MỞ ĐẦU Trong vài thập kỉ gần đây, công nghệ nano đã, đang phát triển mạnh mẽ và được ứng dụng vào nhiều lĩnh vực khác nhau. Công nghệ nano tạo nên các tiểu phân hoặc cấu trúc có kích thước từ 1 nm đến 100 nm. Tuy nhiên, trong dược phẩm, tiểu phân nano bao gồm cả những tiểu phân có kích thước từ 1 nm đến 1 µm được ứng dụng để chuyển giao hoạt chất đến nơi tác động [147]. Với cấu trúc được thiết kế đặc biệt, tiểu phân nano có ưu điểm nổi trội như bảo vệ hoạt chất, tăng tính thấm thuốc qua hàng rào sinh học, giải phóng hoạt chất có kiểm soát, phóng thích tại đích và bảo vệ mô lành, tránh sự đa đề kháng thuốc. Hoạt chất được nghiên cứu thuộc nhiều nhóm dược lý, gồm các chất có tác dụng kháng ung thư, chống thải ghép, tiểu đường hay diệt ký sinh trùng,... Trong nhóm diệt ký sinh trùng phải kể đến thuốc điều trị sốt rét – đặc biệt là artemisinin (ART) và dẫn chất – vì chúng có vai trò quan trọng trong việc kiểm soát bệnh. ART và dẫn chất đã được WHO đưa vào phác đồ điều trị sốt rét từ năm 2001, cho đến nay vẫn chưa có chất mới nào có thể thay thế được. Tu Youyou – nhà khoa học phát minh ART – nhận giải Nobel năm 2015 cùng với Satoshi Omura và William Campbell đã nói lên giá trị khoa học, giá trị thực tiễn và tính thời sự của ART. Hạn chế của ART do tính chất rất kém tan (thực tế không tan) trong nước và cũng rất ít tan trong dầu [2], [149] ảnh hưởng tới sinh khả dụng của thuốc. Hiện nay, vẫn còn khoảng 3,2 tỉ dân số thế giới có nguy cơ mắc bệnh sốt rét. Năm 2015 có khoảng 214 triệu trường hợp mới mắc và 438.000 trường hợp tử vong do sốt rét [153]. Ở nhiều khu vực, ký sinh trùng Plasmodium falciparum đề kháng lan rộng với cloroquin, quinin dẫn đến thất bại điều trị và tăng tỉ lệ tử vong [150], [152]. Một trong những nguyên nhân gây đề kháng là do tính chất của hoạt chất như kém tan, kém bền nên sinh khả dụng thấp hay thời gian bán thải ngắn khiến nồng độ thuốc không đạt yêu cầu điều trị. Trong khi đó, quá trình phát minh hoạt chất mới có tác dụng trên ký sinh trùng cần rất nhiều thời gian và chi phí, đến nay các nghiên cứu vẫn trong giai đoạn thử nghiệm. Vì những trở ngại này, trong kế hoạch ngăn chặn sự đề kháng của ký sinh trùng sốt rét trên toàn cầu, WHO đã chọn cải tiến kỹ thuật là giải pháp được ưu tiên hàng đầu nhằm bảo vệ hiệu quả điều trị của ART và dẫn chất [151]. Giải pháp được quan tâm hiện nay là ứng dụng công nghệ nano trong kỹ thuật bào chế [118]. Khi đó, quá trình đến đích sinh học của hoạt chất không còn phụ thuộc vào tính chất lý hóa của hoạt chất mà phụ thuộc phần lớn vào kích thước, hình dạng, tính chất bề mặt,... của tiểu phân. Bào chế hệ tiểu phân nano lipid nhằm cải thiện độ tan và khả năng phân tán của ART trong môi trường để có thể sử dụng bằng đường uống hoặc tiêm tĩnh mạch, từ đó cải thiện sự hấp thu và sinh khả dụng cũng như kiểm soát quá trình phóng thích hoạt chất, tăng thời gian tác dụng của thuốc nhằm hạn chế sự đề kháng [34], [121]. Với mục đích đó, đề tài “Bào chế hệ tiểu phân nano artemisinin và đánh giá tác động diệt ký sinh trùng sốt rét trên chuột” được thực hiện với các nội dung nghiên cứu sau: Đánh giá sự tương tác giữa hỗn hợp lipid (Compritol ® 888 ATO – Labrafac TM PG) và ART. Xây dựng công thức và quy trình bào chế hệ tiểu phân nano ART. Đánh giá tính chất của hệ tiểu phân nano ART. Đánh giá tác động diệt ký sinh trùng sốt rét của hệ tiểu phân nano ART trên chuột gây nhiễm Plasmodium berghei.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHƯU MỸ LỆ BÀO CHẾ HỆ TIỂU PHÂN NANO ARTEMISININ VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG DIỆT KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT TRÊN CHUỘT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Thành Phố Hồ Chí Minh – Năm 2017 MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt, bảng đối chiếu thuật ngữ Anh – Việt Danh mục bảng, hình, biểu đồ sơ đồ MỞ ĐẦU MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU .3 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu thành tựu công nghệ nano .4 1.2 Khái niệm phân loại tiểu phân nano ngành dược 1.3 Phương pháp bào chế hệ tiểu phân nano lipid .9 1.4 Phương pháp phân tích tính chất hệ tiểu phân nano lipid .16 1.5 Các tá dược dùng bào chế hệ tiểu phân nano ART 25 1.6 Artemisinin nghiên cứu ứng dụng điều trị sốt rét 27 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .37 2.1 Đối tượng nghiên cứu .37 2.2 Phương pháp nghiên cứu 39 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 59 3.1 Kết đánh giá tương tác hỗn hợp lipid (Compritol 888® ATO – LabrafacTM PG) ART 59 3.2 Kết xây dựng công thức quy trình bào chế hệ tiểu phân nano ART 65 3.3 Kết đánh giá tính chất hệ tiểu phân nano ART .92 3.4 Kết đánh giá tác động diệt ký sinh trùng sốt rét hệ tiểu phân nano ART chuột gây nhiễm P berghei .122 Chương BÀN LUẬN 127 4.1 Tương tác hỗn hợp lipid (Compritol® 888 ATO – LabrafacTM PG) ART 127 4.2 Công thức quy trình bào chế hệ tiểu phân nano ART 128 4.3 Tính chất hệ tiểu phân nano ART 136 4.4 Tác động diệt ký sinh trùng sốt rét hệ tiểu phân nano ART chuột gây nhiễm Plasmodium berghei 142 KẾT LUẬN 144 KIẾN NGHỊ 146 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AFM Atomic force microscopy ART Artemisinin ACTs Artemisinin – based combination therapies ARTs Artemisinin and its derivatives CT Công thức D Day DĐ Dược điển DHA Dihydroartemisinin DM Dung môi D/N Dầu/Nước DSC Differential scanning calorimetry HPH High pressure homogenization HPLC High performance liquid chromatography HSNH Hiệu suất nang hóa KHV Kính hiển vi KT Kết tủa KST Ký sinh trùng KTTP Kích thước tiểu phân LD Laser diffraction N/D Nước/Dầu N/D/N Nước/Dầu/Nước NLC Nanostructured lipid carriers NT Nhũ tương PCS Photon correlation spectroscopy PD Pha dầu PdI Poly dispersity index PEG Polyethylen glycol PN Pha nước PTHC Phóng thích hoạt chất PTNH Phần trăm nang hóa RESS Rapid expansion from supercritical solutions RH Relative humidity SAS Supercritical antisolvent SEM Scanning electron microscopy SLN Solid lipid nanoparticles STH Siêu tới hạn TB Trung bình TEM Transmission electron microscope TN Thí nghiệm BẢNG ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH – VIỆT Artemisinin and its derivatives Artemisinin dẫn chất Artemisinin – based combination therapies Các liệu pháp phối hợp dựa vào artemisinin Atomic force microscopy Phương pháp kính hiển vi lực nguyên tử Day Ngày Differential scanning calorimetry Quét nhiệt vi sai High pressure homogenization Đồng hóa áp suất cao High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao Laser diffraction Nhiễu xạ laser Nanostructured lipid carriers Giá mang lipid cấu trúc nano Photon correlation spectroscopy Phổ tương quan photon Poly dispersity index Chỉ số đa phân tán Rapid expansion from supercritical solutions Khuếch trương nhanh từ dung dịch siêu tới hạn Relative humidity Độ ẩm tương đối Scanning electron microscopy Phương pháp kính hiển vi điện tử quét Solid lipid nanoparticles Tiểu phân nano lipid rắn Supercritical antisolvent Đối kháng dung môi siêu tới hạn Transmission electron microscopy Phương pháp kính hiển vi điện tử truyền qua DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Số lượng công bố vật liệu nano số nước ASEAN Nhật Bảng 1.2 Một số chế phẩm thuốc nano lưu hành thị trường .6 Bảng 1.3 Một số lipid lớp đơn dầu dùng bào chế tiểu phân nano lipid 10 Bảng 1.4 Ưu nhược điểm phương pháp bào chế tiểu phân nano 15 Bảng 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu .37 Bảng 2.2 Hóa chất dung môi nghiên cứu .37 Bảng 2.3 Trang thiết bị nghiên cứu 38 Bảng 2.4 Thành phần công thức bào chế tiểu phân nano ART 42 Bảng 2.5 Các mức yếu tố khảo sát .46 Bảng 3.1 Thể chất hỗn hợp Compritol® 888 ATO – LabrafacTM PG .59 Bảng 3.2 Nhiệt độ tan chảy hỗn hợp Compritol® 888 ATO – LabrafacTM PG lượng ART khác .64 Bảng 3.3 Thành phần công thức bào chế hệ tiểu phân nano 65 Bảng 3.4 Kết khảo sát số tính chất hệ tiểu phân nano 65 Bảng 3.5 Thông số KTTP CT 68 Bảng 3.6 Thành phần công thức với chất diện hoạt polysorbat 80 69 Bảng 3.7 Thông số KTTP mẫu 25, 26 27 69 Bảng 3.8 Thành phần công thức với hỗn hợp chất diện hoạt polysorbat 80 – Gelucire® 50/13 71 Bảng 3.9 Kết đánh giá số tính chất mẫu 19, 20 21 71 Bảng 3.10 Thông số KTTP mẫu 19, 20 21 71 Bảng 3.11 Thành phần công thức với hỗn hợp polysorbat 80 - phosphatidylcholin 73 Bảng 3.12 Kết đánh giá số tính chất CT 22, 23 24 73 Bảng 3.13 Thông số KTTP CT 22, 23 24 75 Bảng 3.14 Thành phần công thức phối hợp phosphatidylcholin 75 Bảng 3.15 Kết đánh giá số tính chất CT 16, 17 18 76 Bảng 3.16 Thông số KTTP CT 17 18 77 Bảng 3.17 Thành phần công thức với hỗn hợp chất diện hoạt polysorbat 80 – SimulsolTM 4000 P 78 Bảng 3.18 Thông số KTTP CT 28, 29 30 80 Bảng 3.19 Thông số KTTP mẫu đồng hóa HPH .82 Bảng 3.20 Thông số KTTP mẫu sau tăng áp suất đồng hóa 84 Bảng 3.21 Tính chất hệ tiểu phân có hàm lượng ART khác .85 Bảng 3.22 Các mức yếu tố khảo sát 87 Bảng 3.23 Ma trận bố trí thí nghiệm kết .87 Bảng 3.24 KTTP TN điều kiện 88 Bảng 3.25 Kích thước tiểu phân TB thí nghiệm tiến đến vùng gần dừng 89 Bảng 3.26 Thông số KTTP lô kiểm chứng 90 Bảng 3.27 Sự thay đổi KTTP trình khảo sát .91 Bảng 3.28 Thông số kích thước hệ tiểu phân nano ART 92 Bảng 3.29 Các thông số sắc ký thẩm định tính tuyến tính 97 Bảng 3.30 Các thông số thẩm định độ lặp lại 98 Bảng 3.31 Các thông số sắc ký ART 99 Bảng 3.32 Các thông số thẩm định độ .99 Bảng 3.33 Hàm lượng % hiệu suất nang hóa hệ tiểu phân nano ART 100 Bảng 3.34 Dữ liệu lượng hoạt chất phóng thích hệ tiểu phân nano ART 101 Bảng 3.35 Thành phần công thức bào chế hệ tiểu phân nano ART 102 Bảng 3.36 Tiêu chuẩn nguyên liệu công thức bào chế hệ tiểu phân nano ART 103 Bảng 3.37 Chỉ tiêu chất lượng hệ tiểu phân nano ART 103 Bảng 3.38 Thông số KTTP hệ tiểu phân nano ART lô nâng cấp 109 Bảng 3.39 Hàm lượng %, PTNH HSNH lô nâng cấp 111 Bảng 3.40 Lượng hoạt chất phóng thích lô nâng cấp .112 Bảng 3.41 Tính chất hệ tiểu phân lô nâng cấp 113 Bảng 3.42 Bảng tóm tắt tính chất tiểu phân lô tối ưu lô nâng cấp 113 Bảng 3.43 Kết tính chất cảm quan hệ tiểu phân nano không chứa ART 114 Bảng 3.44 Thông số KTTP hệ tiểu phân nano không chứa ART ± oC 115 Bảng 3.45 Giá trị p so sánh KTTP hệ tiểu phân nano không chứa ART theo thời gian bảo quản với tháng .115 Bảng 3.46 Tính chất cảm quan hệ tiểu phân nano ART ± oC 116 Bảng 3.47 Giá trị p so sánh KTTB hệ tiểu phân nano ART ± oC 116 Bảng 3.48 KTTP HSNH hệ tiểu phân nano ART ± oC .117 Bảng 3.49 Tính chất cảm quan hệ tiểu phân ART 30 ± oC / 75 ± 5% RH 119 Bảng 3.50 Giá trị p so sánh kích thước hệ tiểu phân nano ART theo thời gian bảo quản với tháng 30 ± oC / 75 ± 5% RH 119 Bảng 3.51 KTTP HSNH hệ tiểu phân nano ART 30 ± oC / 75 ± 5% RH 120 Bảng 3.52 Mật độ KST (KST/vi trường) lô chứng âm lô điều trị 122 Bảng 3.53 Giá trị p đánh giá mật độ KST lô chứng âm lô điều trị 123 Bảng 3.54 Tỉ lệ giảm mật độ KST máu chuột lô chứng âm lô điều trị 124 Bảng 3.55 Thời gian sống sót chuột lô chứng âm lô điều trị (ngày 35) 125 Bảng 3.56 Thời gian KST máu chuột lô điều trị (ngày 35) 125 Bảng 3.57 Thời gian trì tình trạng KST máu chuột lô điều trị (ngày 35) 126 Bảng 4.1 Kích thước tiểu phân nano ART áp suất chu kỳ khác nhau135 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Tỉ lệ sáng chế lĩnh vực chăm sóc sức khỏe số quốc gia giới (a) tỉ lệ sáng chế lĩnh vực ứng dụng (b) Hình 1.2 Cấu tạo SLN (a), NLC dạng I (b), NLC dạng II (c) NLC dạng III (d) Hình 1.3 Hình minh họa cấu tạo (a) chế hoạt động (b) máy HPH 13 Hình 1.4 Các phương pháp đo kích thước vùng kích thước phù hợp 17 Hình 1.5 Vị trí định vị hoạt chất nang hóa tiểu phân .22 Hình 1.6 Hình minh họa giải phóng hoạt chất qua túi thẩm tách 24 Hình 1.7 Hình minh họa tế bào Franz .24 Hình 1.8 Công thức hóa học artemisinin 27 Hình 3.1 Hình ảnh tiểu phân CT 13 quan sát KHV (x 100) 66 Hình 3.2 Hình ảnh tiểu phân CT 12 quan sát KHV (x 100) 66 Hình 3.3 Hình ảnh tiểu phân CT quan sát KHV (x 100) 67 Hình 3.4 Hình ảnh tiểu phân CT quan sát KHV (x 100) 67 Hình 3.5 Hình ảnh tiểu phân nano ART chụp TEM (x 50.000) .94 Hình 3.6 Hình ảnh tiểu phân lô nâng cấp chụp TEM (x 30.000) 110 Hình 3.7 Hình ảnh tiểu phân ART sau tháng bảo quản ± oC (x 50.000) 118 Hình 3.8 Hình ảnh tiểu phân ART sau tháng bảo quản ± oC (x 30.000) 118 Hình 3.9 Hình ảnh tiểu phân sau tháng bảo quản 30 ± oC / 75 ± 5% RH (x 30.000) .121 Phụ lục 4.11 So sánh mật độ KST máu chuột ngày thứ 35 lô – Phụ lục 4.12 Tỉ lệ giảm mật độ KST máu chuột Phụ lục 4.13 So sánh ngày bắt đầu KST máu Phụ lục 4.14 So sánh số ngày trì tình trạng KST máu lô – Phụ lục Tiêu chuẩn hệ tiểu phân nano ART Khoa Dược TIÊU CHUẨN Số TC: Đại học Y Dược TPHCM HỆ TIỂU PHÂN NANO ARTEMISININ Có hiệu lực từ: Quyết định ban hành số: , ngày tháng năm 2016 I TIÊU CHUẨN KỸ THUẬT 1.1 CÔNG THỨC BÀO CHẾ CHO LÔ 1.000 G Artemisinin 8g Compritol® 888 ATO 70 g LabrafacTM PG 30 g Polysorbat 80 10 g SimulsolTM 4000 P 10 g Nước cất vđ 1.000 g 1.2 TIÊU CHUẨN NGUYÊN LIỆU Artemisinin (Lô 100309-1001IN) Đạt tiêu chuẩn DĐ Việt Nam IV (2010) Compritol® 888 ATO Đạt tiêu chuẩn DĐ Châu Âu 7.0 (2011) LabrafacTM PG Đạt tiêu chuẩn DĐ Châu Âu 7.0 (2011) Polysorbat 80 Đạt tiêu chuẩn DĐ Châu Âu 7.0 (2011) SimulsolTM 4000 P Đạt tiêu chuẩn DĐ Mỹ 34 (2011) 1.3 CHẤT LƯỢNG SẢN PHẨM 1.3.1 Cảm quan: Hệ tiểu phân nano artemisinin đồng nhất, không kết bông, không kem không tách lớp 1.3.2 Kích thước Tiểu phân nano artemisinin có kích thước trung bình khoảng 105 – 125 nm, dãy phân bố kích thước từ 58 – 339 nm, d10 khoảng 70 – 85 nm, d90 khoảng 150 – 180 nm 1.3.3 Hình thể học Tiểu phân nano artemisinin có hình cầu, kích thước khoảng 58 – 339 nm 1.3.4 Thế zêta Trị tuyệt đối zêta khoảng |–13,5| – |–16,5| mV 1.3.5 Phần trăm nang hóa Hệ tiểu phân nano artemisinin phải có phần trăm nang hóa khoảng 7,0 – 8,5% 1.3.6 Hiệu suất nang hóa Hệ tiểu phân nano artemisinin phải có hiệu suất nang hóa không 92% 1.3.7 Phóng thích hoạt chất Lượng artemisinin phóng thích phải nằm khoảng 12 – 15 mg/cm2 II PHƯƠNG PHÁP THỬ 2.1 CẢM QUAN Quan sát mắt thường, hệ tiểu phân phân tán đồng nhất, không xuất chuyển đổi màu sắc, không kết hay kem,… 2.2 KÍCH THƯỚC VÀ DÃY PHÂN BỐ KÍCH THƯỚC 2.2.1 Thiết bị thử nghiệm Máy phân tích kích thước tiểu phân nhiễu xạ laser 2.2.2 Cách tiến hành Phân tích máy phân tích kích thước tiểu phân Tráng tế bào đo nước cất, cho nước cất vào tế bào đo, khử khí đo đường Tráng tế bào đo mẫu phân tích, cho mẫu vào tế bào đo, khử khí phân tích mẫu 2.3 HÌNH THỂ HỌC 2.3.1 Thiết bị thử nghiệm Kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) 2.3.2 Cách tiến hành Phân tích kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) Pha loãng mẫu nước cất với tỉ lệ phù hợp (thường : 9), trải mẫu pha loãng lên lưới đồng phủ màng carbon theo phương pháp bốc bay chân không Đặt lưới đồng chứa mẫu vào đĩa petri, hút ẩm khoảng 24 để làm khô mẫu Khảo sát mẫu với nguồn electron có điện gia tốc 100 kV 2.4 THẾ ZÊTA 2.4.1 Thiết bị thử nghiệm Máy phân tích kích thước tiểu phân có chức đo zêta 2.4.2 Cách tiến hành Đo zêta máy phân tích kích thước tiểu phân Pha loãng mẫu nước cất với tỉ lệ phù hợp (thường : 9), cho vào cốc đo, khử khí đo mẫu 2.5 ĐỊNH LƯỢNG ARTEMISININ: SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 2.5.1 Điều kiện sắc ký Pha động: Hỗn hợp acetonitril – nước (68 : 32) Cột thép không gỉ (250 mm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C18 (5 µm) Nhiệt độ phân tích trì nhiệt độ phòng Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 216 nm Tốc độ dòng: 0,6 ml/phút Thể tích tiêm mẫu: 20 µl 2.5.2 Dung dịch chuẩn Cân xác khoảng mg ART chuẩn vào bình định mức ml, hòa tan pha động, siêu âm bổ sung pha động vừa đủ thể tích Lấy 100 l dung dịch, cho vào bình định mức ml, bổ sung pha động vừa đủ thể tích Lắc lọc qua màng lọc 0,45 m, bỏ vài giọt đầu Dung dịch chuẩn có nồng độ 50 g/ml 2.5.3 Dung dịch thử Cân xác khoảng 50 mg mẫu đông khô, đun cách thủy (80 oC), hòa tan ml methanol Siêu âm phút, ly tâm 3.500 vòng/phút (10 phút) Lọc, rửa tủa ml methanol (2 lần), thu dịch lọc vào bình định mức 10 ml, bổ sung methanol vừa đủ thể tích Pha loãng lần pha động, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 m, bỏ vài giọt đầu Định lượng ART HPLC 2.5.4 Cách tiến hành Tiêm lặp lại sáu lần dung dịch chuẩn, phép thử có giá trị độ lệch chuẩn tương đối diện tích đỉnh thời gian lưu artemisinin nhỏ 2% Tiêm dung dịch thử Tính hàm lượng (%) artemisinin từ diện tích đỉnh dung dịch thử dung dịch chuẩn 2.5.5 Cách tính hàm luợng (%) artemisinin 𝑋 (%) = 𝑆𝑡 𝐶𝑐 𝐻𝐿𝐶 𝐹 100 100 𝑆𝑐 𝑚 Sc, St Lần lượt diện tích đỉnh dung dịch chuẩn thử Cc Nồng độ (mg/ml) dung dịch chuẩn HLC Độ tinh khiết (%) chuẩn F Độ pha loãng mẫu thử m Khối lượng (g) mẫu thử 2.6 PHẦN TRĂM NANG HÓA VÀ HIỆU SUẤT NANG HÓA: PHƯƠNG PHÁP SIÊU LỌC 2.6.1 Thiết bị thử nghiệm Dụng cụ lọc với màng có kích thước lỗ lọc 3.000 Da 2.6.2 Cách tiến hành Cân xác khoảng 250 mg mẫu vào ngăn dụng cụ lọc Ly tâm 20.000 vòng/phút (tương đương 29.060 g) 20 phút (2 lần) Thu dịch lọc định lượng artemisinin tự HPLC 2.6.3 Tính phần trăm nang hóa hiệu suất nang hóa 𝑃ℎầ𝑛 𝑡𝑟ă𝑚 𝑛𝑎𝑛𝑔 ℎó𝑎 (%) = 𝐻𝑖ệ𝑢 𝑠𝑢ấ𝑡 𝑛𝑎𝑛𝑔 ℎó𝑎 (%) = 𝑛1 𝑥 100 𝑛2 𝑛1 𝑥 100 𝑛3 n1 Lượng hoạt chất nang hóa n2 Lượng lipid n3 Lượng hoạt chất định lượng toàn phần Lượng hoạt chất định lượng toàn phần lượng hoạt chất tiểu phân môi trường phân tán Lượng hoạt chất nang hóa hiệu số lượng hoạt chất định lượng toàn phần hoạt chất môi trường phân tán tán – lượng hoạt chất tự do, không nang hóa tiểu phân 2.7 PHÓNG THÍCH HOẠT CHẤT: PHƯƠNG PHÁP KHUẾCH TÁN QUA MÀNG 2.7.1 Thiết bị thử nghiệm Túi thẩm tách có chiều dài cm (diện tích 3,2 cm2 tương ứng với cm chiều dài túi) tạo thành cách kẹp kín hai đầu màng bán thấm có MWCO 6.000 – 8.000 kẹp kẹp từ Màng bán thấm ngâm nước cất hai lần (1 giờ), rửa nước cất hai lần (3 lần) trước sử dụng 2.7.2 Điều kiện thử nghiệm Môi trường thử nghiệm 500 ml đệm phosphat pH 6,8 có natri laurylsulfat 0,5% Nhiệt độ môi trường thử nghiệm: 37 ± 0,5 oC Tốc độ quay: 100 vòng/phút Thời điểm lấy mẫu: 15 phút, 30 45 phút, giờ; giờ; 3,5 giờ; Thể tích lấy mẫu: ml, bù dịch môi trường đệm với thể tích tương ứng Lọc mẫu qua màng lọc 0,2 µm định lượng HPLC 2.7.3 Cách tính lượng hoạt chất khuếch tán (mg/cm2) thời điểm i 𝑋𝑖 (mg/cm2 ) = 𝑆𝑡 𝐶𝑐 𝐻𝐿𝐶 𝑉 100 + 𝑋 𝑆𝑐 𝑚1 d 3,2 100 𝑖−1 i Thời điểm lấy mẫu Sc, St Lần lượt diện tích đỉnh dung dịch chuẩn thử Cc, HLC Lần lượt nồng độ (mg/ml) độ tinh khiết (%) chuẩn Xi Lượng hoạt chất khuếch tán mẫu thử thời điểm i V Thể tích (ml) môi trường thử nghiệm m1 Khối lượng (g) mẫu thử nghiệm d Chiều dài túi thẩm tách (cm) 3,2 Diện tích (cm2) ứng với cm chiều dài túi III BẢO QUẢN Bảo quản: Trong tủ lạnh, nhiệt độ ± oC TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2017 Người soạn tiêu chuẩn DS KHƯU MỸ LỆ ... v quy trỡnh bo ch h tiu phõn nano ART 65 3.3 Kt qu ỏnh giỏ tớnh cht ca h tiu phõn nano ART .92 3.4 Kt qu ỏnh giỏ tỏc ng dit ký sinh trựng st rột ca h tiu phõn nano ART trờn chut gõy nhiờm... Cụng thc v quy trỡnh bo ch h tiu phõn nano ART 128 4.3 Tớnh cht ca h tiu phõn nano ART 136 4.4 Tỏc ng dit ký sinh trựng st rột ca h tiu phõn nano ART trờn chut gõy nhiờm Plasmodium... cú tỏc dng khỏng ung th, chng thi ghộp, tiu ng hay dit ký sinh trựng, Trong nhúm dit ký sinh trựng phi k n thuc iu tr st rột c bit l artemisinin (ART) v dn cht vỡ chỳng cú vai trũ quan trng