LY TRÍCH VÀ ĐỊNH TÍNH TINH DẦU VỎ BƯỞI

BÁO CÁO THÍ NGHIỆM CÁC PHƯƠNG PHÁP HÓA SINH HIỆN ĐẠI Bài 2: LY TRÍCH VÀ ĐỊNH TÍNH TINH DẦU VỎ BƯỞI BẰNG PHƯƠNG PHÁP HÓA LÝ I KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM Chỉ tiêu Màu sắc Mùi vị Acid Ethanol Terpenoid Phương pháp tách chiết Cổ điển Lôi nước Màu trắng trong, không Màu trắng đục màu vàng Có mùi tinh dầu nồng bưởi n-hexane Màu trắng Nhỏ phenolphthalein trung tính vào dịch mẫu chứa tinh dầu và ethanol lắc tan hoàn toàn Thêm vào vài giọt KOH với VKOH= 0.1ml (3giọt) thì dung dịch chuyển sang màu hồng, có kết tủa trắng đáy ống nghiệm Tinh dầu có màu vàng sau chuyển thành trắng với Vethanol = 0.05ml (1giọt) Tinh dầu + Chloroform + H2SO4→ dung dịch tách lớp lớp Trong đó,lớp là tinh dầu , lớp dưới đáy ống nghiệm có chứa chloroform màu Tinh dầu + Chloroform + H2SO4→ dung dịch tách lớp lớp Trong đó,lớp là tinh dầu , lớp dưới đáy ống nghiệm có chứa chloroform màu trắng, lớp giữa trắng, lớp giữa có màu màu vàng nâu xuất thêm H2SO4 vào chứng tỏ có terpenoid dịch mẫu Flavonoid Ammoniac + tinh dẩu + H2SO4 → dung dịch không xuất màu vàng → sự diện Flavonoid → hàm lượng tinh dầu thấp, tách chiết lẫn nhiều nước Hợp chất Dịch chiết tinh dầu + NaOH bay + HCl → không xuất kết tủa trắng nhỏ bề mặt dung dịch II Hình ảnh minh họa có màu màu vàng nâu xuất thêm H2SO4 vào chứng tỏ có terpenoid dịch mẫu → Tuy nhiên, màu vàng nâu rất nhạt chứng tỏ Tepernoid ít Ammoniac + tinh dẩu + H2SO4 → dung dịch xuất màu vàng chứng tỏ có sự diện Flavonoid Hình 1: màu sắc tinh dầu sau tách chiết Hình 2: xác định số acid Hình 3: xác định độ hòa tan Ethanol Hình 4: xác định tepernoid tinh dầu tách chi ết b ằng n-hexan Hình 5: xác định tepernoid tinh dầu tách chiết b ằng ph ương pháp lôi nước Hình 6: xác định flavonoid từ tinh dầu bưởi tách chi ết theo ph ương pháp cổ điển Hình 7: xác định flavonoid từ tinh dầu bưởi tách chi ết theo ph ương pháp lôi nước III Hình : xác định hợp chất bay phương pháp cổ điển Giải thích kết Độ hòa tan ethanol - Ban đầu tinh dầu có màu vàng sau nhỏ ethanol vào dịch chiết, dung dịch xuất hiện tượng lớp không v ẫn đ ục có t - bên Vethanol = 0.05ml (1giọt) Tinh dầu vỏ bưởi tan tốt dung môi hữu Vì nhỏ ethanol tạo dung dịch đồng nhất Chỉ cần nhỏ giọt làm mất màu vàng nhạt tinh dầu cho thấy lượng tinh dầu thu vỏ bưởi nhiều Mặt khác, tỷ trọng ethanol nhỏ so với tinh dầu nên ethanol có thể tan tốt - tinh dầu vỏ bưởi Xác định số acid Cho biết hàm lượng acid tự do, tinh dầu khai thác hay b ảo qu ản lâu Do tinh dầu bảo quản lâu ester bị thủy phân, aldehyde bị oxy - hóa số acid tăng Ban đầu nhỏ phenolphthalein vào dịch mẫu có màu trắng mang tính acid, sau nhỏ KOH vào, KOH tác dụng hết với acid có tinh dầu Khi lượng KOH tác dụng hết, lượng OH - dư tạo môi trường kiềm, tư môi trường acid chuyển thành môi trường bazơ làm đổi màu - phenolphthalein, dung dịch chuyển sang màu hồng Định tính Terpenoid Khi cho chloroform vào tinh dầu tượng xuất hai l ớp, tr ắng bên trắng đục bên Khi bổ sung thêm H 2SO4 vào dung dịch tách hai lớp lớp bên chuyển sang màu nâu để lâu - đậm màu Terpenoid có cấu tạo gồm isopren không phản ứng với dung môi chloroform mà là hợp chất có nhiều nhất tinh dầu Chính vì chloroform không tan tinh dầu nên chìm xuống đáy ống nghiệm, tư tạo tượng tách lớp Ta thấy lớp giữa có có màu nâu là terpenoid tác dụng với H2SO4 Xuất màu nâu không đậm là lượng tinh dầu không nhiều nên lượng terpenoid ít nên màu nâu không đậm - Định tính Flavonoid Ammoniac + tinh dầu + H2SO4 → dung dịch xuất màu vàng chứng tỏ có sự - diện Flavonoid Flavonoid chứa flavon, flavonol là hợp chất phân cực ít tan nước và chuyển sang màu vàng môi trường ammoniac Các dẫn chất flavon, flavonol có nhóm OH- tự vị trí thứ tan kiềm loãng Nên có màu vàng Khi nhỏ H2SO4 vào cho màu vàng đậm màu vàng nhạt là lượng tinh dầu thu ít nên flavonoid ít dẫn đến phản ứng có màu nhạt Định tính tinh dầu Trong tinh dầu có chứa hợp chất alkaloid, alkaloid thường có tính base - yếu nên tác dụng với base mạnh NaOH thì alkaloid bị giải phóng khỏi muối tạo dung dịch màu vàng nhạt, sau thêm HCl vào dung dich thì HCl tác dụng tiếp với muối alkaloid tạo kết tủa trắng bề mặt dung dịch - Kết âm tính thời gian làm thí nghiệm việc gi ữ mẫu không t ốt làm cho tinh dầu bay nhiều nên làm thí nghiệm định tính cho kết âm tính IV Nhận xét Qua phương pháp chưng cất thu tinh dầu bưởi ta thấy: • Chưng cất bằng phương pháp cổ điển Ưu điểm: thời gian chưng cất nhanh, cách làm đơn giản, thiết bị chưng cất không phức tạp Nhược điểm: tinh dầu thu đươc chưa chưng cất hết tư nguyên liệu, mùi vị kém đậm đà hơn,trong trình chưng cất nguyên liệu có thể bị cháy khét đun nóng nồi làm hư nguyên liệu • Phương pháp chưng cất lôi nước Ưu điểm: tinh dầu thu được tách chiết triệt để tư nguyên liệu, có mùi nồng và thơm so với phương pháp chưng cất cổ điển, vị cũng đậm đặc biệt Nhược điểm: thời gian chưng cất lâu, cần phải có thiết bị chưng cất lôi nước, trình chưng cất ống sinh hàn có thể bị nghẹt vướng nguyên liệu cần phải quan sát và chú ý chưng cất • Phương pháp tách chiết bằng n-hexan Ưu điểm: hiệu suất thu cao Nhược điểm: dung môi độc hại có thể gây nguy hiểm, sản phẩm thu không ứng dụng thực phẩm và mĩ phẩm TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Nguyễn Văn Đàn, Ngô Ngọc Khuyến, Hợp chất thiên nhiên dùng làm thuốc, NXB Y học Hà Nội, 1999 [2] Nguyễn Hoàng Lộc, Viện Tài nguyên, Môi trường và Công nghệ sinh học, Đại học Huế, Sản xuất hợp chất thứ cấp từ nuôi cấy tế bào thực vật [3] https://www.shutterstock.com/search/terpenoids [4] http://doc.edu.vn/tai-lieu/de-tai-nghien-cuu-alkaloid-va-quy-trinh-tach-chietmot-so-chat-co-ban-chat-la-alkaloid-10223/ [5] https://en.wikipedia.org/wiki/Flavonoid [6] http://text.123doc.org/document/3101467-nghien-cuu-ly-thuyet-ve-phuongphap-tach-chiet-hop-chat-terpenoid.htm [7] http://www.ioop.org.vn/vn/nctk/thanh-tuu-cua-vien/ban-tin-khoa-hoc-congnghe/cac-phuong-phap-san-xuat-tinh-dau/ ... mất màu vàng nhạt tinh dầu cho thấy lượng tinh dầu thu vỏ bưởi nhiều Mặt khác, tỷ trọng ethanol nhỏ so với tinh dầu nên ethanol có thể tan tốt - tinh dầu vỏ bưởi Xác định số acid Cho biết... Ethanol Hình 4: xác định tepernoid tinh dầu tách chi ết b ằng n-hexan Hình 5: xác định tepernoid tinh dầu tách chiết b ằng ph ương pháp lôi nước Hình 6: xác định flavonoid từ tinh dầu bưởi tách chi... Kết âm tính thời gian làm thí nghiệm việc gi ữ mẫu không t ốt làm cho tinh dầu bay nhiều nên làm thí nghiệm định tính cho kết âm tính IV Nhận xét Qua phương pháp chưng cất thu tinh dầu bưởi