Phân lập và tuyển chọn nấm nội sinh để tăng cường khả năng kháng bệnh chết héo do nấm Ceratocystis sp. gây hại cây keo tai tượng tại tỉnh Thái Nguyên

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - LÊ MINH HẢI Tên đề tài: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM NỘI SINH ĐỂ TĂNG CƢỜNG KHẢ NĂNG KHÁNG BỆNH CHẾT HÉO DO NẤM CERATOCYSTIS SP GÂY HẠI CÂY KEO TAI TƢỢNG TẠI TỈNH THÁI NGUYÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Lâm nghiệp Khoa : Lâm nghiệp Khóa học : 2012 - 2016 Thái Nguyên - 2016 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - LÊ MINH HẢI Tên đề tài: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM NỘI SINH ĐỂ TĂNG CƢỜNG KHẢ NĂNG KHÁNG BỆNH CHẾT HÉO DO NẤM CERATOCYSTIS SP GÂY HẠI CÂY KEO TAI TƢỢNG TẠI TỈNH THÁI NGUYÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Lâm nghiệp Lớp : K44 – LN Khoa : Lâm nghiệp Khóa học : 2012 - 2016 Giảng viên hƣớng dẫn : ThS Trần Thị Thanh Tâm Thái Nguyên - 2016 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu khoa học thân Các kết số liệu kết suốt trình nghiên cứu Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam hoàn toàn trung thực, chưa công bố kết Nếu có sai sót xin chịu hoàn toàn trách nhiệm Thái Nguyên, ngày Xác nhận giáo viên hƣớng dẫn tháng năm 2016 Ngƣời viết cam đoan Đồng ý cho bảo vệ kết trước Hội đồng khoa học ThS Trần Thị Thanh Tâm Lê Minh Hải Xác nhận giáo viên phản biện Giáo viên chấm phản biện xác nhận sinh viên sửa sai sót sau hội đồng chấm yêu cầu ( ký, ghi rõ họ tên) ii LỜI CẢM ƠN Để báo cáo khoá luận đạt kết tốt ngày hôm Trước hết xin gửi lời cảm ơn tới anh, chị Trung tâm Nghiên cứu Bảo vệ rừng thuộc Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam toàn thể giáo viên khoa lâm nghiệp trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên lời chúc sức khoẻ, lời chào trân trọng, lời cảm ơn sâu sắc Đặc biệt anh Nguyễn Minh Chí cán Trung tâm Nghiên cứu Bảo vệ rừng thuộc Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam, cô Trần Thị Thanh Tâm người trực tiếp hướng dẫn tôi, cho cách nhìn nhận hội tiếp xúc với môi trường làm việc động, chuyên nghiệp, tiếp xúc với nhiều trang thiết bị đại Thời gian có hạn kinh nghiệm hạn chế khoá luận không tránh khỏi thiếu xót Tôi mong nhận bảo, đóng góp ý kiến thầy cô để có điều kiện sửa đổi bổ sung để hoàn thành khoá luận hoàn chỉnh Một lần nữa, Tôi xin chân thành cảm ơn Thái Nguyên, ngày 29 tháng năm 2016 Sinh viên Lê Minh Hải iii DANH LỤC BẢNG Trang Bảng 4.1 Kết phân lập nấm nội sinh Keo tai tượng 31 Bảng 4.2 Kết phân lập nấm nội sinh cành Keo tai tượng 32 Bảng 4.3: Kết đánh giá hiệu lực kháng bệnh chủng nấm nội sinh 34 iv DANH LỤC CÁC HÌNH Trang Hình 4.1: Chủng nấm N25L2 35 Hình 4.2: Sợi nấm chủng N25L2 35 Hình 4.3: Sợi nấm chủng N25L2 36 Hình 4.4 Ức chế nấm bệnh Ceratocystis 36 Hình 4.5: Chủng nấm N28C8 37 Hình 4.6 : Sợi nấm chủng N28C8 37 Hình 4.7: Ức chế nấm bệnh Ceratocystis sp 37 Hình 4.8: Sợ nấm N28C8 37 Hình 4.9: Chủng nấm N31R8 38 Hình 4.10: Ức chế nấm bệnh Ceratocystis sp 38 Hình 4.11: Sợi nấm chủng N31R8 38 Hình 4.12: Sợi nấm chủng N31R8 38 v DANH MỤC KÝ HIỆU VIẾT TẮT Ký hiệu Tên đầy đủ PDA Potato dextrose agar CSIRO Tổ chức Úc SIDA-SAREC Tổ chức Thụy Điển PAM (Programme Alimentaire Mondial) Chương trình lương thực Thế Giới FAO Tổ chức Liên Hợp Quốc lương thực nông nghiệp ½ PDA A half potato dextrose agar vi MỤC LỤC Trang PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Ý nghĩa 1.3.1 Ý nghĩa khoa học: 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn: PHẦN 2: TỔNG QUAN 2.1 Cơ sở khoa học 2.2 Tình hình nghiên cứu nước 2.2.1 Tình hình nghiên cứu Keo tai tượng 2.2.2 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật nội sinh 2.3 Tình hình nghiên cứu giới 2.3.1 Tình hình nghiên cứu bệnh hại Keo giới 2.3.2 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật nội sinh Thế giới 10 2.4 Điều kiện tự nhiên khu vực nghiên cứu 14 2.4.1 Điều kiện tự nhiên 14 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 26 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 26 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 26 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 26 3.3 Nội dung nghiên cứu 26 3.3.1 Phân lập chủng vi sinh vật nội sinh Keo tai tượng 26 3.3.2 Đánh giá hiệu lực kháng nấm gây bệnh chủng nấm nội sinh đặc điểm số chủng có hiệu lực cao 27 vii 3.4 Phương pháp nghiên cứu 27 3.4.1 Phương pháp thu thập mẫu 27 3.4.2 Phương pháp phân lập nấm nội sinh Keo tai tượng 27 3.4.3 Phương pháp đánh giá hiệu lực kháng nấm Ceratocystis sp gây bệnh chết héo chủng vi sinh vật nội sinh 28 3.5 Đề xuất biện pháp phòng trừ 30 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31 4.1 Kết phân lập tổng hợp chủng vi sinh vật nội sinh 12 Keo tai tượng 31 4.1.1 Phân lập vi sinh vật nội sinh Keo tai tượng 31 4.1.2 Phân lập vi sinh vật nôi sinh cành Keo tai tượng 32 4.1.3 Phân lập vi sinh vật nôi sinh rễ Keo tai tượng 33 4.2 Kết đánh giá hiệu lực kháng bệnh chủng vi sinh vật nội sinh đặc điểm số chủng có hiệu lực cao 33 4.2.1 Kết đánh giá hiệu lực kháng bệnh chủng vi sinh vật nội sinh 33 4.2.2 Mô tả đặc điểm số chủng vi sinh vật có hiệu lực cao 35 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 5.1 Kết luận 39 5.2 Tồn - Kiến nghị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Keo tai tượng loài nhập nội đưa vào trồng nước ta từ năm đầu thập niên 80, 90 Chỉ thời gian ngắn sau tiến hành khảo nghiệm xuất xứ thí nghiệm biện pháp kỹ thuật gây trồng có kết (Nguyễn Hoàng Nghĩa, 2003), Keo tai tượng nhanh chóng gây trồng phổ biến hầu hết tỉnh nước Keo tai tượng loài gỗ lớn, mọc nhanh, gỗ dễ gia công nên ưa chuộng để đóng đồ gia dụng, làm nhà, ván dăm, làm bột giấy… Trong năm gần đây, diện tích rừng trồng Keo tai tượng chiếm tỷ trọng lớn tổng diện tích rừng trồng Việt Nam Theo Cục Lâm nghiệp (2006) diện tích rừng trồng Keo tai tượng vùng Tây Bắc, Đông Bắc, Bắc Trung Bộ, Tây Nguyên Duyên Hải miền Trung đạt 600.000 (Phạm Quang Thu, 2006) Tuy nhiên trước gia tăng nhanh diện tích, rừng trồng loài keo xuất nhiều loại bệnh hại gây khó khăn không nhỏ cho người sảm xuất nhiều địa phương nước Điển hình số nơi Bầu Bàng, Bình Dương xác định số dòng keo lai bị mắc bệnh phấn hồng (Pink disease) với tỷ lệ mức độ bị bệnh cao, gây nhiều thiệt hại cho sản xuất Tại Đạ Tẻh, tỉnh Lâm Đồng, tổng diện tích 400 có 118,5 bị bệnh với tỷ lệ từ đến 59 % có số diện tích bị hại nặng Tỷ lệ bị bệnh nặng Ngọc Tụ, Ngọc Hồi, Kon Tum lên đến 90% bị chết Do việc áp dụng biện pháp hóa học để phòng trừ bệnh cho rừng trồng không khả thi diện tích rừng trồng lớn gây ảnh hưởng đến môi trường sinh thái 28 Khoai tây rửa cắt thành miếng có kích thước 1x1x1cm cho vào nồi luộc để lửa nhỏ để 30 phút tính từ lúc sôi, lọc lấy nước trong, sau cho thêm nước cho đủ 1000 ml Cho Dextrose agar vào, quấy đều, đun vừa sôi để đảm bảo thành phần tan Đổ môi trường vào bình 500 ml đậy nút Môi trường hấp khử trùng 121 0C 30 phút, đổ hộp lồng trùng Môi trƣờng nƣớc cất Rửa ống nghiệm cho ml nước cất vào ống nghiệm nút quấn miệng ống nghiệm giấy Hấp khử trùng 121 0C (tương đương với 1atm) 30 phút Phương pháp phân lập nấm nội sinh Mẫu lấy chọn rễ, cành, khoẻ, tươi không bị bệnh tiến hành rửa nước cất vô trùng, sau khử trùng bề mặt cồn 700 rửa lại - lần nước cất vô trùng Sau khử trùng mẫu xong cắt thành đoạn nhỏ – 7mm, đặt vào hộp lồng chứa môi trường 1/2PDA hấp khử trùng Đặt hộp lồng cấy mẫu tủ định ôn nhiệt độ 280 C khoảng - ngày sợi nấm phát triển mọc môi trường Khi nấm mọc tiến hành tách nấm cấy chuyển sang hộp lồng có chứa môi trường PDA, lặp lại sợi nấm nội sinh khiết 3.4.3 Phương pháp đánh giá hiệu lực kháng nấm Ceratocystis sp gây bệnh chết héo chủng vi sinh vật nội sinh 3.4.3.1 Phương pháp xác định hiệu lực kháng bệnh chủng loại nấm nội sinh Sau phân lập vi sinh vật nội sinh khiết, tiến hành đánh giá hiệu lực kháng nấm gây bệnh chúng cách sau: Phương pháp đánh giá hiệu lực ức chế nấm gây bệnh đĩa thạch theo phương pháp Singh Tripathi năm 1999 29 Đánh giá hiệu lực ức chế nấm gây bệnh phương pháp nuôi cấy đồng thời nấm nội sinh nấm gây bệnh hộp lồng (dula culture) Pha loãng bào tử nấm Ceratocystis sp mật độ trung bình từ 1.6x104 – 1.8x104 CFU/ml Đong 30µl dung dịch nấm gây bệnh pha loãng cho vào hộp lồng có chứa môi trường PDA, phân tán bào tử nấm bề mặt môi trường Cấy nấm nội sinh vào băng kín paraffin, thử hiệu lực ức chế nấm gây bệnh hộp lồng/chủng nấm nội sinh lặp lại lần Nuôi tủ định ôn 250C sau 10 ngày tiến hành đo số liệu cụ thể sau Công thức đo đường kính vòng ức chế nấm nội sinh nấm gây bệnh tính công thức: V (mm) = D - d (3.1) Trong đó: V: Đường kính trung bình vòng ức chế, đơn vị mm D: Khoảng cách trung bình từ tâm hệ sợi nấm nội sinh đến mép hệ sợi nấm bệnh, đơn vị mm d: Bán kính trung bình hệ sợi nấm nội sinh, đơn vị mm Căn vào trị số V, xác định chủng nấm nội sinh nội sinh có hiệu lực kháng nấm gây bệnh Chủng có trị số V lớn chủng có khả kháng nấm mạnh, ngược lại trị số V nhỏ khả kháng nấm bệnh nấm khuẩn nội sinh yếu Hiệu lực kháng nấm bệnh chủng vi sinh vật nội sinh phân thành cấp (Phạm Quang Thu, 2010) sau: V > 20: Hiệu lực ức chế mạnh (Rm) 20 ≥ V > 10: Hiệu lực ức chế mạnh (M) 10 ≥ V > 5: Hiệu lực ức chế trung bình (Tb) 5≥V>1 Hiệu lực ức chế yếu (Y) V≤1 Không có hiệu lực (O) 30 3.4.3.2 Mô tả đặc điểm chủng nấm nội sinh có hiệu lực Nấm nội sinh nuôi cấy môi trường PDA, đánh giá khả sinh trưởng phát triển khả kháng nấm gây bệnh nấm nội sinh có hiệu lực Mô tả hình dạng, màu sắc, kích thước hệ sợi chủng nấm nội sinh 3.5 Đề xuất biện pháp phòng trừ - Đối với vườn ươm: Để hạn chế rừng trồng bị nhiễm bệnh chết héo nấm Ceratocystis sp biện pháp phòng – trừ quan trọng, áp dụng biện pháp sau: Vườn giống đầu dòng để lấy cành dâm hom: phát bị bệnh nên tạm ngưng thời gian việc lấy hom nhân giống để tiến hành biện pháp xử lý bị bệnh vườn giống Đối với bị bệnh tiến hành thu thập toàn thân, cành, rễ tiến hành cho xuống hố để đốt Phần hố để đốt phải tiến hành bón vôi, xới xáo với liều lượng 0.3 – 0.5 kg/hố sau để ải 15 – 20 ngày trồng dặm Trước trồng dặm hay không trồng dặm phải tiến hành tưới chế phẩm trichoderma, phân bón có thành phần trichoderma vào quanh gốc theo định kỳ cho tất vườn ươm Đối với vườn ươm giống (cả dâm hom gieo hạt): Xử lý bầu đất (tạo đất ruột bầu), giống phân vi sinh tổng hợp (bằng vi khuẩn cố định đạm, vi khuẩn phân giải lân vi khuẩn đối kháng nấm) để diệt mầm bệnh cho phát triển khỏe mạnh Nếu vườn ươm mà bị bệnh ta tiến hành tạo hố đốt toàn - Đối với rừng trồng: Tránh gây tổn thương cho cây, không tỉa cành vào mùa mưa Tỉa cành nên dùng cưa cắt cành bôi thuốc chống nấm vào vết cắt Phòng trừ côn trùng đục thân cây, bón phân đa lượng vi lượng chứa cacbon cho sinh trưởng phát triển tốt Xử lý bị bệnh: phát bị bệnh, tiến hành thu toàn thân, cành, lá, đào thu thập toàn rễ gốc tập chung vào hố lớn để đốt 31 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết phân lập tổng hợp chủng vi sinh vật nội sinh 12 Keo tai tƣợng Kết phân lập vi sinh vật nội sinh từ mẫu thu thập trường 12 Keo tai tượng thu 45 chủng nấm nội sinh ba phận rễ, cành, 4.1.1 Phân lập vi sinh vật nội sinh Keo tai tượng Bảng 4.1 Kết phân lập nấm nội sinh Keo tai tƣợng STT Tên chủng N1L1 N2L12 N3L12 N4L12 N5L8 N6L6 N7L6 N8L6 N9L10 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 Đặc điểm Màu xám, mọc thành lớp tròn hoa Màu trắng nhạt, mọc dày, sợi ngắn Màu trắng, hệ sợi mọc không đều, sợi nấm mọc dày, sợi ngắn Sợi nấm dài, màu trắng đục, mọc Màu xanh đen, mọc thành lớp tròn, sợi ngắn, mọc thưa Màu trắng, sợi nấm dài, mọc không Màu trắng, hệ sợi ngắn, mọc dày tròn xung quanh Màu trắng, hệ sợi dài, mọc tròn xung quanh Màu trắng, bề mặt hệ sợi lồi lõm, sợi ngắn, mọc dày không đều, làm cho mặt thạch có màu xám đen N10L5 Màu trắng, sợi ngắn, hệ sợi mọc thưa N11L4 Sợi nấm dài, mọc thưa, có màu trắng, làm cho mặt thạch có màu nâu đen N12L7 Sợi nấm ngắn, mọc dày, màu trắng, làm cho mặt thạch màu xanh đen N13L6 Màu trắng, sợi ngắn, mọc dày N15L3 Nấm màu xám đen, sợi dài, mọc dày không N21L9 Nấm màu trắng, mọc hoa, không đều, sợi N21L11 Nấm màu trắng, mọc hoa, không đều, sợi N22L3 Sợi nấm ngắn, màu trắng, làm cho mặt thạch có màu xám đen N24L1 Màu trắng, mọc không đều, mọc bông, mọc dày N24L4 Màu trắng, mọc không đều, mọc bông, mọc dày N25L2 Màu trắng, sợi ngắn, mọc không mép sợi giống cưa N26L1 Màu trắng, sợi dài, mọc dày N27L5 Màu trắng nhạt, mọc dày, sợi ngắn N28L9 Sợi nấm màu trắng, mọc dày, không N29L11 Màu trắng, sợi ngắn, mọc dày, khồng N30L2 Màu trắng, sợi ngắn, mọc dày, khồng N30L11 Màu trắng, sợi ngắn, mọc dày, khồng 32 Nấm nội sinh Keo tai tượng có 26/45 chủng, có số chủng có đặc điểm giống từ màu sắc, cách mọc… Ở Keo tai tượng số lượng chủng nhiều phận Phần đa chủng có màu trắng, bên cạnh xuất số chủng có màu khác Như N1L1 nấm nội sinh có màu trắng, N5L8 nấm nội sinh có màu xanh đen, N15l3 nấm nội sinh có màu xám đen Đặc biệt nấm nội sinh thuộc chủng N12L7 làm cho mặt thạch có màu xanh đen N5L8 mặt thạch có màu xanh đen 4.1.2 Phân lập vi sinh vật nôi sinh cành Keo tai tượng Bảng 4.2 Kết phân lập nấm nội sinh cành Keo tai tƣợng STT Tên chủng Đặc điểm N14C2 Màu trắng, bề mặt hệ sợi lồi lõm, mọc không N16C7 Sợi nấm màu trắng, hệ sợi lồi lõm, sợi ngắn mọc không N18C5 Nấm màu xám đen, sợi ngắn, mọc không N22C12 Sợi nấm ngắn, màu trắng, làm cho mặt thạch có màu xám đen N23C2 Không mọc N23C3 Không mọc N25C11 Màu trắng, sợi ngắn, mọc không mép sợi giống cưa N26C10 Màu trắng, sợi dài, mọc dày N27C4 Màu trắng xám, sợi ngắn, mọc bông, không 10 N27C8 Màu trắng xám, sợi ngắn, mọc bông, không 11 N27C11 Màu trắng xám, sợi ngắn, mọc bông, không 12 N28C8 Sợi nấm màu trắng, mọc dày, không 13 N28C12 Sợi nấm màu trắng, mọc dày, không 14 N29C6 Màu trắng, sợi dài, mọc dày, tròn 15 N29C10 Màu trắng, sợi dài, mọc dày, tròn Qua bảng ta thấy nấm nội sinh cành có 15/45 mẫu đứng thứ hai sau lá, có hai chủng nấm nội sinh không mọc N23C2 N23C3 Màu sắc chủng nấm nội sinh cành đa dạng: chủng có màu trắng, chủng có màu trắng xám, chủng có màu xám đen 33 4.1.3 Phân lập vi sinh vật nôi sinh rễ Keo tai tượng Bảng 4.3 Kết phân lập nấm nội sinh rễ Keo tai tƣợng STT Tên chủng Đặc điểm N17R8 Nấm màu trắng, sợi ngắn,mọc tròn đều, dày N19R12 Sợi nấm màu vàng, sợi ngắn, mọc dày N20R8 Nấm màu xám, sợi ngắn, mọc thưa, không N31R8 Sợi nấm có màu vàng nhạt, sợi ngắn, mọc tròn đều, sợi mọc làm bề mặt thạch có màu hồng Qua bảng ta thấy nấm nội sinh rễ có 4/45 mẫu không đa dạng số chủng cành Nhận xét: Từ bảng số liệu cho thấy phận Keo tai tượng khác có số chủng vi sinh vật nội sinh hoàn toàn khác nhau, có chủng xuất vi sinh vật nội sinh có chủng không xuất số lượng chủng vi sinh vật nội sinh phân lập phận không giống Trong tổng 45 chủng nấm nội sinh phân lập đặc biệt có chủng không mọc N23C2 N23C3 4.2 Kết đánh giá hiệu lực kháng bệnh chủng vi sinh vật nội sinh đặc điểm số chủng có hiệu lực cao 4.2.1 Kết đánh giá hiệu lực kháng bệnh chủng vi sinh vật nội sinh Để đánh giá hiệu lực kháng bệnh chủng vi sinh vật nội sinh áp dụng công thức 3.1 Kết trình bày bảng 4.3 sau: 34 Bảng 4.3: Kết đánh giá hiệu lực kháng bệnh chủng nấm nội sinh STT Kí hiệu chủng nấm 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 N1L1 N2L12 N3L12 N4L12 N5L8 N6L6 N7L6 N8L6 N9L10 N10L5 N11L4 N12L7 N13L6 N14C2 N15L3 N16C7 N17R8 N18C5 N19R12 N20R8 N21L9 N22C12 N23C2 N24L1 N25L2 N26C10 N27R5 N28C8 N29C6 N30L2 N31R8 Đƣờng kính trung bình vòng kháng (mm) Khả ức chế 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 36,5 0 12 Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Không kháng Trung bình Không kháng Không kháng Rất mạnh Không kháng Không kháng Mạnh 35 Qua bảng số liệu ta thấy phần lớn số chủng không kháng (28/31) chiếm 90.32% Có chủng kháng với Ceratocystis sp đó: N28C8 kháng mạnh với đường kính vòng kháng trung bình 36.5mm, N31R8 kháng mạnh ứng với đường kính vòng kháng trung bình 12mm, N25L2 kháng trung binh với đường kính 9mm 4.2.2 Mô tả đặc điểm số chủng vi sinh vật có hiệu lực cao 4.2.2.1 Chủng nấm nội sinh N25L2 Nấm bệnh sau cấy môi trường PDA có nấm nội sinh chủng N25L2 sinh trưởng phát triển bình thường sau 24 đầu Nhưng sau nấm nội sinh chủng N25L2 phát triển phủ kín ức chế nấm bệnh Hệ sợi chủng N25L2 có màu trắng đục, hệ sợi nấm mọc Sợi nấm soi kính hiển vi ta thấy sợi đan xen nhau, sợi nấm ngắn Phát triển theo trục định tạo thành sợi to, sợi lớn có sợi nhỏ phân nhánh Hình 4.1: Chủng nấm N25L2 Hình 4.2: Sợi nấm chủng N25L2 36 Hình 4.3: Sợi nấm chủng N25L2 Hình 4.4 Ức chế nấm bệnh Ceratocystis 4.2.2.2 Chủng nấm nội sinh N28C8 Nấm bệnh sau cấy môi trường PDA có nấm nội sinh chủng N28C8 sinh trưởng phát triển bình thường sau 24 đầu Nhưng sau nấm nội sinh chủng N28C8 phát triển phủ kín ức chế nấm bệnh Hệ sợi chủng N28C8 có màu trắng đục, hệ sợi nấm mọc Sợi nấm soi kính hiển vi ta thấy sợi đan xen nhau, có xu hướng cuộn lại tạo thành cuộn có hình bầu dục 37 Hình 4.5: Chủng nấm N28C8 Hình 4.6 : Sợi nấm chủng N28C8 Hình 4.7: Ức chế nấm bệnh Hình 4.8: Sợ nấm N28C8 Ceratocystis sp 4.2.2.3 Chủng nấm nội sinh N31R8 Nấm bệnh sau cấy môi trường PDA có nấm nội sinh chủng N31R8 sinh trưởng phát triển bình thường sau 24 đầu Nhưng sau nấm nội sinh chủng N31R8 phát triển phủ kín ức chế nấm bệnh Hệ sợi chủng N31R8 có màu trắng vàng mọc làm cho mặt thạch có màu hồng, hệ sợi nấm mọc hoa Sợi nấm soi kính hiển vi ta thấy sợi đan xen nhau, phân nhánh, hệ sợi dài 38 Hình 4.9: Chủng nấm N31R8 Hình 4.10: Ức chế nấm bệnh Ceratocystis sp Hình 4.11: Sợi nấm chủng N31R8 Hình 4.12: Sợi nấm chủng N31R8 39 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Phân lập 45 chủng nấm nội sinh 12 Keo tai tượng Nấm nội sinh Keo tai tượng có 26/45 chủng, có số chủng có đặc điểm giống từ màu sắc, cách mọc Ở Keo tai tai tượng số lượng chủng nhiều phận Nấm nội sinh cành có 15/45 mẫu Màu sắc chủng nấm nội sinh cành đa dạng, phong phú Nấm nội sinh rễ có 4/45 mẫu Rễ phận phát chủng nấm Keo tượng Thông qua khả đối kháng với nấm gây bệnh chủng vi sinh vật nội sinh, bước đầu tuyển chọn 45 chủng nấm nội sinh tổng số 12 Keo tai tượng khảo nghiệm Thái Nguyên Đây kết ban đầu song để công tác chọn giống kháng bệnh dòng vô tính Trong tổng số chủng nấm nội sinh Keo tai tượng có khả kháng bệnh, dựa tiêu sinh trưởng chọn chủng nấm nội sinh có khả kháng lại bệnh chết héo nấm Ceratocystis sp Keo tai tượng có khả sinh trưởng nhanh kháng bệnh, gồm chủng: N25L2, N28C8, N31R8 Trong có mẫu N28C8 có khả kháng bệnh mạnh 5.2 Tồn - Kiến nghị Do thời gian nhiều hạn chế nên việc nghiên cứu định loại chủng vi sinh vật nội sinh có hiệu lực chưa tiến hành Chưa có điều kiện nghiên cứu đặc tính sinh học chủng vi sinh vật nội sinh có hiệu lực ức chế nấm bệnh cao nhiệt độ, tốc độ phát triển, mật độ 40 Do điều kiện thời gian kinh tế có hạn nên chưa đưa thí nghiệm ứng dụng chủng nấm mạnh vào phòng trừ thực tế Qua thực tập, nghiên cứu vi sinh vật nội sinh mô thực vật để kháng bệnh nhận thấy lĩnh vực nghiên cứu nước Vì vậy, cần phải có nghiên cứu bổ sung thử nghiệm phạm vi rộng không 12 dòng vô tính Keo tai tượng 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty Lê Mai Hương (1998), Vi sinh vật học, Nxb Giáo Dục, Hà Nội Vũ Văn Định, (2008) Nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn nội sinh để phòng trừ bệnh đốm lá, khô cành keo lai (Acacia auriculiformis x Acacia mangium) nấm Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc gây hại lâm trường Tam Thắng, huyện Thanh Sơn, Phú Thọ Luận văn Thạc sỹ, Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên Nguyễn Văn Độ, Phạm Quang Thu (2001), Tình hình sâu, bệnh hại số loài trồng rừng định hướng nghiên cứu lĩnh vực bảo vệ thực vật rừng Tạp chí Nông nghiệp  PTNT, Tr.827-828-829 Nguyễn Hoàng Nghĩa, Phạm Quang Thu, (2006) xác định vai trò vi khuẩn nội sinh chế kháng bệnh loét thân, cành nấm Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc gây bệnh hại keo lai Nguyễn Hoàng Nghĩa (2003), Phát triển loài Keo Acasia Việt Nam, NXB Nông nghiệp, 132 trang Phạm Văn Mạch (1991), Góp phần nghiên cứu bệnh thối nhũn (Dampingoff) thông nhựa thông caribe số vùng miền Bắc Việt Nam, luận án PTS KHNN, Hà Nội Phạm Quang Thu, Nguyễn Thị Thuý Nga (2007), Phân lập tuyển chọn vi khuẩn nội sinh để phòng trừ nấm Cryptosporiopsis eucalypti Sankaran & Sutton gây bệnh cháy bạch đàn Thông tin khoa học kỹ thuật Lâm nghiệp số 4/2007 Tr 484 – 485 Phạm Quang Thu (2009), “Bệnh hại Keo Tai tượng lâm trường Tạ Tẻh tỉnh Lâm Đồng-nguyên nhân gây bệnh biện pháp phòng trừ, Tạp chí Khoa học Lâm Nghiệp Phạm Quang Thu (2002), Một số biện pháp phòng trừ, quản lý bệnh hại Keo tai tượng Lâm trường Đạ Tẻh - Lâm Đồng Tạp chí Nông nghiệp PTNT số 6/2002, Tr 532 - 533 42 10 Phạm Quang Thu (2016), “Kết nghiên cứu thành phần sâu, bệnh hại số loài rừng Việt Nam”, Tạp chí Khoa học Lâm Nghiệp(1) 11.Pham Quang Thu, Trần Thanh Trăng (2002), Phân lập tuyển chọn vi khuẩn đối kháng với nấm gây bệnh vùng rễ trồng Thông con, Thông tin KHKT Lâm nghiệp số 3/2002 12.Kile, G.A., 1993 Plant diseases caused by species of Ceratocystis sensu stricto and Chalara In: Wingfield, M.J., Seifert, K.A., Webber, J.F.(Eds.), Ceratocystis and Ophiostoma: Taxonomy, Ecology and Pathogenicity The American Phytopathology Society, St Paul, Minnesota,pp 173-183 13.Marin,M.,Castro, B., Gaitan, A.,Preisig, O., Wingfield, B.D.,Wingfield, M.J.,2003 Relationship of Ceratocystis fimbriata isolates from Colombian coffee-growing regions based on molecular data and pathogenicity Phytopathology 151, 395-405 14.Ploetz, R.C.,2003 Diseases of mango In: Ploetz, R.C (Ed.), Diseases of Tropical Fruit Crops CABI Publishing, Wallingford, Oxford,pp.327363 15.Pontis, R.E., 1951 A canker disease of the coffee tree in Columbia and Venezuela Phytopathology 41, 178- 184 16.Roux,J., Wingfield, M.J, Bouillett, J.P.,Wingfield, B.D., Alfenas, A.C.,2000 A serious new disease of Eucalyptus caused by Ceratocystis fimbriata in Central Africa Forest Pathology 30, 175-184 17.Tarigan, M., Roux, J., Van Wyk, M., Tjahjono,B., Wingfield, M.J., 2010 A new wilt and die-back disease of Acacia mangium associated with Ceratocystis manginecans and C acaciivora sp nov in Indonesia SAJB-00591; No of Pages ... tính Keo tai tượng có khả kháng bệnh thông qua tính kích kháng vi sinh vật nội sinh Trên sở tiến hành thực đề tài: Phân lập tuyển chọn nấm nội sinh để tăng cường khả kháng bệnh chết héo nấm Ceratocystis. .. THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - LÊ MINH HẢI Tên đề tài: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM NỘI SINH ĐỂ TĂNG CƢỜNG KHẢ NĂNG KHÁNG BỆNH CHẾT HÉO DO NẤM CERATOCYSTIS SP GÂY HẠI CÂY KEO. .. đa chủng gồm nấm nội sinh với Keo tai tượng, phân lập tuyển chọn vi sinh vật nội sinh Keo tai tượng có khả đối kháng vi sinh vật gây bệnh chết héo nấm Cratocystis sp Chế phẩm vi sinh 14 vật đa