Những phương phá tiếp cận hiện đại gen trị liệu ung thư

PGS.TS NGUYN VN KèNH, PGS.TS TRN THY HNH, BS NGUYN TUN ANH NHNG PHNG PHP TIP CN HIN I GEN TR LIU UNG TH NH XUT BN Y HC H NI - 2011 LI GII THIU Nhng nm gn õy gen tr liu ó c ng dng thnh cụng iu tr cỏc bnh Alzheimer, bnh Parkinson, ỏi thỏo ng, lupus ban h thng, viờm a khp dng thp, cỏc bnh tim mch, bnh v mỏu, viờm gan virus B, C, HIV/AIDS v c bit l bnh ung th - nhng cn bnh ny trc õy c lit kờ l bnh nan y vụ phng cu cha S i ca gen tr liu rừ rng l mt cụng c ca Y hc th k 21, nú thc thi c nhng cụng vic m nhng phng phỏp truyn thng khỏc khụng th thc hin c iu ỏng chỳ ý l gen tr liu ung th chim ti 70% cỏc quy trỡnh gen tr liu Ti Hoa K, mt t hp gm nhiu c s gen tr liu ung th tri khp t nc ó c thit lp thc hin th nghim lõm sng cỏc bnh ung th Cũn ti Trung Quc t nc cú s dõn ụng nht th gii cng l nc i u lnh vc gen tr liu, hng nghỡn bnh nhõn ung th ó c iu tr bng phng phỏp ny Cỏc nc chõu u nh Phỏp, Anh, Tõy Ban Nha, Cng hũa liờn bang c v chõu , ngoi Trung Quc, thỡ cỏc nc khỏc nh Hn Quc, Nht Bn cng cú nhng bc tin nhy vt Vi Vit Nam, gen tr liu cũn rt non tr nhng ó cú nhng thnh tớch rt ỏng khớch l iu tr cỏc bnh tim mch, ung th mỏu bng cụng ngh t bo gc Tuy nhiờn, thi i hin nay, cỏc phng phỏp tip cn úng vai trũ ht sc quan trng i vi s thnh bi ca tr liu ung th, vỡ vy cỏc tỏc gi: PGS.TS Nguyn Vn Kỡnh (Ch biờn), PGS.TS Trn Thỳy Hnh (nguyờn Giỏm c Bnh vin Bch Mai) v BS Nguyn Tun Anh - nhng ngi sỏng lp Trung tõm Gen tr liu Bch Mai ó c gng biờn son cun sỏch Nhng phng phỏp tip cn hin i gen tr liu ung th nhm truyn ti ti bn c nhng thụng tin cp nht nht lnh vc ny vi hy vng giỳp cỏc nh lõm sng la chn c nhng phng phỏp ti u nht cho tng iu kin c th, c bit l iu tr ung th vỳ, ung th bung trng, ung th vựng u - c, ung th phi, ung th ty, ung th ng tiờu húa, ung th tuyn tin lit, u nóo, u thn kinh m v.v Tuy vy, cun sỏch cng thc s ớch li i vi cỏc sinh viờn Y, Dc, cỏc nghiờn cu sinh v tt c nhng quan tõm ti gen tr liu núi chung v gen tr liu ung th núi riờng Hy vng rng cun sỏch s mang li cho bn c nhiu iu b ớch Nh xut bn Y hc trõn trng gii thiu cun sỏch Nhng phng phỏp tip cn hin i gen tr liu ung th ti cỏc bn c gi NH XUT BN Y HC LI NểI U Hng nm th gii cú trờn 10 triu trng hp mc mi bnh ung th, nm 2005 ó cú 7, triu ngi cht vỡ cn bnh ny Cng theo c tớnh ca T chc Y t th gii (WHO) n 2020 hng nm s cú 15 triu trng hp mc mi v 10 triu ngi s cht vỡ ung th Theo thng kờ ca ngnh ung th Vit Nam, c tớnh c nc mi nm cú khong 150.000 trng hp mc mi v 75.000 trng hp t vong ung th Mt cỏch hin nhiờn, ung th l mt ỏm nh vi c cng ng, v nhim v ca cỏc nh khoa hc lnh vc phũng v iu tr bnh ung th rt nng n Trong thp k qua vi s n lc vt bc ca cỏc nh khoa hc, nhiu cỏch tip cn mi hiu qu hn, tinh t hn iu tr ung th ó c thit lp Hn na, ung th dự bt c nguyờn nhõn no cui cựng u dn n s bin i gen v gen tr liu tt nhiờn l mt la chn thớch hp Nhng thnh qu to ln t c sinh hc phõn t cng to iu kin cho cỏc nh khoa hc thit k c cỏc mụ hỡnh tr liu hin i, u vit hn, hiu ng hn Cụng ngh antisense, ribozym, triplex, aptamer, RNAi v microRNA ó c ng dng rng rói tr liu ung th (Chng IV v Chng V) Vic thay th gen c ch ung th p53 (Chng III), tiờm chng vi c s t bo tua (Dendritic cell) (Chng IX), tr liu dch vi cỏc cytokin, chemokine, cỏc ligand /receptor ng kớch thớch dch, cỏc khỏng th n dũng (Chng VIII) ó tr thnh thng quy ti nhiu c c nghiờn cu v iu tr ung th Cụng ngh tr liu vi gen t sỏt (suicide gene) (Chng VI) cú hoc khụng kt hp vi gen cytokin hay vi cm th bc x ó em li nhng thnh qu bt ng cho cỏc bnh nhõn ung th Nhng ci tin nhm nõng cao tớnh chn lc ca tr liu húa hc ung th i vi cỏc u c da trờn c s ớch cỏc t bo ung th vi cng hp dch húa hc, hay tr liu vi tin thuc /enzym nh hng bi khỏng th hoc tr liu vi tin thuc /enzym nh hng bi gen (Chng VII) Nh vy mt tin thuc ớt c c hot húa s tr nờn rt c v tiờu dit c cỏc t bo ung th S tng trng u cũn ph thuc vo s to mch v s cht theo chng trỡnh ca t bo (apoptosis), vỡ th cỏc mụ hỡnh gen tr liu khỏng s to mch v cm ng apoptosis cng ó c thit k v ng dng rng rói cỏc th nghim tin lõm sng v lõm sng (Chng XI v Chng XII) Di cn ung th l mt gỏnh nng i vi ngi bnh v l nguyờn nhõn chớnh dn n t vong Vic phỏt hin gen khỏng di cn E1A, p202 v ng dng nú iu tr ung th l mt tin b ỏng k ca gen tr liu (Chng XIII) Nhm giỳp cỏc t bo lnh vụ hi vi cỏc tỏc ng ca thuc húa tr liu, vic ng dng cỏc h thng gen khỏng thuc nhm bo v in vivo l mt bc tin quan trng tr liu ung th, m cỏc t bo ung th phi hng chu mt hiu ng c t bo khng khip t thuc tr liu thỡ cỏc t bo lnh li t vụ s vỡ ó c khỏng thuc, rt cuc ch cỏc t bo ung th b cht cũn cỏc t bo lnh thỡ nguyờn (Chng XIV) Vi s tin b khụng ngng ca khoa hc cụng ngh, cỏc mụ hỡnh gen tr liu ung th c thit k ngy cng nhiu, to iu kin cho cỏc nh khoa hc la chn c cỏc phng phỏp thớch hp nht Tuy nhiờn, õy khụng phi l mt n gin, s thnh bi ca quỏ trỡnh iu tr ph thuc hon ton vo toan tớnh ca thy thuc Ch nhng a c s la chn thớch hp vi tng trng hp c th thỡ mi thnh cụng tr liu, c bit l tr liu ung th, ỳng nh nhn nh ca t chc Y t th gii (WHO) nm 2006: Trc ung th c coi l bnh vụ phng cu cha, nhng hin ung th khụng nhng cú th phũng trỏnh m cũn cú th cu cha c Chỳng ta cn phi nhn mnh rng cỏc nguyờn lý ca iu tr ung th l s tớch hp, h thng húa v cỏ th húa iu ú cú ngha l ngi thy thuc khụng ch n thun l ỏp dng mt cỏch mỏy múc quy trỡnh ny hay quy trỡnh m phi l mt chin lc gia a c cỏc u phỏp hp lý Cú th ch l gen tr liu thay th, sa cha gen v cng cú th l s kt hp c gen tr liu vi húa tr, x tr, dch tr liu v.v Cun sỏch Nhng phng phỏp tip cn hin i gen tr liu ung th bao gm 14 chng, chng u cp ti nhng nguyờn nhõn gõy ung th v h gen ung th khỏi quỏt nhng nột chớnh v sinh hc phõn t ung th Mi hai chng cũn li cp y cỏc cỏch tip cn hin i nht gen tr liu ung th hin Sỏch ch s dng nhng ti liu xut bn t 2005 v liờn tc c cp nht cho n tn thi im xut bn - 2011 Cun sỏch ny dnh cho cỏc bỏc s lõm sng, nhiờn nú cng b ớch cho cỏc nh nghiờn cu Y, Sinh, Dc hc, cỏc nghiờn cu sinh ngnh Cụng ngh Sinh hc, cỏc sinh viờn Y, Dc v cng b ớch cho tt c nhng quan tõm ti lnh vc gen tr liu, c bit gen tr liu ung th hon tt cun sỏch ny chỳng tụi xin trõn trng cỏm n cỏc nh khoa hc nc v quc t ó ng viờn, khớch l v cung cp cỏc ti liu quý bỏu chỳng tụi hon thnh ni dung cun sỏch Chỳng tụi xin trõn trng cỏm n Nh xut bn Y hc ó to iu kin tt nht cun sỏch sm n tay c gi Vỡ thi gian biờn son quỏ gp, ni dung cun sỏch liờn quan ti nhiu lnh vc khoa hc mi m thuc nhiu chuyờn ngnh khỏc nhau, hn na trỡnh ca cỏc tỏc gi cú hn nờn nhng sai sút sỏch l khụng th trỏnh Chỳng tụi mong nhn c s úng gúp t cỏc c gi, cỏc nh khoa hc v cỏc ng nghip Mt ln na chỳng tụi xin trõn trng cỏm n H Ni, ngy 19 thỏng nm 2011 Cỏc tỏc gi Chng I C S DI TRUYN CA UNG TH Trong mt s trng hp ngi ta cú th núi ung th l mt bnh di truyn, ú cỏc t bo ỏc tớnh ó tri qua quỏ trỡnh t bin v cú nhng thay i cú tớnh cht biu sinh (epigenic) trỡ mt kiu hỡnh bin np (transformed phenotype) c nuụi cy hoc tiờm vo cỏc ng vt thớ nghim ó dung np dch Tuy nhiờn, hu ht cỏc bin c di truyn cỏc u li l soma (tc l khụng di truyn), nú c mang n t mụi trng hoc ngu nhiờn no ú v cỏc nguyờn nhõn di truyn ó c xỏc nh (thng gi l nguyờn nhõn di truyn) ch chim mt t l rt nh tt c cỏc ung th c bit, cỏc gen t bin liờn quan ti quỏ trỡnh ung th li nm lp: lp gen kim ch cỏc u v lp gen gõy ung th Vic phõn bit gia cỏc nguyờn nhõn di truyn hay mụi trng cú th d dng thy c nu nh cỏc hi chng ung th cỏc tỏc ng ó c phi by, chng hn nh vic hỳt thuc lỏ hay virus papilloma (virus gõy cỏc bnh u nhỳ) l cỏc tỏc nhõn gõy ri ro cao Trong hu ht cỏc ung th thng gp thỡ khụng phi nh vy v chỳng c xem xột nh l cỏc bnh phc gõy nờn bi s tng tỏc gia cỏc yu t di truyn v mụi trng Cỏc hiu ng di truyn s dn n ung th cú tớnh cht gia ỡnh Tuy nhiờn, lp ung th ny cng cú th l mụi trng hoc li sng v vic tng cỏc ri ro cú tớnh cht gia ỡnh thỡ khụng th núi ú l di truyn hay mụi trng Chỳng tụi s cp di õy nhng nguyờn nhõn gõy ung th v cỏc c ch phõn t c trng nht theo cỏch tip cn ca gen tr liờu D nhiờn, vic nõng cao hiu bit v nguyờn nhõn gõy ung th s rt hu ớch i vi cỏc nh khoa hc, vi cỏc nh lõm sng cng nh vi vic xỏc nh cỏc ch s cú tớnh cht d phũng ung th C S DI TRUYN CA SINH UNG TH Mt cỏch ngn gn, ung th cú th c coi nh mt bnh cỏc gen ung th v cỏc t bin cng nh nhng bin i biu sinh (khim khuyt methyl húa) cỏc gen kỡm ch u Thụng thng nht cú dng t bin, mt dng cú th lm mt ngha -[missense] (lm bin i amino acid), thay i khung c v mt dng vụ ngha -[nonsense] (do s thay th nucleotid to nờn codon kt thỳc, lm ngng quỏ trỡnh dch mó v tng hp protein, quỏ trỡnh ny cũn c gi l t bin kt thỳc chui) Tuy vy, ụi cỏc t bin khụng tỏc ng ti trỡnh t amino acid nhng li nh hng khỏ nhiu ti promoter hoc cỏc v trớ ghộp ni Nhng t bin trỡnh t DNA khụng cú liờn h trc tip ti kiu hỡnh nhng li gi vai trũ quan trng v s a hỡnh Cú nhiu c ch gõy nờn t bin, bao gm loi b cỏc on ln hoc nh DNA, o on, chuyn v, to vũng dn ti ct b trỡnh t v.v Nguyờn nhõn u cho cỏc c ch ny l bc x cc tớm i vi cỏc cht húa hc v cỏc gen ung th ca virus Nhng vi hu ht cỏc trng hp ung th thỡ vic xỏc nh nguyờn nhõn rt s si Cng cú kh nng l, thc phm v cỏc nguyờn nhõn thuc mụi trng gi vai trũ ch cht Tuy nhiờn, mi liờn h gia nguyờn nhõn v hiu ng thỡ rt khú chng minh mt cỏch rnh mch, bi vỡ t lỳc u ca mt u ti lỳc cú biu hin lõm sng l mt khong thi gian rt di Bõy gi chỳng ta hóy bn lun v cỏc t bin di truyn ó c xỏc nh l nguyờn nhõn gõy ung th Ngi ta ó xỏc nh c rng, nhng bin i di truyn rt quan trng i vi sinh ung th (cú th nhn din nh nhng bin i dũng cỏc u ỏc tớnh), nú lm bt hot cỏc gen kỡm ch u Tuy ó cú hng chc thnh viờn gõy ung th c xỏc nh mt cỏch rừ rng nhng cũn hng trm thnh viờn khỏc cha c tng tn Mt vớ d kinh in v gen ung th l RAS, gen ny u c xỏc nh l mt gen hot húa mnh quỏ trỡnh cm ng to u Nhng sau ny nhng t bin ca RAS li thng thy rt nhiu dng ung th Hu ht cỏc sn phm protein ca gen ung th u liờn quan ti s truyn tớn hiu v iu hũa tng trng Cn phi lu ý rng ch cn mt t bin hot húa mt alen l ó gõy nhng hu qu nghiờm trng Chc nng bỡnh thng ca cỏc protein c mó bi cỏc gen kim ch u thng liờn quan mt thit ti chc nng iu hũa hay qun gia (housekeeping) quan trng i vi s ton cỏc chc nng t bo bao gm phõn chia v cht theo chng trỡnh ca t bo Vỡ vy, cỏc chc ny b mt s to iu kin thun li cho s tin trin ỏc tớnh Trong hu ht cỏc trng hp, c alen c ch u u b mt i vy m lm mt chc nng ca cỏc sn phm protein Thng thỡ mt alen b mt t bin cc b; cũn alen thỡ b mt loi b ln -[large deletion] (mt tớnh d hp t) Cỏc gen kim ch u kinh in l p53 v APC (adenomatous polyposis coli) Cỏc gen ny cú thay i rt ln v chc nng liờn quan ti kim soỏt chu k sng cng nh cht theo chng trỡnh ca t bo Cỏc t bin ca p53 c xỏc nh hn phõn na cỏc trng hp ung th APC u c xỏc nh nh l mt gen cha ng cỏc t bin mm nhng bnh nhõn a u tuyn (adenomatous polyposis) - mt bnh di truyn dn ti vic hỡnh thnh hng trm polyp rut nu khụng c iu tr, sau ú s tr thnh ỏc tớnh v l nguyờn nhõn gõy cht la tui rt tr APC cú nhiu chc nng liờn quan ti s truyn tớn hiu v kt dớnh t bo APC l mt vớ d rt hay vỡ lý do: th nht, õy l mt vớ d hu ớch cho vic khỏm phỏ c s phõn t mt bnh thụng thng nhng li trờn mt bnh di truyn him gp Mc du APC l him gp, nhng nhng t bin ca APC (hoc cỏc thnh viờn ng truyn tớn hiu ca nú) li liờn tip phỏt hin thy tt c cỏc ung th kt - trc trng Th hai l, theo cỏc cụng trỡnh nghiờn cu ca Bert Vogelstein v cng s John Hopkins, Baltimore v APC v c s di truyn ca ung th kt - trc trng li khỏm phỏ c mt khớa cnh khỏc cú th l ph bin nhiu dũng ỏc tớnh Rừ rng l s bt hot ca APC cú th l bc u hay l giai on sm nhiu trng hp ung th kt - trc trng, nhng ú khụng phi l nhng bin i nht thy cỏc u ó phỏt trin n giai on cao Thay vo ú, s sinh ung th thng l mt quỏ trỡnh xy vi nhiu bc, ú nhng t bin tip theo li to thun li cho tng sinh v lm gim nhy cm i vi iu hũa tng trng (Hỡnh 1.1) ỏng tic l tt c t bin xy li u cú li i vi dũng ỏc tớnh Nhiu trng hp ó to cỏc di dũng (subclone) vi kh nng sng kộm hoc d b phỏt hin bi h dch Tuy nhiờn cng cú nhng bin i li cú li cho tng trng, vy m ngi ta phỏt hin c cỏc sn phm cui ca quỏ trỡnh nhiu bc s sinh ung th, m hu ht cỏc trng hp u ó xõm ln rng v cú th ó di cn Nhng gen trỡ cỏc t bin u cho phộp quỏ trỡnh ung th tip tc c gi l gen gỏc cng (gatekeeper gene) (gen - Hỡnh 1.1) Theo lý thuyt thỡ mi dng t bo u cú vũng iu hũa tng trng ch cht: vic lm bt hot chỳng l iu cn thit i vi sinh ung th APC ó tng c coi l ngi gỏc cng i vi biu mụ kt - trc trng Mt lp khỏc ca gen kim ch u l gen lõm thi (caretaker gene): gen ny cú th to thun li cho cỏc quỏ trỡnh sinh ung th a bc nú cho phộp tớch t nhanh cỏc t bin xa hn Nhng gen ny thng liờn quan ti sa cha DNA v trỡ tớnh ton ca h gen i vi cỏc nh tr liu gen, quan trng l cn phi tớnh xem cn bao nhiờu bc quỏ trỡnh ngn chn can thip mt cỏch hiu qu Hin gi, cõu tr li chớnh xỏc cũn b ng Cú l kh d nht l hiu ớnh mt khim khuyt n, chng hn nh thay th mt gen kim ch ung th b khim khuyt hoc lm bt hot mt gen ung th ang hot húa quỏ mc Lm c nh vy ó l i vi kim soỏt quỏ trỡnh ỏc tớnh húa Chng hn nh, p53 biu l cỏc t bo ung th cú p53 t bin thỡ cỏc t bo ny s tri qua apoptosis v trờn thc t nú cú th lm cho cỏc t bo ung th k cn cng cú hnh ng tng t Hinh 1.1 Tớnh cht a bc ca ung th Nhng t bin tớch t dn cỏc gen kim ch u v gen ung th s lm tng kh nng xõm ln ca u cng nh s di cn ca chỳng Cựng vi tng v kớch thc, cng dn dn xut hin cỏc triu chng v biu hin lõm sng Hu ht cỏc t chc v cỏc b phn ca c th u cú kh nng d phũng cao, vỡ th nờn cỏc triu chng thng xut hin chm hn so vi tin trin ca u (Theo Akseli Hemminki & Kari Hemminki (2005) Cancer Gene Therapy Human Press Totowwa, New Jersey) Hỡnh 1.2 Nhng tỏc nhõn thụng thng lm ung th tin trin (Theo Akseli Hemminki & Kari Hemminki (2005), Cancer Gene Therapy Human Press Totowwa, New Jersey) Bi vy, kiu hỡnh ỏc tớnh cú th c so sỏnh nh mt ngụi nh cú nhiu thnh viờn, nu loi b i bt k thnh viờn no cng gõy nờn s sp ton b cu trỳc ca nú Khụng cú gỡ ngc nhiờn chỳng ta xem xột cỏc phng thc bo v khỏc ca c th ngi khỏng li cỏc t bo ỏc tớnh Cng cn phi lu ý rng, cỏc t bo ỏc tớnh cú th ang lu hnh cỏc cỏ th khe mnh cha h phỏt trin ung th Tuy nhiờn, bnh ung th d phỏt trin nhng ngi tui cao, m cỏc c ch bo v ca c th ó tr nờn chm chp Nhng cú l phi tri qua nhiu thp k thỡ ung th mi cú th cú c mt t hp cõn bng tinh t cỏc c trng cho phộp nú trỡ tng trng m khụng b phỏt hin bi h dch S lng cỏc gen c xỏc nh l gen kim ch u hay gen ung th ngy cng nhiu Cỏc sn phm protein tng ng dng nh cú s bin i ln v chc nng Tuy nhiờn, cỏc bin i di truyn liờn quan ti ung th thng ri vo loi sau õy (Hỡnh 1.2): (1) kt dớnh lm lc (mt c ch tip xỳc), (2) ỏp ng tng quỏ mc hoc phi sinh lý i vi cỏc tớn hiu thỳc y tng trng v gim ỏp ng vi cỏc tớn hiu iu hũa tng trng, (3) tht bi quỏ trỡnh cht theo chng trỡnh ca t bo cú s hy hoi v mt di truyn (mt chc nng trm kim soỏt checkpoint chu k t bo), (4) bt t húa (nh hot tớnh ca telomerase), (5) trỏnh nộ c s bo v ca h dch v (6) cỏc yu t thỳc y tõn to mch mỏu (neovasculogenesis) (cỏc u phỏt trin nhanh nờn cn phi c cung cp nhiu oxy v cỏc cht dinh dng) iu quan trng l tt c cỏc hỡnh nh ny khỏc vi cỏc c trng thy hu ht cỏc t bo khụng b ỏc tớnh, vỡ th chỳng ta mi cú th can thip c PHN LOI UNG TH Mc du hu ht cỏc trng hp ung th u cú tớnh cht soma, tc l khụng cú cỏc thnh phn c trng gia ỡnh, nhng cỏc nghiờn cu v hi chng di truyn ngy ó cho phộp chỳng ta hiu ung th nh l mt bnh di truyn Tuy nhiờn, cng cha cú lý no m bo chc chn rng iu ny s ỳng tng lai, bi vy chỳng ta ch bn lun õy mt cỏch tt v tớnh di truyn ca ung th Cú hai cụng trỡnh nghiờn cu cung cp cho chỳng ta nhng hiu bit v nhng thnh phn cú tớnh cht gia ỡnh ca cỏc ung th thng gp Cụng trỡnh th nht s dng thit k cp ụi (twin) kinh in, tc l so sỏnh s tng quan ca cp ụi ung th n hp t (monozygotic) v nh hp hp t (dizygotic) t nc Bc u Trong mụ hỡnh ny, chc chn l c dng cp ụi u chu cỏc hiu ng nh t mụi trng; cp ụi n hp t c xỏc nh l tng ng di truyn, cũn cp ụi nh hp t thỡ ging nh trng hp cỏc anh ch em rut, ch chia x trung bỡnh 50% s gen Cụng trỡnh th da trờn cỏc d liu v ung th cú tớnh cht gia ỡnh trờn ton lónh th Thy in vi triu gia ỡnh Ngi ta so sỏnh mi tng quan ung th gia tt c cỏc thnh viờn gia ỡnh vi cựng mt mu thng kờ nh ó c s dng mụ hỡnh nghiờn cu cp ụi Cỏc s liu thu c cú ý ngha thng kờ cao hn nhiu so vi mụ hỡnh nghiờn cu cp ụi bi vỡ ton b dõn s Thy in vi triu u ó c xem xột mt cỏch k lng Mt khỏc phn ln cỏc ung th liờn quan ti gii tớnh c bit li khụng th ỏnh giỏ c theo mụ hỡnh ny Nhng kt qu ca c mụ hỡnh nghiờn cu c trỡnh by Bng 1.1 Bng 1.1 Hiu ng di truyn v mt s gen liờn quan T l ca cỏc bin i gúp phn to nờn cỏc hiu ng di truyn V trớ ung th Theo nghiờn cu cp ụi D dy Kt - trc trng 0, 28 0, 35 a Theo nghiờn cu Gen tỏc ng cú t /c gia ỡnh 0, 01 a 0, 13 a E-cadherin Sa cha ghộp ụi khụng ỳng, APC, LKB1 Ty 0, 36 Phi 0, 26 0, 08 a Gen thõm nhp chuyn húa thp Vỳ 0, 27 0, 25 a BRCA1/2, ATM a Gen ỏp ng dch? a C t cung 0, 22 Mụ t cung CDKN2A Sa cha ghộp ụi khụng ỳng, PTEN Bung trng 0, 22 BRCA1/2 Sa cha ghộp ụi khụng ỳng a Tuyn tin lit 0, 42 Bng quang 0, 31 0,07 a Gen thõm nhp chuyn húa thp Locus ng c viờn Bnh bch cu 0, 21 0, 09 a ATM, helicase Ghi chỳ: Khong tin cy 95%, tc l cú ý ngha thng kờ (theo cỏc s liu t cỏc nghiờn cu cp ụi Bc u v cỏc nghiờn cu cú tớnh cht gia ỡnh Thy in) i vi ung th d dy, cú 28% l di truyn theo nghiờn cu cp ụi v 1% theo nghiờn cu gia ỡnh Vi cỏc ung th khỏc thỡ cỏc s liu thu c ln lt l 72% v 99% Nguyờn nhõn ca cỏc ung th cng cú th l hon ton cỏc hiu ng ca mụi trng Trong nghiờn cu cp ụi, cỏc ch s di truyn cú ý ngha thng kờ ( tin cy 95%) vi ung th kt - trc trng l 35%, ung th vỳ 27% v ung th tuyn tin lit 42% Cỏc nghiờn cu v ch s gia ỡnh cho cỏc s tng ng vi ung th vỳ, nhng vi ung th kt - trc trng thỡ thp hn Ch s di truyn ung th c t cung l 22%, nhng vi ung th phi, ung th bng quang v cỏc bnh bch cu thỡ thp hn 10% Tuy nhiờn, mt s ung th thng gp li cú thang di truyn rt cao so vi cỏc quan sỏt so sỏnh cỏc ri ro cú tớnh cht gia ỡnh gia nhng ngi h hng cp th nht Nu c tớnh v ung th kt - trc trng, ung th vỳ v ung th tuyn tin lit vi cỏc s 27-42% thỡ rừ rng cũn mt l hng rt ln s hiu bit ca chỳng ta v c s di truyn cỏc u tõn sinh Mt s gen truyn cỏc ri ro cú tớnh cht gia ỡnh c lit kờ Bng 1.1 Tn s t bin cỏc gen mn cm cao ó c bit rt rừ nh BRCA1 v BRCA2 ung th vỳ v cỏc gen sa cha DNA ung th kt - trc trng khụng polyp c di truyn l rt thp i vi ung th tuyn tin lit, cỏc gen ng c ó c xỏc nh bn nhng li cha xỏc nh c cỏc ch s c th Nhng phỏt hin ny chng minh rng cũn nhiu gen khỏc na cha c xỏc nh v cn phi cú thờm cỏc nghiờn cu tip theo CC MU UNG TH Nhng hi chng ung th ó c nghiờn cu k cng nh u nguyờn bo vừng mc, ung th vỳ liờn quan ti BRCA v HNPCC (hereditary nonpolyposis colorectal cancer) tuõn theo mu di truyn Mendel tri vi tn s cao (cỏc vt mang cú kiu gen hp vi kiu hỡnh) Vỡ th gn 50% hu du ca cỏc b m b tỏc ng cú biu hin bnh Tuy nhiờn, nhng hi chng ny l him v tn s gen t bin l 1/1000 (tn s mc bnh l 1/500) hoc nh hn Hi chng ung th BRCA1, BRCA2 v HNPCC thng gp nht i vi tt c ung th vỳ v ung th kt - trc trng cú l l 1-3% Hi chng Bloom, hay mt iu hũa mao mch (ataxia telangiectasia) v khụ da nhim sc t (xeroderma pigmentosum) l cỏc vớ d v hi chng ung th Mendel tri Khong 25% chỏu ca cỏc bc cha m cú biu hin triu chng, bao hm c cỏc u Chỳng ta cú th c tớnh tng i d dng t l ca tt c cỏc dng ung th Hi chng n gen thng gõy ri ro cao, v 1% l mt t s tt Hu ht cỏc ung th thng gp u cỏc bin i nhiu gen Theo lý thuyt a giai on v ung th thỡ mt xut hin l kt qu ca rt nhiu t bin mt t bo n Nhng t bin u tiờn xy cỏc t bo bỡnh thng s to nờn mt qun th tin u, tng trng chm Nhng bin i ph kốm theo mt t bo ca qun th tin u l iu kin cn thit to nờn t bo u cú kh nng tng sinh nh mt u ỏc tớnh Nhiu t bin cú th b bin i v nú ph thuc vo cỏc gen v cỏc dng t bo b tỏc ng iu ny cú th l ỳng vi cỏc trng hp sinh u cỏc t bin di truyn t bin gen gỏc cng u cú th to li th cho s tng trng vỡ th m lm tng kớch c ớch (cú rt nhiu t bo khim khuyt s u) cho nhng t bin k tip Theo cỏch tớnh toỏn v t s cỏc t bin, s cỏc t bo gc v vũng i ca cỏc t bo ngi bỡnh thng thỡ iu kin thớch hp cho mt quỏ trỡnh sinh ung th cn phi cú ớt nht t bin, chng hn nh t bin giai on u v ớt nht mt t bin giai on tip theo Khi hai hoc nhiu gen cú liờn quan vi thỡ khú m quan sỏt c ch s di truyn Mendel mt cỏch thun chng, bi vỡ rt cú th cú mt hu du no ú ch c truyn li mt cỏch ớt i b gen bnh ca cha m Vỡ th tht khú m phõn bit qu ny ó chc chn khng nh tớnh kh thi cu vic iu tr ung th vỳ bng gen tr liu p202 ton h thng Khi kim tra cỏc u ó c x lý vi Ad-p202 hoc CMV-p202/SN2 bng cỏc th nghim húa dch t chc ngi ta thy rng mc protein p202 rt tng quan vi phm vi apoptosis cỏc u cỏc mụ hỡnh c xỏc nh bng cỏc th nghim khớa v ỏnh du (nick and labeling) dUTP qua trung gian deoxynucleotid transferase tn u (terminal) lm bin mu uụi ca cỏc mu DNA Quan sỏt ny cng phự hp vi nhng dn liu in vitro l s thõm nhim Ad-p202 s lm cm ng apoptosis Vỡ th, apoptosis cm ng bi p202 cng gúp phn vo hot ng khỏng u in vivo núi chung Ngoi ngi ta cng thy s gim sỳt rt mnh nhiu yu t sinh mch, yu t tng trng ni mch (VEGF) cỏc u vỳ c x lý vi CMV-p202/SN2 hoc Ad-p202 so sỏnh vi cỏc cỏch iu tr i chng Kt qu ny cng phự hp vi quan sỏt trc õy cho thy s biu hin p202 ó lm kim ch s di cn v to mch cỏc u tuyn ty Vỡ th, nhng kt qu trờn li cng khng nh p202 l mt gen tr liu tim nng thớch hp cho gen tr liu ung th vỳ Mụ hỡnh ung th ty Ung th ty l loi ung th hiu chin cao v l nguyờn nhõn hng u gõy t vong ung th ti cỏc nc Phng Tõy Nguy c ca bnh ny c d oỏn nm 1999 l cú 28.000 trng hp mc mi c chn oỏn v hu ht cỏc trng hp u cú th b cht Nguyờn nhõn chớnh l s tiờn oỏn quỏ nghốo nn v bnh nhõn ti khỏm thỡ bnh ó giai on mun Thi gian sng sút trung bỡnh dao ng t n thỏng v t l sng sút nm l di 2% Hin cha cú phng phỏp no iu tr hu hiu loi bnh nguy him ny bi vỡ cỏc phng phỏp iu tr thụng thng nh húa tr v x tr thỡ cng ch t c nhng kt qu rt hn ch Vỡ th cỏc chin lc mi iu tr loi bnh ny l mt nhu cu khn thit Cỏc s liu trc õy cho thy p202 cú kh nng kim ch bin np (c ch tng trng mụi trng thch mm [soft agar]) ca cỏc t bo ung th tuyn ty - Pancreatic cancer cell [Panc-1]) in vitro Cú kh nng l p202 kim ch s sinh u in vivo test hiu ng tr liu ca p202 cỏc mụ hỡnh ghộp ngoi lai ung th ty, cỏc nh khoa hc ó thc hin cỏc thớ nghim sinh u ti chớnh c quan th nghim hoc to di da cỏc mụ hỡnh trờn chut thỡ thy c mụ hỡnh, s sinh u ca cỏc t bo Panc-1 biu hin p202 u gim mnh so vi cỏc t bo ung th ty cha m (parental) c bit mụ hỡnh gõy ung th ti c quan thc nghim orthotopic) thỡ cỏc t bo Panc-1 biu hin p202 khụng nhng cú tn sut to u thp hn m nhng chut cú u li cú t l sng sút cao hn ỏng k so vi nhng chut mang u Panc-1 Nhng kt qu ny ó chng minh rừ rng rng p202 cú hot tớnh khỏng u mt cỏch tim nng in vivo Kim ch di cn ca p202 Khi kim tra s tng trng u ty ngi ta thy 40% chut mang u Panc-1 v 20% chut mang u vec t i chng cú di cn gan Trỏi li khụng cú di cn gan no c phỏt hin chut cú cú cỏc u biu hin p202 Kt qu ny cho thy p202 cú th cú hot tớnh khỏng di cn in vivo test gi thuyt ny in vitro, ngi ta ỏp dng mt thớ nghim bung ụi (double chamber assay) ú cỏc t bo test phỏt hin thy bung phớa trờn, cũn bung phớa ỏy thỡ c lm y vi mụi trng cú cha cht lụi cun húa hc (chemoattractant) laminin Mt mng c lút bi matrigel dựng tỏch bit gia bung dch chuyn t bung trờn xung bung di, cỏc t bo phi vt qua cỏc hng ro (tc l phi kin to li khung mng c bn) bng cỏch sn xut cỏc protease tit nh MMP trc xuyờn qua cỏc l trờn mng Vỡ th thớ nghim ny dng nh l mụ phng li quỏ trỡnh di cn v nhiu t bo ó phỏt hin thy bung di, vy rừ rng l cỏc t bo test cú tim nng di cn Da trờn quy lut ny ngi ta thy rng cỏc t bo biu hin p202 ớt cú kh nng thm nhp vo mng so vi cỏc t bo Panc-1 cha m Quan sỏt in vitro ny cng phự hp vi nhng dn liu in vivo v ng h cho gi thuyt p202 kim ch di cn Cng ging nh hot tớnh khỏng di cn ca p202, cỏc nh khoa hc cng phỏt hin hot tớnh ca MMP-2, mt promoter di cn cng gim i cỏc t bo Panc-1 biu hin p202 Kim ch s to mch ca p202 Cỏc ti liu ó nờu rừ s tng trng v di cn ca u ũi hi phi cú s tng trng liờn tc cỏc mch mỏu mi kim tra xa hn na hot tớnh khỏng u qua trung gian p202 cỏc u tuyn ty ngi ta phi phõn tớch s hỡnh thnh cỏc mch mỏu mi cỏc u Panc-1 v cỏc u biu hin p202 Cỏc nh khoa hc phỏt hin rng nhiu mch mỏu gim i ỏng k u biu hin p202 so sỏnh vi u Panc-1 Phự hp vi gim s to mch, cỏc nh khoa hc phõn tớch húa dch t chc cng phỏt hin rng s biu hin ca cỏc yu t to mch nh interleukin (IL-8) v VEGF cng gim i cỏc u cú biu hin p202 Vỡ p202 nhỡn chung c hiu l mt cht iu hũa õm s phiờn mó nờn phi test xem cú s kim ch ca protein Il-8 hay VEGF u p202 hay khụng (vỡ p202 kim ch s phiờn mó) Cỏc nh khoa hc cng lm thớ nghim vi vic ng thõm chuyn cỏc vec t biu hin p202 cựng vi luciferase c hng dn bi promoter IL-8 hay VEGF vo cỏc t bo Panc - Tht thỳ v phỏt hin rng s thõm chuyn p202 ó gõy c ch hot tớnh ca c promoter IL-8 v VEGF Vỡ th quan sỏt ny ó chng t c rng p202 cú gõy kim ch biu hin IL-8 v VEGF mc phiờn mó Tp hp cỏc dn liu thu c cú th khng nh c s biu hin p202 cú liờn quan ti gim to mch v vỡ th gúp phn vo lm gim tim nng tng trng v di cn ca cỏc u biu hin p202 Phõn phi p202/liposom kim ch tng trng u mụ hỡnh ghộp ngoi lai ung th ty test hiu ng tr liu ca vic x lý vi p202 mụ hỡnh gen tr liu tin lõm sng, cỏc nh khoa hc ó x lý cỏc u Panc - di da bng cỏch tiờm thng vo u CMV - p202 vi mt h thng chuyn gen phi virus SN2 Cỏc nh khoa hc chng minh rng vic x lý vi CMV - p202/SN2 ó lm c ch ỏng k s tng trng u so sỏnh vi cỏc x lý i chng Kim tra sinh thit u bng phng phỏp húa dch t chc ngi ta thy mc biu hin protein p202 rt tng quan vi phm vi apoptosis cỏc u c x lý vi CMV p202/liposom Nh vy li mt ln na cho thy cú s phự hp vi ý kin cho rng apoptosis qua trung gian p202 cng gúp phn vo hot tớnh khỏng u núi chung Kt qu ny ó cung cp c s khoa hc cho cỏc kho sỏt xa hn vi vic ỏp dng gen tr liu c s p202 iu tr ung th ty NH HNG TNG LAI Trong chng ny chỳng ta ó túm lc nhng phỏt hin liờn quan ti s kim ch di cn bi gen liu phỏp l E1A v p202 C gen ny u cú tim nng kim ch sinh u, di cn v to mch i vi E1A, cỏc dn liu s b thu c cỏc TNLS pha II l rt khớch l C E1A v p202 u lm cho cỏc TB ung th nhy cm vi apoptosis c cm ng bi TNF- hoc chiu x tia v dn n tng cng apoptosis Nhng dn liu ny ó nờu c nhng lý cn phi phỏt trin cỏc tr liu phi hp E1A (hoc p202) vi TNF- (hoc chiu x tia ) cú c hiu ng tr liu tt hn so vi vic s dng mt tỏc nhõn n l Cú kh nng l E1A hoc p202 kt hp vi cỏc tỏc nhõn húa tr s lm hot húa NF - kB cú th lm tng hiu lc tiờu dit u Hn na, vỡ x lý ton h thng l iu bt buc iu tr cỏc u di cn nờn vic ớch c hiu s lm ti thiu húa cỏc hiu ng ph tim tng Mt cỏch vt qua tr ngi ny l biu hin gen E1A hoc p202 phi c t di s kim soỏt ca mt promoter c hiu u hoc c chuyn giao bng mt h thng chuyn gen c hiu u Vỡ s biu hin c hiu ca E1A hay p202 cỏc v trớ u li c kt hp cựng vi cỏc tỏc nhõn húa tr liu thớch hp nờn ó lm cỏc t bo ung th nhy cm vi apoptosis v cú l s lm tng hiu ng tiờu dit cỏc u ó di cn Chng XIV CHUYN GEN KHNG THUC - MT CHIN LC KHNG U M U p dng k thut chuyn gen l mt hn tuyt vi i vi vic ci thin tr liu khỏng u Mc tiờu tng quỏt ca vic chuyn gen iu tr cỏc bnh tng sn ung th l nõng cao kh nng ca c th loi tr u hoc lm suy yu u mt cỏch c hiu Trong mi trng hp u cú liờn quan ti cỏc mụ bỡnh thng khỏc c th Trong cỏc chng trc ó cp trc tip ti cỏc cỏch tip cn phõn t, dch, hot húa tin thuc v khỏng to mch vi t cỏch l cỏc chin lc tr liu khỏng u Nhng cũn mt cỏch tip cn khỏc ó c nghiờn cu l a cỏc gen vo lm cỏc t bo v mụ bỡnh thng khỏng li cỏc tỏc nhõn húa tr v c coi nh phng thc bo v cỏc hiu ng ph ca húa tr ung th Nhng h thng ó c nghiờn cu mt cỏch sõu rng cho mc ớch ny l h thng khỏng a thuc hoc glycoprotein P (P-glycoprotein-P or multidrug resistance system MDR), cỏc dng khỏng thuc ca folat reductase (DHFR) v O6 alkylguanin DNA- alkyltransferase [AGT]), mc du vy cỏc h thng khỏc cng ó c nghiờn cu khỏ k lng Nhỡn chung, chin lc tr liu liờn quan ti vic a vo v lm biu hin mt gen khỏng thuc cỏc qun th t bo to mỏu l lm cho tỏc nhõn húa tr ớt c hn i vi ngi nhn v cho phộp húa tr khỏng u hiu ng hn thụng qua vic thuc c s dng tớch cc hn hoc lm gim nh cỏc hiu ng ph liu khụng tng dn Mt ng dng liờn quan ti s chuyn gen khỏng thuc l s chn lc in vivo Trong chng ny s lc qua c ch phõn t ca cỏc h thng khỏng thuc ny, cỏc bng chng tin lõm sng v lõm sng v cỏc hiu ng ca chỳng vic h tr ci thin húa tr khỏng u cng nh tng lai v nhng thỏch vic phỏt trin v ng dng chuyn gen khỏng thuc tng lai Nhỡn chung, cỏc h thng ny ó c xỏc nh c tớnh trc tiờn cỏc t bo nuụi cy ng vt cú vỳ, ụi nú nh l cỏc marker cú th khuch i v chn lc c iu ú ó cung cp cho chỳng ta nhng hiu bit ban u v dc lý hc v phõn t v tim nng ca chỳng cỏc ng dng in vivo Vic ng dng cụng ngh chuyn gen t bo soma v t bo mm cho phộp ỏnh giỏ cỏc h thng ny mụi trng in vivo ( chut v mt s trng hp khỏc l cỏc ng vt ln hn) Nhng ng dng ny ó t c tin b TNLS vi mt s bỏo cỏo v s chuyn gen MDR lõm sng v mt vi th nghim chuyn gen khỏng thuc khỏc cng ang c xem xột CC H THNG KHNG THUC Gen mdr - ca ngi mó húa cho P glycoprotein - mt bm thoỏt dũng (efflux pump) cú th nhn bit c nhiu hp cht thuc khỏng ung th nh paclitaxel (Taxol), vincristin, doxorubicin, eposid v actinomycin D loi chỳng t bo Sn phm ca gen ny l mt glycoprotein mng 170-kDa, lm trung gian cho vic phỏt sinh phn ng ph thuc ATP P-glycoprotein cú 12 vựng xuyờn mng v domain liờn kt ATP C ch ca s thoỏt dũng (efflux) bi MDR cha c rừ nhng rừ rng l cú liờn quan ti vic loi cỏc thuc a lipid t bờn mng nguyờn sinh (plasma membrane) (Hỡnh 14.1) Vai trũ ca MDR vic khỏng li cỏc tỏc nhõn ny ó c quan sỏt qua vic xut hin cỏc u khỏng thuc biu hin quỏ mc MDR S biu hin MDR cng quan sỏt thy cỏc t bo to mỏu, c bit l cỏc t bo tin thõn CD34+ MDR sau ny c th hin l mt cụng c hu hiu vi t cỏch l mt marker u th cú th khuch i chn lc cỏc t bo nuụi cy ca ng vt cú vỳ Do vy nú cng ng h cho quan im s dng MDR trỏnh cỏc c tớnh ca thuc Kiu hỡnh MDR cng liờn quan ti gen MRP mó húa cho protein khỏng a thuc mt glycoprotein mng Tuy nhiờn, vic s dng MRP vi t cỏch l mt gen khỏng thuc cú th chn lc thỡ phi nghiờn cu sõu rng hn na Hỡnh 14.1 Cỏch thc hot ng ca MDR MDR l mt glycoprotein mng lm trung gian cho s thoỏt dũng ph thuc ATP ca nhiu thuc cú c tớnh (vũng trũn nh) nh Taxol, chỳng tớch t trờn mng t bo (Theo Colin L Sweeney v R Scott v Mclvor (2005) Cancer Gene Therapy Human Press Totowwa, New Jersey) O6- alkylguanin DNA alkyltransferase (AGT) Cỏc tỏc nhõn methyl húa DNA nh temozolomide v cỏc tỏc nhõn chloroethyl húa nh 1,3-bis (2-chloroethyl)-1-niotrosourea (BCNU) v mitozolomid gõy nờn s alkyl húa v trớ O6 ca guanin DNA ó c s dng nh cỏc tỏc nhõn húa tr iu tr nhiu u Vic x lý vi cỏc tỏc nhõn chloroethyl húa s gõy nờn c t bo vỡ cú s hỡnh thnh nhanh chúng cỏc liờn kt chộo cỏc chui gia guanin ci bin v cytosin chui b cu C ch gõy c ca cỏc tỏc nhõn methyl húa cú liờn quan ti s cm ng lm t góy nhim sc th s sa cha khụng thớch ng hu chộp ATG cng c hiu l O6-methylguanin-DNA-methyltransferase (MGMT), ú l mt protein dựng sa cha nhng h hng gõy bi cỏc tỏc nhõn alkyl húa DNA AGT ca ng vt cú vỳ sa cha O6-methylguanin cỏc chui kộp, nhng nú cng tỏc ng trờn cỏc nhúm alkyl húa khỏc v trớ O6 ca guanin v cú th sa cha c c O4methylthymin ATG sa cha cỏc DNA alkyl húa bng cỏch chuyn cõn bng húa hc trc tip sn phm cng alkyl (adduct) ti gc cystein ni ti (Hỡnh 14.2) S chuyn giao ny l bt thun nghch ú dn n bt hot protein AGT alkyl húa nh mt quỏ trỡnh cú tờn l t sỏt (suicide process) AGT ca ngi l mt protein 21-kDa vi 207 amino acid ó c kt tinh thnh tinh th Cỏc t bo t tiờn to mỏu v t bo ty xng ngi cú biu hin AGT ni sinh vi mc thp, iu ú c gii thớch l s kim ch ty cú gii hn liu ca cỏc tỏc nhõn alkyl húa húa tr liu Tuy nhiờn, cng cú nhiu u cú hot tớnh AGT cao khin cho chỳng khỏng mnh hn vi cỏc tỏc nhõn alkyl húa Hỡnh 14.2 S hot ng ca AGT Cỏc tỏc nhõn nh BCNU gõy ci bin DNA (ng ln súng kộp) bng cỏch alkyl húa base guanine (Alk ) AGT (vũng trũn nh) loi b cỏc sn phm cng alkyl húa ny vi phong cỏch cõn bng húa hc mt quỏ trỡnh c c ch bi O benzylguanin (BG), tr phi AGT l th t bin khỏng li BG Theo Colin L Sweeney v R Scott v Mclvor (2005) Cancer Gene Therapy Human Press Totowwa, New Jersey) Hỡnh 14.3 S hot ng ca DHFR DHFR chuyn i dihydrofolat (DHF) thnh tetrahydrofolat (THF) vi s hin din ca + NADPH2 dng kh ca nicotinamid adenin dinucleotid phosphat (NADP ) Phn ng ny b c ch bi cỏc cht khỏng folat nh methotrexat (MTX) Theo Colin L Sweeney v R Scott v Mclvor (2005) Cancer Gene Therapy Human Press Totowwa, New Jersey) Vic sa cha DNA bi cỏc AGT ng vt cú vỳ cú th b c ch bi cỏc hp cht khụng cha base nh O6 benzylguanine (BG); BG cnh tranh trc tip vi cỏc DNA ó alkyl húa gn vo AGT, lm bt hot vnh vin AGT ngi thụng qua vic chuyn sn phm cng benzyl ca BG ti v trớ acceptor cystein ca protein Khi cng hp vi cỏc tỏc nhõn alkyl húa thỡ BG s lm tng c tớnh t bo cỏc dũng t bo u ca ngi in vitro v lm gim s tng trng u cỏc mụ hỡnh ghộp ngoi lai; cỏc TNLS v ny ang c kho sỏt Nhiu protein t bin c thit lp ó lm tng khỏng vi BG Nhng t bin ny nm cnh v trớ tip nhn cystein ti amino acid 145 ca AGT ngi c bit l nhng t bin v trớ 140 v 156 ó c nghiờn cu rt k t bin ca prolin v trớ 140 thnh alanin (P140A) hoc lysin (P140K) ó lm tng s khỏng i vi BG ln lt l 25 ln v trờn 6000 ln so vi AGT dng hoang dó S thay th glycin thnh alanin v trớ 156 (G156A) lm tng khỏng lờn 240 ln; mt t bin kộp ca prolin thnh alanin v trớ 140 v glycin thnh alanin v trớ 156 (P140A/G156A) ó lm tng sc khỏng lờn trờn 1200 ln Khi a cỏc gen AGT th t bin vo cỏc dũng t bo ó bo v c chỳng c tớnh t bo gõy bi s kt hp BG vi cỏc tỏc nhõn alkyl húa DNA Dihydrofolat reductase (DHFR) H thng khỏng thuc th ó c phỏt trin l cỏc dng khỏng thuc t bin ca DHFR Enzym ny xỳc tỏc cho s chuyn i ph thuc nicotinamid adenin- dinucleotid phosphat ca dihydrofolat thnh tetrafolat (Hỡnh 14.3) - mt tin cht gn nht thnh vụ s cỏc cht chuyn húa folat ỏp ng nh cỏc cht cho mt carbon (one - carbon donors) chuyn húa t bo, bao gm sinh tng hp purin v tng hp thymidylat de novo Cỏc cht khỏng folat nh methotrexat (MTX) v trimetrexate l nhng cht c ch liờn kt cht ch tng t nh c cht ca DHFR Cỏc t bo c x lý vi thuc ny lm c ch sõu s chuyn húa ca t bo v tip sau l hiu ng khỏng tng sinh MTX c dựng nh mt tỏc nhõn khỏng u hiu qu, ỏng chỳ nht l iu tr cỏc bnh bch cu lympho cp, u xng ỏc tớnh, bnh carcinoma Ewing v ung th rau (choriocarcinoma) Tuy nhiờn cng cú c tớnh khỏ ln liờn quan ti vic s dng MTX, c bit l gõy c cho ng tiờu húa v c ch ty khỏng t bo i vi MTX cú liờn quan ti s khuch i gen DHFR, gim chuyn thuc v thay i glutamyl húa hay deglutamyl húa ni bo ca thuc Kớch thớch ng thi c gen cựng vi DHFR ó c s dng rng rói nh mt phng thc cụng ngh t bo biu hin cỏc protein mc cao cỏc t bo ng vt cú vỳ S hin din ca cỏc dng DHFR khỏng thuc l mt c ch khỏc, theo ú cỏc t bo tr nờn khỏng antifolat Vn ny ó c gi lờn sm t nhng nghiờn cu c ch ng hc enzym c chit xut t mt s dũng t bo khỏc thớch nghi tng trng cỏc nng cao ca MTX Gi thuyt t bin sau ú c xỏc nhn bng gii trỡnh t dũng DNA b cu ca DHFR (cDNA) mó húa cho s thay th leucin thnh arginin v trớ mó 22 c phõn lp t dũng t bo 3T6 khỏng MTX biu hin DHFR khỏng thuc t bin ny gen DHFR ó lm tng s khỏng vi MTX iu ny ó c khng nh bng vic thõm chuyn cỏc plasmid biu hin vo nhiu dũng t bo ng vt cú vỳ nuụi cy, iu ú chng t rng trỡnh t ci bin ó m nhim chc nng nh mt marker tri cú th chn lc tng t nh cỏc gen NEO v EcoGPT ca vi sinh vt c xỏc nh c tớnh cựng thi im ú K t phõn lp c t bin L22R ca chut ó cú rt nhiu nghiờn cu v vic to v xỏc nh c tớnh cỏc DHFR khỏng thuc liờn quan ti vic ỏp dng nhng gen khỏng thuc ny c in vitro v in vivo Cỏc bỏo cỏo cp ti vic phõn lp cỏc cDNA t cỏc dũng t bo khỏng thuc, sng lc cỏc dng khỏng thuc E.coli v s phỏt sinh t bin nh hng v trớ Cỏc nh khoa hc ó s dng chin lc phỏt sinh t bin bóo hũa trờn c s PCR cựng vi s chn lc MTX cỏc t bo ng vt cú vỳ v ó phõn lp c 13 tỏi t hp cỏc v trớ 22 v 31 ca gen DHFR chut to nờn s khỏng thuc Do thit lp hp lý nhng thay th mt s v trớ trung tõm hot ng ca DHFR ngi ta ó to c nhiu dng khỏng tht s vi antifolat, ú cú c nghiờn cu v cỏc th t bin kộp Vic to cỏc bin th ny cng nh xỏc nh cỏc c trng v s c ch ng hc ca chỳng ó giỳp chỳng ta thu hiu mi quan h gia cu trỳc v chc nng v trớ hot húa ca DHFR, cung cp cho chỳng ta nhng cụng c to nờn s khỏng thuc cng nh la chn cỏc qun th t bo ớch cỏc nghiờn cu v s chuyn gen Nhỡn chung cú s cõn bng gia khỏng thuc v mc hot húa xỳc tỏc c th hin bt k bin th DHFR c bit no Chng hn nh th t bin L22R c phõn lp trc õy ó c xỏc nh l cú khỏng cao vi MTX (nng c ch 50% [IC50] tng 2000 ln so vi dng hoang dó, nhng b tn thng v xỳc tỏc thỡ ch t 1-2% mc hot tớnh dng hoang dó Cỏc nghiờn cu v phỏt sinh t bin cng ó mụ t mt s th t bin vi s ci bin t hp c v s khỏng thuc cng nh hot tớnh xỳc tỏc nh cỏc bin th L22Y ca chut v ngi Núi chung, vic kim tra cỏc c tớnh c ch ng hc ca cỏc enzym th t bin ny v mi liờn quan ti s khỏng ca t bo s to c s thit yu cho vic ỏp dng chỳng húa tr liu v chn lc in vivo BO V NG VT KHI C TNH CA THUC IN VIVO: CC NGHIấN CU TRấN CHUT Cỏc h MDR, AGT v DHFR ó c kim tra sõu rng trờn chut vi t cỏch l h thng mụ hỡnh ng vt nh v tim nng biu hin gen khỏng thuc cỏc t bo to mỏu cho phộp gii thoỏt c tớnh liờn quan ti vic s dng thuc húa tr liu Nhng nghiờn cu ny ó tn dng cỏc ng vt chuyn gen biu hin cỏc gen khỏng thuc v vic ghộp ty ti np vi retrovirus vo cỏc i tng tip nhn bỡnh thng hng cỏc gen khỏng thuc biu hin cỏc t bo to mỏu Nhng kt qu t cỏc nghiờn cu ny ó cho nhng bng chng tin cy v nguyờn lý ca khỏi nim biu hin khỏng thuc, lm tng s khỏng ca ng vt i vi cỏc tỏc nhõn húa tr liu liờn quan vi vic ỏp dng phng phỏp ny cỏc chin lc tng cng liu hoc gim thiu c tớnh i vi cỏc liu ang c ỏp dng hin ti ca cỏc tỏc nhõn khỏng u Vic s dng MDR vi mc ớch bo v húa hc (chemoprotection) ln u tiờn c chng minh cỏc thc nghim ú gen biu hin chut chuyn gen khỏng li nhiu tỏc nhõn bao gm Taxol v daunomycin ó quan sỏt thy khụng nhng cỏc ng vt chuyn gen m cũn c nhng ng vt ó c cy ghộp ty Cỏc chin lc ti np vi retrovirus ni lờn vo thi im ny sau ú ó c s dng chng minh s ti np v biu hin ca MDR ty chut ó lm tng ỏng k c tớnh mỏu cỏc chut c s dng Taxol v bisantren Hanania v cng tỏc ó chng minh rng chuyn gen vo cỏc t bo to mỏu nhiu thc nghim cy ghộp, ú s biu hin ca gen ti np c trỡ thụng qua ghộp a ty chut Cỏc nghiờn cu v ti np ó gp tr ngi gim biu hin MDR vỡ cú s ghộp ni sai lch t MDRcDNA cỏc vec t Vic cy ghộp ty ti np MDR cng liờn quan ti ri lon tng sinh ty mt s ng vt Trong h AGT, so sỏnh vi chut c cy ghộp vi ty ti np lacZ, Davis v cng s bỏo cỏo ó ci thin ỏng k kh nng sng sút ca chut c chiu x liu t sau ú c cy ghộp cỏc t bo tin thõn ca ty xng c ti np vi mt retrovirus mó húa cho G156A AGT v c x lý vi BG v BCNU Hn na, vic x lý vi BG v BCNU cũn lm tng t l % t bo ty xng biu hin G156A AGT sau 13 tun cy ghộp t 30-60% v tng s khỏng BG/BCNU ca cỏc t bo hỡnh thnh qun th ó c ti np vi G156 A sau 23 tun cy ghộp so sỏnh vi cỏc t bo ti np vi lacZ hoc chut khụng c x lý, iu ú ó chng minh cú s chn lc in vivo ca cỏc t bo tin thõn ty xng biu hin AGT khỏng thuc Vic bo v hiu ng gõy t bin tim tng x lý vi BG v temozolomid ó c Chinnasmy v cng s chng minh nh vic s dng AGT th t bin P140A/G156 Ngi ta quan sỏt thy nhng chut ó c x lý vi thuc sau ú c ghộp ty ti np thỡ gim s hỡnh thnh cỏc nhõn nh (micronucleus) ty xng Liờn quan ti vic ỏp dng trờn ngi thỡ s ti np ca cỏc t bo CD34+ ngi s cp vi mt vec t retrovirus mó húa cho AGT th t bin G156A s lm tng s khỏng i vi BG + BCNU cỏc thớ nghim v s hỡnh thnh qun th trờn methylcellulose so vi cỏc t bo khụng ti np v cỏc t bo u c nuụi cy di hn t cỏc t bo nguyờn thy cng nh cỏc t bo c ti np vi vec t lacZ i chng Cụng trỡnh v s chuyn gen u tiờn c dn dt bi Isola v Gorden h DHFR, nhng ng vt c thit lp cú mang gen chuyn DHFR ca chut L22R S chuyn gen DHFR vo cỏc t bo to mỏu c chng minh bi Hock v Miller cỏc phõn tớch in vitro v k tip l William v cng tỏc chng minh kh nng bo v liu t ca MTX a vo ty ti np DHFR Corey v cng tỏc chng minh cú trỡ khỏng thuc cỏc t bo ty cy ghộp v ó khng nh cú s ti np retrovirus v khỏng thuc ca cỏc t bo gc to mỏu tỏi nh c Nhiu DHFR khỏng thuc tip tc c th nghim (test) v ó phỏt hin cú kh nng bo v cỏc c tớnh ca MTX hoc trimetrexat nú cú biu hin cỏc t bo to mỏu Cỏc nh khoa hc ó s dng h thng mụ hỡnh chuyn gen vi nn tng ng thun, cho phộp cỏc iu kin cú th c kim soỏt mt cỏch cht ch v tn s v c tớnh cỏc t bo khỏng thuc cỏc ng vt tip nhn Mc du cú s nhõn to húa cao vic lm cho cỏc t bo biu hin DHFR cú cha cỏc gen chuyn ging nhau, nhng h thng ny ó cho phộp lp li cỏc nhúm, cỏc thớ nghim to thun li cho vic xỏc nh cỏc c tớnh v huyt hc v dc lý ca s khỏng thuc cỏc ng vt tip nhn Cỏc nh khoa hc u ó chng minh c cú s khỏng thuc cỏc ng vt nhn FVB/N c ghộp ty chuyn gen L22R v L22Y DHFR ng thun Vic cy ghộp vi ty chuyn gen L22R ó to c khỏng vi MTX liu phõn phi 4mg/kg Tht ngc nhiờn l liu ny chng nhng gõy c s kim ch ty m cũn gõy c ỏng k i vi ng tiờu húa ca chut S bo v húa hc di nhng iu kin ny khụng liờn quan gỡ vi vic gim cỏc mc thuc c nh giỏ cỏc thớ nghim dc ng hc Cỏc nh khoa hc cng phỏt hin rng cú s gia tng ỏng k chiu di nhung mao cỏc ng vt c bo v bng cỏch ghộp ty chuyn gen L22R DHFR v cú s thõm nhp ỏng k cỏc t bo chuyn gen DHFR ca vt cho vo rut non ca ng vt Mt kh nng hp dn ny sinh t cỏc kt qu ny l a ty khỏng thuc vo cng bo v c nhng ng vt c tớnh ng tiờu húa s dng MTX C ch t bo v phõn t ú xy s bo v bt chộo hin ang c kho sỏt Vic s dng h thng chuyn gen sau ny cho phộp cỏc nh khoa hc chng minh c tm quan trng ca cỏc t bo t tiờn khỏng thuc vic lm trung gian khỏng thuc sm sau cy ghộp v cho phộp cỏc nh khoa hc xỏc nh chớnh xỏc s tng liu dung np ti a ghộp ty chuyn gen L22R v L22Y DHFR (tng 2-3 ln) Cỏc nh khoa hc cng quan sỏt thy cú tng ỏng k s khỏng thuc nhng ng vt cy ghộp mc thp (1% t bo chuyn gen DHFR) Mc du c ch khỏng thuc cỏc ng vt tip nhn ny cha c xỏc nh, nhng nhng kt qu ó ch rừ rng ch vi mc chuyn gen va phi (trờn 1%) thỡ ó bo v c tớnh ca antifolat P DNG CHUYN GEN KHNG THUC NNG CAO TR LIU KHNG U Mt nhng mc ớch chớnh ca vic chuyn gen khỏng thuc l nõng cao s dung np liu c th, tc l lm gim c tớnh ti liu hin hu (existent dose) ca húa tr khỏng u hoc cho phộp tng cng liu Mc du ó hon tt nhiu thớ nghim trờn ng vt chng minh cú s gim c tớnh sau chuyn gen khỏng thuc, nhng nhng nghiờn cu nhm test kh nng ỏp dng ca nú vic nõng cao tớnh khỏng thuc ci thin hn na hiu qu tr liu khỏng u thỡ cũn hn ch Zhao v cng tỏc ó chng minh l cú th nõng cao c kh nng tn ti ca chut cú mang cỏc u vỳ EO771 c cy ghộp vi ty ó c tip cn bin th serin - 31.DHFR retrovirus ri sau ú c x lý vi MTX Hanania v Deisseroth ó chng minh s hiu qu hn ca vic x lý Taxol vi cỏc u vỳ 11A1 c ti np vi vec t nhy cm húa hc p53 chut c ghộp ty ti np MDR Hiu qu ca AGT th t bin i vi vic nõng cao hiu qu húa tr u ó c test bi Koỗ v cng tỏc mụ hỡnh ghộp ngoi lai ung th kt trng ngi SW460 chut c ghộp ty ti np vi AGT th t bin G156A Khi quay vũng nhiu ln vi BG v BCNU thỡ s chn lc c ty G156A ti np v cui cựng s nõng cao c s dung np thuc chut v lm chm li ỏng k s tng trng u liu cao ca BG + BCNU, ú l liu t i vi chut khụng cú ty G156A Cỏc nh khoa hc ó s dng liu dung np tng vi mc cú th d oỏn c cỏc i tng nhn ty chuyn gen L22Y DHFR test kh nng ng dng nú iu tr mt s u cú tớnh nhy cm antifolate khỏc Trong h thng ny, khụng phỏt hin thy liu MTX tng dn khỏng li mt cỏch hiu ng bnh bch cu ty mn tớnh (CML) mụ hỡnh chut 32Dp210 Trờn thc t, MTX cũn gõy hi hn c s sinh u Tuy nhiờn, nu s dng trimetrexat liu cao hn thỡ s lm chm li ỏng k s phỏt u v cỏc u khụng ny sinh na trimetrexat c phõn phi ng thi vi mt tin thuc c ch chuyn nucleosid cú tờn l nitrobezylmercaptopurin-robosid phosphat (NBMPR-P), cht ny c ch s cu h thymine v cỏc nucleosid ca purin vỡ vy m lm tng hiu lc antifolat Mc du sau ngng thuc cỏc u xut hin, nhng nhng thớ nghim ny ó chng minh c tớnh hu dng tim tng ca MTX khỏng li antifolate phõn phi tng liu mt cỏch hp lý cú s biu hin ca DHFR khỏng thuc Vỡ vy vic kt hp cựng vi antisense nhm vo im dng ca BCR/ABC oncogene CML ang c Trng i hc Minnesota khai thỏc nh mt cỏch tip cn tr liu Cỏc nh khoa hc cng thit lp mt loi ung th vỳ FVB/N (FVB/N mammary carcinoma FMC) mt dng ung th vỳ mi tn ti nh mt dũng u di da cú th cy ghộp c chut FVB/N th nghim v s kt hp vi h thng ghộp ng thun nh ó mụ t vi vic s dng ty chuyn gen DHFR Khi u FMC khụng bc l s nhy cm ỏng k i vi MTX c cỏc nng cao hn m ú ó t c cỏc ng vt c ghộp ty chuyn gen hoc cỏc ng vt chuyn gen DHFR Tuy nhiờn ngi ta ó quan sỏt thy cú nõng cao v hot tớnh khỏng u ng vt c x lý vi trimetrexat, c bit c phõn phi ng thi vi NBMPR-P Vi cụng trỡnh v cỏc u 32Dp210 v FMC thỡ rừ rng l vi cỏc u khụng th hin tớnh nhy cm vi MTX thỡ vic s dng mt antifolat luõn phiờn nh trimetrexat kt hp cựng vi mt cht c ch chuyn nucleosid thỡ cú th õy l mt cỏch tip cn khỏng u hiu qu, c bit ỏp dng mt ch tr liu mnh m hn biu hin c DHFR khỏng thuc Cú th d oỏn c rng tng dn liu MTX tng dn s lm tng hiu ng khỏng li cỏc u cú tớnh nhy cm ln hn vi thuc ny Cỏc nghiờn cu kiu ny hin ang c thc hin h mụ hỡnh chuyn gen S CHN LC IN VIVO CA T BO BIU HIN GEN KHNG THUC Vic d oỏn hiu qu ca chuyn gen vo t bo to mỏu hin cũn b hn ch l hiu qu ca nú i vi cỏc ng vt ln v ngi Tuy nhiờn cng cú nhiu hy vng vic nõng cao hiu qu ca chuyn gen thụng qua vic s dng cỏc vec t xen k (alteRNAte vector) nh cỏc vec t lentivirus hay vec t foamy virus hoc thụng qua s tip xỳc v cỏc quy trỡnh x lý t bo Mt cỏch tip cn khỏc lm tng s trỡnh din cỏc t bo ti np tun hon l s chn lc in vivo thụng qua vic ng dng chn lc dc lý hc Trong cỏc nghiờn cu c lp h MDR, Sorrentino v cng s, Podda v cng s thy cú s tng cỏc t bo bch cu mỏu ngoi vi ti np MDR sau c x lý vi Taxol, vy ó chng minh c tớnh hu dng ca vic chn lc thuc lm tng s trỡnh din ca cỏc t bo biu hin gen khỏng thuc Tuy nhiờn, s chn lc mc cỏc t bo gc to mỏu cú kh nng ghộp di hn n nh thỡ cha c chng minh cỏc nghiờn cu ny Mt cỏch gii thớch hp lý v vic thiu s chn lc mc t bo gc l cú s biu hin MDR ni sinh mc tng i cao nhiu t bo to mỏu nguyờn thy Khi a vo t bo cỏc MDR th t bin khỏng cỏc cht c ch ca P-glycoprotein hoang dó cú th chn lc c cỏc t bo gc ti np tt hn l cỏc t bo ch biu hin ni sinh MDR dng hoang dó Vic s dng gen DHFR cho vic chn lc in vivo ó c d oỏn trc t nhiu nm ri, nhng cỏch tip cn ny khụng mang li thnh qu, ny ch c gii quyt cho n tn Allay v cng s chng minh c rng vi cỏc antifolat (trong trng hp ny l trimetrexat) thỡ bn thõn nú khụng gõy c hiu ng vi t cỏch l trung gian gõy c t bo gc m c tớnh t bo gc ch cú c phõn phi ng thi vi NBMRP - P ngn nga s cu h ca nucleosid v cu c c tớnh ca antifolat Allay v cng tỏc sau ú li tip tc khng nh kh nng s dng cỏch tip cn dc lý hc vic m rng cỏc t bo ti np L22Y ca ngi theo cỏch l lm n nh lõu di cỏc i tng nhn s cp cng nh cỏc i tng nhn cy ghộp th cp Cỏc nh khoa hc ó khng nh tớnh chn lc ca cỏc t bo gc biu hin DHFR cng tng t nh cỏc iu kin dc lý hc nh ó c Allay v cng tỏc mụ t Tuy nhiờn, nhng iu kin tin cy chn lc in vivo cỏc t bo gc biu hin DHFR t khi u cy ghộp (t 0,1 n 1%) thỡ cha c thit lp H AGT ni bt l mt h thnh cụng nht t c chn lc in vivo AGT khỏng thuc c chng minh l cho phộp lm giu ti 940 ln cỏc thnh viờn t bo t tiờn ca ty ti np G156A c cy ghộp vo chut nonmyeloblat sau c x lý vi BG v BCNU mt mc chn lc in vivo ln hn mc ó quan sỏt thy vi cỏc gen khỏng thuc khỏc Ragg v cng tỏc, Sawai v cng tỏc ó bỏo cỏo, da trờn vic cu trỳc li t bo to mỏu ca cỏc i tng ghộp th cp ni tip thỡ s chn lc in vivo mc t bo gc to mỏu cú c l vic x lý thuc trờn chut c ghộp ty ti np P140K Vic phõn phi thuc nhng nghiờn cu ny gm BG v BCNU mi tun ln, kộo di 4-5 tun hoc BG v temozolomid ln mt tun, kộo di 3-4 tun Trỏi ngc vi h AGT, s chn lc t bo gc h DHFR ũi hi phi phõn phi hng ngy trimetrexat + NBMPR - P trờn tun vi vi chu k x lý qua mt thi gian di S khỏc gia h thng ny l ch cỏc c ch tỏc ng ca chỳng rt khỏc i vi antifolat, s chn lc c da trờn hiu ng khỏng tng sinh thu c t cỏc nhúm thõm tht nucleotid purin v thymidin, ũi hi phi cú s hin din tip tc ca thuc quỏ trỡnh chn lc i vi cỏc cht alkyl húa nh BCNU, nhng kt qu thu c n gin l ci bin DNA lm cho s tng sinh tip theo s khụng cú thuc v dn n vic phỏt mt tớn hiu apoptosis v t bo b cht, tr s h hng ny c sa cha bi AGT NGHIấN CU TH NGHIM TRấN NG VT LN V NGI Cỏc nghiờn cu v biu hin v chuyn gen khỏng thuc ng vt ln cho ti cũn hn ch, nhng du nhng v s thỏch t bo, di truyn hc v dc lý hc ca chuyn gen cng ó c nghiờn cu rng rói Stead v cng s ó bỏo cỏo cỏc nghiờn cu v chuyn gen DHFR bi retrovirus ex vivo trờn chú, qua ú cho thy nú b hn ch hiu lc chuyn gen kộm Trong nghiờn cu v chuyn gen MDR kh uụi súc (marmoset), Hibino v cng s bỏo cỏo ó phỏt hin thy cỏc t bo to mỏu ti np sau cy ghộp 400 ngy, nhng li cú mt ớt (di 1%) cỏc t bo bch cu ht mỏu ngoi vi ti np khụng bo v c ng vt khỏng li s gim bch cu cm ng docetaxel Vic cy ghộp di hn cng quan sỏt thy kh rhesus c truyn ty ti np MDR Cú cỏc t bo ti np t mc u cao sau ú li ri xung mc thp mc dự ó c b sung cytokin Mt bỏo cỏo ex vivo v chuyn gen MDR trờn ó ghi nhn cú cỏc t bo mỏu ngoi biờn ti np sau c x lý vi taxol nhng sau ngng thuc thỡ mc t bo li gim xung, nhiờn cng trỡ c ti 16 thỏng Nhng kt qu ny cho thy, mc du ó ti np thnh cụng cỏc t bo gc to mỏu nguyờn thy, nhng s chn lc cao hn ch xy ch yu cỏc qun th t bo ó bit húa Cú mt ngoi l quan sỏt thy cỏc ng vt ln h AGT l cú hin tng tng n nh cỏc t bo dng tớnh AGT sau c phõn phi BCNU + BG Nhng kt qu ny ó to hy vng cho vic ỏp dng s biu hin v chuyn gen khỏng thuc nh mt phng thc chn lc in vivo lm tng trỡnh din ca cỏc t bo ti np gen in vivo S thnh cụng ca cỏc nghiờn cu v s chuyn gen MDR trờn ng vt l cỏc tin tin lõm sng cho vic thc hin cỏc th nghim chuyn gen trờn ngi (Bng 14.1) Nhng th nghim ny ó c thit k test trc tiờn v hiu lc ti np retrovirus lm trung gian a cỏc gen chuyn vo cỏc qun th t bo to mỏu, sau ú xỏc nh xem vic x lý nh vy cú bo v c cỏc bnh nhõn s c ch ty hay khụng cú nhng gii phỏp thớch hp Hanania v cng s bỏo cỏo cú ti np cao cỏc n v hỡnh thnh qun th bch cu ht - i thc bo (CFU-GM) Cowan v cng tỏc bỏo cỏo cú cỏc mc tng i cao (9%) bch cu ht mang du n MDR tn ti s dng nhiu ln paclitaxel mt bnh nhõn c ghộp ty ti np MDR, nhiờn nhng mc ny cui cựng cng b h thp dn Bng 14.1 Cỏc quy trỡnh bo v húa hc lõm sng i vi ngi S OBA 9306-044 Ngi ng u nghiờn cu Deisseroth Bnh Ung th bung trng Gen Tỏc nhõn MDR-1 Paclitaxel 9306-051 Hesdorfter Ung th tin trin MDR-1 Paclitaxel 9309-054 OShaughnessy Ung th vỳ MDR-1 Paclitaxel 9406-077 Deisseroth Ung th vỳ MDR-1 Paclitaxel 9601-143 Cowan Ung th vỳ MDR-1 Paclitaxel 9701-172 Cornetta U t bo mm MDR-1 Paclitaxel 9701-173 Croop U nóo MGMT CCNU 9705-187 Verfaillie Bnh bch cu ty mn DHFR 9809-265 Gerson Cỏc u c tin trin MGMT Methotrexate BG, BCNU 0001-376 Bertino U lympho DHFR-CD 0005-400 Becker U lympho MDR-1 0104-466 Belant Ung th phi MnSOD Ghi chỳ: a = c lit kờ bi Office of Biotechnology Activities 2003 b b = CCNU , lomustine c c = BG, BCNU b c Metho Paclitaxel E Tia x d= e= d e CD, cystidine deaminase MnSOD, manganese superoxite dismutase Mt s nghiờn cu cng phỏt hin thy du n t bo mc thp thm khụng th phỏt hin c cỏc bnh nhõn ỏp dng quy trỡnh ci tin ti np retrovirus Abonour v cng s ó t c s chuyn gen MDR mc cao hn cỏc t bo to mỏu v bỏo cỏo cú tng nh s trỡnh din t bo ti np c x lý vi Taxol Cụng trỡnh ny c xem nh ó cung cp cỏc chng c v tớnh kh thi ca s chuyn gen vo cỏc t bo to mỏu v m rng thờm khỏi nim v chn lc in vivo vi ngi Trong tt c cỏc h khỏng thuc ó cp chng ny thỡ MDR cú li th nht cho cỏc ng dng lõm sng Tuy nhiờn, c vi MDR thỡ mc ớch chớnh ca thao tỏc gen (cho phộp húa tr hiu chin hn hoc lm gim c tớnh liu khụng tng dn) cng cha c gii quyt lõm sng KT LUN V CC NGHIấN CU TRONG TNG LAI Cỏc t bo to mỏu ó cú mt thi gian di c coi l qun th ớch ch cht cho s chuyn gen liu phỏp v vic a vo cỏc gen khỏng thuc l chin lc ch cht, theo ú vic chuyn gen vo cỏc t bo to mỏu cú th c ỏp dng iu tr ung th Nhng tin b t c lnh vc ny nh ó túm tt trờn ó chng minh c tim nng ca cỏc chin lc cỏc h thng mụ hỡnh tin lõm sng cng nh cỏc th nghim lõm sng u Kh nng lm cho ng vt ớt nhy cm vi c tớnh ca thuc rừ rng l cn phi cú s kt hp gia cỏc tỏc nhõn húa tr v cỏc gen khỏng thuc Mc tng dn liu cú th ỏp dng nõng cao kh nng tr liu khỏng u ph thuc vo s tng thc t ca liu dung np t c thụng qua s biu hin gen khỏng thuc Kh nng ỏp dng tng liu dung np cú th c thc nghim trc tip trờn cỏc ng vt mang u nõng cao hiu ng khỏng u liu dung np cao hn qua s biu hin gen khỏng thuc Cỏc gen khỏng thuc cng cú th c ỏp dng chn lc in vivo, vic m rng qun th cỏc t bo biu hin gen khỏng thuc nh s iu khin ca cỏc tỏc nhõn chn lc Kh nng ỏp dng phng phỏp ny s cũn ph thuc vo mc m rng ca cỏc t bo biu hin gen khỏng thuc cú th t c Tớnh chn lc nh vy s cng m rng kh nng s dng s chuyn gen khỏng thuc iu tr cỏc bnh di truyn v cỏc bnh khỏc ngoi ung th TI LIU THAM KHO CHNH BeRNArd R Glick, Jack J PasteRNArk (2007), Cụng ngh Sinh hc phõn t (Ti liu dch), Nh xut bn Khoa hc K thut Trn Thỳy Hnh (2007), Mt s khớa cnh v D ng Min dch lõm sng hin i, Nh xut bn Y hc Nguyn Vn Kỡnh (2005), Gen tr liu Nh xut bn Y hc Nguyn Vn Kỡnh, Nguyn Quc Tun, Nguyn Tun Anh (2007), Thc hnh ng dng Gen tr liu, Nh xut bn Y hc Phan Kim Ngc, Phm Vn Phỳc, Trng nh (2010), Cụng ngh T bo gc, Nh xut bn Giỏo dc Aland T Barrett and Lawrence R (2009), Vaccin, Copyrightâ Elsevier Inc Alexander Batter (2006), Stem Cell and Gene-Based Therapy, Frontier in Regenertive Medicine Springer-Verlage London Limited Andreas Offenhaỹsser (2008), Nanobioelectronics for Electronics, Biology and medicine Springer Chi Wai Eric So (Eds) (2008), Leukemia (Methods and Protocols) Humana Press 10 E Nigel Wardle (2008), Guide to Signal Pathways in Immune Cells Humana Press 11 Erwin G Van Meir (2009), CNS Cancer, Human Press 12 Greoffrey S Ginsburg, Huntingtonn F Willard (2010), Esstials of Genomic and Personalized Medicine Amsterdam Boston Heidenberg London Newyork Oxford Paris San diego San Francisco Sydney Tokyo 13 Jaque Zimmer (2010), Natural Killer Cells Springer-Verlage Berlin Heidelberg 14 John D Potter Noralane M Lindor (2008), Genetics of Colorectal Cancer Springer 15 Joseph Panno (2005), The Cell Copyrightâ by Joseph Panno 16 Karvita B Ahluwalia (2009), Genetics second Edition New Age intweRNAtional Limited, Publishers 17 Kathleen Sakamoto Eric Rubin (2009), Modulation of Protein Stability in cancer Therapy, Springer Science Business media 18 M.A Hayat (2008), Liver Cancer, Springer 19 Michael R Shurin Russel D Salter (2008), Dendritic Cell in Cancer Springer 20 Michelle Raabe (2008), Genes & Disease Hemophilia, Copyright â by Infobase Publishing 21 M Molls, P Vaupel, C Nieder, M.S Anscher (Eds) (2009), The impact of Tumor Biology on Cabcer treatment and Multidisciplinary Strategies Springer-Verlag Berlin Heidelberg 22 Peter J Quesenberry, Gary S Stein, BeRNArd G Forget, Sherman M Weissman (2005), Stem Cell Biology and Gene Therapy Willey-Liss 23 Ralf Kỹhn, Wolfgang Wurst (2009), gene Knockout Protocols Humana Press 24 Rebecca G Bagley, Beverly A Teicher (2009), Stem Cells and Cancer, Human Press 25 Robert Lanza (Eds) (2010), Essentials of Stem Cell Biology John Georhort Brigid Hogon Douglas Roger Pederse E Donanal Thomas Jam Thomson 26 Robert Stern (Eds) (2009), Hyaluronan in cancer Biology Academic Press is an imprint of Elsevier 27 T Tachikawa, K Nose, T Ohmori, M Adachi (Eds) (2009), New trends in the Molecular and Biological Basics for Clinical Oncology Springer 28 Thomas C, G Bosch (2008), Stem Cells: From Hydra to man Springer 29 Uma Lakshmipathy, Jonathan D Chesnut, Braska Thyagarajan (2009), Emerging Technology platforms for Stem Cells A John Wiley & Son, inc., Publication 30 Vemu (2006), Stem Cell Assays, Human Press, Totowa, NJ 31 Vijay K Varadan, Linfeng Chen, Jining Xie (2008), Nanomedicine Wiley 32 Vinagulu K Rajasekhas, Mohan C Vemuri (Eds) (2009), Regulatory Network in Stem Cell, Human Press 33 Wiestler, B Haendler, D Mumberg (2007), Cancer Stem Cells: Novel Concepts and Prospects for Tumor Therapy, Springer ... gen kết hợp gen trị liệu với hóa trị, xạ trị, miễn dịch trị liệu v.v Cuốn sách Những phương pháp tiếp cận đại gen trị liệu ung thư bao gồm 14 chương, chương đầu đề cập tới nguyên nhân gây ung. .. tới gen trị liệu nói chung gen trị liệu ung thư nói riêng Hy vọng sách mang lại cho bạn đọc nhiều điều bổ ích Nhà xuất Y học trân trọng giới thiệu sách Những phương pháp tiếp cận đại gen trị liệu. .. lược gen trị liệu nhằm tiêu diệt trực tiếp tế bào ung thư Chương II HỆ GEN UNG THƯ NHỮNG NÉT CƠ BẢN VỀ HỆ GEN UNG THƯ (CANCER GENOMICS) Ung thư bệnh có liên quan tới biến đổi gen tế bào soma Ung