LY TRÍCH VÀ ĐỊNH TÍNH TINH DẦU VỎ BƯỞI

KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM chiết Màu sắc Màu tr ng trong, không v nắ ẫ đ c và không có màu vàngụ Màu tr ng trongắ Màu tr ng trongắ Mùi vị Có mùi tinh dầu hơi nồng của bưởi Acid Nhỏ phenolphthal

BÁO CÁO THÍ NGHIỆM CÁC PHƯƠNG PHÁP HÓA SINH HIỆN ĐẠI Bài 2: LY TRÍCH VÀ ĐỊNH TÍNH TINH DẦU VỎ BƯỞI BẰNG PHƯƠNG

PHÁP HÓA LÝ

I. KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM

chiết

Màu sắc Màu tr ng trong, không v nắ ẫ

đ c và không có màu vàngụ Màu tr ng trongắ Màu tr ng trongắ

Mùi vị Có mùi tinh dầu hơi nồng của

bưởi

Acid Nhỏ phenolphthalein trung

tính vào dịch mẫu chứa tinh dầu và ethanol đã được lắc tan hoàn toàn

Thêm vào vài giọt KOH với

VKOH= 0.1ml (3giọt) thì dung dịch chuyển sang màu hồng,

có kết tủa trắng ở đáy ống nghiệm

Ethanol Tinh dầu có màu vàng sau đó

chuyển thành trắng trong với

Vethanol = 0.05ml (1giọt)

H2SO4→ dung dịch tách lớp lớp Trong đó,lớp trên là tinh dầu , lớp dưới cùng

ở đáy ống nghiệm

chloroform màu

Tinh dầu +

H2SO4→ dung dịch tách lớp lớp Trong đó,lớp trên là tinh dầu , lớp dưới cùng ở đáy ống nghiệm có chứa chloroform màu trắng, lớp giữa

trắng, lớp giữa có màu màu vàng nâu xuất hiện khi thêm

H2SO4 vào chứng tỏ có terpenoid trong dịch mẫu

có màu màu vàng nâu xuất hiện khi thêm H2SO4 vào chứng tỏ có terpenoid trong dịch mẫu

→ Tuy nhiên, màu vàng nâu rất nhạt chứng tỏ Tepernoid ít

Flavonoid Ammoniac + tinh dẩu +

H2SO4 → dung dịch không xuất hiện màu vàng → không có sự hiện diện của Flavonoid

→ hàm lượng tinh dầu thấp, tách chiết còn lẫn quá nhiều hơi nước

Ammoniac + tinh dẩu + H2SO4 → dung dịch xuất hiện màu vàng chứng tỏ có sự hiện diện của Flavonoid

Hợp chất

bay hơi Dịch chiết tinh dầu + NaOH

+ HCl → không xuất hiện kết tủa trắng nhỏ trên bề mặt dung dịch

II. Hình nh minh h a ả ọ

Hình 1: màu s c c a tinh d u sau khi tách chi t ắ ủ ầ ế

Hình 2: xác đ nh ch s acid ị ỉ ố

Hình 3: xác đ nh đ hòa tan trong Ethanol ị ộ

Hình 4: xác đ nh tepernoid b ng tinh d u tách chi t b ng n-hexan ị ằ ầ ế ằ

Hình 5: xác đ nh tepernoid b ng tinh d u tách chi t b ng ph ị ằ ầ ế ằ ươ ng pháp

lôi cu n h i n ố ơ ướ c

Hình 6: xác đ nh flavonoid t tinh d u b ị ừ ầ ưở i tách chi t theo ph ế ươ ng

pháp c đi n ổ ể

Hình 7: xác đ nh flavonoid t tinh d u b ị ừ ầ ưở i tách chi t theo ph ế ươ ng

pháp lôi cu n h i n ố ơ ướ c

Hình 8 : xác đ nh h p ch t bay h i b ng ph ị ợ ấ ơ ằ ươ ng pháp c đi n ổ ể

III. Gi i thích k t qu ả ế ả

1. Đ hòa tan ethanol ộ

- Ban đầu tinh dầu có màu vàng sau khi nh ethanol vào d ch chi tỏ ị ế , trong dung d ch xu t hi n hi n tị ấ ệ ệ ượng là l p trên trong không v n đ c và có t aớ ẫ ụ ủ bên dướ Vi ethanol = 0.05ml (1giọt)

- Tinh dầu vỏ bưởi tan tốt trong các dung môi hữu cơ Vì thế khi nhỏ ethanol nó

sẽ tạo một dung dịch đồng nhất Chỉ cần nhỏ 1 giọt đã làm mất màu vàng nhạt của tinh dầu cho thấy lượng tinh dầu thu được trong vỏ bưởi nhiều Mặt khác,

do tỷ trọng của ethanol nhỏ hơn so với tinh dầu nên ethanol có thể tan tốt trong tinh dầu vỏ bưởi

2. Xác đ nh ch s acid ị ỉ ố

- Cho bi t hàm lế ượng acid t do, tinh d u m i khai thác hay b o qu n lâu.ự ầ ớ ả ả

Do tinh d u b o qu n lâu các ester sẽ b th y phân, các aldehyde sẽ b oxyầ ả ả ị ủ ị hóa do đó ch s acid tăng.ỉ ố

- Ban đầu khi được nhỏ phenolphthalein vào dịch mẫu có màu trắng do mang tính acid, sau đó khi nhỏ KOH vào, KOH sẽ tác dụng hết với acid có trong tinh dầu Khi lượng KOH tác dụng hết, lượng OH- dư sẽ tạo môi trường kiềm, tư môi trường acid sẽ chuyển thành môi trường bazơ làm đổi màu phenolphthalein, dung dịch chuyển sang màu hồng

3. Đ nh tính Terpenoid ị

- Khi cho chloroform vào tinh d u hi n tầ ệ ượng xu t hi n hai l p, tr ng trongấ ệ ớ ắ bên trên và tr ng đ c bên dắ ụ ưới Khi b sung thêm Hổ 2SO4 vào thì dung d chị

v n tách hai l p nh ng l p bên dẫ ớ ư ớ ưới chuy n sang màu nâu và đ lâu càngể ể

đ m màu.ậ

- Terpenoid có cấu tạo gồm 5 isopren do đó nó không phản ứng được với dung môi chloroform mà nó là hợp chất có nhiều nhất trong tinh dầu Chính vì thế chloroform không tan được trong tinh dầu nên nó sẽ chìm xuống đáy ống nghiệm, tư đó tạo hiện tượng tách lớp Ta thấy lớp ở giữa có có màu nâu là do terpenoid tác dụng với H2SO4 Xuất hiện màu nâu nhưng không đậm là do lượng tinh dầu không nhiều nên lượng terpenoid ít nên màu nâu không đậm

4. Đ nh tính Flavonoid ị

- Ammoniac + tinh dầu + H2SO4 → dung dịch xuất hiện màu vàng chứng tỏ có sự hiện diện của Flavonoid

- Flavonoid chứa các flavon, flavonol là các hợp chất phân cực ít tan trong nước và sẽ chuyển sang màu vàng trong môi trường ammoniac Các dẫn chất flavon, flavonol có nhóm OH- tự do ở vị trí thứ 7 tan được trong kiềm loãng Nên có màu vàng Khi nhỏ H2SO4 vào sẽ cho màu vàng đậm hơn nhưng màu vàng ở đây nhạt là do lượng tinh dầu thu được ít nên flavonoid trong đó ít dẫn đến phản ứng có màu nhạt

5. Đ nh tính tinh d u ị ầ

- Trong tinh dầu có chứa các hợp chất alkaloid, các alkaloid thường có tính base yếu nên khi tác dụng với base mạnh như NaOH thì alkaloid sẽ bị giải phóng ra khỏi muối của nó tạo dung dịch màu vàng nhạt, sau đó khi thêm HCl vào dung dich thì HCl sẽ tác dụng tiếp với muối của alkaloid tạo kết tủa trắng trên bề mặt dung dịch

- K t qu âm tính do trong th i gian làm thí nghi m vi c gi m u không t tế ả ờ ệ ệ ữ ẫ ố làm cho tinh d u bay h i khá nhi u nên khi làm thí nghi m đ nh tính choầ ơ ề ệ ị

k t qu âm tính.ế ả

Qua 3 phương pháp chưng cất thu tinh dầu bưởi ta thấy:

• Chưng cất bằng phương pháp cổ điển

Ưu điểm: thời gian chưng cất nhanh, cách làm đơn giản, thiết bị chưng cất không quá phức tạp

Nhược điểm: tinh dầu thu đươc chưa được chưng cất hết tư nguyên liệu, mùi vị kém đậm đà hơn,trong quá trình chưng cất nguyên liệu có thể bị cháy khét khi đun nóng trên nồi làm hư nguyên liệu

• Phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước

Ưu điểm: tinh dầu thu được được tách chiết triệt để tư nguyên liệu, có mùi nồng và thơm hơn so với phương pháp chưng cất cổ điển, vị cũng đậm hơn đặc biệt hơn

Nhược điểm: thời gian chưng cất lâu, cần phải có thiết bị chưng cất lôi cuốn hơn nước, trong quá trình chưng cất ống sinh hàn có thể bị nghẹt do vướng nguyên liệu cần phải quan sát và chú ý trong khi chưng cất

• Phương pháp tách chiết bằng n-hexan

Ưu điểm: hiệu suất thu được cao

Nhược điểm: dung môi độc hại có thể gây nguy hiểm, sản phẩm thu không ứng dụng được trong thực phẩm và mĩ phẩm

TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] Nguyễn Văn Đàn, Ngô Ngọc Khuyến, Hợp chất thiên nhiên dùng làm thuốc,

NXB Y học Hà Nội, 1999

[2] Nguyễn Hoàng Lộc, Viện Tài nguyên, Môi trường và Công nghệ sinh học, Đại

học Huế, Sản xuất hợp chất thứ cấp từ nuôi cấy tế bào thực vật

[3] https://www.shutterstock.com/search/terpenoids

[4] http://doc.edu.vn/tai-lieu/de-tai-nghien-cuu-alkaloid-va-quy-trinh-tach-chiet-mot-so-chat-co-ban-chat-la-alkaloid-10223/

[5] https://en.wikipedia.org/wiki/Flavonoid

http://text.123doc.org/document/3101467-nghien-cuu-ly-thuyet-ve-phuong-phap-tach-chiet-hop-chat-terpenoid.htm

[7] http://www.ioop.org.vn/vn/nctk/thanh-tuu-cua-vien/ban-tin-khoa-hoc-cong-nghe/cac-phuong-phap-san-xuat-tinh-dau/