanh (MBS) và dịch chiết giá đỗ (MBSC) trên chuột bị tiểu đường typ II 11

1.3.7 Tác dụng chống kích ứng 12

1.3.8 Tác dụng ức chế các Cytokin gây viêm trong các đại thực bào bị kích Thích bởi LPS( Polylyposaccarid) 12

1.3.9 Tác dụng ức chế của Vitexin và Isovitexin đối với sự hình thành AGEs (advanced glycation endproducts) 13

1.3.10 Tác dụng trên Virus 13

1.3.11 Tác dụng của dịch chiết HHKV 13

1.4 Tính vị, công năng 14

1.5 Công dụng 15

1.6 Bài thuốc có đậu xanh 15

1.7 Một số chế phẩm có đậu xanh 17

CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19

2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ 19

2.1.1 Nguyên liệu 19

2.1.2 Hóa chất và dụng cụ 19

2.1.3 Thiết bị nghiên cứu 19

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20

CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21

3.1 MÔ TẢ ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI CỦA MẪU NGHIÊN CỨU 21

3.1.1.Đặc điểm cây đậu xanh 21

3.1.2 Xác định tên khoa học của mẫu nghiên cứu 23

3.1.3 Đặc điểm dược liệu Vỏ hạt đậu xanh 23

3.2 NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 23

3.2.1 Định tính các nhóm chất hữu cơ trong Vỏ đậu xanh bằng phản ứng hóa học 23

3.2.2 Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ Vỏ đậu xanh 30

3.2.3 Định tính các phân đoạn dịch chiết từ Vỏ đậu xanh bằng SKLM 34

3.2.4 Phân lập các chất từ phân đoạn dịch chiết VDX1 39

3.2.5 Kiểm tra độ tinh khiết của các chất phân lập được 42

3.2.6 Nhận dạng các chất phân lập được 45

3.3 BÀN LUẬN 50

CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 53 PHỤ LỤC

3 sau khi chạy cột

chiết

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1: Các Flavonoid chính có trong Vỏ hạt đậu xanh 7 Bảng 3.1: Kết quả định tính các nhóm chất trong Vỏ đậu xanh bằng phản ứng hóa học 29 Bảng 3.2: Hiệu suất chiết xuất các phân đoạn từ Vỏ đậu xanh 32 Bảng 3.3: Kết quả phân tích SKLM VDX1, VDX2, VDX3 khai triển với hệ dung môi 1 34 Bảng 3.4: Số liệu phổ 13

C-NMR, 1H-NMR của FV1 46

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 3.1: Ảnh chụp các đặc điểm cây đậu xanh 22

Hình 3.2: Sơ đồ chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ Vỏ đậu xanh 33

Hình 3.3: Ảnh chụp sắc ký đồ VDX1, VDX2, VDX3 khai triển với hệ dung môi 1 37

Hình 3.4: Ảnh chụp sắc ký đồ VDX1 khai triển với hệ dung môi 1 38

Hình 3.5: Ảnh chụp sắc ký đồ phân đoạn 2 (PĐ2) 38

Hình 3.6: Ảnh chụp sắc ký đồ FV2 ở 3 hệ dung môi khác nhau 43

Hình 3.7: Ảnh chụp sắc ký đồ FV1 ở 3 hệ dung môi khác nhau 44

Hình 3.8: Cấu trúc hóa học của Isovitexin 48

Hình 3.9: Cấu trúc hóa học của Vitexin 49

ĐẶT VẤN ĐỀ

Đậu xanh là cây trồng thuộc họ Đậu ( Fabaceae) rất gần gũi với nhân dân

ta Cũng như các loài đậu đỗ khác, hạt đậu xanh là một loại thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao, cung cấp nhiều glucid, lipid, các vitamin và đặc biệt là cung cấp nguồn protid thực vật quan trọng cho nhứng người ăn kiêng, ăn chay, người bị đái tháo đường, tăng lipid máu…Từ xa xưa, nhân dân ta đã trồng đậu xanh để lấy hạt như một loại cây lương thực và chữa một số bệnh thường gặp Theo kinh nghiệm dân gian, đậu xanh có vị ngọt, hơi lạnh, tính mát, vào các kinh tâm và vị, có tác dụng thanh nhiệt, giải độc, trừ phiền nhiệt [7] Ngoài ra còn có tác dụng tiêu thử, lợi thủy, giải độc [36] Vỏ hạt đậu xanh

có vị ngọt, tính mát, không độc, và có tác dụng thanh nhiệt giải độc tốt hơn hai lá mầm [33]

Cũng theo kinh nghiệm dân gian, vỏ đậu xanh phơi khô được dùng làm gối có tác dụng rút mồ hôi, làm mát đầu và gáy, chống bẹp đầu cho trẻ sơ sinh Theo "Nhật hoa tử bản thảo"[50] vỏ đậu xanh dùng làm gối kê trị được

bệnh đầu phong, đầu thống, cao huyết áp, thanh nhiệt ngừa say nắng, giảm bứt rứt, giúp sáng mắt…

Năm 1996, nhóm nghiên cứu của Trần Lưu Vân Hiền và cộng sự công

bố các kết quả cho thấy, thành phần chủ yếu trong vỏ đậu xanh là flavonoid, trong đó vitexin chiếm 90,5% và iso vitexin chiếm 9,5% [1818],[36] Sau đó

là một loạt các công trình nghiên cứu về tác dụng sinh học của Flavonoid trong vỏ đậu xanh có tác dụng bảo vệ cơ thể chống phóng xạ, chống đột biến nhiễm sắc thể, thanh nhiệt, ức chế rõ rệt các phản ứng peroxide hóa trong cơ thể…Phòng khám đa khoa Đại học Y dược TP HCM đã chiết xuất thành công chất flavonoid từ vỏ đậu xanh và sản xuất thành các biệt dược chữa viêm gan B,C mang tên Vitex và Vitexin [51]

Để góp phần nghiên cứu đầy đủ hơn về loại dƣợc liệu này, chúng tôi tiến

hành đề tài ― Nghiên cứu thành phần hóa học của Vỏ hạt đậu xanh (Vigna

radiata (L).Wilczeck)‖, họ Đậu (Fabaceae) với các nội dung sau:

1) Định tính các nhóm chất trong Vỏ hạt đậu xanh bằng các phản ứng hóa học

2) Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ Vỏ đậu xanh Định tính các phân đoạn dịch chiết bằng sắc kí lớp mỏng

3) Phân lập một số chất từ Vỏ đậu xanh

4) Sơ bộ nhận dạng các chất phân lập đƣợc

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN

1.1 VỀ THỰC VẬT

1.1.1 Vị trí phân loại của chi Vigna

Theo Võ Văn Chi và các tài liệu [2],[7],[8],[24],[38] chi Vigna có vị trí phân loại như sau:

Chi Vigna (Savi, Nouovo Giorn)

Theo các hệ thống phân loại thực vật trước đây [38], đậu xanh thuộc chi

Phaseolus Tuy nhiên, theo hệ thống phân loại hiện nay, đậu xanh được xếp

vào chi Vigna[23], [29]

1.1.2.Đặc điểm thực vật và phân bố của chi Vigna

Theo ‗Thực vật chí Trung Quốc‖ [3939], chi Vigna có những đặc điểm sau:

Cây leo hoặc mọc thẳng đứng, hiếm khi là cây bụi thấp Lá hình lông chim, có 3 lá chét, lá kèm hình khiên hoặc có mấu ở gốc, có 2 thùy, hình tim hoặc cắt vát Cụm hoa ở nách lá hoặc ở ngọn, mấu của cuống thường dày và

có tuyến Lá bắc và lá bắc con rụng vào một thời kỳ nhất định hàng năm Đài

5, có răng cưa, gồm 2 môi Tràng hoa màu vàng, xanh hoặc tía; cánh bên ngắn

hơn cánh cờ, cánh thìa dài gần bằng cánh bên,được uốn cong vào nhưng không cuộn lại và trên đỉnh không có mỏ dài xoắn ốc Nhị xếp thành 2 bó,

bao phấn đồng nhất, bầu nhụy không có cuống, vòi nhụy hình chỉ, có chùm lông ở gần đỉnh ,có ngạnh hoặc có lông rậm theo chiều dọc bên trong Núm

nhụy không đối xứng, quả đậu dài hoặc thuôn, có vách ngăn, hạt hình thận hoặc gần vuông, rốn hạt ngắn hoặc có hình thuôn dài, có hoặc không có áo hạt

Trên thế giới chi Vigna có khoảng 100 loài, được trồng nhiều ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới Theo Nguyễn Đăng Khôi [29], chi Vigna có

30 loài, các loài thuộc chi Vigna được trồng nhiều để làm thức ăn cho người

và gia súc

1.1.3 Một số đặc điểm của loài Vigna radiata (L.) Wilczeck

Tên thường gọi: Đậu xanh, còn có tên gọi khác là đậu chè, đậu tằm [3030],[3636]

Tên khoa học: Vigna radiata (L.) Wilczeck., họ Đậu (Fabaceae)

Tên đồng nghĩa: Phaseolus radiatus Lour non L; Phaseolus mungo Gagnep non L; Phaseolus aureus Roxb.; Vigna aureus (Roxb.) Hepper;

Vigna aurea Khôi; Vigna aurea Roxb [30], [36]

Tên nước ngoài: Green gram, mung bean (Anh); haricot mungo (Pháp) [30], [36]

1.1.3.1 Đặc điểm thực vật và phân bố

Đậu xanh đuợc mô tả trong cuốn ― Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam‖ [36]: Cây thảo, mọc đứng, sống hàng năm, ít phân cành, cao 50- 60cm Thân cành hơi có cạnh và rãnh, phủ đầy lông mềm Lá kép mọc so le, gồm 3 lá chét hình trái xoan tam giác, gốc tròn, đầu nhọn, dài 5-11cm, rộng 4-

9 cm, mặt trên màu lục sẫm, mặt dưới nhạt, gân 3 tỏa ra từ gốc, cuống lá dài 10-15cm

Cụm hoa mọc ở kẽ lá thành chùm, hoa nhiều màu vàng nhạt hoặc màu lục, đài hình chuông, nhẵn, tràng có cánh cờ rộng, cánh thìa hình liềm, cánh bên có tai nhọn, nhị 2 bó, bầu có lông

Quả đậu, hình trụ, dài 5-10cm, lúc đầu có lông, sau nhẵn, hạt nhiều, màu lục

Mùa hoa: tháng 3-5, mùa quả: tháng 6-8

Cây được trồng khắp Đông Dương lấy hạt ăn

1.1.3.2.Khóa phân loại chi Vigna đến loài Vigna radiata (L.) Wilczeck

Theo ―Thực vật chí Trung Quốc ‖[39], chi Vigna được phân loại theo khóa phân loại cho 14 loài thường gặp ở Trung Quốc như sau:

1b Lá kèm 2 thùy hình tim, hoặc có cựa ở gốc, hoặc hình khiên

2b Lá kèm có cựa ở gốc hoặc hình khiên

6b Lá kèm hình khiên, cánh thìa với một bao phấn riêng biệt nằm về phía bên trái

7b Tràng hoa dài 10 mm hoặc hơn; lá chét phần lớn liền

9a Quả đậu có lông cứng màu nâu, tràng hoa màu vàng

1.1.3.3.Khóa phân loại loài Vigna radiata (L.) Wilczeck đến đơn vị thứ [39]

1a Thân cây mọc thẳng, lá chét liền, nhọn ở đỉnh……… var radiata

Được trồng khắp Trung Quốc, và trồng rộng rãi ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới

1b.Thân cây , hoặc bò, lá chét có 2-3 thùy, nhọn ở đỉnh…… var sublobata

Cây leo hoặc bò, lá chét có 2-3 thùy, nhọn ở đỉnh

1.2 VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC

1.2.1 Đậu xanh toàn hạt

Hạt đậu xanh là một loại thực phẩm có giá trị dinh dưỡng cao, có chứa nước (14%), protid (23,4 %), lipid (2,4%), glucid( 53,10%), cellulose (4,7%), tro (2,4% ),ngoài ra còn có các nguyên tố vi lượng như Ca (64mg%), P (377mg%), Fe (4,8mg%), Na (6mg%), K (1132mg%) và các vitamin như A (5mg%), B1 (0,72 mg%), B2 (0,15mg%), PP (2,4mg%), B6 (0,47mg%), C

(4mg%), acid folic (121mcg%), acid panthotenic (2,5mcg%), còn có phosphatidylcholin, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, phosphatidylserine, phosphatidic acid [7],[30],[36],[37]

1.2.2 Vỏ hạt đậu xanh

Việc nghiên cứu thành phần hóa học của vỏ đậu xanh đã thu hút sự quan tâm của một số tác giả Theo nghiên cứu của Trần Vân Hiền và cộng sự [18] ,[36], bằng các phương pháp hóa lý đã xác định được hàm lượng flavonoid toàn phần trong vỏ hạt đậu xanh là 0,8% Các flavonoid này bao gồm vitexin 90,5% và isovitexin 9,5% có cấu trúc hóa học được trình bày ở bảng 1.1

Một nghiên cứu về thành phần chất vô cơ bằng phương pháp đo quang phổ phát xạ của tác giả Hoàng Quỳnh Hoa [23] cho thấy Vỏ hạt và nhân hạt đậu xanh có 14 nguyên tố vô cơ, trong đó có 12 nguyên tố giống nhau (Al, Si,

Mg, Ca, Ba, Fe, Mn, Ni, Cu, P, Na, K), và có 2 nguyên tố khác nhau (Sr và Ti

có trong vỏ hạt còn Mo và Pb có trong nhân hạt), nguyên tố K chiếm tỷ lệ nhiều nhất trong hạt đậu xanh ( 5% trong vỏ hạt và 10 % trong nhân hạt)

Bảng 1.1 : Các Flavonoid chính có trong vỏ hạt đậu xanh

OH

(R) O

(R) (S) (R) (R)

3 4 5

6

7 8 9 10

1' 2' 3'

4' 5' 6'

'' 1'' 2''

3'' 4''

5'' 6''

OH

HO

1 2

4 5

6 7 8

3

9 10

1'

4' 5' 6' 1''

2'' 3'' 4'' 5'' 6''

Gy, và giảm tổn thương rõ rệt ở các cơ quan này cả về đại thể lẫn vi thể [12],[13],[15] Flavonoid vỏ hạt đậu xanh còn có tác dụng bảo vệ tế bào nội mạc động vật bò và nguyên bào sợi được gây tổn thương bằng H2O2 hoặc hệ thống tạo gốc tự do Hypoxanthin/ Xanthin oxidase [12]

Trên lâm sàng, viên nang vitexin với liều 400mg/ngày x 60 ngày có tác dụng thanh nhiệt, giảm các triệu chứng nhiệt, cân bằng lại tình trạnh oxy hóa- chống oxy hóa đối với bệnh nhân ung thư vú sau xạ trị [25], đồng thời còn giúp phục hồi sự đáp ứng chuyển dạng của tế bào lympho ở máu ngoại vi của bệnh nhân này [26],[27],[49]

Trong nghiên cứu về tính chất sinh học của một số chất chống oxy hóa thử nghiệm trên lympho bào người nuôi cấy, Trịnh Văn Bảo và cộng sự đã có nhận xét: đậu xanh có tác dụng rõ rệt trong việc bảo vệ làm giảm tỷ lệ nhân nhỏ do Cyclophosphamid gây ra [1],[23]

Đến năm 1998, Trần Đức Phấn đã hoàn thành công trình nghiên cứu về tác dụng chống đột biến của flavonoid vỏ hạt đậu xanh và dịch chiết đậu xanh toàn phần trên chuột thực nghiệm bị nhiễm monitor là một loại hóa chất bảo

vệ thực vật Kết quả cho thấy flavonoid vỏ có tác dụng hạn chế việc xuất hiên các đột biến cấu trúc nhiễm sắc thể ở chuột bị nhiễm monitor liều nhỏ dài ngày [31]

1.3.3.Tác dụng điều trị tại chỗ tổn thương bỏng thực nghiệm trên thỏ

Cạo sạch lông hai bên sống lưng thỏ, dùng hai miếng kim loại có đường kính 10cm để làm vị trí gây bỏng, độ sâu của bỏng ở độ III và IV Chia thỏ ra làm 3 nhóm, nhóm 1 điều trị bằng dung dịch Berberin 1% do học viện quân y sản xuất, nhóm 2 dùng mỡ Flavonoid A chiết từ củ ráy (Latsia araceae) và mỡ Flavonoid B chiết từ vỏ đậu xanh Sau đó theo dõi các chỉ tiêu: Diễn biến tại chỗ của vết bỏng (diện tích, độ sâu, viêm mủ, mọc vi khuẩn, thời gian bong vẩy, phát triển tổ chức hạt, nền vết bỏng, tính chất sẹo), định lượng vi khuẩn

ái khí và tụ cầu vàng qua các thời điểm khác nhau và rút ra kết luận: Flavonoid từ vỏ đậu xanh có tác dụng se khô vết bỏng, kích thích liền sẹo, kháng khuẩn tốt hơn dung dịch Berberin 1%, nhưng không tốt bằng Flavonoid

từ củ ráy [10]

1.3.4.Tác dụng chống u thực nghiệm trên chuột nhắt trắng

Dùng tác nhân benzo [α] và dầu Ba đậu theo phương pháp của Ramanathan R để gây khối u thực nghiệm trên chuột nhắt trắng bằng cách bôi các dịch này lên vùng da đã được cạo sạch lông của chuột nhắt trắng.Quan sát theo dõi sự xuất hiện và phát triển của khối u So sánh kết quả của nhóm chứng và nhóm thử cho thấy flavonoid vitexin với liều 150mg/kg /ngày qua đường uống và bôi trên da 7 ngày trước khi gây u thực nghiệm, sau đó cho chuột uống trong 13 tuần tiếp theo đã có tác dụng rõ rệt trong ức chế sự hình thành và phát triển khối u trên da [20]

1.3.5 Tác dụng dược lý của toàn hạt đậu xanh

Dạng chiết bằng cồn và bằng nước từ hạt đậu xanh, đem trộn vào thức ăn

để nuôi súc vật thí nghiệm trong 7 ngày liên tiếp với liều 10g/kg đối với chuột nhắt trắng và 16g/kg đối với chuột cống trắng, đều có tác dụng làm giảm hàm lượng cholesterol huyết thanh một cách rõ rệt Trên thỏ gây cholesterol huyết thanh tăng cao thực nghiệm, dạng chiết bằng cồn và bằng nước từ hạt đậu

xanh với liều 11,6g/kg cho thẳng vào dạ dày, dùng liên tục trong 7 ngày liền cũng có tác dụng làm giảm hàm lượng cholesterol huyết thanh [36]

Bột đậu xanh hoặc bột đậu xanh đã mọc mầm, trộn vào thức ăn chăn nuôi thỏ với tỷ lệ 70% có tác dụng phòng ngừa và điều trị hiện tượng tăng cao lipid máu thực nghiệm [36]

Lê Khánh Trai đã nghiên cứu tác dụng của đậu xanh toàn hạt trên chuột và so sánh kinh nghiệm dân gian cho thấy:

- Tác dụng chống nóng: chia chuột thành 2 lô, lô 1 cho ăn cơm gạo, lô

2 cho ăn đậu xanh sống đã nghiền, để chuột nghỉ 2h, sau đó cho vào tủ ấm điều chỉnh nhiệt độ từ 32-50°C, theo dõi thời gian cầm cự của chuột thấy thời gian này ở lô 2 dài hơn, phù hợp với kinh nghiệm dân gian coi đậu xanh là thức ăn mát và đông y coi đậu xanh là thuốc giải nhiệt [33]

- Tác dụng làm giảm độc tính của mã tiền: Giun đất để tiến hành thí nghiệm được chia thành 2 lô Với lô chứng, sử dụng mã tiền sống, giun chết ở nồng độ 1/200 của mã tiền Với mã tiền đã ngâm nước 15 ngày (1 ngày thay nước 1 lần), giun chết ở nồng độ 1/200 của mã tiền Ở lô thử, với mã tiền đã ngâm nước giã đậu xanh 1:1 trong 15 ngày, giun chết ở nồng độ 1/100 của mã tiền Như vậy, đậu xanh có khả năng làm giảm độc tính của mã tiền, phù hợp với kinh nghiệm dân gian coi đậu xanh là thuốc giải độc [33]

- Tác dụng chống dị ứng, bảo vệ tế bào Mastocyte khi bị tiêm mẫn cảm bằng lòng đỏ trứng, phù hợp kinh nghiệm đông y coi đậu xanh sống chữa mẩn ngứa Tuy nhiên mô hình choáng Histamin (tiêm Histamin vào cơ thể chuột để gây choáng) lại không thể hiện tác dụng chống dị ứng của đậu xanh,

có thể do mô hình này quá nặng [33]

- Tác dụng của đậu xanh trên mạch cô lập cho thấy, đậu xanh sống có tác dụng giãn mạch, có thể tạo khả năng tỏa nhiệt, phù hợp với tác dụng thanh nhiệt trong đông y [33]

Ngoài ra theo công trình của Lê Đức Tu, Nguyễn Huy Hoàn, Lê Khánh Trai thì trong đậu xanh có 0,7mg % nhóm sulfhydryl (-SH) Nhóm này có vai trò quan trọng trong cơ thể và đặc biệt trong các enzyme, có tính khử nên dễ

bị tấn công bởi các tác nhân oxy hóa Phải chăng, nhóm –SH của đậu xanh bảo vệ nhóm –SH của enzyme và thể hiện tính giải độc của đậu xanh như kinh nghiệm cổ truyền [33]

Và cũng theo kinh nghiệm dân gian, vỏ hạt đậu xanh có tác dụng thanh nhiệt giải độc tốt hơn hai lá mầm [33]

Năm 2007, nhóm nghiên cứu của Nguyễn Thị Hà đã dùng mô hình thực nghiệm invitro để đánh giá tác dụng của đậu xanh trên quá trình peroxid hóa

ty thể ở tế bào gan của chuột nhắt trắng và mô hình invivo để khảo sát tác dụng của đậu xanh trên hoạt động gốc tự do trong máu của thỏ bị chiếu xạ Kết quả cho thấy đậu xanh toàn phần có tác dụng ức chế quá trình peroxid hóa lipid ở ty thể tế bào gan chuột và không phụ thuộc vào tác nhân khơi mào

là Fe3+.ADP/NADPH hay cumene hydroperoxid Trên thỏ bị chiếu xạ liều 5

Gy, đậu xanh toàn phần có tác dụng hạn chế sự tăng MDA huyết tương và giảm hoạt độ của SOD, GPx, cùng hàm lượng TAS huyết tươn [16]

1.3.6 Tác dụng hạ đường huyết của dịch chiết vỏ đậu xanh (MBS) và dịch chiết giá đỗ (MBSC) trên chuột bị tiểu đường type II

Những con chuột sử dụng trong thí nghiệm có mức glucose, peptid C, glucagon, cholesterol toàn phần, triglyceride và ure trong máu cao; đồng thời cũng có sự đề kháng rõ rệt Insulin do tuyến tụy sản xuất Sau khi được uống dịch chiết MBS và MBSC trong 5 tuần thì các chỉ số trên được cải thiện rõ rệt, đồng thời khả năng sử dụng Insulin tăng lên Điều này chứng tỏ rằng dịch chiết MBS và MBSC có tác dụng điều trị đái tháo đường type II [44]

1.3.7 Tác dụng chống kích ứng

Dịch chiết đậu xanh 2,0% có tác dụng làm giảm kích ứng da do acid lactic 5,0%, retinol ID 4000, và 1,0% hỗn hợp chất bảo quản thường dùng trong mỹ phẩm gây ra, và làm giảm cảm giác khó chịu khoảng 30-50% Sau

đó một thử nghiệm được tiến hành để so sánh công thức có chứa đậu xanh với giả dược Từ những kết quả của bản câu hỏi được đưa ra sau 4 tuần thử nghiệm, nhóm nghiên cứu đã khẳng định dịch chiết đậu xanh có tác dụng chống kích ứng hiệu quả [41]

1.3.8 Tác dụng ức chế các Cytokin gây viêm trong các đại thực bào bị kích thích bởi LPS (Lypopolysaccarid)

Các đại thực bào này được ủ với dịch chiết F3 ( gồm các thành phần chính là Vitexin, Isovitexin, acid Galic) Kết quả cho thấy tất cả các cytokines gây viêm bao gồm interleukin (IL)-1β, IL-6, IL-12β, yếu tố hoại tử khối u (TNF)-α, và tính chất cảm ứng enzym tổng hợp NO (iNOS) được giảm đáng

kể trong các tế bào được điều trị với 3,7 mg / ml F3 [4242] Trong một nghiên cứu khác cho thấy tác dụng chống chống viêm của iso vitexin mạnh hơn vitexin, isovitexin chống được tác dụng gây viêm của dầu ba đậu và acid arachidonic, còn vitexin thì chỉ chống được tác dụng doacid arachidonic gây

ra [49].

Để nghiên cứu về cơ chế hoạt động chống viêm của dịch chiết đậu xanh, người ta đã kiểm tra các tác dụng ức chế giải phóng histamine từ tế bào Mast ở phúc mạc của chuột và hoạt động của enzym lipoxygenase Kết quả cho thấy dịch chiết đậu xanh ức chế phóng thích histamin phụ thuộc vào nông độ, nhưng không có tác dụng ức chế hoạt động của enzyme 5-lipoxygenase [41]

1.3.9.Tác dụng ức chế của vitexin và isovitexin đối với sự hình thành AGEs (advanced glycation endproducts)

AGEs một peptid gây ra chứng thèm ăn ở người và là nguyên nhân gây

ra chứng béo phì và nhiều bệnh tật sau này Dịch chiết cồn nước của đậu xanh thể hiện sự ức chế mạnh nhất các hoạt động hình thành AGEs trong Albumin huyết thanh bò Trong các thử nghiệm kháng glycation, cả vitexin và isovitexin đều cho thấy ức chế đáng kể sự hình thành của AGE gây ra bởi glucose hoặc methylglyoxal với hiệu quả trên 85% ở nồng độ 100 μM Trong một khảo nghiệm khác vitexin và isovitexin thất bại trong việc ức chế các phản ứng carbonyl Do vây, người ta cho rằng hoạt động kháng Glycation của vitexin và isovitexin chủ yếu có được là do khả năng chống các gốc tự do [4343]

1.3.11 Tác dụng của dịch chiết HHKV

HHKV là dịch chiết Flavonoid toàn phần, chiết xuất từ Hà thủ ô đỏ (dạng

đã chế biến), sinh Hoàng kỳ, Hoa kim ngân và Vỏ đậu xanh, bài thuốc được chiết xuất và làm giàu thành phần flavonoid (16%) Dịch chiết dùng cho thí

nghiệm được chuẩn bị ở nồng độ 30 ug/ml, lọc qua lọc vô trùng và bảo quản

ở 18°C

Các tác giả đã tiến hành nghiên cứu nhằm xác định sự tổn thương tế bào lympho máu ngoại vi bệnh nhân ung thư và người bình thường dưới tác động của hydrogen peroxide H2O2, một tác nhân oxy hóa invitro và xem xét khả năng bảo vệ tế bào lympho bởi HHKV.Kết quả là, khi có mặt dịch chiết HHKV với nồng độ 30mg/ml, các tế bào lympho được bảo vệ, tỷ lệ các tế bào còn khỏe mạnh nhiều hơn so với nhóm chứng [3434], thí nghiệm cũng cho kết quả tương tự đối với tế bào lympho người cao tuổi [2222]

Một số nghiên cứu khác đánh giá tác dụng của dịch chiết HHKV đối với

tế bào não của chuột nhắt trắng chịu stress oxy hóa invitro.Kết quả được đánh giá thông qua hàm lượng MDA (Malona dialdehyd), một sản phẩm của quá trình peroxid hóa lipid do stress tâm lý.Kết quả cho thấy dịch chiết giàu Flavonoid từ Hà thủ ô đỏ, Hoàng kỳ, Kim ngân hoa, Vỏ đậu xanh và dịch chiết hỗn hợp 4 vị thuốc trên (HHKV) đều có tác dụng ức chế phản ứng peroxyd hóa rõ rệt, ở các nông độ tương ứng là 1,62; 2,47; 0,102; 0,084; 0,081 mg/ml [1919].Như vậy dịch vỏ đậu xanh cũng có tác dụng gần tương đương dịch chiết HHKV, ở nồng độ thấp (0,084mg/ml) đã gây được tác dụng làm giảm MDA ở tế bào não chuột nhắt trắng bị stress oxy hóa invitro [1919] Một kết quả nghiên cứu sau đó đã chứng minh rằng, Flavonoid vitex toàn phần từ vỏ đậu xanh với liều 200mg/kg làm giảm đáng kể hàm lượng MDA trong não chuột bị stress oxy hóa [19],[21]

Trên chuột nhắt trắng, dịch chiết HHKV giúp hình thành trí nhớ nhanh

và bền vững hơn so với lô đối chứng [1717]

1.4 Tính vị, công năng

Đậu xanh được ghi làm thuốc trong sách ―Nam dược thần hiệu‖ của Tuệ Tĩnh và ― Bản thảo cương mục‖ của Lý Thời Trân [3030],[3333] Theo

Lý Thời Trân, hạt đậu xanh, thường gọi là lục đậu, có vị ngọt, hơi lạnh, tính mát, vào các kinh tâm và vị, có tác dụng thanh nhiệt,giải độc, trừ phiền nhiệt, bớt sưng đau, ích khí lực, điều hòa ngũ tạng, nấu ăn thì bổ mát và trừ được các bệnh nhiệt [36] Ngoài ra còn có tác dụng tiêu thử, lợi thủy, giải độc [36] Hải Thượng Lãn Ông trong ―Lĩnh Nam bản thảo‖ [33] viết:

― Lục đậu tên gọi bột đậu xanh Ngọt lạnh không độc vị hơi tanh Trừ nhiệt bỏ hư kiêm giải độc Lợi thủy tiêu sang mắt sáng tinh‖

Vỏ hạt đậu xanh (còn gọi là lục đậu bì, lục đậu y, lục đậu xác, thu được bằng cách xay đậu, ngâm nước, và gạn lấy vỏ phơi hay sấy khô), vị ngọt, tính mát, không độc, có tác dụng giải nhiệt làm cho mắt khỏi mờ [30]

1.5 Công dụng

Đậu xanh là món ăn thông dụng trong nhân dân, trộn với gạo nếp để đồ xôi, làm bánh, nấu cháo, nấu chè, làm giá đậu ăn sống hoặc xào Đậu xanh nấu cháo, hoặc nấu chin nhừ ăn để :

- Chữa cảm sốt, đề phòng các bệnh ôn nhiệt mùa hè

- Trị tiêu khát, uống nước nhiều và đái tháo đường

- Trị đau bụng cồn cào, nhức đầu, nôn ọe, có thai nôn ọe không yên

- Trị mụn nhọt sưng tấy loét miệng lưỡi

- Giải độc các trường hợp ngộ độc, do thuốc hoặc kim loại

Cũng dùng nhai sống nuốt nước Hoặc dùng ngoài lấy đậu xanh nhai sống, lấy bã đắp chữa giời leo, ngứa ngáy, khó chịu [7]

1.6 Bài thuốc có đậu xanh

Bài thuốc 1: Giải nhiệt, cảm sốt:

Bột đậu xanh cả vỏ 50g,

Lá dâu non 18g,

Lá tía tô 12g

Bột đậu xanh cho thêm ít gạo nấu chin nhừ nát, dâu và tía tô thái nhỏ, bỏ

vào nồi cháo, để sôi 5-10 phút, ăn nguội để tránh ra nhiều mồ hôi và chữa

Bài thuốc 3: Chữa sốt nóng, sưng quai hàm, nhức nhối

Đậu xanh tán bột thật nhỏ trộn với giấm, phết một lớp thật dày lên chỗ

sưng đau Nếu khô lại them giấm vào Ngày làm một lần đến khi khỏi bệnh

[3636] (―Nam dược thần hiệu‖)

Bài thuốc 3: Chữa ngộ độc

Hạt đậu xanh để sống, nghiền nhỏ, chế nước vào, hòa đều cho uống thật

nhiều để nôn ra và giải độc [36]

Bài thuốc 4: Chữa ngộ độc nấm

Đậu xanh 60-120g,

Bồ công anh, đại thanh diệp, tử thảo căn, kim ngân hoa mỗi vị 30-60g,

Cam thảo sống 9-15g

Sắc nước uống ngày một thang Trẻ con giảm liều theo tuổi [36]

Bài thuốc 5: Chữa đái tháo đường (tiêu khát), khát nước uống nhiều, đái

Kim tiền thảo, kê nội kim, hải kim sa, xuyên ngưu tất mỗi thứ 60g

Gia giảm tùy theo triệu chứng:

Nếu đái ra máu thêm bạch mao căn, thiên thảo mỗi thứ 25g, Khí suy yếu thêm hoàng kỳ, đương quy mỗi thứ 60g, Đại tiện táo bón thêm đại hoàng 15g, mang tiêu 12g, Đau bụng thêm nguyên hồ, mộc hương, mỗi thứ 30g, đau hông

đỗ trọng, tang kí sinh mỗi thứ 30g

Tất cả nghiền thành bột, trộn đều, mỗi ngày uống 2 lần, mỗi lần 15g Sau khi uống thuốc 30 phút, ăn thêm dưa hấu và hoạt động nhiều Mỗi đợt điều trị là một tháng [36]

1.7.Một số chế phẩm có đậu xanh

1.7.1 Giải độc ngũ lão [47]

Hộp 10 vỉ X 10 viên nang, Công ty TNHH DP & TM thành công

* Thành phần:

Mỗi viên nang chứa:

Tinh chất vỏ đậu xanh 100mg

Tá dược vừa đủ (1 viên) 500mg

* Công dụng:

Giải nhiệt độc, chống mờ mắt, bảo vệ gan trong các trường hợp ngộ độc thức ăn và các trường hợp ngộ độc do các nguyên nhân khác ảnh hưởng tới chức năng gan Dùng tốt trong các trường hợp:

- Các trường hợp ngộ độc thức ăn, thuốc trừ sâu

- Trong các trường hợp sử dụng kháng sinh, thuốc phòng lao, hạ mỡ máu, thuốc và hóa chất điều trị ung thư có ảnh hưởng tới chức năng gan

- Nhiễm độc kim loại nặng

* Cách dùng:

- Thông thường dùng 2-8 viên/ ngày,chia làm 2 lần

- Trong các trường hợp hỗ trợ điều trị ngộ độc có thể dùng tới 16 viên/ ngày, chia làm 2 lần

1.7.2 Viên nang Vitexin [52]

Viên nang Vitexin là chế phẩm của Viện Y học cổ truyền Việt Nam và Xí nghiệp Dược phẩm TƯ 24, được sản xuất theo quy trình bào chế thuốc của Bộ

- Bệnh nhân bị ung thư vú giai đoạn II và III sau phẫu thuật có thể kết hợp trị

xạ - Những bệnh nhân bị viêm gan siêu vi mạn tính có men Transaminaza cao

- Hội chứng tăng lipit máu nguyên phát

CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG

Phần vỏ được sấy trong tủ sấy có quạt thông gió ở 60 độ C cho tới khô rồi bảo quản trong túi nilon kín, để nơi khô mát

Các mẫu hạt đảm bảo yêu cầu: hạt đậu mẩy đều, vỏ láng bóng, đều nhau, không bị mốc, không bị mối mọt, không chất bảo quản

2.1.2 Hóa chất và dụng cụ

Hóa chất dùng cho nghiên cứu đạt tiêu chuẩn phân tích

- Các dung môi hữu cơ: Cồn tuyệt đối, toluene, acid formic, acetone, ethylacetat, ammoniac, nước…

- Sephadex LH 20

- Bản mỏng Silicagel GF 254 tráng sẵn (Merck)

- Các thuốc thử vô cơ

- Bình định mức, ống nghiệm, và ống đong các loại

Tất cả các dụng cụ dùng trong thí nghiệm được rửa sạch bằng cồn và sấy khô trong tủ sấy

2.1.3 Thiết bị nghiên cứu

Cân phân tích Mettler Toledo AB204-S9 (Thụy Sĩ)

Máy cất quay Buchi Rotavapor R-200 (Đức)

Máy đo độ ẩm Precisa HA 60 tại bộ môn Dược liệu trường đại học Dược

Hà Nội

Tủ sấy Memmert (Đức)

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Nghiên cứu về hóa học

- Mô tả đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu, đối chiếu với khóa phân loại để xác định tên khoa học

- Định tính các nhóm chất hữu cơ trong dược liệu bằng phản ứng hóa học theo các tài liệu [3],[4],[5], [4848]

- Phân lập các chất bằng sắc ký lọc gel, và sắc ký chế hóa

* Sắc ký lọc gel với chất nhồi cột là Sephadex LH20

* Sắc ký chế hóa: Sử dụng Silicagel có đường kính hạt 5-40μm của viện Kiểm nghiệm

- Nhận dạng các chất phân lập được bằng các dữ liệu về phổ MS, 1NRM, 13C-NRM, HMBC, DEPT, đo tại Viện hóa học Viện Khoa Học

H-và Công Nghệ Việt Nam, kết hợp so sánh với các dữ liệu phổ trong các

tài liệu tham khảo [45Error! Reference source not found.]

CHƯƠNG 3:

THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

3.1 MÔ TẢ ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI CỦA MẪU NGHIÊN CỨU

3.1.1 Đặc điểm cây đậu xanh

Quan sát tại thực địa, cây đậu xanh có đặc điểm hình thái như sau:

Cây thảo, mọc đứng, cao khoảng 60-80cm Thân cành hơi có cạnh và rãnh, phủ đầy lông mềm Lá kép mọc so le, gồm 3 lá chét hình trái xoan tam giác, gốc tròn, đầu nhọn, mặt trên màu lục sẫm, mặt dưới nhạt, gân 3 tỏa ra từ gốc Lá kèm hình khiên, kéo dài dưới nơi gắn

Cụm hoa mọc ở nách lá thành chùm dài từ 15-20cm, hoa nhiều màu vàng lục, không đều Đài hình chuông, nhẵn, tràng có cánh cờ rộng, cánh thìa hình liềm, cánh bên có tai nhọn, nhị 2 bó (chín nhị liền và một nhị rời), bầu

có lông bao phủ

Quả đậu hình trụ mảnh, dài 5-10cm, lúc đầu có lông khi còn non, sau nhẵn, chứa nhiều hạt nhỏ hình trụ ngắn, gần hình cầu thường có màu xanh Mùa hoa: tháng 3-5, mùa quả: tháng 6-8

Ảnh chụp các đặc điểm của cây đậu xanh được trình bày ở hình 3.1

Ảnh cây tươi tại thực

Một hoa nguyên vẹn Đài hình chuông Cánh cờ Cánh bên

Cánh thìa Bộ nhụy 9+1 Bầu có lông Quả loại đậu

Hình 3.1: Ảnh chụp các đặc điểm cây đậu xanh

3.1.2 Xác định tên khoa học của mẫu nghiên cứu

Căn cứ vào đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu ở mục 3.1.1, đối chiếu với bản mô tả theo các tài liệu [24],[2828],[36],[39], chúng tôi xác định tên khoa học của cây đậu xanh thu hái tại Minh Khai, Hoài Đức, Hà Nội đến

đơn vị thứ là Vigna radiata (L.) Wilczeck var radiata, họ Đậu (Fabaceae)

3.1.3 Đặc điểm dƣợc liệu Vỏ hạt đậu xanh

Bột màu xanh lục, mùi thơm nhẹ, vị hơi ngọt

3.2 NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC

3.2.1 Định tính các nhóm chất hữu cơ trong vỏ đậu xanh bằng phản ứng hóa học

ml rồi làm các phản ứng

Ống 1: Nhỏ 2-3 giọt thuốc thử Mayer, không thấy có kết tủa (-)

Ống 2: Nhỏ 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat, không thấy có kết tủa (-) Ống 3: Nhỏ 2-3 giọt thuốc thử Dragendroff, không thấy có kết tủa (-) Kết luận: Vỏ đậu xanh không có Alcaloid

3.2.1.2 Định tính Anthranoid

Phản ứng Borntrager

Cân 10g dƣợc liệu vào bình nón 50ml, thêm 30ml H2SO4 1N, đun sôi cách thủy trong 15 phút, để nguội, lọc lấy dịch lọc vào bình gạn dung tích

100ml Lắc với 5ml CHCl3, gạn lấy phần CHCl3 cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 1ml để tiến hành phản ứng

Ống 1: 1ml dịch chiết cloroform + 1ml dung dịch NH4OH 10%, lắc nhẹ thấy lớp nước không có màu đỏ (-)

Ống 2: 1ml dịch chiết cloroform + 1ml dung dịch NaOH 10%, lắc nhẹ thấy lớp nước không có màu đỏ (-)

Kết luận: Vỏ đậu xanh không có Anthranoid

3.2.1.3.Định tính Flavonoid

Cân 10g bột dược liệu cho vào một bình nón dung tích 100ml, thêm 50ml cồn 80°; đun cách thủy 10 phút, lọc nóng qua giấy lọc gấp nếp lấy dịch lọc làm các phản ứng

- Phản ứng Cyanidin

Cho vào 2 ống nghiệm nhỏ mỗi ống 1ml dịch chiết cồn Ống 1 thêm một ít bột Mg kim loại Thêm 3-5 giọt HCl đậm đặc Đun cách thủy, đợi bọt khí bay ra hết So sánh với ống 2 (ống chứng) thấy dung dịch chuyển từ vàng sang đỏ (+)

- Phản ứng với hơi NH 3

Nhỏ một giọt dịch chiết cồn lên giấy lọc Hơ khô rồi để miếng giấy lọc lên miệng lọ NH3 đã mở nút thấy màu vàng của vết dịch chiết tăng lên (+)

- Phản ứng với dung dịch kiềm loãng

Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch chiết cồn, thêm vài giọt NaOH 10% thấy xuất hiện tủa vàng Thêm 1ml nước cất tủa tan và màu vàng của dịch chiết tăng lên (+)

- Phản ứng với ion kim loại nặng

Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch chiết cồn Thêm vài giọt FeCl3 5% thấy có tủa màu xanh đen (+)

- Định tính Anthocyan

Cho vào ống nghiệm lớn 5g bột Vỏ đậu xanh và 10 ml nước Ðun sôi trong 5 phút Gạn lấy dịch chiết cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 1ml

Ống 1: thêm vài giọt HCl 10%, không thấy xuất hiện màu đỏ

Ống 2: thêm vài giọt NaOH 10%, không thấy xuất hiện màu xanh

Kết luận: Vỏ đậu xanh có Flavonoid nhưng không có Anthocyan

3.2.1.4 Định tính Saponin

Quan sát hiện tượng tạo bọt:

Cho 10g bột dược liệu vào bình nón, thêm 20ml nước cất, đun sôi nhẹ, lọc nóng Dịch lọc cho vào ống nghiệm to Lắc mạnh trong 5 phút theo chiều dọc ống nghiệm, để yên, không thấy xuất hiện cột bọt (-)

Kết luận: Vỏ đậu xanh không có Saponin

3.2.1.5 Định tính Glycosid tim

Cho 10g bột dược liệu vào bình nón dung tích 250ml, thêm 100ml ethanol 25%, lắc đều, ngâm qua đêm Gạn lấy dịch chiết vào cốc 100 ml, thêm 3ml chì acetate 30%, khuấy đều, lọc qua giấy lọc lấy dịch Nhỏ vài giọt dịch lọc đầu tiên vào ống nghiệm, thêm vào 1 giọt chì acetate 30%, nếu xuất hiện tủa thì ngừng lọc, thêm tiếp chì acetate 30% vào dịch chiết, lọc lại và tiếp tục thử cho đến khi dịch lọc không còn tủa với chì acetate 30% nữa

Chuyển dịch vào bình gạn dung tích 200ml, chiết 2 lần mỗi lần 10 ml hỗn hợp chloroform : Ethanol (4:1), gạn lớp chloroform vào cốc có mỏ đã sấy khô, nếu còn lẫn nước thì lọc lại qua một lớp bông, chia đều dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ đánh số từ 1 đến 3 đã sấy khô, cô cách thủy đến cắn và làm các phản ứng định tính

- Phản ứng Baljet

Cho vào ống nghiệm chứa cắn 0,5 ml ethanol 90%, lắc đều cho cắn được hoà tan hết, thêm thuốc thử Baljet mới pha (gồm 1 phần dung dịch acid picric 1% và 9 phần dung dịch NaOH10%) cho đến khi xuất hiện màu đỏ

cam.So sánh với ống chứng là ống không có cắn Glycosid tim thấy màu của ống thử và ống chứng giống nhau (-)

- Phản ứng Legal

Cho vào ống nghiệm chứa cắn 1ml ethanol 90%, lắc đều cho tan hết cắn rồi thêm 5 giọt dung dịch Natri nitroprussiat 1% và 2 giọt dung dịch NaOH 10%, lắc đều, không thấy xuất hiện màu đỏ (-)

- Phản ứng Keller - Kiliani

Cho vào ống nghiệm chứa cắn 0,5ml ethanol 90% Lắc đều cho tan hết cắn Thêm vài giọt dung dịch sắt (III) clorid 5% pha trong acid acetic Lắc đều Nghiêng ống 450 Cho từ từ theo thành ống 0,5ml acid sulphuric đặc, tránh xáo trộn chất lỏng trong ống Quan sát thấy ở mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng xuất hiện một vòng tím đỏ, lớp chất lỏng phía dưới có màu hồng,lớp trên có màu xanh lá (+)

Kết luận: Vỏ đậu xanh không có glycosid tim

3.2.1.6.Định tính Tanin

Cho vào ống nghiệm lớn 5g bột dược liệu, thêm 20ml nước cất, đun sôi trực tiếp 5 phút Lọc qua giấy lọc gấp nếp Lấy dịch lọc làm các phản ứng sau:

Ống 1: 1ml dịch lọc thêm vài giọt dung dịch FeCl 5% ,thấy xuất hiện tủa xanh đen (+)

Ống 2: 1ml dịch lọc thêm vài giọt dung dịch dung dịch chì acetat 10% ,thấy xuất hiện tủa bông (+)

Ống 3: 1ml dịch lọc thêm 1ml dung dịch gelatin 1% ,thấy tủa bông trắng(+)

Kết luận: Vỏ đậu xanh có chứa tanin

3.2.1.7 Định tính Coumarin

Cho 10g bột dược liệu vào bình nón có dung tích 50ml, thêm 20ml ethanol 90% Đun cách thuỷ sôi 5 phút Lọc nóng Dịch lọc thu được dùng để làm các phản ứng sau:

- Phản ứng mở đóng vòng lacton:

Cho vào 2 ống nghiệm nhỏ mỗi ống 1ml dịch chiết:

Ống 1: Thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10%

Ống 2: Để nguyên

Đun cả hai ống nghiệm đến sôi, để nguội Quan sát thấy:

Ống 1: Dung dịch có tủa vàng và màu vàng

Ống 2: Không thay đổi

Thêm vào cả hai ống nghiệm, mỗi ống 2ml nước cất Lắc đều

Quan sát thấy thấy ở ống 1 tủa tan một phần, ở ống 2 không thấy xuất hiện tủa (-)

-Quan sát huỳnh quang dưới ánh sáng tử ngoại

Giỏ vài giọt dịch chiết lên giấy lọc Giỏ tiếp vài giọt dung dịch NaOH 5% Sấy nhẹ Che một nửa vết trên giấy lọc bằng một miếng kim loại (chìa khoá, đồng xu v.v ) rồi chiếu tia tử ngoại trong một vài phút Bỏ miếng kim loại ra, quan sát tiếp dưới đèn tử ngoại không thấy có sự khác biệt giữa hai vết (-)

Kết luận: Vỏ đậu xanh không có Coumarin

3.2.1.8 Định tính chất béo