Nghiên cứu bán tổng hợp chất trung gian trong quy trình tổng hợp thuốc ung thư vinblastin từ catharathin và vindolin chiết tách từ cây dừa cạn (Catharanthur roseus)

Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG MAI VĂN ĐẠT NGHIÊN CỨU BÁN TỔNG HỢP CHẤT TRUNG GIAN TRONG QUY TRÌNH TỔNG HỢP THUỐC UNG THƯ Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: GS.TSKH TRẦN VĂN SUNG Phản biện : PGS.TS Lê Tự Hải Phản biện : PGS.TS Nguyễn Phi Hùng VINBLASTIN TỪ CATHARATHIN VÀ VINDOLIN CHIẾT TÁCH TỪ CÂY DỪA CẠN (CATHARANTHUR ROSEUS) Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 27 Luận văn ñã ñược bảo vệ trước hội ñồng chấm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 13 tháng 11 năm 2012 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - 2012 Footer Page of 126 Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin – Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵn Header Page of 126 MỞ ĐẦU ĐẶT VẤN ĐỀ Sự thay ñổi khí hậu toàn cầu dẫn tới khắc nghiệt thời Trong ñề tài ñặt mục tiêu: “nghiên cứu bán tổng hợp chất trung gian quy trình tổng hợp thuốc chống ung thư vinblastin từ catharathin vindolin chiết tách từ tiết, môi trường bị ô nhiễm ñó ñiều kiện sống thay ñổi thói dừa cạn’’ quen sinh hoạt người có nhiều bất lợi cho sức khỏe, MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Những yếu tố ñã tác ñộng ñến sức khỏe người, làm gia 2.1 Thu thập tài liệu, thông tin tăng nguy mắc bệnh, mà ñó có nguy tế bào bị biến 2.2 Tiến hành thực nghiệm ñổi Đây nguyên nhân làm cho số ca mắc bệnh ung thư ngày tăng Vì thế, nhiệm vụ hàng Tổng hợp số chất trung gian quy trình tổng hợp vinblastin (Sơ ñồ 1) ñầu nhà khoa học nghiên cứu, cải tiến biện pháp chữa trị ung thư ñể nâng cao chất lượng sống cho người bệnh Vinblastin loại thuốc ñược sử dụng ñể ñiều trị bệnh ung thư thông qua phương pháp hóa trị liệu Đây hợp chất có nguồn gốc tự nhiên, ñược tách từ dừa cạn Hoạt chất có khả chống phân bào ñược sử dụng kết hợp với số loại thuốc khác ñể ñiều trị nhiều loại ung thư ung thư bạch cầu, ung thư bàng quang, ung thư tinh hoàn, u bạch huyết ,… Tuy nhiên, vinblastin lại có hàm lượng thấp chiếm khoảng 0,01% dừa cạn khô trình phân lập hợp chất tốn kém, ñầy khó khăn hiệu suất thấp [15], [16] Chính yếu tố nên vinblastin ñối tượng quan tâm nhà khoa học Phương pháp bán tổng hợp tận dụng alkaloid phụ trình phân lập vinblastin từ dừa cạn catharanthin vindolin ñược quan tâm nhiều Đây alkaloid có hàm lượng cao vinblastin (trong nguyên liệu thực vật khô tách ñược 400 g catharanthin 800 g vindolin [15] có khả ghép ñôi ñể tạo thành vinblastin Do ñó việc nghiên cứu bán tổng hợp vinblastin từ vindolin catharanthin cần thiết Footer Page of 126 Sơ ñồ Sơ ñồ tổng chất trung gian ñể tổng hợp vinblastin ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU - Nghiên cứu quy trình tổng hợp bốn chất trung gian 56, 57, Header Page of 126 58 chất 59 trình tổng hợp thuốc chống ung thư thư ung thư bạch cầu, ung thư bàng quang, ung thư tinh vinblastin từ catharathin vindolin, chiết tách từ dừa cạn hoàn, u bạch huyết,… - Các chất tổng hợp ñược kiểm tra ñộ tinh khiết sắc ký Tuy nhiên, vinblastin lại có hàm lượng thấp chiếm lớp mỏng (SKLM), sắc ký lỏng hiệu cao ( HPLC), sắc ký khoảng 0,01% dừa cạn khô trình phân lập hợp lỏng gắn với khối phổ (LC/ MS)… chất tốn kém, ñầy khó khăn hiệu suất thấp làm cho giá PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU thành sản phẩm cao BỐ CỤC CỦA LUẬN VĂN Ngoài phần mở ñầu, kết luận, danh mục tài liệu tham Từ kết khảo sát sơ Viện Hóa học công nghiệp, kết hợp so sánh tham khảo tài liệu nước ngoài, khảo phụ lục, nội dung luận văn chia làm chương nhận thấy với công nghệ chiết suất ñại hiệu suất thu hồi Chương trình bày tổng quan tài liệu khoảng 40%, giống dừa cạn tốt (có hàm lượng vinblastin Chương nêu nguyên liệu hoá chất phương pháp nghiên cứu 0,014% tính theo khối lượng khô – tương ñương với Chương trình bày phần thực nghiệm ñề tài Madagasca), chi phí tối thiểu ñể phân lập gam vinblastin Chương trình bày kết nghiên cứu thảo luận ñề tài lớn 200 USD, ñó giá xuất xưởng Eli Lilly, TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU Geoden Richer Cipla dao ñộng khoảng 120 – 135 Cây dừa cạn có tên dừa, hải ñằng Tên khoa học USD/1 gam vinblastin sunfat Như túy dựa vào Catharanthus roseus (L.) G – Don [Apocynaceae] loại cỏ cao chiết – tách, thuốc chống ung thư từ hoa dừa cạn Việt khoảng 40 – 60 cm.Thân mềm tẽ nhiều cành nên thường nghiêng Nam không cạnh tranh ñược thị trường nước phía Hoa có cánh màu phớt hồng màu trắng Cây có Đề tài nghiên cứu bán tổng hợp chất trung gian quy nguồn gốc Madagasca (châu Phi), ñược người Pháp ñưa vào trồng trình tổng hợp vinblastin từ vindolin catharathin chiết tách từ Việt Nam ñể làm cảnh Cây dễ trồng, phát triển nhanh nên dừa cạn làm thuốc chống ung thư chương trình hóa dược lâu sau ñã lan nhiều ñịa phương, tỉnh ñồng thực thành công tạo công nghệ bán tổng hợp vinblastin ven biển nước ta Dáng ñẹp, mềm mại, xanh mướt, hoa rực phù hợp với Việt Nam, tận dụng có hiệu hoạt chất chiết sáng suất từ dừa cạn làm giảm giá thành thuốc, mang lại sống tốt ñẹp cho người Vinblastin hợp chất có nguồn gốc tự nhiên, ñược tách từ dừa cạn Hoạt chất có khả chống phân bào ñược sử dụng kết hợp với số loại thuốc khác ñể ñiều trị nhiều loại ung Footer Page of 126 Header Page of 126 CHƯƠNG sau: acid pyrocatechic, sắc tố flavonoid (glucosid quercetin TỔNG QUAN TÀI LIỆU kampferol) anthocyanin từ thân dừa cạn hoa ñỏ 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY DỪA CẠN Ngoài từ chiết ñược acid ursolic, từ rễ chiết ñược cholin Cây dừa cạn có tên dừa, hải ñằng Tên khoa học Năm 1952, nghiên cứu tác dụng alkaloid từ Catharanthus roseus (L.) G – Don [Apocynaceae] loại dừa cạn lên chuột , R Noble C Noble ñã phát hợp cỏ cao khoảng 40 – 60 cm Thân mềm tẽ nhiều cành nên chất có khả làm giảm số lượng bạch cầu máu thường nghiêng phía Hoa có cánh màu phớt hồng chuột Từ ñó, theo ñịnh hướng nghiên cứu chất gây ñộc tế màu trắng Cây có nguồn gốc Madagasca (châu Phi), bào gây ức chế phân bào bạch cầu ác tính, vinca ñược người Pháp ñưa vào trồng Việt Nam ñể làm cảnh alkaloid có hoạt tính vinblastin, vincristin, vindesin Cây dễ trồng, phát triển nhanh nên lâu sau ñã lan vinorelbin ñã ñược phân lập bán tổng hợp ñể ứng dụng nhiều ñịa phương, tỉnh ñồng ven biển ñiều trị ung thư, ñặc biệt bệnh Hodgkin bệnh nước ta Dáng ñẹp, mềm mại, xanh mướt, hoa rực sáng, ung thư máu ñấy nét ñặc trưng tạo ñược hấp dẫn loài Năm 1958, lần ñầu tiên Noble Beer ñã phân lập ñược vinblastin gọi vincaleukoblastin từ dừa cạn Theo Đông y, dừa cạn có tác dụng làm săn, chống viêm, hạ áp, Trong năm 1959 ñến 1962, Johnson Svoboda ñã tìm ñược sử dụng ñể ñiều trị số bệnh: viêm ñại tràng, bệnh trĩ, khí hư vincristin - alkaloid có hàm lượng thấp dừa cạn bạch ñới, tăng huyết áp, viêm nhiễm phần phụ, kinh bế, zona, phong Hợp chất muối sunfat vinblastin vincristin ñã ñược áp ngứa, ñái tháo ñường, vàng da Lá phần ñược dùng dụng rộng rãi trị liệu hóa học chữa ung thư máu, ung làm thuốc Có thể ñể tươi giã ñắp, phơi khô sắc uống chế biến thư mô bào bạch huyết, ung thư tinh hoàn ung thư vú [32] thành dạng trà Vinblastin ñược FDA phê chuẩn vào năm 1965 thuốc Hoạt chất dừa cạn alkaloid có nhân indol tất ñiều trị nhiều loại ung thư như: bạch cầu, bàng quang, tinh hoàn, phận cây, nhiều rễ Dừa cạn Việt u bạch huyết, … ñược bán thị trường 40 năm Nam có tỷ lệ alkaloid toàn phần 0,1 - 0,2% Rễ chứa hoạt chất Vinblastin trở thành dược phẩm quan trọng, nhiên lại (0,7 - 2,4%) nhiều thân (0,46%) (0,37 - 1,15%) có hàm lượng nhỏ thực vật (chiếm 0,01% dừa Các chất chủ yếu là: vinblastin, vincristin tetrahydroalstonin, cạn khô việc tách hợp chất từ thực vật thời gian, prinin, vindolin, catharanthin, ajmalicin, alstonine, leurocin, tốn kém, hiệu suất thấp ñầy khó khăn [15], [16] Do ñó vincaleucoblastin, vincosid (1 glucoalkaloid tiền thân ñể sinh tổng vinblastin ñối tượng ñược nhà khoa học quan tâm hợp alkaloid) Từ dừa cạn, người ta chiết ñược chất Nhiều phương pháp tổng hợp vinblastin ñã ñược nghiên cứu bao Footer Page of 126 Header Page of 126 gồm: nuôi cấy tế bào [15], công nghệ chuyển hóa [31] , bán tổng a Bán tổng hợp vinblastin từ catharanthin vindolin hợp tổng hợp toàn phần Trong ñó phương pháp bán tổng hợp b Bán tổng hợp vinblastin từ vindolin ñể tận dụng alkaloid phụ trình tách vinblastin từ dừa cạn vindolin catharanthin có hàm lượng lớn nhiều (trong nguyên liệu thực vật khô tách ñược 400 g catharanthin 800 g vindolin , ñồng thời monome ghép ñôi tạo thành vinblastin ñược quan tâm lớn Cho ñến nay, vinblastin dẫn xuất sử dụng làm thuốc chống ung thư giới ñã ñược sản xuất chủ yếu theo hai ñường [23]: - Chiết xuất từ dừa cạn; - Bán tổng hợp từ vindolin catharanthin Vinblastin dẫn xuất alkaloid dimeric có hàm lượng thấp (~ 0,01 % dừa cạn khô), alkaloid chủ yếu dừa cạn vindolin - hai phần monomer cấu thành vinblastin - có hàm lượng dừa cạn lớn ñến lần so với vinblastin Trong trình phân tách “alkaloid tổng số” dừa cạn sắc ký hấp phụ, thông thường vindolin catharanthin ñược rửa giải trước so với vinblastin Để hạ giá thành thuốc, tận dụng phụ phẩm vindolin, catharanthin vinca alkaloid khác, nghiên cứu bán tổng hợp vinblastin dẫn xuất từ vindolin catharanthin ñã ñược phát triển mạnh mẽ ñưa vào áp dụng giới từ cuối năm 1970 [13], [23] 1.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP TỔNG HỢP VINBLASTIN 1.2.1 Giới thiệu vinblastin 1.2.2 Phương pháp bán tổng hợp Footer Page of 126 Header Page of 126 10 CHƯƠNG 3.2.1 Tổng hợp chất 56 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU 2.2 DUNG MÔI VÀ HÓA CHẤT NGHIÊN CỨU 2.3 CÁC PHƯƠNG PHÁP CHUYỂN HÓA HÓA HỌC 2.4 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA CÁC CHẤT CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 3.1 THIẾT BỊ VÀ HÓACHẤT 3.2 NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP CÁC CHẤT TRUNG GIAN TRONG QUY TRÌNH TỔNG HỢP VINBLASTIN Tổng hợp chất 56, 57, 58, 59 theo sơ ñồ hình 3.1 Quy trình tổng hợp 2,92 g (20 mmol) chất 54, 1,28 g (40 mmol) MeOH khan, 0,344 g (2 mmol) p-toluensunfonic acid 50 ml CHCl3 ñược cho vào bình cầu 100 ml hai cổ có loại nước, sinh hàn hồi lưu Hỗn hợp phản ứng ñược ñun hồi lưu 10h, ñể nguội sau ñó ñược rửa với nước, trung hòa NaHCO3 ñến pH = cuối rửa với H2O Dịch chiết ñược làm khan với Na2SO4 cất loại dung môi, thu ñược 3,03 g sản phẩm dimethyl-2-oxoglutarat 56 ( HS: 87%) Phổ hồng ngoại IR (KBr) ν (cm-1): 3461,55 ; 2972,70; 1732,86; 1626,39; 1435,34; 1254,48; 1202,24; 1084,02; 979,55; 611,14; 514,91 cm-1 Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 3,86 (3H, s, OCH3); 3,66 (3H, s, OCH3); 3,14 (2H, t, J = 6,5 Hz, H-3); 2,66 (2H, t, J = 6,5 Hz, H-4) Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3) δ (ppm): 192,18 (C-2); 172,36 (C-5); 160,84 (C-1); 52,96; 51,90 (2xOCH3); 34,10 (C-3); 27,3 (C-4) 3.2.2 Tổng hợp hợp chất 57 Hình 3.1 Sơ ñồ tổng hợp hợp chất trung gian quy trình tổng hợp toàn phần vinblastin Footer Page of 126 Header Page of 126 12 11 3.2.3 Tổng hợp chất 58 59 Quy trình tổng hợp 2,04 g (10mmol) L-tryptophan ñược hòa 50 ml THF (0,756 g, 10,5mmol) 100ml benzene ñược cho vào quay cất hết dung môi áp suất giảm, thu ñược muối khan Cặn muối ñược hòa 50ml THF khan, cho 2,2g (12,6 mmol) dimethyl-2-oxoglutarate vào Hỗn hợp phản ứng ñược ñun hồi lưu 15 h, cất loại dung môi Cặn ñược hòa 100ml CH2Cl2 rửa với 50ml nước, làm khan Na2SO4 cất loại dung môi Tách cột silicagel với hệ dung môi rửa giải EtOAc/CH2Cl2 = 10 : 90, CH2Cl2/MeOH/ HOAc = 90/10/5 Quy trình tổng hợp Thu ñược 1,39 g (42%) sản phẩm 57 637 mg (1,9 mmol) chất 57 ñược hòa 15 ml THF Nhỏ từ từ Phổ hồng ngoại IR (KBr) ν (cm ): 3341,71; 1731,15; 1654,05; -1 1404,23; 1185,25; 1068,05 cm-1 292 mg (2,1 mmol) isobutyl chloroformate 196 mg (1,9 mmol) Nmethylmorpholine, khuấy thêm 10 phút, cho 247 mg (1,9 mmol) N- Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 8,48 (1H, s); 7,48 (1H, hydroxy-2-thiopyridone 233 mg (2,3 mmol) triethylamine vào hỗn d, J = Hz) ; 7,36 (1H, d, J = 8,0 Hz) ; 7,20 (1H, t, J = 7,5 Hz); 7,11 hợp phản ứng khuấy thêm 30 phút nhiệt ñộ phòng sau ñó làm lạnh (1H, t, J = 7,5 Hz); 5,45 (1H, d, J = 7,0 Hz); 3,71 (3H, s, OCH3); 3,34 xuống -15oC ñá muối nhỏ 1750 mg t-butylthiol, dung dịch (1H, d, J = 15,5 Hz); 3,10 (1H, dd, J = 15,5 7,5 Hz); 2,84 – 2,89 phản ứng ñược tăng từ từ lên 20oC cách chiếu bóng ñiện 250W (1H, m); 2,63 – 2,68 (1H, m); 2,47 – 2,52 (1H, m); 2,18 – 2,22 (1H, 30 phút Quay cất hết dung môi áp suất giảm, thu ñược cặn m) Cặn ñược hòa 100ml CH2Cl2 rửa với HCl loãng cuối Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3) δ (ppm): 175,36 (C-16); 173,72 với 50ml nước, làm khan Na2SO4 Cất loại dung môi (C-19); 172,56 (C-17); 136,96 (C-6); 130,56 (C-8); 126,06 (C-1); Tách cột silicagel với hệ dung môi rửa giải EtOAc thu ñược 122,87 (C-2); 119,93 (C-3); 118,72 (C-4); 111,42 (C-5); 106,27 (C- 654 mg (81%) sản phẩm 58 9); 63,98 (C-11); 52,90 (C-18); 49,53 (C-13); 34,24 (C-14); 30,73 (C-15); 24,03 (C-10) 425 mg (1 mmol) chất 58 ñược hòa 12 ml THF cho từ từ 528 mg (1 mmol) Belleau’reagent, hỗn hợp phản ứng khuấy thêm nhiệt ñộ phòng sau ñó ñược quay cất dung môi hết dung môi áp suất giảm, thu ñược cặn.Tách cột silicagel với hệ dung môi rửa giải EtOAc thu ñược 227 mg (80%) sản phẩm 59 Footer Page of 126 Header Page of 126 13 14 Phổ hồng ngoại IR (KBr) ν (cm-1): 3382,09; 2927,53; 2856,51; CHƯƠNG -1 1667,97; 1465,26; 1419,58; 1165,48; 1076,97 cm Phổ H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 8,35 (1H, s); 7,50 (1H, KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 TỔNG HỢP HỢP CHẤT 56: dimethyl - 2-oxoglutarat d, J = 7,5 Hz); 7,31 (1H, d, J = 7,5 Hz); 7,18 (1H, t, J = 7,0 Hz); 7,12 (1H, d, J = 7,0 Hz); 5,36 (1H, d, J = 7,0 Hz); 5,20 (1H, d, J = 7,0 Hz); 3,65 (3H, s); 3,41 (1H, m); 3,10 – 3,15 (1H, m); 2,49 – 2,72 (3H, m); 1,88 – 1,94 (1H, m) Phổ C-NMR (125MHz, CDCl3) δ (ppm): 173,75 (C-16); 171,17 13 (C-17); 136,38 (C-6); 132,45 (C-8); 126,64 (C-1); 122,35 (C-2); 119,87 (C-3); 118,43 (C-4); 111,06 (C-5); 105,54 (C-9); 52,53 (C11); 52,23 (C-18); 49,35 (C-13); 31,51 (C-14); 26,32 (C-15); 23,60 (C-10) Dimethyl-2-oxoglutarat ñược tạo thành cho 2- oxopentanedioic acid phản ứng với MeOH khan (1:2 theo tỉ lệ mol), xúc tác p-toluensunfonic acid cho hiệu suất cao (87%) Phổ hồng ngoại: (Hình 4.1) cho ñỉnh hấp thụ ñặc trưng nhóm carbonyl 1732,86 cm-1 (C=O) Phổ 1H-NMR (Hình 4.2 4.3) có hai tín hiệu triplet vùng trường cao với δH = 3,14 (2H, t, J = 6,5 Hz, H-3); 2,66 (2H, t, J = 6,5 Hz, H-4) Đặc biệt xuất hai tín hiệu singlet δH = 3,86, 3,66 (2x3H, s, x OCH3) ñặc trưng cho nhóm methyl este Phổ 13C-NMR hợp chất dimethyl -2-oxoglutarat 56 (Hình 4.4 4.5) có mặt cacbon ñó có nhóm cacbon bậc (CH2); nhóm cacbon bậc (OCH3) nhóm cacbon bậc (C) Phổ 13CNMR có tín hiệu nhóm methyl este δ = 173,72 (C-19) ; 172,56 (C-17), nhóm xêton δ = 175,36 (C-16) có tín hiệu nhóm OCH3 δ = 52,96 51,90 ppm Từ số liệu phổ hồng ngoại, phổ khối, 1H -NMR 13C-NMR chất 56 oxoglutarat Footer Page of 126 cho thấy hoàn toàn phù hợp với dimethyl -2- Header Page of 126 15 16 Hình 4.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR chất 56 Hình 4.1 Phổ hồng ngoại chất 56 Hình 4.2 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR chất 56 Footer Page of 126 Hình 4.4 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR chất 56 Header Page 10 of 126 18 17 Bảng 4.1 Số liệu phổ 1H- 13C-NMR chất 57 4.2 TỔNG HỢP HỢP CHẤT 57 (3-Oxo-5-carboxy-9-methoxycarbonylindolizino[8,7-b]indole) STT Chất 57 δH (J=Hz) Tài liệu [28] δC δH (J=Hz) C δC 126,06 122,87 7,36 (d, J = 8,0 Hz) 7,26 (d, J = 7,2 Hz) 119,93 7,20 (t, J = 7,5 Hz) 7,12 (m) 118,72 7,11 (t, J = 7,5 Hz) 7,05 (m) 111,42 7,48 (d, J = 8,0 Hz) 7,42 (d, J = 7,2 Hz) với δH = 7,48 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-2); 7,36 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5) 136,96 hai tín hiệu triplet với δH = 7,20 (1H, t, J = 7,5 Hz, H-3); 7,11 - (1H, t, J = 7,5 Hz, H-4) Có tín hiệu duplet δH = 5,45 (1H, d, J 130,56 = 7,0 Hz) ñặc trưng cho H-11 Đặc biệt xuất tín hiệu singulet δ 106,27 =3,71(3H, s, OCH3) ñặc trưng cho nhóm OCH3 10 24,03 3,34 (1H, d, J = 15,5 3,30 (1H, d, J = 15 Hz) Hz) 5,45 (d, J = 7,0 Hz) 5,38 (d, J = 7,5 Hz) 3,10 (2H, dd, J=15,5 3,00 (dd, J=15,6 và 7,5) 7,5) 2,84 – 2,89 (2H, m) 2,72 – 2,84 (2H, m) 3,71 (3H, s) 3,55 (3H, s) Phổ hồng ngoại: (Hình 4.6) cho ñỉnh hấp thụ ñặc trưng nhóm OH 3341,71 cm-1 keton 1731,15 cm-1 Phổ 1H-NMR (Hình 4.7; 4.8 4.9) có hai tín hiệu dublet Phổ 13 C-NMR (Hình 4.10 4.11) có mặt 17 cacbon ñó có nhóm CH2 cacbon bậc 2; nhóm OCH3 cacbon bậc 1; 11 63,98 NMR xuất tín hiệu δ =172,56 ñặc trưng cho nhóm COOH (C- 12 - 17); δ = 173,72 ñặc trưng cho nhóm keton (C-16) δ = 173,72 ppm 13 49,53 ñặc trưng cho nhóm este (C-18) 14 34,24 nhóm cacbon bậc nhóm cacbon bậc (C) Đặc biệt phổ 13C- Phổ khối ESI-MS cho pic có m/z= 327 pic ion giả ñịnh - [M-1] phù hợp với công thức phân tử C17H16O5N2 (Hình 4.12) 13 Từ số liệu phổ hồng ngoại, phổ khối, H -NMR CNMR chất 57 hoàn toàn phù hợp với liệu phổ tài liệu 28 (xem bảng 4.1) Footer Page 10 of 126 15 30,73 16 175,36 17 172,56 18 173,72 19 52,09 Header Page 11 of 126 19 20 Hình 4.10 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR chất 57 Hình 4.5 Phổ hồng ngoại chất 57 Hình 4.6 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR chất 57 Hình 4.11 Phổ khối ESI-MS chất 57 Footer Page 11 of 126 Header Page 12 of 126 22 21 Bảng 4.2 Số liệu phổ 1H- 13C-NMR chất 59 4.3 TỔNG HỢP CHẤT 58 59 STT Chất 59 δH (J=Hz) Tài liệu [28] δC δH (J=Hz) C δC 126,64 122,35 119,87 7,31 (1H, d , J=7,5 Hz) 7,12 (1H, t, J=7,0 Hz) 118,43 7,18 (1H, t, J=7,0 Hz) 111,06 7,50 (1H, d, J=7,5 Hz) Phổ 1H-NMR (Hình 4.14; 4.15 4.16) có hai tín hiệu dublet 136,38 với δH = 7,50 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-5); 7,31 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-2) - hai tín hiệu triplet với δH = 7,18 (1H, t, J = 7,0 Hz, H-4); 7,12 132,45 (1H, t, J = 7,0 Hz, H-3) Đặc biệt xuất tín hiệu singulet δ =3,65 105,54 (3H, s, OCH3) ñặc trưng cho nhóm OCH3 10 23,60 3,15 – 3,45 (2H, m) 3,05 – 3,30 (2H, m) 11 52,53 5,20 – 5,36 (2H) 4,58 (2H, m) nhóm cacbon bậc nhóm cacbon bậc (C) Đặc biệt phổ 13C- 12 - NMR xuất tín hiệu δ = 173,75 ñặc trưng cho nhóm keton (C-16) 13 49,35 δ = 171,17 ppm ñặc trưng cho nhóm este (C-17) 14 31,51 2,49 – 2,78 (2H, m) 2,49 – 2,82 (2H, m) 15 26,32 2,65 (2H, m) 2,54 (2H, m) 16 173,75 17 171,17 18 52,23 3,65 (3H, s) 3,79 (3H, s) Chất 58: Chất 58 chất trung gian, không bền, chuyển hóa thành chất 59 xác ñịnh cấu trúc chất 59 Chất 59:(3-Oxo-9-methoxycarbonylindolizino[8,7-b]indole) Phổ hồng ngoại: (Hình 4.13) cho ñỉnh hấp thụ ñặc trưng nhóm keton 1731,15 cm-1 Phổ 13C-NMR (Hình 4.17 4.18) có mặt 16 cacbon ñó có nhóm CH2 cacbon bậc 2; nhóm OCH3 cacbon bậc 1; Phổ khối ESI-MS cho pic có m/z= 285 pic ion giả ñịnh + [M+1] phù hợp với công thức phân tử C16H16O3N2 (Hình 4.18) Từ số liệu phổ hồng ngoại, phổ khối, 1H -NMR 13C-NMR chất 59 hoàn toàn phù hợp với tài liệu 28 (xem bảng 4.2) Footer Page 12 of 126 7,38 (1H, d , J=8,7 Hz) 7,23 (1H, t , J=7,8 Hz) 7,13 (1H, t, J=7,8 Hz) 7,51(1H, d, J=7,8 Hz) Header Page 13 of 126 23 Hình 4.12 Phổ hồng ngoại chất 59 24 Hình 4.16 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR chất 59 Hình 4.13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR chất 59 Hình 4.18 Phổ khối ESI-MS chất 59 Footer Page 13 of 126 Header Page 14 of 126 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Chúng ñã tổng ñược hợp chất trung gian 56, 57, 58, 59 quy trình tổng hợp toàn phần vinblastin làm thuốc chống ung thư với hiệu suất cao, quy trình không phức tạp - Các sản phẩm thu ñược ñã ñược xác ñịnh cấu trúc hóa học việc kết hợp phương phương pháp phổ ñại như: Phổ hồng ngoại (FTIR); phổ khối phân giải cao (HR-ESI-MS); phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13C-NMR Các số liệu phổ cho thấy phù hợp hoàn toàn chất tổng hợp ñược với cấu trúc dự ñoán Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu tổng hợp hợp chất quy trình bán tổng hợp chất trung gian quy trình tổng hợp toàn phần thuốc chống ung thư vinblastin từ hóa chất Footer Page 14 of 126  ... NGHIÊN CỨU - Nghiên cứu quy trình tổng hợp bốn chất trung gian 56, 57, Header Page of 126 58 chất 59 trình tổng hợp thuốc chống ung thư thư ung thư bạch cầu, ung thư bàng quang, ung thư tinh vinblastin. .. tổng hợp ñược với cấu trúc dự ñoán Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu tổng hợp hợp chất quy trình bán tổng hợp chất trung gian quy trình tổng hợp toàn phần thuốc chống ung thư vinblastin từ hóa chất. .. tới khắc nghiệt thời Trong ñề tài ñặt mục tiêu: nghiên cứu bán tổng hợp chất trung gian quy trình tổng hợp thuốc chống ung thư vinblastin từ catharathin vindolin chiết tách từ tiết, môi trường