Nghiên cứu thành phần và hoạt tính sinh học của một số loài cây chọn lọc từ chi Schefflera, Livistona và Eriobotrya ở Việt Nam

Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG GIANG THỊ KIM LIÊN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ LOÀI CÂY CHỌN LỌC TỪ CHI SCHEFFLERA, LIVISTONA VÀ ERIOBOTRYA Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 62 44 27 01 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Đà Nẵng - Năm 2012 Footer Page of 126 Header Page of 126 Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: GS TS ĐÀO HÙNG CƯỜNG PGS TS NGUYỄN THỊ HOÀNG ANH Phản biện 1: GS.TSKH Nguyễn Đình Triệu Phản biện 2: PGS.TS Lê Tự Hải Phản biện 3: TS Nguyễn Thị Bích Tuyết Luận án ñược bảo vệ Hội ñồng chấm Luận án tiến sĩ chuyên ngành Hóa hữu họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 24 tháng năm 2012 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Trung tâm Thông tin - Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng Footer Page of 126 Header Page of 126 I GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn ñề Nước ta nằm vùng nhiệt ñới ẩm nên hệ thực vật phong phú Trong vô số loài thực vật ñang sống phát triển Việt Nam, nhiều loài thuộc chi Schefflera, Livistona Eriobotrya có giá trị sử dụng, ñược dùng ñể bào chế thuốc chữa nhiều bệnh, ñặc biệt hỗ trợ ñiều trị bệnh hiểm nghèo ung thư máu, ung thư gan Mặc dù loài thuộc chi Schefflera, Livistona Eriobotrya có nhiều giá trị sử dụng nước ta công trình nghiên cứu thành phần hoá học, hoạt tính thuộc chi nói chưa có hệ thống, công trình nghiên cứu nước ñược công bố chưa nhiều Việc tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học, ứng dụng phương pháp ñại ñể xác ñịnh cấu trúc nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất loài thuộc chi nói Việt Nam hướng nghiên cứu có nhiều triển vọng, ñược nhiều nhà khoa học nước giới quan tâm Với lý chọn ñề tài “Nghiên cứu thành phần hoạt tính sinh học số loài chọn lọc từ chi Schefflera, Livistona Eriobotrya Việt Nam” làm luận án tiến sĩ Mục ñích nghiên cứu Tìm hiểu thành phần hóa học số loài thuộc chi Chân chim - Schefflera, Cọ - Livistona Sơn trà - Eriobotrya thăm dò hoạt tính hợp chất phân lập ñược từ chúng, góp phần cung cấp thông tin khoa học, hướng tới nâng cao giá trị sử dụng loài ứng dụng rộng rãi thực tế Đối tượng nghiên cứu luận án Các phận từ loài thuộc chi nghiên cứu: Chân chim bột Schefflera farinosa (BL.) Merr., Chân chim trắng - Schefflera hypoleuca (Kurn) Hamrs Chân chim núi - Schefflera petelotii Merr thuộc chi Schefflera; Cọ xẻ - Livistona chinenis (Jacq.) R.Br thuộc chi Livistona; Sơn trà hẹp - Eriobotrya angustissima Hook f thuộc chi Eriobotrya Những ñóng góp luận án Theo tra cứu tài liệu, ñây công trình ñầu tiên giới Việt Nam công bố kết nghiên cứu thành phần hóa học thăm dò hoạt tính sinh học loài cây: Chân chim bột, Chân chim trắng, Chân chim núi thuộc chi Schefflera thu hái Lào Cai Sơn trà hẹp chi Eriobotrya thu hái Lâm Đồng Footer Page of 126 Header Page of 126 Lần ñầu tiên chất 4',7-di-O-methylnaringenin (SF1), chất rutin (SF8), acid 3α,29-dihydroxy-olean-12-en-23,28-dioic (SF6) chất 7α,29-dihydroxy-friedelan-3-on (SP4) ñược phân lập từ chi Schefflera Đồng thời SF6 chất Chất 2α,3α,19α-trihydroxy-12-ursen-28-oic (EA1) lần ñầu tiên phân lập ñược từ chi Sơn trà dạng hai dẫn xuất axetyl hóa lần lần acid 2α-O-acetyl,3α,19α-dihydroxy-urs-12-en-28-oic (EA1b) acid 2α,3α-di-O-acetyl,19α-hydroxy-urs-12-en-28-oic (EA1a) Theo tra cứu, lần ñầu tiên Việt Nam công bố kết nghiên cứu hoá học hoạt tính sinh học dịch chiết từ Cọ xẻ, kết cho thấy chất tricin (LC1), stigmast-5,22-dien-3β-O-Dglucopyranoside (LC2), salicin (LC3) saccharose (LC4) ñược phân lập lần ñầu tiên từ chi Cọ - Livistona Bố cục luận án Luận án gồm 130 trang với chương, 12 bảng, 29 hình sơ ñồ, 108 tài liệu tham khảo (tiếng Việt: 18, tiếng Anh: 87 03 trang web) 42 trang phụ lục Luận án ñược bố cục sau: mở ñầu: trang, tổng quan (chương 1): 38 trang, phương pháp nghiên cứu (chương 2): trang, thực nghiệm (chương 3): 18 trang, kết thảo luận (chương 4): 52 trang, kết luận kiến nghị: trang, tài liệu tham khảo: 11 trang, danh mục công trình liên quan ñến luận án: trang II NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN MỞ ĐẦU Phần mở ñầu ñề cập ñến lý chọn ñề tài, ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án CHƯƠNG TỔNG QUAN Trong phần tổng quan, luận án ñã tổng kết công trình nghiên cứu nước giới ñặc ñiểm thực vật, ứng dụng dân gian số thuộc ba chi nghiên cứu Schefflera; Livistona Eriobotrya Đồng thời ñã tổng quan hóa học hoạt tính sinh học lớp chất thành phần hóa học chủ yếu loài thuộc chi nghiên cứu Nhận xét tình hình nghiên cứu loài thuộc ba chi nói vấn ñề cần nghiên cứu CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phần mô tả chi tiết phương pháp ứng dụng nghiên cứu 2.1 Phương pháp phân lập hợp chất Các phương pháp phân lập chủ yếu: sắc kí cột thường sắc kí cột Footer Page of 126 Header Page of 126 nhanh, chất hấp phụ silicagel; sắc kí Sephadex LH–20; sắc ký ngược pha RP–18 kết hợp sắc kí lớp mỏng với hệ dung môi thích hợp 2.2 Phương pháp xác ñịnh cấu trúc hóa học chất Cấu trúc hóa học chất ñược xác ñịnh kết hợp phương pháp vật lý phương pháp phổ ñại như: phổ hồng ngoại (IR), phổ khối ion hóa bụi electron (ESI-MS), phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT) hai chiều (HSQC, HMBC, 1H-1H COSY, NOESY) 2.3 Phương pháp thăm dò hoạt tính sinh học Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm ñịnh ñược thử chủng vi khuẩn nấm theo phương pháp pha loãng nồng ñộ Hadacek F Greger H Hoạt tính gây ñộc tế bào ñược thử theo phương pháp Scudiero D A cộng dòng tế bào ung thư: biểu mô (KB), gan (HepG2), phổi (Lu), vú (MCF7) ñối chiếu với chất chuẩn Hoạt tính kháng oxi hóa ñược thử theo phương pháp DPPH Shela G cộng CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 3.1 Nguyên liệu, hóa chất, thiết bị Phần mô tả chi tiết nguyên liệu dùng cho nghiên cứu: mẫu thực vật, hóa chất thiết bị dùng cho nghiên cứu 3.2 Phân lập chất từ thuộc chi Chân chim 3.2.1 Cây Chân chim bột - Schefflera farinosa (Bl.) Merr Mô tả chi tiết trình chiết mẫu vỏ Chân chim bột (hình 3.1) phân lập chất từ dịch chiết methanol SFM vỏ Chân chim bột (hình 3.2) Bột vỏ (0,5 kg) Ngâm chiết với n-hexane - Lọc lấy phần dịch n-hexane, - Cô quay khô dung môi Cao chiết n-hexane (1,4g) Bã thực vật Ngâm chiết với ethyl acetate - Lọc lấy dịch ethyl acetate, - Cô quay khô dung môi Cao chiết EtOAc (6,4g) Bã thực vật - Ngâm chiết với methanol - Lọc lấy dịch methanol, - Cô quay khô dung môi Cao chiết MeOH (33,7g) Hình 3.1 Sơ ñồ chiết mẫu vỏ Chân chim bột Footer Page of 126 Header Page of 126 Cao chiết MeOH SFM - (24g) Sắc ký cột silicagel, CH2Cl2/MeOH (90:10); CH2Cl2/MeOH/H2O(80:20:2-60:40:5) SFM3 0,5g SFM6 1,9g Tinh thể, kết tinh lại SFM9 5,7g SKC silicagel, H2Cl2/MeOH/H20 (70:30:5) Sắc ký Sephadex, dung môi MeOH, SF1 30 mg SFM9.3 1,2g SFM6.2 chứa chất kết tinh SFM9.4 0,98g Sắc ký Sephadex, dung môi MeOH Sắc ký Sephadex, dung môi MeOH Kết tinh lại SF6 25 mg SFM9.3.2 SFM9.3.3 0,25g 0,17g 60 mg chất rắn Kết tinh lại Kết tinh lại SF8 32 mg Kết tinh lại SF4 25 mg SF7 20 mg Hình 3.2 Sơ ñồ phân lập chất từ vỏ Chân chim bột Trình bày số liệu phổ, thông số vật lý chất phân lập ñược từ dịch chiết (5 chất: SF1, SF6, SF8, SF7 SF4) 3.2.2 Cây Chân chim trắng - Schefflera hypoleuca (Kurz) Hamrs Mô tả chi tiết trình chiết mẫu Schefflera hypoleuca phân lập chất từ cao chiết ethyl acetate (hình 3.3) Trình bày số liệu phổ, thông số vật lý chất phân lập ñược từ dịch chiết (3 chất SH1, SH2 SH3) Cặn chiết EtOAc SHE (25g) SKC silica gel Hệ dung môi CH2Cl2:MeOH (99:1 → 70:30), SHE3 SHE4 SHE5 (1,2g) (8,5g) (3,5g) SKC silica gel CH2Cl2:MeOH (99:1) SHE3.2 Chất rắn, kết tinh lại SH1 25 mg SKC silica gel CH2Cl2:MeOH (95:5) SHE4.3 Kết tinh lại SH2 125 mg SKC silica gel CH2Cl2:MeOH (95:5) SPE5.4 Kết tủa trắng, kết tinh lại SH3 125 mg Hình 3.3 Sơ ñồ phân lập chất từ Chân chim trắng Footer Page of 126 Header Page of 126 3.2.3 Cây Chân chim núi - Schefflera petelotii Merr Mô tả chi tiết trình chiết mẫu vỏ Schefflera petelotii phân lập chất từ cao chiết ethyl acetate methanol (hình 3.4) Trình bày số liệu phổ, thông số vật lý chất phân lập ñược từ dịch chiết ethyl acetate (3 chất: SP1, SP2 SP3) methanol (1 chất: SP4) Cao chiết EtOAc SPE (8 g) Cao chiết EtOAc SPM (40 g) SKC silica gel, hệ CH2Cl2:MeOH (99:1 → 70:30), SPE4 (0,64 g) SPE3 (0,5 g) SKC silica gel CH2Cl2:MeOH (99:1) SPE3.2 Kết tinh lại SKC silica gel CH2Cl2:MeOH (95:5) SPE4.3 Kết tinh lại SP2 30 mg SP1 26 mg (a) SKC silica gel, hệ CH2Cl2:MeOH (MeOH từ 5-100%) SPE5 (0,71 g) SKC silica gel CH2Cl2:MeOH (95:5) SPE5.4 Kết tinh lại SP3 27 mg SPM9 (134 mg) SKC silica gel CH2Cl2:MeOH (98:2 → 3:7) SPM9.2 Kết tinh lại SP4 27 mg (b) Hình 3.4 Sơ ñồ phân lập chất từ vỏ Chân chim núi a) Cao chiết EtOAc; b) Cao chiết MeOH 3.3 Thăm dò hoạt tính sinh học số chất phân lập từ chi Chân chim Các hợp chất SP2, SF4, SF6 SF7 ñã ñược phân lập từ chi Chân chim (Schefflera) ñược chọn ñể thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm ñịnh hoạt tính gây ñộc tế bào 3.4 Thăm dò hoạt tính sinh học dịch chiết từ Cọ xẻ Các dịch chiết từ Cọ Xẻ (Livistona chinensis) dung môi n-hexane (kí hiệu LCQ.N), dung môi EtOAc (kí hiệu LCQ.E) dung môi MeOH (kí hiệu LCQ.M) ñược thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm ñịnh, hoạt tính gây ñộc tế bào hoạt tính kháng oxi hoá 3.5 Phân lập chất từ dịch chiết methanol Quả Cọ xẻ Livistona chinensis (Jacq.) R.Br Mô tả chi tiết trình phân lập chất từ cao chiết methanol (hình 3.5) Trình bày số liệu phổ, thông số vật lý chất phân lập ñược từ dịch chiết (4 chất LC1, LC2, LC3 LC4) Footer Page of 126 Header Page of 126 Cao MeOH LC2 (17 gam) SKC silicagel, hệ dung môi EtOAc – MeOH LC2.2 (0,78g) LC2.4 (0,24g) LC1 150 mg LC2 14 mg SKC silicagel, hệ dung môi CH2Cl2:MeOH: H2O = 8:3:0,5 Lọc, rửa kết tủa, Sắc ký Sephadex dung môi MeOH SKC silicagel, lọc, rửa kết tủa, kết tinh lại Lọc, rửa kết tủa, kết tinh lại LC2.9+ LC2.10 (1,56g) LC2.6 (0,58g) LC4 25 mg LC3 16 mg Hình 3.5 Sơ ñồ phân lập chất từ Cọ xẻ 3.6 Phân lập chất từ Sơn trà hẹp - Eriobotrya angustissima Hook f Mô tả chi tiết trình phân lập chất từ cao chiết n-hexane (3 chất: EA5, EA6, EA2) ethyl acetate (5 chất gồm EA4 chất ñược tách dạng sản phẩm acetyl hoá: EA1a, EA1b, EA2a, EA3a (hình 3.7) Trình bày số liệu phổ, thông số vật lý chất Cao chiết n-hexane Cao chiết EtOAc EAH (9g) EAE (19 g) SKC silica gel, hệ nhexan:EtOAc (tỉ lệ EtOAc tăng dần từ 20-100%) SKC silica gel, hệ n-hexan:EtOAc (tỉ lệ EtOAc tăng dần từ 20-100%), EAH6 EAH10 - Lọc lấy chất kết tinh - Kết tinh lại n-hexan EA5 100 mg SKC silicagel Hệ n-hexan: EtOAc = 95:5 EA6 12 mg EAH14 EAE20 (1,12g) EAH15+16 (1,1 g) Acetyl hoá hỗn hợp anhydrit acetic pyridine 24h - Lọc lấy chất kết tinh - Kết tinh lại EtOAc EA-Ac (0,95 g) SKC silicagel, hệ n-hexan:EtOAc = 95:5 EA2 95 mg EA1a 120 mg EA1b 55 mg EA2a 67 mg - Phân tách qua cột Sephadex, dung môi MeOH - Tiếp tục tinh chế sắc ký cột pha ñảo, hệ MeOH:H2O=3:7 EA4 45 mg EA3a 28 mg Hình 3.7 Sơ ñồ phân lập chất từ Sơn trà hẹp CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài chọn lọc từ chi Chân chim (Schefflera) Footer Page of 126 Header Page of 126 4.1.1 Thành phần hóa học 4.1.1.1 Các hợp chất phân lập từ vỏ Chân chim bột - Schefflera farinosa (BL.) Merr Cao chiết methanol vỏ Chân chim bột - Schefflera farinosa ñược tinh chế phương pháp sắc ký cột với dung môi thích hợp thu ñược chất: SF1; SF6; SF8; SF7 SF4 theo sơ ñồ 3.2 SF1: 4',7-Di-O-methylnaringenin (lần ñầu phân lập từ chi Chân chim) SF6: 3α,29-dihydroxy-12-oleanen -23,28-dioic acid (chất mới) SF8: rutin SF7 (57): R1 = Caffeoyl; R2 = H SF4 (59): R1 = R2 = Caffeoyl Chất SF1 (4',7-di-O-methylnaringenin) Hình 4.1 Phổ ESI-MS chất SF1 Footer Page of 126 Phổ khối positive ESI-MS (hình 4.1) cho pic ion phân tử m/z = 301 [M + H]+ Số liệu phổ khối kết hợp với phổ 1H, 13C-NMR DEPT cho biết công thức phân tử SF1 C17H16O5 Phổ 1H-NMR (hình 4.2) cho biết phân tử chất SF1 có 16 proton Độ dịch chuyển hóa học ñộ bội tín hiệu proton Header Page 10 of 126 10 ñặc trưng cho hợp chất flavanon: proton thơm vòng A δH = 6,05 6,04 (mỗi tín hiệu d, 2,3Hz); proton vòng B δH = 7,38 6,95 (mỗi tín hiệu 2H, d, 8,7Hz); aliphatic proton vòng C, ñó có proton nhóm oxygen methin δH = 5,36 (dd, 3,0 13,0Hz), cho thấy nhóm methoxy nhóm hydroxy có liên kết cầu hydro nội phân tử 12,03ppm Các tín hiệu phổ 13C-NMR (hình 4.3) phù hợp với tín hiệu proton, thể qua: nhóm carbonyl 196,0 ppm; 12 carbon thơm cộng hưởng vùng từ 94,2 ñến 167,9ppm; nhóm oxygen methin 79,0ppm; nhóm methylen nhóm methoxy OC H OC H O H3 C O O H3 C OH O O OH Hình 4.2 Phổ 1H-NMR chất SF1 (500 MHz, CDCl3) O Hình 4.3 Phổ 13C-NMR chất SF1 (125 MHz, CDCl3) Các số liệu phổ SF1 hoàn toàn ñồng với chất 4',7-di-Omethylnaringenin tài liệu [31] Cho phép kết luận chất SF1 4',7di-O-methylnaringenin, công thức phân tử là: C17H16O5 Chất SF6 (acid 3α α,29-dihydroxy-olean-12-en-23,28-dioic) Phổ hồng ngoại chất SF6 (hình 4.4) cho ñỉnh hấp thụ 3424 cm-1 nhóm hydroxy, ñỉnh 1653cm-1 (carbonyl) Phổ khối positiv ESI-MS (hình 4.5) cho pic ion phân tử m/z = 525 [M + Na]+ Số liệu phổ khối kết hợp với phổ 13C-NMR DEPT cho biết công thức phân tử SF6 C30H46O6 29 HOH2C 19 12 30 20 18 22 17 11 25 26 10 28 COOH 13 14 16 29 HOH2C 30 27 19 HO HOOC 23 12 20 18 24 22 17 11 25 26 14 10 28 COOH 13 16 27 HO HOOC 23 Hình 4.4 Phổ IR chất SF6 Footer Page 10 of 126 24 Hình 4.5 Phổ ESI-MS chất SF6 Header Page 13 of 126 13 gốc trans-caffeoyl vào nhóm OH khác acid quinic Cấu trúc SF4 ñược xác ñịnh acid 3,5-di-O-caffeoylquinic so sánh thêm với số liệu phổ chất (59) tài liệu [100] Các phổ chất SF4 ñược trình bày phụ lục Bảng 4.2 Số liệu phổ 1H- 13C-NMR chất SF7 SF4 (500 & 125 MHz, CD3OD) SF7 SF4 Vị trí δH δC δH δC 76,6 s 76,38 s 1,99 - 2,25 m 40,68 t 2,27 dd(3,0; 15,0) 41,06 t 4,20 m 72,68 d 5,38 dd (3,0; 6,2) 73,35 d 3,77 dd (3,0; 73,14 d 3,91 dd (3,4; 10,0) 72,51 d 5,47 m 75,12 d 5,54 ddd (5,0; 10,0; 74,56 d 1,99 - 2,25 m 39,02 t 2,09 m 37,74 t 181,3 s 181,65 s 1' 127,86 s 128,12 s 2' 7,13 d (2,0) 115,61d 7,08/ 7,06 d (2,0) 115,60 d 3' 146,80 s 149,54 s 4' 149,52 s 146,81 s 5' 6,86 d ( 8,0) 116,50 d 6,78/ 6,78 d (8,0) 116,46 d 6' 7,03 dd (2,0; 122,90 d 6,97/ 6,95 dd (2,0; 122,96 d 7' 7,66 d (15,9) 146,80 d 7,61/ 7,59 d (15,9) 146,77 d 8' 6,38 d (15,9) 115,10 d 6,42/ 6,31 d (15,9) 116,51 d 9' 169,15 s 169,01 s 4.1.1.2 Các hợp chất phân lập ñược từ Chân chim trắng Schefflera hyploleuca (Kurn) Hamrs Từ Chân chim trắng ñã phân lập ñược chất: SH1, SH2 SH3 theo sơ ñồ 3.3 SH1: β-sitosterol SH3: β-sitosterol – glucoside SH2: Acid 3α-hydroxy-20-demethylisoaleuritolic-14(15)-en-28,30-dioic Footer Page 13 of 126 Header Page 14 of 126 14 Chất SH1 (β-sitosterol) Chất SH1 thu ñược dạng kết tinh hình kim, màu trắng Cấu trúc chất ñược xác ñịnh β-sitosterol nhờ so sánh mỏng phân tích số liệu phổ IR với chất chuẩn, CTPT: C29H50O Chất SH2 (acid 3α-hydroxy-20-demethylisoaleuritolic-14(15) -en28,30 -dioic) Từ phổ hồng ngoại SH2 (phụ lục 6, hình 28) cho thấy ñỉnh hấp thụ ñặc trưng νmax 3416 cm-1 nhóm OH 1689 cm-1 nhóm C=O acid Phổ khối ESI-MS (phụ lục 6, hình 29) cho pic ion phân tử m/z = 486 [M]+.Kết hợp số liệu phổ khối kết với số liệu phổ NMR, phổ DEPT cho phép ñưa công thức phân tử chất SH2 C30H46O5 Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO) (phụ lục 6, hình 30) chất SH2 cho tín hiệu δH (ppm): 5,52 m, 1H (H-15); 4,16 br-s, 1H (H-3); 3,17 br-s, 1H (H-13), 0,87; 0,86; 0,82; 0,79; 0,78; 0,73 Phổ 1H- 13C-NMR (phụ lục 6, hình 30-33) SH2 cho thấy tín hiệu singlet δH (ppm): 0,87; 0,86; 0,82; 0,79; 0,78; 0,73 nhóm methyl bậc bốn; nối ñôi bị ba lần thể qua tín hiệu δH = 5,52 m δC = 125,08; 136,6; nhóm hydroxy methin δH = 4,16 (br-s) δC = 73,56 Ngoài phân tử chất SH2 chứa nhóm cacboxyl δC = 176,54 178,47 Bên cạnh tín hiệu trên, phổ 13CNMR-DEPT (phụ lục 6, hình 34) cho thấy phân tử có 10 nhóm CH2, nhóm CH cacbon bậc bốn Các số liệu phổ phân tích cho phép dự ñoán cấu trúc SH2 triterpene khung acid 14taraxeren-28-oic Độ dịch chuyển hóa học nhóm hydroxy methin δC = 73,56 ppm chứng tỏ nhóm hydroxy vị trí 3α so sánh với chất khác có nhóm 3β-OH [92] Tín hiệu cacbon δC = 178,47 ppm ñặc trưng cho nhóm cacboxylic gắn vào C-17, tín hiệu δC = 176,54 ppm ñược gán cho C-30 so sánh với tài liệu [67] Các số liệu phổ SH2 hoàn toàn ñồng với số liệu chất acid 3α-hydroxy-20-demethylisoaleuritolic-14(15)-en-28,30-dioic Chất ñã ñược tác giả Min Zhu cộng phân lập lần ñầu tiên từ Schefflera bodinieri vào năm 1996 Số liệu 13C-NMR SH2 chất so sánh (51) tài liệu ñược ñưa bảng 4.3 Bảng 4.3 Số liệu phổ 13C-NMR chất SH2 (125MHz, DMSO) Tài liệu [67] Vị trí Tài liệu [67] Vị trí SH2 SH2 C (DMSO) C (DMSO) δC δC 32,88 t 33,11 23,76 t 23,90 16 Footer Page 14 of 126 Header Page 15 of 126 10 11 12 13 14 15 23,65 t 73,56 d 36,90 s 46,21 d 25,22 t 33,01 t 36,67 s 48,18 d 36,67 s 17,74 t 43,16 t 46,21 d 136,60 s 125,08 d 15 23,98 73,76 37,11 46,40 25,45 33,54 36,90 48,40 36,90 18,00 43,01 46,40 136,80 125,40 55,18 s 40,0 s 31,64 t 30,34 s 35,93 t 22,37 t 33,32 q 17,96 q 15,83 q 22,39 q 23,34 q 178,47 s 28,58 q 176,54 s 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 55,35 40,18 31,85 30,57 36,17 22,58 33,25 18,20 16,10 22,50 23,60 178,70 28,80 176,80 Chất SH3 (β-sitosterol glucosid) Cấu trúc chất SH3 ñược xác ñịnh β-sitosterol glucoside, CTPT: C35H60O6 nhờ so sánh giá trị Rf mỏng phổ IR (hình 4.11) chất SH3 với β-sitosterol glucoside chuẩn 4.1.1.3 Các hợp chất phân lập ñược từ vỏ Chân chim núi Schefflera petelotii Merr Từ vỏ Chân chim núi phân lập ñược chất SP1, SP2, SP3 SP4 theo sơ ñồ 3.4 SH1: β-sitosterol SH3: β-sitosterol – glucoside 29 30 CH2OH 2719 11 16 26 O 28 14 10 25 21 17 OH 23 α,29-dihydroxy-friedelan-3-on, SH2: Acid 3α-hydroxy-20-demethyl- SP4:7α isoaleuritolic-14(15)-en-28,30-dioic lần ñầu phân lập từ chi Chân chim Footer Page 15 of 126 Header Page 16 of 126 16 Chất SP1(β-sitosterol), SP2 (acid 3α α-hydroxy-20-demethyl isoaleuritolic-14(15)-en-28,30-dioic) SP3 (β-sitosterol glucoside) Các chất SP1, SP2 SP3 ñược xác ñịnh tương ứng β-sitosterol; acid 3α-hydroxy-20-demethyl isoaleuritolic-14(15)-en-28,30-dioic βsitosterol glucosid, nhờ so sánh mỏng với chất SH1, SH2 SH3 mà nhóm nghiên cứu ñã tách ñược từ Chân chim trắng (mục 4.1.1.2) Chất SP4 (7α α,29-dihydroxy-friedelan-3-on) Phổ khối (ESI-MS) chất SP4 cho pic ion phân tử m/z = 459 [M]+ Số liệu phổ khối kết hợp với liệu 13C-NMR DEPT cho phép xác ñịnh công thức phân tử C30H50O3 Từ phân tích liệu phổ cho phép dự ñoán SP4 triterpene khung friedelan-3on với nhóm hydroxyl Cấu trúc chất SP4 ñược khẳng ñịnh 7α,29-dihydroxy-friedelan-3-on nhờ phân tích so sánh số liệu phổ với tài liệu ñã công bố [69] Các số liệu phổ 13C-NMR (DMSO) chất SP4 chất so sánh tài liệu [69] ñược trình bày bảng 4.4 Bảng 4.4 Số liệu phổ 13C-NMR chất SP4 (125MHz, DMSO) Tài liệu [69] Tài liệu [69] Vị trí SP4 Vị trí SP4 C (CD OD) C (CD3OD) δC δC 21,36 t 21,90 36,15 t 36,10 16 40,45 t 41,20 29,12 s 29,70 17 211,65 s 212,30 41,89 d 42,40 18 56,88 d 58,30 29,24 t 29,50 19 41,84 s 42,60 33,07 s 33,50 20 51,81 t 52,30 27,85 t 28,00 21 66,31 d 68,80 38,01 t 38,30 22 57,38 d 58,70 6,81 q 6,90 23 38,23 s 39,10 15,50 q 15,90 24 57,48 d 58,90 18,71 q 18,90 10 25 35,38 t 35,90 19,82 q 20,80 11 26 29,91 t 30,40 18,86 q 19,00 12 27 38,23 s 40,10 31,69 q 31,90 13 28 41,84 s 40,40 69,71 t 71,40 14 29 33,84 t 35,40 29,48 q 29,10 15 30 4.1.2 Kết thử hoạt tính sinh học số chất phân lập ñược từ chi Chân chim Kết thử hoạt tính chất SP2 cho biết chất có hoạt tính tương ñối tốt với dòng tế bào ung thư ñem thử: ung thư biểu mô Footer Page 16 of 126 Header Page 17 of 126 17 (KB), gan (HepG2), phổi (Lu) ung thư vú (MCF7) với giá trị IC50 tương ứng 17,88; 22,15; 8,0 3,5 µg/ml Nhưng hoạt tính kháng chủng vi sinh vật Gram(+), Gram(-) nấm ñã thử Các chất SF4, SF6 SF7 không kháng chủng vi sinh vật kiểm ñịnh không ñộc với dòng tế bào ung thư ñem thử Nhận xét chung kết nghiên cứu ba loài thuộc chi Chân chim Đây lần ñầu tiên loài Chân chim bột, Chân chim trắng Chân chim núi thuộc chi Chân chim ñược nghiên cứu Việt Nam giới Kết nghiên cứu thành phần hóa học loài cho thấy, sterol phổ biến thực vật β-sitosterol (SH1) β-sitosterol glucoside (SH3) hợp chất phân lập ñược chủ yếu thuộc lớp chất flavonoid triterpene Kết hoàn toàn phù hợp với nghiên cứu trước ñây thành phần hóa học thuộc chi Trong số chất phân lập ñược có chất lần ñầu tiên tìm thấy từ chi Schefflera, gồm có flavonoid: 4',7-di-O-methylnaringenin (SF1); hai hợp chất triterpene: 7α,29-dihydroxy-friedelan-3-on (SP4) acid 3α,29-dihydroxy-olean-12-en-23,28-dioic (SF6), ñó chất SF6 (acid 3α,29-dihydroxy-olean-12-en-23,28-dioic) chất Các hợp chất khung flavonoid triterpene tồn phổ biến giới thực vật Nhiều công trình nghiên cứu hoạt tính sinh học mối liên hệ cấu trúc hoạt tính sinh học hai lớp chất ñã ñược công bố Khả giải tỏa electron tốt, nhóm carbonyl C4 liên kết ñôi C2 C3 ñặc trưng quan trọng ñể hợp chất flavonoit cho hoạt tính chống oxi hóa cao Sự có mặt nhóm phenolic hợp chất flavonoid tự nhiên ñược kì vọng có hoạt tính chống vi sinh vật thêm vào nhóm phenolic tăng cường hoạt tính Các hợp chất triterpene có hoạt tính kháng khuẩn, kháng viêm, chống ung thư, kìm hãm phát triển khối u, chống oxi hoá, trị chứng bệnh ñường hô hấp, bệnh gan, bệnh thấp khớp, hạn chế sinh tổng hợp cholesterol, ñặc biệt khả chống lại phát triển virus HIV Qua việc nghiên cứu tương quan cấu trúc hoạt tính triterpene cho thấy chuyển hoá vị trí C-3, C-7 C-28 tạo dẫn xuất có hoạt tính kháng HIV-1 cao có tính ưu việt Người ta nhận thấy dẫn xuất vòng ña acid C-24, C-28, C-30 có hoạt tính mạnh vòng ñơn acid Footer Page 17 of 126 Header Page 18 of 126 18 Hoạt tính sinh học lý thú vài chất số chất phân lập ñược từ thuộc chi Schefflera ñã ñược công bố Ví dụ rutin, chất SF8 phân lập từ Chân chim bột, ñược biết chất có khả chống oxi hóa, có hoạt tính kháng viêm, chống nghẽn mạch, hạ huyết áp, tạo giãn trơn ruột kết tá tràng chuột Ngoài ra, acid 3-Ocaffeoylquinic (SF4) acid 3,5-di-O-caffeoylquinic (SF7) phân lập ñược từ Schefflera heptaphylla (L.) Frodin ñã ñược nhà khoa học Trung Quốc phát có hoạt tính chống RSV mạnh Trong ñề tài chọn chất SF4, SF6, SF7 SP2 ñể thăm dò hoạt tính sinh học Kết thử hoạt tính cho thấy SP2 (acid 3αhydroxy-20-demethyl isoaleuritolic-14(15)-en-28,30-dioic) có hoạt tính tương ñối tốt với dòng tế bào ung thư ñem thử Từ kết nghiên cứu kết hợp với tài liệu ñã công bố kết luận thuộc chi Chân chim ñược sử dụng y học dân gian ñể chữa bệnh bệnh nội khoa, làm mạnh gân cốt, trừ phong, ñau nhức xương khớp, ñau bụng, chống suy nhược thần kinh, tăng trí nhớ, kháng viêm, giảm ñau, hạ sốt có sở khoa học Tuy nhiên, ñể xác ñịnh chất có hoạt tính cao thăm dò hoạt tính sinh học khác cần phải tiến hành nghiên cứu 4.2 Kết nghiên cứu Cọ xẻ 4.2.1 Kết thử hoạt tính sinh học dịch chiết từ Cọ xẻ 4.2.1.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm ñịnh Bảng 4.7 Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm ñịnh dịch chiết từ Cọ xẻ Giá trị IC50, (µg/ml) TT Tên mẫu LCQ.N LCQ.E LCQ.M Gram (+) Gram (-) Nấm L.f B.s S.au S.ent E.coli P.aeru > 256 > 256 > 256 > 256 > 256 > 256 209.71 > 256 46.77 > 256 > 256 > 256 > 256 > 256 > 256 > 256 > 256 > 256 C.allbi cans > 256 > 256 > 256 Kết bảng 4.7 cho thấy dịch chiết Cọ xẻ MeOH (LCQ.M) dịch chiết Cọ xẻ n–hexan (LCQ.N) có hoạt tính ức chế sinh trưởng ñối với vi khuẩn Gram (+) Staphylococcus aureus với nồng ñộ ức chế IC50 46,77 209,71 µg/ml tương ứng Dịch chiết lại hoạt tính ñối với vi sinh vật ñược thử Footer Page 18 of 126 Header Page 19 of 126 19 4.2.1.2 Hoạt tính chống oxi hoá Bảng 4.8 Kết thử hoạt tính chống oxi hoá dịch chiết từ Cọ xẻ Nồng ñộ chất thử % ức chế hoạt ñộng enzim LCQ.N LCQ.E LCQ.M (µg/ml) 128 82 32 36 0 23 0 0,5 0 IC50 (µg/ml) > 128 > 128 61,22 Kết bảng 4.8 cho thấy dịch chiết MeOH Cọ xẻ có hoạt tính ức chế hoạt ñộng enzim peroxydaza với nồng ñộ ức chế IC50 61,22 µg/ml Các dịch chiết lại hoạt tính 4.2.1.3 Hoạt tính gây ñộc tế bào Bảng 4.9 Kết thử hoạt tính gây ñộc tế bào dịch chiết từ Cọ xẻ IC50 (µg/ml) KB LU MCF–7 Hep G2 LCQ.N > 128 > 128 > 128 > 128 LCQ.E > 128 > 128 > 128 > 128 > 128 LCQ.M 68,04 88,30 101,25 Từ bảng 4.9 cho thấy dịch chiết Cọ xẻ MeOH có hoạt tính với dòng tế bào ung thư thử nghiệm là: KB (ung thư biểu mô), MCF–7 (ung thư vú) Hep.G2 (ung thư gan) với giá trị IC50 là: 68,04; 88,30 101,25 µg/ml tương ứng Các dịch chiết lại hoạt tính ức chế dòng tế bào ung thư thử nghiệm Số TT Tên mẫu 4.2.2 Các hợp chất phân lập ñược từ Cọ xẻ Sơ ñồ phân lập chất từ LC1 ñến LC4 ñược trình bày hình 3.5 Bốn chất lần ñầu tiên ñược phân lập từ chi Cọ OCH3 3' HO O OH 4' 2' 5' 1' 6' OCH3 10 OH O LC1: Tricin Footer Page 19 of 126 LC2 : stigmast -5, 22-dien3β− β−O-D-glucopyranoside β− Header Page 20 of 126 20 LC3: Salicin LC4: Saccharose Chất LC1 (tricin) Chất LC1 tinh thể hình kim, màu vàng, ñiểm nóng chảy 290-291oC Phổ hồng ngoại IR (hình 4.20) LC1 có ñỉnh hấp thụ nhóm OH tự (3597 cm-1) OH liên kết hydro (3335 cm-1), carbonyl (1657 cm-1) liên kết C-O-C (1172 cm-1 Phổ ESI-MS (hình 4.21) có pic ion âm với m/z [M–H]- = 329 → M = 330 phù hợp với CTPT C17H14O7 Hình 4.20 Phổ IR LC1 KBr Hình 4.21 Phổ MS LC1 Phổ H-NMR (hình 4.22) có singlet 6H δH = 3,88 Vùng nhân thơm olefin có cụm tín hiệu bao gồm: doublet δH 6,20 (1H, J = 2,09 Hz); doublet δH 6,55 (1H, J = 2,09 Hz) chứng tỏ có proton vị trí meta với nhân thơm, singlet δH 6,97 (1H); singlet δH 7,32 (2H) chứng tỏ có ñối xứng vòng benzen bốn lần Ngoài có singlet δH 12,95 proton phenolic có liên kết cầu hydro Phổ 13C-NMR (hình 4.23) cho kết phù hợp với số liệu từ phổ 1HNMR với 17 tín hiệu carbon Phổ DEPT cho thấy nhóm OCH3 (tín hiệu trùng nhau) với δC = 56,35; nhóm CH, ñó có nhóm tín hiệu trùng δC = 104,38; 10 carbon bậc 4, ñó có carbon có tín hiệu trùng δC = 148,17 Các số liệu cho thấy LC1 flavon có vòng B ñối xứng nhóm có nhóm OCH3 Footer Page 20 of 126 Header Page 21 of 126 Hình 4.22 Phổ 1H–NMR chất LC1 (500 MHz, DMSO) 21 Hình 4.23 Phổ 13C–NMR chất LC1 (125 MHz, DMSO) Số liệu phổ 13C-NMR LC1 hoàn toàn ñồng với phổ tricin ñã công bố tài liệu [20] (bảng 4.10) Tricin ñã ñược phân lập trước ñây từ chi Aechmea, Billbergia, Graminneae có nhiều họ Cyperaceae (họ Cói) Tricin có hoạt tính chống oxi hóa cao Bảng 4.10 Số liệu phổ NMR chất LC1 tricin Chất LC1 (DMSO) Tricin Vị trí δH δC δC 163,63 164,0 6,97 (s) 103,57 103,6 181,77 181,6 157,30 157,2 6,55 (d; 2,09) 98,80 98,7 163,63 163,5 6,20 (d; 2,09) 94,16 94,1 161,38 161,3 10 120,38 120,8 1' 139,85 139,7 2' 7,324 (s) 104,39 104,3 3' 148,17 148,0 4' 164,10 164,0 5' 148,17 148,0 6' 7,324 (s) 104,39 104,3 OCH3 3,884 (s) 56,35 56,3 Chất LC2 (stigmasterol glucoside) Chất LC2 thu ñược dạng bột vô ñịnh hình, màu trắng, màu tím mỏng phun với thuốc thử vanilin/ H2SO4 hơ nóng, có Rf trùng với stigmasterol glucoside Điều ñược củng cố thêm phổ Footer Page 21 of 126 Header Page 22 of 126 22 H-NMR chất LC2 ñồng với phổ stigmast -5, 22-dien-3βO−β−D-glucopyranoside (stigmasterol glucoside), C30H46O5 Chất LC3 (salicin) Chất LC3 thu ñược dạng tinh thể hình kim, không màu Phân tích liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR phổ DEPT kết hợp với liệu phổ trongtài liệu [32, 33] kết luận chất LC3 salicin [2(hydroxy- methyl) phenyl-D- glucopyranoside], CTPT: C13H18O7 Chất LC4 (saccharose) Chất LC4 màu xám với thuốc thử vanilin/ H2SO4 sắc ký lớp mỏng Phân tích phổ 1H 13C-NMR (DMSO D2O) cho phép kết luận chất LC4 saccharose, CTPT: C11H22O11 * Nhận xét chung kết nghiên cứu Cọ xẻ: Dịch chiết MeOH Cọ xẻ có hoạt tính sinh học lý thú phù hợp với kết ñã công bố giới ñã ñược chọn ñể nghiên cứu thành phần hoá học Từ dịch chiết ñã phân lập xác ñịnh ñược cấu trúc hợp chất LC1 (tricin), LC2 (stigmasterol glucoside), LC3 (salicin) LC4 (saccharose) Trong ñó chất LC1 (tricin) LC3 (salicin) ñược công bố có nhiều hoạt tính lý thú Vì vậy, dự ñoán hợp chất thành phần mang hoạt tính dịch chiết từ Cọ xẻ Theo tra cứu tài liệu ñây lần ñầu tiên chất LC1 - LC4 ñược phân lập từ chi Cọ 4.3 Kết nghiên cứu Sơn trà hẹp Từ Sơn trà hẹp (Eriobotrya angustissima Hook f.) ñã phân lập ñược chất, EA2; EA4; EA5; EA6 ; EA1a ; EA1b ; EA2a EA3a EA2a: ursolic acid 3β-acetate EA2: acid ursolic OH EA5: n-hexatetracontan-1-ol Footer Page 22 of 126 EA6: ursolic aldehyd Header Page 23 of 126 23 EA1a: acid 2α α,3α α-di-O EA1b: acid 2α α-OEA1: acid 2α,3α,19α-acetyl,19α α-hydroxy- acetyl,3α α,19α α-di-hydroxy trihydroxy-12-ursenurs-12-en-28-oic -urs-12-en-28-oic 28-oic HO CO OH HO EA4: epicatechin EA3a: pomolic acid 3β-acetate EA3: acid pomolic Các chất EA2; EA2a; EA3a; EA5 EA6: ñược xác ñịnh acid ursolic, ursolic acid 3β-acetate, pomolic acid 3β-acetate, nhexatetracontan-1-ol ursolic aldehyd tương ứng cách so sánh với chất chuẩn Các chất chuẩn ñược nhóm nghiên cứu phân lập từ loài Eriobotrya poilanei xác ñịnh cấu trúc So sánh mỏng chất EA3a phân ñoạn trước thực phản ứng acetyl hóa kết luận chất gốc dịch chiết ethyl acetate acid pomolic (EA3) Chất có khả ức chế tăng trưởng gây chết tế bào K562 - dòng tế bào làm tăng hồng bạch cầu ức chế gia tăng Lucena - dẫn xuất kháng vincristine Chất EA1a (acid 2α α,3α α-di-O-acetyl,19α α-hydroxy-urs-12-en-28-oic) Chất EA1a thu ñược dạng bột màu trắng Phổ ESI-MS cho pic ion phân tử m/z 595 [M+Na]+ Phân tích số liệu phổ1H-NMR, 13 C-NMR, kết hợp với tài liệu cho phép kết luận chất EA1a acid 2α, 3α-di-O-acetyl,19α-hydroxy-urs-12-en-28-oic, CTPT: C34H50O7 Chất EA1b (acid 2α α-O-acetyl,3α α,19α α-dihydroxy-urs-12-en-28-oic) Phổ 1H- 13C-NMR chất EA1b tương tự chất EA1a với khác biệt phân tử EA1b chứa nhóm acetyl [δH = 2,07, δC = 21,30; 170,17] phổ 1H-NMR tín hiệu H-3 cộng hưởng δH = 3,49 (1H, d, J = 2,5) dịch phía trường cao so với H3 phân tử EA1a (∆δH = 1,48ppm) Điều chứng tỏ nhóm hydroxy ñược gắn vị trí C-3 Cấu trúc EA1b ñược xác ñịnh acid 2α-O-acetyl,3α,19α-dihydroxy-urs-12-en-28-oic, CTPT: C32H48O6 Footer Page 23 of 126 Header Page 24 of 126 24 So sánh mỏng chất EA1a, EA1b phân ñoạn trước thực phản ứng acetyl hóa kết luận chất gốc dịch chiết ethyl acetate 2α,3α,19α-trihydroxy-12-ursen-28-oic acid (EA1) Chất có tên acid euscaphic, ñã ñược phân lập ñược từ Isodon oresbius Sản phẩm methyl hóa methyl euscaphate ñã ñược phân lập trước ñây Số liệu phổ 13C-NMR EA1a, EA1b chất methyl euscaphate (125 MHz, CDCl3) ñược trình bày bảng 4.11 Bảng 4.11 Số liệu phổ 13C-NMR EA1a, EA1b methyl euscaphat C EA1a EA1b Methyl C EA1a EA1b Methyl euscaphat euscaphat 38,83 t 37,92 t 38,7 t 17 47,73 s 47,74 s 47,8 s 68,25 d 71,17 d 68,2 d 18 52,85 d 52,89 d 53,1 d 77,16 d 76,87 d 77,1 d 19 73,13 s 73,10 s 73,1 s 38,45 s 38,51 s 38,3 s 20 41,09 d 41,09 d 41,1 d 25,9 t 49,58 d 48,01 d 49,5 d 21 25,99 t 25,99 t 37,3 t 18,22 t 18,02 t 17,9 t 22 37,46 t 37,51 t 32,46 t 32,52 t 32,4 t 23 27,74 q 28,33 q 27,7 q 40,16 s 40,19 s 40,0 s 24 21,56 q 21,85 q 21,5 q 47,73 s 47,74 s 47,0 s 25 16,12 q 16,19 q 16,1 q 10 38,13 s 38,50 s 38,1 s 26 17,04 q 17,05 q 16,6 q 24,66 q 24,6 q 11 23,66 t 23,70 t 23,6 t 27 24,6 q 12 129,05 d 129,14 d 128,8 d 28 183,01 s 183,24 s 178,3 s 13 138,02 s 138,02 s 138,1 s 29 27,39 q 27,39 q 27,3 q 14 41,24 s 41,26 s 41,2 s 30 16,12 q 16,14 q 16,1 q 170,7 s 15 28,19 t 28,16 t 28,1 t Ac 170,64 s 16 25,36 t 25,38 t 25,4 t Ac 170,43 s 170,18 s 170,4 s 20,98 q 21,1 q Chất EA4 (epicatechin) Phân tích số liệu phổ NMR kết hợp so sánh với tài liệu ñã xác ñịnh ñược cấu trúc EA4 epicatechin, CTPT: C15H14O6 * Nhận xét chung kết nghiên cứu Sơn trà hẹp: Đây lần ñầu tiên loài Sơn trà hẹp (E angustissima) thuộc chi Sơn trà (Eriobotrya) ñược nghiên cứu Việt Nam giới Từ ñã phân lập xác ñịnh ñược cấu trúc chất Trong ñó, hai chất triterpene khung thuộc ursane ñược tách dạng nguyên gốc EA2 (acid ursolic) EA6 (ursolic aldehyd) Bốn triterpene khung ursane phân lập ñược dạng sản phẩm acetate từ sản phẩm acetyl hoá phân ñoạn dịch chiết ethyl acetate EA1a; EA1b; EA2a; EA3a tương ứng acid 2α,3α-di-O-acetyl,19α-hydroxy-urs-12-en-28-oic; acid 2α-O-acetyl,3α,19α-dihydroxy-urs-12-en-28-oic; ursolic acid 3β- Footer Page 24 of 126 Header Page 25 of 126 25 acetate; pomolic acid 3β-acetate Hai chất lại: EA4 (epicatechin) flanovoid ancol béo EA5 (n-hexatetracontan-1-ol) EA1a EA1b dẫn xuất acetyl hóa lần lần hợp chất gốc cây: 2α,3α,19α-trihydroxy-12-ursen-28-oic Các chất ñã phân lập ñược từ Sơn trà hẹp thuộc nhóm chất ñã tìm thấy chi ñã công bố Trong số hợp chất trên, ñáng ý acid ursolic, acid pomolic dẫn xuất chúng Đây triterpene thuộc khung ursane, có nhiều hoạt tính sinh học ñộc ñáo ñã ñược công bố, ñặc biệt dẫn xuất ñược tạo thành cách chuyển hoá hoá học oxi hoá, khử hóa ñã thể tính kháng khuẩn chống viêm vượt trội KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ A Kết luận Đây lần ñầu tiên công bố kết nghiên cứu Việt Nam giới thành phần hóa học loài chọn lọc từ chi Schefflera, loài Sơn trà hẹp thuộc chi Eriobotrya lần ñầu tiên Việt Nam công bố kết nghiên cứu loài Cọ xẻ thuộc chi Livistona Hoạt tính sinh học số cặn chiết hợp chất phân lập ñược từ loài nghiên cứu bước ñầu ñược khảo sát Ba loài thuộc Chi Chân chim (Schefflera): • Từ Chân chim bột (Schefflera farinosa (Bl.) Merr.) ñã phân lập ñược hợp chất Bao gồm flavonoid: 4',7-di-Omethylnaringenin (SF1); flavonoid glycoside: quercetin-3 rutinoside (SF8); dẫn xuất acid quinic: acid 3-O-caffeoylquinic (SF4), acid 3,5-di-O-caffeoylquinic (SF7) triterpene: acid 3α,29-dihydroxyolean-12-en-23,28-dioic (SF6) • Từ Chân chim trắng (Schefflera hypoleuca (Kurn) Hamrs) ñã phân lập xác ñịnh cấu trúc chất, gồm có steroid: βsitosterol (SH1), β-sitosterol glucoside (SH3) triterpene khung taraxerane: acid 3α-hydroxy-20-demethyl-isoaleuritolic-14(15)-en28,30-dioic (SH2) • Từ Chân chim núi (Schefflera petelotii Merr.) chất có cấu trúc giống chất ñã nhận ñược từ Chân chim trắng, chất khung friedelan 7α,29-dihydroxy-friedelan-3-on (SP4) ñã ñược phân lập xác ñịnh cấu trúc Đây lần ñầu tiên chất SF1, SF6, SF8 SP4 ñược phân lập từ chi Schefflera Trong ñó SF6 chất chất SP4 ñại diện Footer Page 25 of 126 Header Page 26 of 126 26 ñầu tiên có khung friedelane ñược tìm thấy chi Schefflera Kết thử hoạt tính sinh học cho thấy: Chất SP2 có hoạt tính ñộc tế bào với dòng tế bào biểu mô (KB), gan (HepG2), phổi (Lu) ung thư vú (MCF7); chất SF4, SF6 SF7 hoạt tính với chủng vi sinh vật dòng tế bào ung thư ñem thử Quả Cọ xẻ (Livistona chinensis (Jacq.) R Br): • Kết thử hoạt tính cặn chiết MeOH Cọ xẻ (Livistona chinensis (Jacq.) R Br) cho thấy thể hoạt tính kháng vi khuẩn Gram (+) Staphylococcus aureus tương ñối tốt (IC50 = 46,77 µg/ml); gây ñộc tế bào với dòng tế bào ung thư người KB, MCF-7 Hep-G2 với IC50 = 68,04; 88,30 101,25 µg/ml tương ứng chống oxi hóa với IC50 = 61,22 µg/ml • Từ cặn chiết hợp chất ñã ñược phân lập, cấu trúc chúng ñược xác ñịnh là: tricin (LC1), stigmast -5,22-dien-3β-O-Dglucopyranosid (LC2), salicin (LC3) saccharose (LC4) ñặc biệt chất LC1 có hàm lượng cao, chiếm 0.028% lượng mẫu khô ban ñầu Bốn chất lần ñầu tiên ñược phân lập từ chi Livistona theo dự ñoán chất LC1 (tricin) LC3 (salicin) với hoạt tính tốt thành phần tạo hoạt tính cặn chiết MeOH Từ Sơn trà hẹp (Eriobotrya angustissima Hook f.) ñã phân lập ñược chất, ñó cấu trúc chất ñược xác ñịnh là: acid ursolic (EA2), epicatechin (EA4), n-hexatetracontan-1-ol (EA5) aldehyd ursolic (EA6) Bốn chất lại nhận ñược dạng dẫn xuất acetate, bao gồm: acid 2α,3α-di-O-acetyl,19α-hydroxy-urs-12-en-28-oic (EA1a), acid 2α-O-acetyl,3a,19α-dihydroxy-urs-12-en-28-oic (EA1b), ursolic acid 3β-acetate (EA2a) pomolic acid 3β-acetate (EA3a) Lần ñầu tiên chất 2α,3α,19α-trihydroxy-12-ursen-28-oic acid (EA1) - chất gốc EA1a EA1b ñược phân lập từ chi Sơn trà dạng sản phấm acetate hoá B Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu phân lập xác ñịnh cấu trúc hóa học hợp chất từ phận khác loài cách hệ thống Lựa chọn dịch chiết có hoạt tính tốt ñể phân lập chất với hàm lượng lớn, thực phản ứng chuyển hóa nhằm tạo dẫn xuất có hoạt tính ưu việt Thử nghiệm ñộc tính, thử nghiệm hoạt tính quy mô lớn hơn, sở ñó kết luận khả ứng dụng vào thực tế hợp chất Footer Page 26 of 126 Header Page 27 of 126 27 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CÔNG BỐ CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Giang Thị Kim Liên, Nguyễn Thị Hoàng Anh, Đào Hùng Cường (2011), Chemical constituents of ethyl axetate extract from Schefflera hypoleuca (Kurz) Hamrs leaves, Journal of science and technology, University of Danang, 4(45), Vol 1, pp 128-132 Giang Thị Kim Liên, Phan Tất Hòa, Phạm Thị Ninh, Nguyễn Thế Anh, Trần Văn Sung (2011), Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Cọ xẻ Livistona chinensis, Tạp chí Hóa học, T.49 (2ABC), tr 446-451 Nguyễn Thanh Tâm, Giang Thị Kim Liên, Nguyễn Thị Hoàng Anh, Trần Văn Sung (2011), Thành phần hóa học Sơn trà hẹp (Eribotrya Angustissima Hook.F.) thu tỉnh Lâm Đồng Việt Nam, Tạp chí Hóa học, T.49 (4), tr 463-467 Giang Thị Kim Liên, Nguyễn Thanh Tâm, Nguyễn Thị Hoàng Anh, Trần Văn Sung, Đào Hùng Cường (2011), 3α,29-dihydroxy12-oleanen-23,28-dioic acid triterpen từ Schefflera farinosa Merr., Tạp chí Hóa học, T.49 (6), tr 738-742 Giang Thị Kim Liên, Nguyễn Vũ Trường, Nguyễn Thị Hoàng Anh, Đào Hùng Cường (2011), Nghiên cứu xác ñịnh thành phần hoá học vỏ Ngũ gia bì chân chim pételot, Tạp chí Khoa học Công nghệ Trường ñại học Kỹ thuật, No 84, tr 127130 Footer Page 27 of 126 ... khoa học nước giới quan tâm Với lý chọn ñề tài Nghiên cứu thành phần hoạt tính sinh học số loài chọn lọc từ chi Schefflera, Livistona Eriobotrya Việt Nam làm luận án tiến sĩ Mục ñích nghiên cứu. .. phần hóa học loài chọn lọc từ chi Schefflera, loài Sơn trà hẹp thuộc chi Eriobotrya lần ñầu tiên Việt Nam công bố kết nghiên cứu loài Cọ xẻ thuộc chi Livistona Hoạt tính sinh học số cặn chi t hợp... nghiên cứu ba loài thuộc chi Chân chim Đây lần ñầu tiên loài Chân chim bột, Chân chim trắng Chân chim núi thuộc chi Chân chim ñược nghiên cứu Việt Nam giới Kết nghiên cứu thành phần hóa học loài