Nghiên cứu một số chất tạo hương thuộc nhóm terpenoid thu nhận từ một số loại quả có múi ở miền bắc việt nam và ứng dụng trong công nghiệp thực phẩm

PHƯƠNG PHÁP THU HỒI CHẤT THƠM, TINH DẦU VÀ CÁC CẤU TỬ TẠO HƯƠNG TRONG TINH DẦU VỎ QUẢ CÓ MÚI .... Giá trị logP và momen lưỡng cực của các cấu tử trong các phân đoạn tinh dầu vỏ quả cam s

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI

NGUYỄN VĂN LỢI

NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHẤT TẠO HƯƠNG THUỘC NHÓM TERPENOID THU NHẬN TỪ MỘT SỐ LOẠI QUẢ CÓ MÖI Ở MIỀN BẮC VIỆT NAM VÀ

ỨNG DỤNG TRONG CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM

LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

Hà Nội: 2013

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI

NGUYỄN VĂN LỢI

NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHẤT TẠO HƯƠNG THUỘC NHÓM TERPENOID THU NHẬN TỪ MỘT SỐ LOẠI QUẢ CÓ MÖI Ở MIỀN BẮC VIỆT NAM VÀ

ỨNG DỤNG TRONG CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM

LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

2

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan các số liệu và kết quả nghiên cứu trong Luận án này là trung thực

Em xin chân thành cảm ơn các thầy, cô giáo trong hội đồng chấm Luận án Tiến sĩ đã dành thời gian đọc, nhận xét và góp ý cho Luận án của em Em xin gửi lời cảm ơn tới thầy TS

Vũ Hồng Sơn và các thầy, cô giáo trong Bộ môn Quản lý chất lượng, Bộ môn Công nghệ Sinh học, Bộ môn Công nghệ Thực phẩm- Viện Công nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm, Viện Đào tạo Sau đại học- Trường Đại học Bách khoa Hà Nội đã đào tạo, tạo điều kiện, hướng dẫn và giúp đỡ em trong suốt thời gian học tập, làm thí nghiệm và viết Luận án

Tôi xin gửi lời cảm ơn tới các cán bộ, công nhân viên Trung tâm giáo dục và phát triển sắc ký, Phòng thí nghiệm Công nghệ lọc hóa dầu và Vật liệu xúc tác- Viện Hóa học Kỹ thuật,

Bộ môn Vi sinh- Hóa sinh- Sinh học phân tử- Viện Công nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm- Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Khoa Hóa học- Trường Đại học Khoa học Tự nhiên- Đại học Quốc gia Hà Nôi Phòng Sinh học thực nghiệm- Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên- Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam Phòng Bảo quản và chế biến- Viên nghiên cứu Rau quả Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn bạn Học viên Cao học Trần Ánh Ngọc, các bạn sinh viên K51, K52 ngành Công nghệ thực phẩm- Trường Đại học Bách khoa Hà Nội

đã giúp đỡ tôi thực hiện các nghiên cứu của mình

Tôi xin chân thành cảm ơn các bạn đồng nghiệp trong Khoa Chế biến món ăn, Ban Giám hiệu- Trường Cao đẳng Du lịch Hà Nội nơi tôi đang công tác và giảng dạy đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi học tập và làm Luận án Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn bạn bè đã động viên và giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành Luận án

Con xin cảm tạ và đội ơn sâu sắc tới cha, mẹ đã sinh thành, dưỡng dục và khắc phục mọi khó khăn để nuôi con ăn học Tôi trân trọng, biết ơn sâu sắc tới gia đình, đã động viên và giúp đỡ tôi vượt qua mọi khó khăn để hoàn thành Luận án này

Hà Nội: 2013

NCS: Nguyễn Văn Lợi

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN i

LỜI CẢM ƠN ii

MỤC LỤC iii

DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ VIẾT TẮT ix

DANH MỤC CÁC BẢNG x

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ xii

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 4

1.1 KHÁI QUÁT VỀ TERPENOID 4

1.1.1 Các loại terpenoid 4

1.1.1.1 Monoterpene 4

1.1.1.2 Sesquiterpene 5

1.1.1.3 Diterpene 5

1.1.1.4 Triterpene 5

1.1.1.5 Tetraterpene 5

1.1.1.6 Lacton terpenoid 5

1.1.2 Qúa trình sinh tổng hợp terpenoid 6

1.1.3 Tính chất tạo hương và hoạt tính sinh học của terpenoid 7

1.1.3.1 Tính chất tạo hương của terpenoid 7

1.1.3.2 Hoạt tính sinh học của terpenoid 8

1.1.4 Một số cấu tử thuộc nhóm terpenoid 9

1.1.4.1 Nootkatone 9

1.1.4.2 Linalool 9

1.1.4.3 Nerol 10

1.1.4.4 Terpineol 10

1.1.4.5 Geraniol 11

1.1.4.6 Citronellal 11

1.1.4.7 Geranial 12

1.1.4.8 Cumin aldehyde 12

1.1.5 Giá trị logP và momen lưỡng cực của các cấu tử thuộc nhóm terpenoid 13

1.1.5.1 Giá trị logP 13 1.1.5.2 Giá trị momen lưỡng cực 13

1.2 KHÁI QUÁT VỀ QUẢ CÓ MÚI 13

1.2.1 Cây ăn quả có múi trồng ở Việt Nam 13

1.2.1.1 Bưởi 13

1.2.1.2 Cam 15

1.2.1.3 Chanh 17

1.2.1.4 Quýt 18

1.2.1.5 Quất 19

1.2.1.6 Phật thủ 20

1.2.2 Đặc tính của tinh dầu quả có múi 21

1.2.3 Tình hình nghiên cứu tinh dầu từ quả có múi 22

1.2.3.1 Nghiên cứu trên Thế giới 22

1.2.3.2 Nghiên cứu ở Việt Nam 24

1.3 PHƯƠNG PHÁP THU HỒI CHẤT THƠM, TINH DẦU VÀ CÁC CẤU TỬ TẠO HƯƠNG TRONG TINH DẦU VỎ QUẢ CÓ MÚI 26 1.3.1 Phương pháp thu hồi chất thơm và tinh dầu 26 1.3.1.1 Phương pháp ép lạnh 26 1.3.1.2 Phương pháp chưng cất lôi cuốn theo hơi nước 26

1.3.1.3 Phương pháp hấp phụ 27 1.3.1.4 Phương pháp trích ly 27 1.3.2 Phương pháp tách nhóm cấu tử tạo hương 28

1.3.3 Phương pháp làm giàu các hợp chất có chứa oxy 30

1.4 NHỮNG TÍNH CHẤT CƠ BẢN CỦA CHẤT THƠM 30

1.4.1 Độ bay hơi 30

1.4.1.1 Hệ số phân bố giữa pha khí-lỏng 30

1.4.1.2 Hệ số hoạt độ 31 1.4.1.3 Độ bay hơi tương đối 31

1.4.1.4 Hệ số phân bố một chất bay hơi i trong hai pha lỏng-lỏng 31 1.4.2 Độ hòa tan 32 1.5 TỔ HỢP HƯƠNG 32

1.5.1 Nguyên tắc xây dựng tổ hợp hương 32 1.5.2 Cấu trúc tổ hợp hương 32

1.5.3 Mức độ thơm của tổ hợp hương 34 1.6 ỨNG DỤNG CHẤT THƠM TRONG CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM 35

1.6.1 Tương tác giữa chất thơm với các thành phần trong thực phẩm 35 1.6.1.1 Tương tác giữa chất thơm với glucid 35

1.6.1.2 Tương tác giữa chất thơm với protein 36

1.6.1.3 Tương tác giữa chất thơm với lipid 36

1.6.1.4 Tương tác giữ chất thơm với các muối vô cơ 36

1.6.2 Ứng dụng chất thơm trong sản xuất một số sản phẩm thực phẩm 37 1.6.2.1 Chất thơm sử dụng trong sản xuất bánh 37 1.6.2.2 Chất thơm sử dụng trong sản xuất kẹo 37

1.6.2.3 Chất thơm sử dụng trong sản xuất thạch rau câu 37

1.6.2.4 Chất thơm sử dụng trong chế biến các món ăn 37

1.6.2.5 Chất thơm sử dụng trong sản xuất đồ uống 38 CHƯƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39

2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 39

2.1.1 Qủa có múi 39

2.1.2 Hóa chất 39

2.1.3 Dụng cụ và thiết bị nghiên cứu 40

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40

2.2.1 Phương pháp khảo sát quả có múi thích hợp cho thu hồi tinh dầu 40 2.2.1.1 Phương pháp lấy mẫu 40 2.2.1.2 Xác định độ cứng của quả có múi bằng máy đo độ cứng 41

2.2.1.3 Xác định màu sắc của qủa có múi bằng máy đo màu 41

2.2.1.4 Xác định tỷ lệ thu hồi vỏ quả bằng phương pháp tính phần trăm 41

2.2.1.5 Xác định độ ẩm vỏ quả có múi bằng phương pháp chưng cất với toluen 41

2.2.1.6 Xác định hàm lượng tinh dầu vỏ quả có múi bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn theo hơi nước 42

2.2.2 Các phương pháp thu hồi tinh dầu vỏ quả có múi 42

2.2.2.1 Phương pháp ép lạnh 42

2.2.2.2 Phương pháp chưng cất lôi cuốn theo hơi nước 43

2.2.3 Phương pháp xác định các chỉ số hóa lý và cấu tử của tinh dầu 43

2.2.3.1 Phương pháp xác định các chỉ số hóa lý của tinh dầu 43

2.2.3.2 Phương pháp xác định cấu tử của tinh dầu vỏ quả có múi 46

2.2.4 Phương pháp xác định các cấu tử tạo hương trong tinh dầu vỏ quả có múi 47

2.2.4.1 Tách nhóm cấu tử tạo hương theo phương pháp sắc ký cột 47

2.2.4.2 Xác định các cấu tử tạo hương theo phương pháp A không A 47

2.2.4.3 Xác định giá trị logP và momen lưỡng cực của cấu tử trong tinh dầu vỏ quả có múi 48

2.2.5 Phương pháp tổ hợp hương 48

2.2.5.1 Xác định công thức tổ hợp hương theo nguyên tắc Jan-Carl 48

2.2.5.2 Đánh giá cảm quan theo phương pháp cho điểm thị hiếu 49

2.2.5.3 Phương pháp xác định hoạt tính sinh học của tổ hợp hương 50

2.2.6 Phương pháp tạo hương liệu quả có múi 51

2.2.7 Tối ưu hóa quá trình chưng cất tinh dầu vỏ quả có theo phương pháp quy hoạch thực nghiêm 52

2.2.8 Ứng dụng hương liệu quả có múi trong công nghiệp thực phẩm theo phương pháp công nghệ 53

2.2.9 Phân tích thống kê kết quả thí nghiệm 53

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 54

3.1 KHẢO SÁT NGUYÊN LIỆU 54

3.1.1 Xác định giống quả có múi thích hợp cho thu hồi tinh dầu 54

3.1.2 Khảo sát hàm lượng tinh dầu trong lá, hoa, vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên 55

3.1.3 Xác định thời điểm thu hoạch quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên, chanh giấy Hàm Yên để thu hồi tinh dầu 57

3.1.4 Xác định độ ẩm của vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên 59

3.1.5 Xác định hàm lượng tinh dầu trong vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên 59

3.1.6 Xác định ảnh hưởng của thời gian bảo quản quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên đến hàm lượng tinh dầu 60

3.2 XÂY DỰNG QUY TRÌNH THU HỒI TINH DẦU 61

3.2.1 Xác định phương pháp thu hồi tinh dầu 61

3.2.2 Khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi tinh dầu 63

3.2.2.1 Ảnh hưởng của kích thước nguyên liệu đến hiệu suất thu hồi tinh dầu 63

3.2.2.2 Ảnh hưởng của tỷ lệ nước/nguyên liệu đến hiệu suất thu hồi tinh dầu 65

3.2.2.3 Ảnh hưởng của thời gian chưng cất đến hiệu suất thu hồi tinh dầu 66

3.2.2.4 Ảnh hưởng của tỷ lệ khối lượng nguyên liệu/thể tích của thiết bị chưng cất đến hiệu suất thu hồi tinh dầu 66

3.2.3 Tối ưu hóa quá trình chưng cất tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 68

3.2.3.1 Thiết lập mô hình thí nghiệm 68

3.2.3.2 Tối ưu hóa 71

3.2.4 Quy trình thu hồi tinh dầu vỏ quả có múi 72

3.2.4.1 Sơ đồ quy trình 72

3.2.4.2 Thuyết minh quy trình 73

3.3 XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ HÓA LÝ VÀ CẤU TỬ CỦA TINH DẦU VỎ QUẢ CÓ MÚI 74 3.3.1 Xác định các chỉ số hóa lý của tinh dầu 74

3.3.2 Xác định các cấu tử của tinh dầu vỏ quả có múi 76

3.3.2.1 Tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 78 3.3.2.2 Tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên 79 3.3.2.3 Tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên 81

3.4 NGHIÊN CỨU CẤU TỬ TẠO HƯƠNG TRONG TINH DẦU VỎ QUẢ CÓ MÚI 81

3.4.1 Tách nhóm cấu tử tạo hương trong tinh dầu vỏ quả có múi 81

3.4.1.1 Sơ đồ quy trình tách nhóm cấu tử tạo hương 81

3.4.1.2 Thuyết minh quy trình tách nhóm cấu tử tạo hương 82

3.4.2 Xác định nhóm cấu tử tạo hương trong tinh dầu vỏ quả có múi 83

3.4.2.1 Xác định nhóm cấu tử tạo hương trong tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 83

3.4.2.2 Xác định nhóm cấu tử tạo hương trong tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên 91 3.4.2.3 Xác định nhóm cấu tử tạo hương trong tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên 97

3.4.3 Xác định một số hoạt tính sinh học của các cấu tử tạo hương 104

3.4.3.1 Xác định khả năng quét gốc tự do DPPH của các cấu tử tạo hương 104

3.4.3.2 Xác định hoạt tính kháng khuẩn của các cấu tử tạo hương 104

3.5 NGHIÊN CỨU LÀM GIÀU CÁC HỢP CHẤT CÓ CHỨA OXY TRONG TINH DẦU VỎ QUẢ CÓ MÚI 106

3.5.1 Xây dựng quy trình làm giàu các hợp chất có chứa oxy trong tinh dầu vỏ quả có múi 107

3.5.1.1 Xác định nồng độ ethanol thích hợp để hòa tan các hợp chất có chứa oxy trong tinh dầu vỏ quả có múi 107

3.5.1.2 Xác định nồng độ ethanol thích hợp để tạo phân lớp giữa các hợp chất có chứa oxy và cấu tử hydrocarbon 108

3.5.1.3 Quy trình làm giàu các hợp chất có chứa oxy trong tinh dầu vỏ quả có múi 109

3.5.2 Xác định các cấu tử trong tinh dầu vỏ quả có múi sau khi làm giàu các hợp chất có chứa oxy 110

3.5.2.1 Tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng sau khi làm giàu hợp chất có chứa oxy 111 3.5.2.2 Tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên sau khi làm giàu hợp chất có chứa oxy 112

3.5.2.3 Tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên sau khi làm giàu hợp chất có chứa oxy 113 3.6 NGHIÊN CỨU TỔ HỢP HƯƠNG VÀ TẠO HƯƠNG LIỆU QUẢ CÓ MÚI 114

3.6.1 Nghiên cứu tổ hợp hương tinh dầu vỏ quả có múi 114 3.6.1.1 Xác định công thức tổ hợp hương tinh dầu vỏ quả có múi 114

3.6.1.2 Xác định một số hoạt tính sinh học của tổ hợp hương 115

3.6.2 Nghiên cứu tạo hương liệu quả có múi 117

3.6.2.1 Xác định công thức tạo hương liệu quả có múi 117 3.6.2.2 Quy trình tạo hương liệu quả có múi 117 3.6.2.3 Đánh giá chất lượng hương liệu quả có múi 119

3.7 ỨNG DỤNG HƯƠNG LIỆU QUẢ CÓ MÚI VÀO CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM 121

3.7.1 Bánh quy xốp hương liệu quả có múi 121 3.7.1.1 Nghiên cứu thời điểm bổ sung hương liệu quả có múi vào bánh quy xốp 121

3.7.1.2 Đánh giá chất lượng cảm quan bánh quy xốp hương liệu quả có múi 122 3.7.1.3 Công thức và quy trình sản xuất bánh quy xốp hương liệu quả có múi 123 3.7.2 Thạch rau câu hương liệu quả có múi 124 3.7.2.1 Nghiên cứu thời điểm bổ sung hương liệu quả có múi vào thạch rau câu 124 3.7.2.2 Đánh giá chất lượng cảm quan thạch rau câu hương liệu quả có múi 124 3.7.2.3 Công thức và quy trình sản xuất thạch rau câu hương liệu quả có múi 125 3.7.3 Nước cam hương liệu quả có múi 127 3.7.3.1 Nghiên cứu thời điểm bổ sung hương liệu quả có múi vào nước cam 127 3.7.3.2 Đánh giá chất lượng cảm quan nước cam hương liệu quả có múi 128 3.7.3.3 Công thức và quy trình sản xuất nước cam hương liệu quả có múi 128 3.7.4 Rượu mùi hương liệu quả có múi 130

3.7.4.1 Nghiên cứu thời điểm bổ sung hương liệu quả có múi vào rượu mùi 130

3.7.4.2 Đánh giá chất lượng cảm quan rượu mùi hương liệu quả có múi 130

3.7.4.3 Công thức và quy trình sản xuất rượu mùi hương liệu quả có múi 131

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 134

TÀI LIỆU THAM KHẢO 136

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ VIẾT TẮT

6 GC-MS: Gas Chromatography/ Mass Spectometry (Sắc ký khí/ khối phổ)

7 GC-O: Gas Chromatography- Olfactometer (Sắc ký kết nối mũi ngửi)

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm tổ hợp hương theo nguyên tắc Jan-Carl 49

Bảng 2.2 Bố trí thí nghiệm chưng cất tinh dầu vỏ quả có múi 52

Bảng 2.3 Bố trí thí nghiệm ứng dụng hương liệu quả có múi trong công nghiệp thực phẩm 53

Bảng 3.1 Đặc điểm hóa lý của một số giống quả có múi 54

Bảng 3.2 Hàm lượng tinh dầu trong lá, hoa và vỏ quả có múi 56

Bảng 3.3 Đặc điểm hóa lý của quả và mùi của tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên, chanh giấy Hàm Yên thu hái ở các độ chín khác nhau 58

Bảng 3.4 Độ ẩm vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên 59

Bảng 3.5 Hàm lượng tinh dầu trong vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên 59

Bảng 3.6 Ảnh hưởng của thời gian bảo quản đến hàm lượng tinh dầu thu được 60

Bảng 3.7 So sánh các phương pháp thu hồi tinh dầu vỏ quả có múi 62

Bảng 3.8 Điều kiện thí nghiệm đối với tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 68

Bảng 3.9 Mô hình thí nghiệm chưng cất tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 69

Bảng 3.10 Kết quả phân tích hồi quy hiệu suất thu hồi tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 69

Bảng 3.11 Chỉ số hóa lý của tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên 74

Bảng 3.12 Các cấu tử của tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên 76

Bảng 3.13 Các cấu tử trong phân đoạn tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng với n-hexane 83

Bảng 3.14 Các cấu tử trong phân đoạn tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng với n-hexane và diethyl ether 85

Bảng 3.15 Các cấu tử trong phân đoạn tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng với diethyl ether 86

Bảng 3.16 Tổng hợp kết quả trả lời của nhóm người thử trên mẫu phân đoạn 1 và tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 87

Bảng 3.17 Tổng hợp kết quả trả lời của nhóm người thử trên mẫu phân đoạn 2 và tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 88

Bảng 3.18 Tổng hợp kết quả trả lời của nhóm người thử trên mẫu phân đoạn 3 và tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 88

Bảng 3.19 Giá trị logP và momen lưỡng cực của các cấu tử trong các phân đoạn tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 89

Bảng 3.20 Các cấu tử trong phân đoạn tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên với n-hexane 91

Bảng 3.21 Các cấu tử trong phân đoạn tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên với n-hexane và diethyl ether 92

Bảng 3.22 Cấu tử trong phân đoạn tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên với diethyl ether 93

Bảng 3.23 Tổng hợp kết quả trả lời của nhóm người thử trên mẫu phân đoạn 1 và tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên 94

Bảng 3.24 Tổng hợp kết quả trả lời của nhóm người thử trên mẫu phân đoạn 2 và tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên 94

Bảng 3.25 Tổng hợp kết quả trả lời của nhóm người thử trên mẫu phân đoạn 3 và tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên 95

Bảng 3.26 Giá trị logP và momen lưỡng cực của các cấu tử trong các phân đoạn tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên 96

Bảng 3.27 Các cấu tử trong phân đoạn tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên với n-hexane 97

Bảng 3.28 Các cấu tử trong phân đoạn tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên với n-hexane và diethyl ether 98

Bảng 3.29 Các cấu tử trong phân đoạn tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên với diethyl ether 99

Bảng 3.30 Tổng hợp kết quả trả lời của nhóm người thử trên mẫu phân đoạn 1 và tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên 100

Bảng 3.31 Tổng hợp kết quả trả lời của nhóm người thử trên mẫu phân đoạn 2 và tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên 101

Bảng 3.32 Tổng hợp kết quả trả lời của nhóm người thử trên mẫu phân đoạn 3 và tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên 102

Bảng 3.33 Giá trị logP và momen lưỡng cực của các cấu tử trong các phân đoạn tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên 102

Bảng 3.34 Khả năng quét gốc tự do DPPH của các cấu tử tạo hương 104

Bảng 3.35 Đường kính vòng kháng khuẩn của các cấu tử tạo hương 105

Bảng 3.36 Các cấu tử của tinh dầu vỏ quả có múi sau khi làm giàu hợp chất có chứa oxy 110

Bảng 3.37 Công thức tổ hợp hương tinh dầu vỏ quả có múi sau khi làm giàu các hợp chất có chứa oxy 114

Bảng 3.38 Đường kính vòng kháng khuẩn của tổ hợp hương 116

Bảng 3.39 Công thức tạo hương liệu quả có múi 117

Bảng 3.40 Cấu tử hương trong hương liệu quả có múi 119

Bảng 3.41 Kết quả đánh giá cảm quan hương liệu quả có múi 121

Bảng 3.42 Công thức sản xuất bánh quy xốp hương liệu quả có múi 123

Bảng 3.43 Công thức sản xuất thạch rau câu hương liệu quả có múi 125

Bảng 3.44 Công thức sản xuất nước cam hương liệu quả có múi 128

Bảng 3.45 Công thức sản xuất rượu mùi hương liệu quả có múi 131

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ

Hình 1.1 Công thức isoprene 4

Hình 1.2 Nootkatone 9

Hình 1.3 Linalool 9

Hình 1.4 Nerol 10

Hình 1.5.a α-Terpineol 10

Hình 1.5.b β-Terpineol 10

Hình 1.5.c γ-Terpineol 10

Hình 1.6 Geraniol 11

Hình 1.7 Citronellal 11

Hình 1.8 Geranial 12

Hình 1.9 Cumin aldehyde 12

Hình 2.1 Bưởi Đoan Hùng 39

Hình 2.2 Cam sành Hàm Yên 39

Hình 2.3 Chanh giấy Hàm Yên 39

Hình 3.1 Ảnh hưởng của kích thước nguyên liệu đến hiệu suất thu hồi tinh dầu 64

Hình 3.2 Ảnh hưởng của tỷ lệ nước/nguyên liệu đến hiệu suất thu hồi tinh dầu 65

Hình 3.3 Ảnh hưởng của thời gian chưng cất đến hiệu suất thu hồi tinh dầu 66

Hình 3.4 Ảnh hưởng của tỷ lệ khối lượng nguyên liệu/thể tích của thiết bị đến hiệu suất thu hồi tinh dầu 67

Hình 3.5.a Ảnh hưởng của các yếu tố đến hiệu suất thu hồi tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 70 Hình 3.5.b Ảnh hưởng của kích thước nguyên liệu và và thời gian chưng cất đến hiệu suất thu hồi tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 70

Hình 3.5.c Ảnh hưởng của kích thước nguyên liệu và tỷ lệ nước/nguyên liệu đến hiệu suất thu hồi tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 70

Hình 3.5.d Ảnh hưởng của tỷ lệ nước/nguyên liệu và thời gian chưng cất đến hiệu suất thu hồi tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 70

Hình 3.6 Mức độ đáp ứng sự mong đợi quá trình chưng cất tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 71 Hình 3.7 Sơ đồ quy trình chưng cất tinh dầu vỏ quả có múi 72

Hình 3.8 Sắc ký đồ tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng 78

Hình 3.9 Sắc ký đồ tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên 79

Hình 3.10 Sắc ký đồ tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên 80

Hình 3.11 Sơ đồ quy trình tách nhóm cấu tử tạo hương trong tinh dầu vỏ quả có múi 82

Hình 3.12 Sắc ký đồ phân đoạn tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng với n-hexane 84

Hình 3.13 Sắc ký đồ phân đoạn tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng với n-hexane và diethyl

ether 85

Hình 3.14 Phân đoạn tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng với n-hexane và diethyl ether 85

Hình 3.15 Sắc ký đồ phân đoạn tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng với diethyl ether 86

Hình 3.16 Sắc ký đồ phân đoạn tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên với n-hexane 91

Hình 3.17 Sắc ký đồ phân đoạn tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên với n-hexane và diethyl ether 92

Hình 3.18 Phân đoạn tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên với n-hexane và diethyl ether 92

Hình 3.19 Sắc ký đồ phân đoạn tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên với diethyl ether 93

Hình 3.20 Sắc ký đồ phân đoạn tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên với n-hexane 98

Hình 3.21 Sắc ký đồ phân đoạn tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên với n-hexane và diethyl ether 99

Hình 3.22 Phân đoạn tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên với n-hexane và diethyl ether 99

Hình 3.23 Sắc ký đồ phân đoạn tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên với diethyl ether 100

Hình 3.24 Hình ảnh chỉ hoạt tính kháng khuẩn của các cấu tử tạo hương 106

Hình 3.25 Hiệu suất hòa tan các hợp chất có chứa oxy 107

Hình 3.26 Hiệu suất phân lớp giữa các hợp chất có chứa oxy và cấu tử hydrocarbon 108

Hình 3.27 Sơ đồ quy trình làm giàu hợp chất có chứa oxy trong tinh dầu vỏ quả có múi 109 Hình 3.28 Sắc ký đồ tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng sau khi làm giàu các hợp chất có chứa oxy 111

Hình 3.29 Sắc ký đồ tinh dầu vỏ quả cam sành Hàm Yên sau khi làm giàu các hợp chất có chứa oxy 112

Hình 3.30 Sắc ký đồ tinh dầu vỏ quả chanh giấy Hàm Yên sau khi làm giàu các hợp chất có chứa oxy 113

Hình 3.31 Kết quả đánh giá thị hiếu các mẫu tổ hợp hương tinh dầu vỏ quả có múi 115

Hình 3.32 Hình ảnh chỉ hoạt tính kháng khuẩn của tổ hợp hương 116

Hình 3.33 Sơ đồ quy trình tạo hương liệu quả có múi sau khi làm giàu các hợp chất có chứa oxy 118

Hình 3.34 Sắc ký đồ cấu tử của hương liệu quả có múi 120

Hình 3.35 Hương liệu quả có múi dạng bột 121

Hình 3.36 Kết quả đánh giá thị hiếu sản phẩm bánh quy xốp hương liệu quả có múi 122

Hình 3.37 Sơ đồ quy trình sản xuất bánh quy xốp hương liệu quả có múi 123

Hình 3.38 Sản phẩm bánh quy xốp hương liệu quả có múi 124

Hình 3.39 Kết quả đánh giá thị hiếu sản phẩm thạch rau câu hương liệu quả có múi 125

Hình 3.40 Sơ đồ quy trình sản xuất thạch rau câu hương liệu quả có múi 126

Hình 3.41 Sản phẩm thạch rau câu hương liệu quả có múi 127

Hình 3.42 Kết quả đánh giá thị hiếu sản phẩm nước cam hương liệu quả có múi 128

Hình 3.43 Sơ đồ quy trình sản xuất nước cam hương liệu quả có múi 129

Hình 3.44 Sản phẩm nước cam hương liệu quả có múi 130

Hình 3.45 Kết quả đánh giá thị hiếu sản phẩm rượu mùi hương liệu quả có múi 131

Hình 3.46 Sơ đồ quy trình sản xuất rượu mùi hương liệu quả có múi 132

Hình 3.47 Sản phẩm rượu mùi hương liệu quả có múi 133

MỞ ĐẦU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Việt Nam là một nước nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, nóng ẩm mưa nhiều Với điều kiện thuận lợi như vậy nên hệ thực vật Việt Nam phát triển rất đa dạng và phong phú, nhóm cây có tinh dầu cũng rất phong phú và mang những nét đặc thù riêng Chúng là nguồn nguyên liệu đóng vai trò quan trọng trong nhiều ngành kinh tế khác nhau cũng như trong đời sống hàng ngày của con người Quả có múi là loại quả có giá trị dinh dưỡng cao và được sử dụng để ăn tươi, sản xuất đồ uống, làm mứt, làm bánh, làm kem, làm kẹo và sản xuất rượu Đặc biệt một số loại quả có múi như chanh và quất còn được làm gia vị cho các món ăn Ngoài phần thịt quả, phần vỏ quả, hạt quả, lá và hoa của cây

có múi có chứa một lượng tinh dầu lớn được sử dụng trong nhiều lĩnh vực của đời sống

Ở Việt Nam, cây ăn quả là một ngành sản xuất quan trọng của nền Nông nghiệp, với nhiều loại quả khác nhau được trồng trọt và thu hoạch quanh năm Theo Bộ Nông nghiệp

và phát triển nông thôn, năm 2005 là 606.400 tấn và năm 2010 là 875.600 tấn Quả có múi rất đa dạng và phong phú, trong số đó có loại trở thành đặc sản của vùng như cam sành Hàm Yên- Tuyên Quang, bưởi Đoan Hùng- Phú Thọ, cam Canh, bưởi Diễn- Hà Nội, bưởi Phúc Trạch- Hà Tĩnh, bưởi Năm Roi- Vĩnh Long [2, 4, 6] Trong giai đoạn từ năm 2000- 2010, hàng năm nước ta đã xuất khẩu 30.000 tấn bưởi, 15.000 tấn cam tươi và 35.000 tấn nước quả đồ hộp từ quả có múi [2, 4]

Trên thị trường thế giới, tinh dầu và các sản phẩm chế biến từ tinh dầu luôn là những mặt hàng có giá trị cao và sôi động Các nước Trung Quốc, Ấn Độ, Indonexia đã

và đang trở thành những nước sản xuất và chế biến tinh dầu với khối lượng lớn Nhiều nước công nghiệp phát triển, đặc biệt là Hoa Kỳ, Anh, Pháp, Đức, Thụy Sỹ, Nhật Bản rất chú trọng việc nhập khẩu tinh dầu thô và xuất khẩu các sản phẩm tinh dầu đã qua chế biến Trong những năm 1965- 1970, khối lượng tinh dầu được sản xuất trên toàn thế giới chỉ trong khoảng 25.000- 35.000 tấn/năm Nhưng những năm gần đây nhu cầu về tinh dầu ngày càng tăng cao đặc biệt là trong lĩnh vực thực phẩm và mỹ phẩm, chỉ riêng Trung Quốc năm 2009 đạt 17.969 tấn Brazin đứng đầu thế giới về sản lượng tinh dầu

cam chanh, năm 2009 Brazin đã sản xuất 18.075 tấn tinh dầu cam, chanh, Hoa kỳ đạt

7.285 tấn, Mexico đạt 370 tấn, Nhật Bản đạt 390 tấn, Israel đạt 372 tấn, Italia đạt 278 tấn, Trung Quốc đạt 265 tấn và Australia đạt 240 tấn [14, 17] Còn ở Việt Nam nhu cầu về tinh dầu cho các ngành thực phẩm, dược phẩm, hóa mỹ phẩm ngày càng nhiều, nước ta

có nhiều loại thực vật có chứa tinh dầu, nhưng nhiều năm qua nước ta lại phải nhập khẩu

tinh dầu với số lượng lớn Theo thống kê của Bộ Công Thương, năm 2008 nước ta phải nhập khẩu một khối lượng tinh dầu trị giá khoảng 25 triệu đô la Mỹ Việc khai thác, sản xuất tinh dầu vẫn còn nhỏ, manh mún và tạm bợ Đặc biệt là việc tách chiết các cấu tử tạo hương trong tinh dầu để tổ hợp hương liệu thì rất ít các cơ sở nghiên cứu và sản xuất [5,

14, 17, 87] Trong tinh dầu vỏ quả có múi có chứa các hợp chất thuộc nhóm terpenoid có khả năng tạo mùi thơm hấp dẫn, đặc trưng của các loại quả này và có khả năng ứng dụng trong thực phẩm, mỹ phẩm và dược phẩm Nhưng ở Việt Nam hiện nay nguồn nguyên liệu để thu chất thơm chủ yếu từ quế, đinh hương, sả, bạc hà với sản lượng còn thấp và chưa đáp ứng được nhu cầu tiêu dùng Trong khí đó, những năm gần đây, chúng ta đang chú trọng tới việc trồng cây ăn quả có múi, nhưng những loại quả này mới chỉ được sử dụng phần múi, còn phần vỏ chiếm từ 20- 25%, có chứa một số cấu tử tạo hương thuộc nhóm terpenoid trong tinh dầu vỏ quả có múi lại chưa được quan tâm nghiên cứu Cho đến thời điểm này ở nước ta có rất ít công trình khoa học nghiên cứu tách chiết và thu hồi các cấu tử tạo hương thuộc nhóm terpenoid trong tinh dầu vỏ quả có múi, để tổ hợp ra một loại hương liệu mới dùng trong các ngành thực phẩm, mỹ phẩm và dược phẩm

Xuất phát từ những lý do trên chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu một số chất tạo hương thuộc nhóm Terpenoid thu nhận từ một số loại quả có múi ở miền Bắc Việt Nam và ứng dụng trong công nghiệp thực phẩm” Đề tài nhằm tạo ra một loại hương liệu

quả có múi, tận dụng phần vỏ quả có múi và góp phần giải quyết đầu ra cho loại quả này

2 Mục tiêu của đề tài

Xây dựng quy trình công nghệ tách chiết các cấu tử tạo hương thuộc nhóm terpenoid từ vỏ quả bưởi, cam và chanh, làm cơ sở khoa học để tổ hợp nhân hương

Tổ hợp tạo ra một loại hương liệu quả có múi từ các hợp chất có chứa oxy và ứng dụng trong công nghiệp thực phẩm

3 Nội dung nghiên cứu

Luận án gồm các nội dung chính như sau:

- Nghiên cứu khảo sát quả có múi thích hợp cho thu thồi tinh dầu

- Nghiên cứu xây dựng quy trình thu hồi tinh dầu

- Nghiên cứu xác định chỉ số hóa lý và các cấu tử trong tinh dầu

- Nghiên cứu xác định các cấu tử tạo hương thuộc nhóm terpenoid trong tinh dầu

- Nghiên cứu làm giàu các hợp chất có chứa oxy trong tinh dầu

- Nghiên cứu tổ hợp hương và tạo hương liệu nhóm terpenoid trong tinh dầu

- Nghiên cứu ứng dụng hương liệu nhóm terpenoid trong công nghiệp thực phẩm

4 Ý nghĩa khoa học của đề tài

4.1 Ý nghĩa lý thuyết

Đã tách chiết và xác định được các cấu tử tạo hương thuộc nhóm terpenoid trong tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên Đây là những đóng góp đáng tin cậy làm phong phú thêm nguồn tư liệu về quả có múi của Việt Nam

Đã xây dựng được quy trình làm giàu các hợp chất có chứa oxy trong tinh dầu

vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên

Đã xây dựng được quy trình tạo hương liệu dạng bột từ các cấu tử tạo hương thuộc nhóm terpenoid trong tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và

chanh giấy Hàm Yên với chất cố định hương là β-cyclodextrin và maltodextrin

5 Tính mới của đề tài

Luận án là công trình khoa học nghiên cứu và xác định được đầy đủ các cấu tử tạo hương đặc trưng thuộc nhóm terpenoid trong tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên của Việt Nam, là cơ sở khoa học cho việc nghiên cứu tổ hợp hương liệu từ tinh dầu của loại quả này

Quy trình làm giàu các hợp chất có chứa oxy tạo mùi thơm cho tinh dầu vỏ quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên, chanh giấy Hàm Yên bằng ethanol 96% và ethanol 70%, đồng thời loại bớt các cấu tử hydrocarbon, không tạo mùi thơm nhưng gây ra vị đắng cho tinh dầu, góp phần làm tăng giá trị của tinh dầu vỏ quả có múi ở nước ta

Quy trình sản xuất hương liệu quả có múi dạng bột, góp phần giữ được các cấu

tử tạo hương trong hương liệu với thời gian dài, thuận tiện trong bảo quản, vận chuyển và

sử dụng trong lĩnh vực thực phẩm

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN

1.1 KHÁI QUÁT VỀ TERPENOID

Terpenoid là một nhóm các hợp chất thiên nhiên, chúng là dẫn xuất của các đơn vị isoprene Hay nói cách khác terpenoid là các hợp chất thường chưa no, có chứa C, H2 và

O2, mà phân tử của nó được cấu tạo bởi một hoặc nhiều đơn vị isoprene và có chung một nguồn gốc sinh tổng hợp là (C5H8)

CH2=C-CH=CH2

׀

CH3

Hình 1.1 Công thức isoprene

Terpenoid là một loại hợp chất thiên nhiên quan trọng có khả năng tạo mùi thơm

và có hoạt tính sinh học mạnh Terpenoid phân bố rộng rãi trong thiên nhiên và có nhiều

ở cây có tinh dầu Ngoài ra terpenoid cũng có mặt trong thực vật bậc thấp như tảo, nấm đến thực vật bậc cao, trong động vật và vi khuẩn Mỗi loại terpenoid có sự phân bố đặc trưng, căn cứ vào số đơn vị isoprene hợp thành người ta phân ra monoterpene (10C), sesquiterpene (15C), diterpene (20C), sesterpene (25C), triterpene (30C), tetraterpene (40C) và polyterpene [1, 11, 13, 16, 19, 92]

1.1.1 Các loại terpenoid

1.1.1.1 Monoterpene

Monoterpene có công thức (C10H16), được tạo thành bởi hai đơn vị isoprene kết hợp, monoterpene là những thành phần chủ yếu của tinh dầu, đã được tìm thấy trong 60

họ thực vật Monoterpene gồm 3 loại không vòng, đơn vòng và hai vòng

Monoterpene không vòng: Nhóm hydradcarbon (ocimene và myrcene), nhóm

aldehyde (geranial và neral), nhóm alcol (geraniol, nerol, linalool)

Monoterpene đơn vòng: Nhóm hydrocarbon (limonene, α-terpinene, γ-terpinene, α-terpinene, α-phellandrene, β-phellandrene có nhiều trong tinh dầu cam), nhóm aldehyde (α-perillaldehyde, phellandral), nhóm alcohol (α-terpineol, menthol, piperitol, carveol) Monoterpene hai vòng: Nhóm thuyane (α-thuyane, sabonene, thuyone, sabinol), nhóm carane (car-3-en, car-4-en, caron), nhóm pinane (α-pinene, β-pinene, myrtenal,

myrtenol), nhóm camphane (camphor, borneol, camptien), nhóm fenchane (phenchone,

α-fenchene) [11, 13, 16, 19, 93]

Diterpene có công thức C20H32, được tạo thành bởi 4 đơn vị isoprene kết hợp,

diterpene có chủ yếu trong nhựa cây và gồm bốn loại: Diterpene không vòng như β-phytol

Diterpene đơn vòng như vitamin A Diterpene hai vòng như sclareol, manool Diterpene ba vòng như abietic acid, levopimaric acid, podocapric acid [1, 11, 13, 16, 19, 93]

1.1.1.4 Triterpene

Triterpene có công thức C30H48, về mặt cấu trúc hóa học triterpene được tạo thành bởi sáu đơn vị isoprene kết hợp với nhau bởi hai mảnh C15 nối với nhau ở giữa theo cách đầu nối với đầu Hợp chất hexane squalene với cấu hình trans là tiền thân của tất cả các triterpene và được phân bố rộng rãi cả trong động vật và thực vật Nghiên cứu về triterpene cho thấy có gần 500 bộ khung triterpene khác nhau có nguồn gốc từ tự nhiên, phần lớn các triterpene có cấu trúc bốn vòng giáp nhau (6-6-6-5) hoặc năm vòng giáp nhau (6-6-6-6-5 hoặc 6-6-6-6-6), nhưng cũng tồn tại một số ít các triterpene dưới các dạng mạch hở, một vòng, hai vòng, ba vòng hoặc sáu vòng [1, 11, 13, 16, 19, 93]

1.1.1.5 Tetraterpene

Tetraterpene có công thức C40H64, các tetraterpene chỉ có trong một nhóm các

hợp chất, đó là các carotenoid bao gồm hàng trăm các chất khác nhau Carotenoid được sinh tổng hợp từ hai phân tử geranyl diphosphat qua nhiều quá trình sẽ tạo ra z-phytoene

và tiếp đó là lycopene Carotenoid là những sắc tố vàng hay đỏ da cam, tan trong dầu mỡ, rất phổ biến trong thực vật và có vai trò quan trọng trong quá trình quang hợp của cây xanh Carotenoid là những hợp chất có từ 40 carbon mà cấu trúc của chúng xếp vào tetraterpene Carotenoid bao gồm hai nhóm: Nhóm hydrocarbon tan trong ether dầu, nhóm xanthophyl là dẫn xuất oxy của carotenoid bao gồm các ethanol, aldehyde, acid

1.1.1.6 Lacton terpenoid

Lacton terpenoid được phân thành hai loại: Sesquiterpene lacton và iridoid Sesquiterpene lacton được sắp xếp theo cấu trúc khung cơ bản sesquiterpene (C15) Có khoảng 20 dạng cấu trúc sesquiterpene lacton khác nhau Các dạng thường gặp nhất trong

tự nhiên là eudesmanoid, guaianoid, pseudoguaianolid, germacranolid, eremophilanoid Sesquiterpene lacton phân bố chủ yếu trong lá, hoa của các cây bụi và của họ asteraceae [1, 16, 19, 93]

Iridoid là nhóm hợp chất thiên nhiên có cấu trúc monoterpene (C10) với một vòng

cyclopentane và một vòng d-lacton không no Ngoài nhóm chức lacton iridoid có thêm

các nhóm thế -COOH, -CH2OH, -COOCH3 Iridoid tan trong ethanol và trong nước nóng nên có thể dùng dung môi đó để tách chiết

1.1.2 Qúa trình sinh tổng hợp terpenoid

Terpenoid được tổng hợp từ các gốc acetyl-CoA hoạt hóa, trước hết tạo thành acid mevalonic, sau đó tạo thành isopentenyl pyrophosphate, isopentenyl pyrophosphate là tiền thân của terpenoid Các kết quả nghiên cứu gần đây đã chứng minh rằng, một số dạng terpenoid của tinh dầu như các geraniol, linalool, farnesol… thường có mặt trong hầu hết các cơ thể sống ở tất cả các mức độ tiến hóa khác nhau, từ các vi sinh vật, các loài thực vật bậc thấp, thực vật bậc cao, đến cả động vật và con người Các terpenoid được hình thành từ hai hoặc ba hay nhiều phân tử isoprene, isoprene lại là một trong những hợp chất

cơ sở để tạo thành các carotenoid, các steroid và cao su Quá trình sinh tổng hợp trong mọi cơ thể thực vật đều bắt nguồn từ hợp chất ban đầu là acetic acid qua các sản phẩm trung gian là mevalonic acid, isopentenil pirophosphat đến geranil và farnesil phosphat Bằng thực nghiệm, người ta đã chứng minh được các chuỗi carbon trong các phân tử geraniol, linalool, farnesol và nerolidol là những sản phẩm trung gian chủ yếu trong quá trình sinh tổng hợp các terpenoid có hoạt tính sinh học như các phyton, hocmon steroid, các vitamin D, E, K và carotenoid Một số hợp chất thường gặp trong thành phần của tinh dầu như linalool, farnesol và nerolidol… luôn có mặt trong hầu hết các hoạt động sống của cây Qúa trình sinh tổng hợp terpenoid được thực hiện qua ba giai đoạn [93]

1 Tạo isoprene hoạt hóa từ ba phân tử acetyl CoA

2 Phốt phát hóa để tạo nên pyrophotphat isopentenyl và pyrophotphat dimethylallyl

3 Sinh tổng hợp pyrophotphat geranyl và neryl Terpenoid hở

Dạng trans Dạng cis

Pyrophotphat neryl Terpenoid vòng

Pyrophotphat geranyl

1.1.3 Tính chất tạo hương và hoạt tính sinh học của terpenoid

1.1.3.1 Tính chất tạo hương của terpenoid

Terpenoid được cấu tạo bởi liên kết “đầu với đuôi” của các đơn vị isoprene được sinh ra từ mevalonic acid Terpenoid là những thành phần chủ yếu trong tinh dầu vỏ quả

có múi Terpenoid tạo nên một nhóm chất rất lớn của các sản phẩm thiên nhiên, chúng có đặc tính thơm và được sử dụng rộng rãi trong hương liệu và công nghiệp chất thơm Các cấu tử thuộc nhóm terpenoid thường dễ bay hơi, dễ hòa tan trong nước, trong ethanol, là những cấu tử có độ phân cực trung bình và phân cực mạnh Đồng thời có tính chất tạo hương, vì thế làm tăng mùi, vị hấp dẫn cho thực phẩm, cho nên thường được sử dụng làm hương liệu cho bánh, kẹo và sản xuất rượu mùi Các cấu tử của tinh dầu vỏ quả có múi bao gồm terpene và dẫn xuất của terpene như aldehyde, ester, ketone, alcohol và acid… Tác giả Newman A.A [93] cho rằng các dẫn xuất chứa oxy của của terpene như: alcohol, aldehyde, ketone, ester và acid có trong tinh dầu vỏ quả có múi, đây là những cấu tử chiếm tỷ lệ nhỏ nhưng lại là những cấu cấu tử góp phần tạo hương thơm hấp dẫn cho tinh dầu vỏ quả này

Hương thơm của tinh dầu vỏ quả có múi thường chủ yếu do các nhóm chức như: aldehyde, ester, ketone, alcohol và acid… quyết định Nhóm alcohol: Các cấu tử có nhóm chức alcohol cũng có nhiều trong tinh dầu vỏ quả có múi, có thể ở dạng mạch thẳng hay mạch vòng Chúng cũng góp phần tạo hương thơm cho tinh dầu vỏ quả có múi, chẳng

hạn trans-p-mentha-2,8-dien-1-ol là cấu tử tạo hương thơm đặc trưng cho tinh dầu bưởi,

nerol cũng góp phần tạo cho tinh dầu chanh có hương thơm Một số kết quả nghiên cứu cho thấy các cấu tử như: Geraniol, linalool, farnesol cũng có tác dụng quan trọng trong việc tạo hương thơm cho loại tinh dầu này Theo Nguyễn Mạnh Pha và cộng sự [15] cho thấy sự có mặt của các cấu tử có nhóm chức alcohol góp phần làm cho tinh dầu hoa bưởi

có hương thơm hấp dẫn, rất đặc trưng và có tác dụng như một chất định hương Nhóm aldehyde: Các cấu tử có nhóm chức aldehyde thường chỉ chiếm một hàm lượng rất nhỏ trong tinh dầu vỏ quả có múi, nhưng lại là những cấu tử tạo hương thơm đặc trưng cho tinh dầu này Trong đó phải kể đến các cấu tử octanal, citronellal, decanal, dodecanal, geranial là những cấu tử tạo hương thơm đặc trưng cho tinh dầu vỏ bưởi, cam và chanh Nhóm ketone: Người ta thường gặp nootkatone là cấu tử tạo mùi thơm đặc trưng cho tinh dầu bưởi Nhóm ester: Trong tinh dầu quả có múi cũng có chứa một số cấu tử tham gia tạo mùi thơm thuộc nhóm ester như octyl acetate, geranyl acetate, neryl acetate, perillyl acetate Những cấu tử này cũng thường chiếm tỷ lệ nhỏ trong tinh dầu quả có múi và rất

dễ bay hơi Nhóm acid: Trong tinh dầu một số loại quả có múi người ta cũng xác định

được một số cấu tử có nhóm chức acid tham gia tạo mùi thơm cho tinh dầu, chẳng hạn như nonanoic acid có trong tinh dầu chanh Nhóm oxide: Người ta cũng xác định được

cis-linalool oxide, trans-linalool oxide góp phần tạo mùi thơm cho tinh dầu quả có múi

[17] Những cấu tử này cũng thường chiếm một tỷ lệ nhỏ và là những cấu tử dễ bay hơi

Ngoài tinh dầu quả có múi thì terpenoid cũng tham gia tạo hương thơm cho tinh dầu bạch đàn, tinh dầu đinh hương và tinh dầu gừng Với những vai trò tạo hương thơm như vậy terpenoid được sử dụng rộng rãi trong sản xuất chất thơm cho thực phẩm và mỹ phẩm Vậy tính chất tạo hương của terpenoid chủ yếu là do các cấu tử có nhóm chức aldehyde, ester, ketone, alcohol và acid quyết định

1.1.3.2 Hoạt tính sinh học của terpenoid

Nhờ có những biến đổi rộng lớn về độ phân bố các cấu tử, trọng lượng phân tử, điểm sôi và độ phân cực mà nhiều tinh dầu đã thể hiện hoạt tính kháng côn trùng, kháng khuẩn và kháng nấm rất tốt [1, 11, 13, 16, 19] Về mặt tác dụng, terpenoid được dùng trong diệt khuẩn, phòng chống tim mạch và phòng chống khối u

Các kết quả nghiên cứu gần đây cho thấy tinh dầu vỏ bưởi và vỏ cam còn có tác dụng chống ung thư Trong tinh dầu bưởi, cam, có các cấu tử limonene, octanal, citronellal và decanal đã được nhiều nhà khoa học nghiên cứu và chứng minh khả năng phòng chống một số loại ung thư [14, 25, 30] Trong dân gian còn dùng tinh dầu bưởi để giải rượu và bôi lên các vùng tóc rụng để kích thích mọc tóc Xông mặt với tinh dầu vỏ cam và quýt với nước có tác dụng giảm thiểu những cơn đau đầu khó chịu [1, 11, 16]

Trong hợp chất lactone terpenoid có vòng lactone không no dễ dàng kết hợp với các nhóm -SH, -OH, -NH của amino acid và protein trong vi sinh vật, biến thành chất độc

và làm rối loạn quá trình sống của chúng

Terpenoid còn có vai trò quan trọng đối với sức khỏe con người, chúng tham gia vào những quá trình trao đổi chất như các vitamin, tác dụng như các tác nhân điều tiết, phòng chống ung thư và đóng vai trò bảo vệ như những chất chống oxy hóa Đặc biệt trong terpenoid có các hợp chất vòng lactone chiếm một vị trí quan trọng trong lĩnh vực nghiên cứu y học, nông nghiệp vì tác dụng độc tế bào, kháng khuẩn, diệt côn trùng, diệt nấm và kháng ung thư [1, 19, 65, 93] Các nghiên cứu về dược lý cho thấy các hợp chất terpenoid thể hiện hoạt tính sinh học rất đa dạng như các hoạt tính chống ung thư, khối u, chống oxy hóa, kháng virus, kháng viêm nhiễm, bảo vệ gan, phòng chống tiểu đường, phòng chống bệnh thấp khớp, trị các chứng bệnh về đường hô hấp và hạn chế sinh tổng hợp cholesterol từ đó làm giảm nguy cơ mắc bệnh tim mạch [1, 19, 21, 33, 65, 93]

Nerol là một alcol có nhiều trong tinh dầu vỏ quả bưởi, vỏ quả cam, vỏ quả chanh

và vỏ quả quýt… Ngoài ra còn có trong tinh dầu sả, tinh dầu gừng và tinh dầu bạch đàn Trong tinh dầu vỏ quả bưởi nerol chiếm từ 0,26- 0,31%, tinh dầu vỏ quả cam nerol chiếm

từ 0,05- 0,09% và tinh dầu vỏ quả chanh nerol chiếm từ 0,07- 0,09% Nerol cũng được sử dụng nhiều trong sản xuất mỹ phẩm, sản xuất xà phòng và sản xuất kem đánh răng Đây

là cấu tử dễ bay hơi và dễ bị oxy hóa [7, 19, 60, 93]

1.1.4.4 Terpineol

Terpineol là một alcol bậc ba tồn tại ở ba dạng đồng phân α, β và γ trong đó

α-terpineol là phổ biến nhất và có mùi thơm dễ chịu nhất Terpineol có cấu trúc hóa học như sau:

Hình 1.5.a α-Terpineol Hình 1.5.b β-Terpineol Hình 1.5.c γ-Terpineol

Terpineol là một cấu tử thơm được sử dụng rộng rãi trong công nghiệp xà phòng, hương liệu, mỹ phẩm và một số ngành khác Trong hương liệu thì terpineol giữ vai trò như một chất kích hương Trong tinh dầu cam terpineol chiếm 0,1%, trong tinh dầu quýt terpineol chiếm từ 0,1- 0,44% và trong tinh dầu chanh terpineol chiếm từ 1- 1,4% Tuy nhiên hiện nay để đáp ứng nhu cầu sử dụng người ta đã tổng hợp terpineol từ geraniol,

linalool và α-pinene Ở nước ta do tinh dầu thông có hàm lượng α-pinene lớn từ 60- 70%, nên người ta thường tổng hợp terpineol từ α-pinene từ loại tinh dầu này Thực hiện bằng

cách từ α-pinene tổng hợp ra terpin hydrade nhờ sunfuric acid và chất tạo bọt sau đó tiến

hành hydrade hóa ở nhiệt độ 90- 1000C [9, 19, 60, 93]

tử có vai trò quan trọng trong việc tạo mùi của tinh dầu sả và tinh dầu hoa hồng Geraniol

thường tồn tại dưới hai dạng đồng phân là cis-geraniol và trans-geraniol Trong tinh dầu

vỏ bưởi và vỏ cam người ta thường gặp cả hai dạng đồng phân này [9, 19, 60, 93]

số mỹ phẩm khác [7, 19, 93]

1.1.5 Giá trị logP và momen lưỡng cực của các cấu tử thuộc nhóm terpenoid

1.1.5.1 Giá trị logP

LogP của một hợp chất, đó là logarit của hệ số phân vùng của nó giữa log octanol

và nước (coctanol/cnước) Hệ số phân vùng được sử dụng trong nhiều lĩnh vực, như trong

luyện kim, hệ số phân vùng là một yếu tố quan trọng trong việc xác định các tạp chất khác nhau được phân phối giữa nóng chảy và kiên cố hóa kim loại Nó là một tham số quan trọng cho thanh lọc sử dụng nhiệt độ nóng chảy vùng và xác định hiệu quả của một tạp chất có thể được loại bỏ Trong lĩnh vực môi trường, hệ số phân vùng có thể được đo hoặc dự đoán các hợp chất hiện đang gây ra vấn đề ô nhiễm Trong lĩnh vực địa chất thủy văn, hệ số phân vùng được sử dụng để dự đoán và mô hình di cư của các hợp chất hữu cơ hòa tan kỵ nước trong đất và nước ngầm Trong lĩnh vực nghiên cứu các các hợp chất thiên nhiên, thì dựa vào hệ số phân vùng có thể biết được các cấu tử này có độ phân cực mạnh hay yếu, biết được mật độ điện tử của các cấu tử [89]

1.1.5.2 Giá trị momen lưỡng cực

Phân tử không cực là phân tử trong đó sự phân bố điện tích hoàn toàn đối xứng, trọng tâm điện tích dương của hạt nhân và trọng tâm điện tích âm của các electron trùng vào nhau Phân tử có cực là phân tử trong đó sự phân bố điện tích không đối xứng, trọng tâm điện tích dương và trọng tâm điện tích âm không trùng vào nhau Mỗi phân tử có cực

là một lưỡng cực điện gồm hai điện tích ngược dấu +q và –q đặt cách nhau một khoảng l

Độ có cực của phân tử được đánh giá bằng momen lưỡng cực và được tính theo công

thức: μ=q.l, phân tử có cực càng mạnh thì momen lưỡng cực càng lớn Momen lưỡng cực

thường được tính bằng đơn vị Debye (ký hiệu là D) Độ có cực của phân tử và momen lưỡng cực của phân tử phụ thuộc vào độ có cực của các mối liên kết và cách phân bố các mối liên kết trong phân tử Độ có cực của phân tử ảnh hưởng mạnh đến tính chất của hợp chất và ảnh hưởng đến lực tương tác giữa các phân tử [26]

1.2 KHÁI QUÁT VỀ QUẢ CÓ MÚI

1.2.1 Cây ăn quả có múi trồng ở Việt Nam

1.2.1.1 Bưởi

Bưởi có tên khoa học là Citrus grandis Osbek [2, 4, 6, 20] Trong bưởi có nhiều

thành phần hóa học có tác dụng tốt cho sức khỏe, đặc biệt là tinh dầu bưởi có tác dụng phòng trừ huyết áp cao, cảm cúm, kích thích cơ quan khứu giác tạo cảm giác dễ chịu cho

cơ thể người [128] Nước ta có một số giống bưởi nổi tiếng như:

a Bưởi Đoan Hùng

Trồng nhiều ở Đoan Hùng- Phú Thọ, trên đất phù sa ven sông Lô và sông Chảy, huyện Đoan Hùng có 11 giống bưởi, nhưng có hai giống bưởi được xem là tốt đó là bưởi Tộc Sửu ở xã Chi Đám và bưởi Bằng Luân ở xã Bằng Luân Bưởi Tộc Sửu quả hình cầu hơi dẹt, trọng lượng trung bình 740- 750g, vỏ quả màu vàng hơi xám nâu, tép múi màu xanh, mọng nước, thịt quả hơi nhão, vị ngọt nhẹ, hàm lượng chất khô hòa tan 9- 11 và tỷ

lệ phần ăn được 70- 75% Bưởi Bằng Luân quả to hơn, trọng lượng trung bình từ 770- 780g, thịt quả ít nhão hơn bưởi Tộc Sửu, vị ngọt nhẹ và có màu trắng xanh Bưởi Đoan Hùng được trồng nhiều ở huyện Đoan Hùng- Phú Thọ Hiện nay toàn huyện Đoan Hùng trồng được 1.300ha bưởi, sản lượng đạt 12.350 tấn, năng suất bình quân khoảng 14- 15 tấn/ha, tỷ lệ vỏ chiếm khoảng 23% [2, 4, 6, 20]

b Bưởi Phúc Trạch

Nguồn gốc ở Phúc Trạch- Hương Khê- Hà Tĩnh Hiện nay được trồng ở hầu khắp

28 xã trong huyện và các vùng lân cận Bưởi Phúc Trạch được coi là một trong những giống bưởi ngon nhất nước ta hiện nay Quả hình cầu hơi dẹt, vỏ quả màu vàng xanh, trọng lượng trung bình từ 800- 900g, tỷ lệ phần ăn được 60- 65% và số lượng hạt từ 50-

80 hạt Màu sắc thịt quả và tép phớt hồng, vách múi dòn dễ tách rời, thịt quả mịn, đồng nhất, vị hơi chua và hàm lượng chất khô hòa tan từ 12- 14 [2, 4, 6]

c Bưởi Diễn

Được trồng ở xã Phú Diễn, Phú Minh- Từ Liêm- Hà Nội Bưởi Diễn quả tròn vỏ nhẵn, khi chín màu vàng cam, trọng lượng trung bình từ 900g, tỷ lệ phần ăn được từ 60- 65%, số hạt trung bình khoảng 50 hạt, múi và vách múi dễ tách rời nhau Thịt quả có màu vàng xanh ăn dòn, ngọt và hàm lượng chất khô hòa tan từ 12- 14 [2, 4, 6]

d Bưởi đỏ Mê Linh

Được trồng nhiều ở Mê Linh- Hà Nội, hiện nay được trồng phổ biến ở nhiều địa phương như Hàm Yên- Tuyên Quang, Hoài Đức- Hà Nội Quả có hai dạng hình cầu hơi dẹt và thuôn dài, trọng lượng trung bình từ 900- 950g, khi chín cùi và thịt quả có màu đỏ gấc, vỏ quả nhẵn và có nhiều túi tinh dầu Qủa thường khô và vị ngọt hơi chua [2, 4, 6]

e Bưởi Thanh Trà

Thường được trồng ở Thanh Trà- Thừa Thiên Huế, ven bờ sông Hương Quả nhỏ như quả lê, trọng lượng trung bình từ 650- 700g, vỏ mọng dễ bóc, khi chín thì có màu vàng xanh, tép nhỏ mọng nước nhưng ăn thì thấy dòn và ngọt Thịt quả mịn, đồng nhất,

có màu vàng xanh và tỷ lệ phần ăn được từ 62- 65% [2, 4, 6]

f Bưởi Biên Hoà

Vùng nổi tiếng là ở cù lao Phố và cù lao Tân Triều trên sông Đồng Nai Quả to hình quả lê, vỏ dày, cùi xốp trắng, múi dễ tách, ăn dòn và ngọt dôn dốt chua Trọng lượng quả trung bình khoảng 1000g và tỷ lệ phần ăn được trên 60% [2, 4, 6]

g Bưởi Năm Roi

Bưởi được trồng nhiều ở vùng đồng bằng sông Cửu Long Quả hình quả lê, trọng lượng trung bình khoảng 1100g, khi chín vỏ có màu vàng xanh, thịt quả màu xanh vàng, mịn và đồng nhất Múi và vách múi rất dễ tách, ăn dòn, ngọt hơi dôn dốt chua, đặc biệt là không có hạt mẩy, chỉ có hạt lép nhỏ li ti và tỷ lệ phần ăn được trên 55% [2, 4, 6]

h Bưởi đường lá cam

Được trồng nhiều ở tỉnh Đồng Nai, hiện nay ở các tỉnh đồng bằng sông Cửu Long cũng phát triển trồng nhiều giống bưởi này Quả hình quả lê, trọng lượng trung bình khoảng 1200g Vỏ quả khi chín màu xanh vàng, thịt quả màu vàng nhạt, đồng nhất, múi, vách múi rất dễ tách, vị ngọt và tỷ lệ phần ăn được trên 50% [2, 4, 6]

1.2.1.2 Cam

Cam có tên khoa học Citrus sinensis Osbeck [3, 4] Ở nước ta hiện nay có nhiều

giống cam được trồng ở các tỉnh miền núi phía Bắc, đồng bằng Sông Hồng và đồng bằng Sông Cửu Long Cam là loại quả có chứa nhiều chất dinh dưỡng có tác dụng tốt cho sức khỏe như đường, vitamin và các chất khoáng Vì vậy các nhà khoa học đã khuyến cáo hãy tăng cường sức khỏe từ các hợp chất chứa trong cam [147] Ngoài ra Zewde D.K và cộng sự cho thấy vỏ cam có tác dụng chống độc và trị cảm cúm [151]

a Cam sành

Cam sành là một giống lai giữa cam và quýt, có nguồn gốc ở Việt Nam Cam sành còn được gọi là quýt King (quýt vua) Ở Việt Nam, cam sành được trồng ở tất cả các vùng miền, ở miền bắc như Hàm Yên- Tuyên Quang, Bắc Quang- Hà Giang và Yên Thế- Bắc Giang Quả cam sành có vỏ dày, thô, sần sùi, vỏ quả và thịt quả khi chín có màu vàng Trong lượng quả trung bình khoảng 170- 190g, vỏ quả có nhiều tinh dầu, thịt quả

có vị ngọt hơi chua, nhiều nước và giàu vitamin… Cam sành Hàm Yên hiện nay được trồng phổ biến ở huyện Hàm Yên- Tuyên Quang, toàn huyện có 2.500ha cam sành, trong

đó diện tích vườn cam cho thu hoạch là 2.260 ha, năng suất 11- 12 tấn/ha Quả cam sành Hàm Yên có đặc điểm là vỏ dày, tỷ lệ vỏ chiếm khoảng 24%, vỏ quả có nhiều túi tinh dầu

và có mùi thơm rất đặc trưng [4, 6]

b Cam Sông Con

Cam Sông Con là một giống cam nhập nội từ Pháp, được trồng đầu tiên ở đội sản xuất Đào nguyên Nông trường Sông Con nên có tên là cam Sông Con Đặc điểm cây cao 3- 4m, cành có gai, góc độ phân cành nhỏ hơn các giống khác, tán cây hình trụ hoặc hình chổi xể Lá dày, hơi bầu, cong lòng máng và màu xanh đậm Trọng lượng trung bình quả 170- 190g, tròn hơi dẹt (đường kính quả trung bình 7,7 cm, quả cao 7,3cm) Vỏ quả màu vàng sáng, tép nhỏ, mịn, vàng mỡ gà, ít hạt, vị ngọt thanh và thơm dịu [4, 6]

c Cam Vân Du

Cam Vân Du là giống cam nhập nội vào trại cam Vân Du năm 1947 Cây nhiều cành, gai, cao từ 4- 5m, tán rậm, hình tháp hoặc hình bán cầu, đường kính từ 4- 5m, lá hơi thuôn màu xanh đậm và eo lá hơi to Quả hình trứng, nặng từ 160- 180g, vỏ mỏng, trơn bóng, túi tinh dầu nhỏ và phân bố đều trên vỏ Khi chín vỏ quả vàng da cam, có từ 11-12 múi, tép mịn màu vàng tươi, vị ngọt thanh và mùi thơm [4, 6]

d Cam xã Đoài

Đây cũng là giống cam nhập nội được người Pháp đưa vào từ rất lâu và trồng đầu tiên ở thôn Đoài- Nghi Diên- Nghi Lộc- Nghệ An Cây cao trung bình 3,5- 4m và tán rộng 4- 4,5m Phân cành tương đối thấp, ít gai và gai ngắn Lá to, chiều dài lá 8- 9 cm, rộng 5- 6 cm và có cánh lá rộng Khung cành thưa hơn các giống khác, quả nặng trung bình 210- 220g, đường kính quả trung bình 6,8- 7,8 cm, vỏ mỏng, dày chừng 3mm và màu vàng tươi rất hấp dẫn Quả có trung bình 10- 12 múi, ít hạt, màng múi mỏng, tép nhỏ, nhiều nước và có vị ngọt đặc biệt [4, 6]

e Cam Valencia

Cam Valencia được nhập vào nước ta năm 1971 từ Cu Ba và được trồng đầu tiên

ở Nông trường Thạch Quảng- Thạch Thành- Thanh Hóa Đặc điểm cây sinh trưởng nhanh, quả tròn hơi ô van và trọng lượng trung bình 180- 220g Vỏ dày khoảng 3mm, khi chín màu vàng nhẵn và bóng rất hấp dẫn Có từ 9- 12 múi, tép nhỏ mịn, màu vàng đậm, nhiều nước, vị ngọt thanh và có mùi thơm [4, 6]

f Cam rốn

Đây là giống cam được nhập nội vào nước ta từ năm 1937 và hiện nay được trồng ở một số địa phương như: Hà Giang, Tuyên Quang và Bắc Giang Đặc điểm của giống cam rốn là lá và tán cây gần giống cam Sông Con Quả nặng trung bình 200- 210g,

có giống tới 290g, đường kính quả xấp xỉ 7,6 cm và quả cao 7cm Vỏ quả màu vàng da cam, quả có 11- 12 múi, thịt quả màu vàng đậm, mọng nước, vị ngọt đậm và ít hạt [4, 6]

g Cam Canh

Cam Canh là loại thuộc nhóm quýt, nhưng từ lâu nhân dân ta vẫn gọi là cam do quả to giống cam và trọng lượng trung bình từ 90- 110g Quả hình cầu hơi dẹt, vỏ mỏng nhẵn khi chín có màu đỏ gấc, giống chín sớm có quả màu vàng, vị ngọt đậm; giống chín muộn có vị ngọt mát Cam canh được trồng nhiều ở xã Phú Diễn, Xuân Canh, Minh Khai- Từ Liêm- Hà Nội Cam canh có thịt quả mọng nước, vàng đậm có sắc đỏ, ít hạt, ít

xơ bã, múi ít nước và dễ tách vỏ [4, 6] Tổng diện tích trồng cam canh các huyện ngoại thành Hà Nội hiện nay khoảng 2.000ha, đặc biệt là trồng nhiều ở các huyện Đan Phương, Phúc Thọ, Quốc Oai, Thanh Oai, Hoài Đức, Từ Liêm và Chương Mỹ

1.2.1.3 Chanh

Chanh có tên khoa học là Citrus limonia Osbeck, được trồng phổ biến ở Việt

Nam Quả chanh được dùng trong bữa ăn hàng ngày, làm nước giải khát, làm rượu, làm mứt, lá non dùng làm gia vị và tách chiết tinh dầu Vỏ chanh được dùng để tách chiết tinh dầu dùng trong lĩnh vực thực phẩm, dược phẩm và mỹ phẩm [4, 6] Ở nước ta hiện nay có rất nhiều giống chanh được trồng ở các địa phương như sau:

a Chanh giấy

Quả chanh giấy có vỏ mỏng nhẵn, màu xanh đậm, túi tinh dầu nhiều nhưng nhỏ, quả tròn, đường kính quả từ 4- 5cm, thịt quả có vị chua và nhiều nước Cây cao trung bình 2,5- 3m, tán rộng 2- 3m, lá màu xanh tươi và cành có nhiều gai Chanh giấy được trồng nhiều ở Tuyên Quang, Hà Giang, Cao Bằng, Bắc Kạn, Bắc Giang, Thanh Hóa, Lâm Đồng và các tỉnh đồng bằng sông Cửu Long Chanh giấy Hàm Yên cũng được trồng nhiều ở huyện Hàm Yên- Tuyên Quang, diện tích chanh giấy ngày càng tăng lên, hiện nay toàn huyện có 885 ha chanh, trong đó diện tích vườn chanh cho thu hoạch là 460 ha, năng suất 8- 9 tấn/ha Chanh giấy Hàm Yên có đặc điểm là vỏ mỏng, nhẵn, có màu xanh đậm, tỷ lệ vỏ chiếm khoảng 22% và vỏ quả có nhiều túi tinh dầu Trong 100g dịch quả chanh có nước: 80- 82%, citric acid: 5- 7%, malic acid: 0,4- 0,5%, đường saccarose: 0,5%, protein: 0,75- 1%, tro: 0,5% ngoài ra còn có vitamin C, B1, A và riboflavin Lớp vỏ xanh bên ngoài có chứa tinh dầu và lớp vỏ trắng bên trong thường chứa pectin Tinh dầu chanh là một chất lỏng màu vàng nhạt, mùi thơm và tỷ trọng ở 150 từ 0,857- 0,862 Trong

tinh dầu chanh có khoảng 90- 95% là terpene trong có các cấu tử như: Limonene, pinene, β-phelandrene, camphene và γ-terpinene Mùi thơm của tinh dầu chanh là do các

α-hợp chất chứa oxy và thường chiếm khoảng 3- 5%, bao gồm citral, citronellale, geranyl acetate và linalyl acetate Trong lá chanh cũng có chứa tinh dầu có mùi thơm dễ chịu và hàm lượng tinh dầu khoảng 0,33- 0,52% [4, 6]

b Chanh núm

Chanh núm có cuống quả lồi thành núm, vỏ dày không bóng, cây cao to, nhiều cành và nhiều gai Vỏ quả chanh này thường mỏng và có nhiều túi tinh dầu, ruột quả có nhiều nước, có vị chua, trong lá, hoa chanh cũng có tinh dầu Tinh dầu vỏ quả chanh núm

có mùi thơm dễ chịu và thành phần chủ yếu là các terpene hoặc dẫn xuất chứa oxy của terpene như: Aldehyde, alcohol, ketone và ester [4, 6]

c Chanh tứ thời

Chanh tứ thời được trồng nhiều ở Nam Đàn, Nghi Lộc- Nghệ An Cây cao khoảng 4m, tán rộng khoảng 4m, lá to dày và xanh đậm Trên cây cùng một lúc có nhiều thế hệ quả (quả sắp thu hoạch, quả đang lớn, có hoa và nụ) Chanh này vỏ dày hơn chanh giấy, trên vỏ có chứa nhiều túi tinh dầu, tinh dầu của loại quả này thường có mùi thơm dễ chịu, trên lá và hoa cũng có chứa tinh dầu nhưng thường với hàm lượng thấp [4, 6]

d Chanh lòng đào

Chanh lòng đào khi quả chín vỏ quả có màu vàng đỏ, tép có màu hồng lòng tôm

và cây chanh này thường ít quả hơn chanh giấy Vỏ chanh có nhiều túi tinh dầu, tinh dầu

vỏ chanh lòng đào thường có mùi thơm, có màu vàng nhạt, ruột quả có nhiều nước, nhiều axit hữu cơ, trong lá và hoa chanh cũng có tinh dầu [4, 6]

1.2.1.4 Quýt

Quýt có tên khoa học là Citrus reticulata Blanco var tangerine Ở Việt Nam

quýt được trồng ở nhiều nơi, có nhiều giống tốt cho năng suất cao và chất lượng tốt Về mặt trồng trọt thì cây quýt thích nghi với điều kiện nhiệt đới, nó ít bị sâu bệnh hơn cam

Ở nước ta có một số giống quýt nổi tiếng như sau:

a Quýt Lý Nhân

Quýt Lý Nhân có cây cao lớn, quả chín có màu đỏ, ngọt, chứa nhiều nước và nhiều chất dinh dưỡng Quả quýt này thường vỏ mỏng, trên vỏ có chứa túi tinh dầu, tinh dầu của loại quả này thường có mùi thơm dễ chịu, trên lá và hoa cũng có chứa tinh dầu nhưng thường với hàm lượng thấp Quýt Lý Nhân là loại quả có giá trị dinh dưỡng cao: Trong 100g phần ăn được của quả có 39 kcal, 11,6% đường, 0,8% protein, 120µg vitamin

A, 55mg vitamin C [2, 4] Trong quả quýt Lý Nhân vỏ chiếm 22%, vỏ quýt có chứa nhiều tinh dầu, tinh dầu quýt là một chất lỏng màu vàng nhạt, có huỳnh quang xanh, mùi thơm dễ chịu, tỷ trọng từ 0,853- 0,858 [2, 4] Các cấu tử chủ yếu trong tinh dầu quýt là limonene, citral, aldehyde nonylic, dexylic, ngoài ra còn có metylanthranilatmetyl đây là cấu tử tạo cho tinh dầu có huỳnh quang và mùi thơm đặc biệt [20] Quýt Lý Nhân hiện nay được trồng nhiều ở các tỉnh Hà Nam, Nam Định, Ninh Bình và Thái Bình

b Quýt Bố Hạ

Quýt Bố Hạ trước đây thường trồng nhiều ở huyện Yên Thế- Bắc Giang, hiện nay được trồng ở tất cả các huyện của tỉnh Bắc Giang, quýt này thường cho năng suất cao, quả chín thường có màu vàng, múi chứa nhiều nước và có vị ngọt Vỏ quýt Bố Hạ thường mỏng, trên vỏ có chứa túi tinh dầu, tinh dầu của loại quả này thường có mùi thơm

dễ chịu, trên lá và hoa cũng có chứa tinh dầu nhưng thường với hàm lượng thấp [4, 6]

c Quýt Tích Giang

Quýt Tích Giang được trồng nhiều ở Hải Dương, Hưng Yên và được gọi là quýt tiến Vua, ngày xưa dùng để tiến cho Vua Cây trung bình, phân cành thấp, cành mọc nhiều khỏe và thẳng, cành dài, đốt ngắn và không có gai Lá dày thuôn dài, eo lá nhỏ, mép lá có răng cưa, đuôi lá chẻ lõm Quả to dẹt, đường kính quả lớn hơn chiều cao, vỏ quả hơi dày, quả chín có màu đỏ gấc, ngọt và thịt quả mọng nước [4, 6]

d Quýt vỏ vàng Lạng Sơn

Quýt này được trồng nhiều ở các tỉnh như Lạng Sơn, Bắc Kạn, Thái Nguyên, Hà Giang, Tuyên Quang, Cao Bằng Cây mọc thẳng và cao, phân cành nhiều và nhỏ, lá giống như lá quýt tích giang, nhưng nhỏ và dài hơn Trên lá có nhiều túi tinh dầu và có mùi thơm đặc trưng Vỏ quả có núm nhô cao ở phía cuống, vỏ mỏng và có rất nhiều túi tinh dầu Thịt quả mọng nước, vách múi mỏng, ít hạt, hương vị thơm ngon, hấp dẫn và ngọt đậm [3]

1.2.1.5 Quất

Quất có tên khoa học là Citrus japonica Thumb, được trồng nhiều ở Việt Nam,

đặc biệt là một số tỉnh, thành như: Hưng Yên, Bắc Ninh, Bắc Giang, Vĩnh Phúc, Tuyên Quang, Hòa Bình và Hà Nội Cây quất là cây nhỏ, cao khoảng 1- 1,5m, phân nhiều cành nhánh, lá đơn hình bầu dục, màu xanh thẫm, cuống có cánh rất nhỏ, có đốt ở đầu Hoa thường đơn độc, nở xòe 5 cánh màu trắng tươi, nhụy rất ngắn và có mùi rất thơm Quả còn non mày xanh bóng, khi quả chín đổi thành màu vàng cam Bên trong ruột có nhiều múi màu vàng nhạt, chứa nhiều nước và có vị chua nên thường dùng để làm nước uống hoặc làm mứt Cây quất có tỷ lệ quả nhiều thường chín vào cuối mùa đông và đầu mùa

xuân, thường sử dụng để làm cảnh trong dịp tết Quả quất thường vỏ mỏng, có nhiều nước, có vị chua và thường được sử dụng làm gia vị trong các bữa ăn Trong quả quất, nước chiếm 89%, protein chiếm 0,9%, lipid chiếm 5,5%, glucid chiếm 4,1%, ngoài ra trong quả quất còn có chứa tinh dầu, các vitamin, flavonoid, alkaloid, phytosterol, steroid, carotenoid, acid hữu cơ và đường khử

Quả quất có công dụng phòng chống một số bệnh như: Ho, nôn, cảm cúm và nhức đầu… Ngoài ra trong vỏ quất, quýt, cam có chứa tinh dầu có khả năng ngăn ngừa phát sinh ung thư gan, thực quản, đại tràng và da… Các nhà khoa học Nhật Bản cho biết

ăn quất sẽ cung cấp vitamin C, chất xơ rất có lợi cho tiêu hóa, giảm cholesterol, làm vững chắc thành mạch và chữa bệnh tăng huyết áp [8]

1.2.1.6 Cây phật thủ

Phật thủ có tên khoa học Citrus medica L.var sarcodactylis Sw Quả phật thủ

khi chín có màu vàng, vỏ quả rất thô do có nhiều túi tinh dầu, tinh dầu vỏ quả phật thủ có mùi thơm dễ chịu, các cấu tử của tinh dầu chủ yếu là terpene và một số dẫn xuất có chứa oxy của terpene Trong vỏ quả phật thủ người ta còn tìm thấy có chứa một số hợp chất như: Flavonoid, hesperidin Qủa phật thủ không có tép, không có hạt và ít nước Trong quả phật thủ có chứa nhiều vitamin C, đường, acid hữu cơ, pectin, tinh dầu, glucosid, limettin, citropten, ngoài ra còn có diosmin và chất trắng anbeto

Quả phật thủ có vị cay, đắng, chua và có tính ôn hòa Quả phật thủ dùng làm thuốc điều hòa khí, bồi bổ dạ dày, có công hiệu giảm đau, hòa khí, làm dễ tiêu, tan đờm, khỏe tỳ vị, giảm ho, chữa nôn và giã rượu… Ngoài ra, hoa phật thủ cũng là vị thuốc Đông y rất tốt, tính ấm, vị hơi đắng, có tác dụng lợi tỳ vị và trị nôn Đặc biệt trong quả phật thủ và tinh dầu phật thủ có chứa nhiều hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học mạnh Bên cạnh việc sử dụng trong y học thì hiện nay trong dân gian người ta còn sử dụng phật thủ để ngâm rượu, sử dụng để nấu nước gội đầu và sử dụng quả phật thủ để thờ cúng trong các dịp lễ tết

Hiện nay nước ta cây phật thủ được trồng nhiều ở huyện Hoài Đức, Đan Phương, Quốc Oai, Thạch Thất, Phúc Thọ- Hà Nội, huyện Hàm Yên- Tuyên Quang… Diện tích

và sản lượng cây phật thủ ngày càng tăng lên, nhưng quả phật thủ vẫn chủ yếu sử dụng để thờ cúng vào dịp lễ tết và xuất khẩu sang thị trường Trung Quốc Trong khi đó trong quả phật thủ có chứa rất nhiều các thành phần có ích, vẫn chưa được nghiên cứu và sử dụng

có hiệu quả [6, 20]

Trong những năm gần đây ở nước ta năng suất và sản lượng quả có múi liên tục gia tăng, được trồng ở nhiều địa phương trong cả nước, với nhiều loại quả đã trở thành

đặc sản nổi tiếng như: Bưởi Diễn, bưởi Năm Roi, bưởi Đoan Hùng, bưởi Phúc Trạch, cam sành, cam Canh và chanh giấy Đặc biệt là quả bưởi Đoan Hùng, cam sành Hàm Yên và chanh giấy Hàm Yên được trồng nhiều ở các tỉnh miền núi phía Bắc, với diện tích, năng suất và sản lượng tăng cao Quả có múi ở nước ta hiện nay vẫn chủ yếu để ăn tươi

và bên cạnh đó cũng có một số nhà máy chế biến rau quả, có quy trình chế biến nước quả

có múi như Bắc Giang, Tiền Giang Vì vậy vỏ quả có múi ở đây sẽ là nguồn nguyên liệu quan trọng cho nghiên cứu thu hồi chất thơm và sản xuất hương liệu

1.2.2 Đặc tính của tinh dầu quả có múi

Các loài bưởi, cam, chanh, quýt được trồng để lấy quả là chủ yếu, nhưng bên cạnh đó có thể tận dụng vỏ quả, lá và hoa để thu hồi tinh dầu Trong công nghiệp chế biến cần tận dụng những phần này để thu hồi tinh dầu và đây là nguồn tinh dầu có khối lượng đáng kể, góp phần làm tăng giá trị của loài cây có múi Các kết quả nghiên cứu cho thấy hầu như tất cả các loài thuộc chi cam quýt đều có chứa tinh dầu ở trong vỏ, trong lá

và trong hoa Hàm lượng tinh dầu trong vỏ quả thường khá cao, thường dao động từ 1,5- 6,5% so với khối lượng vỏ quả tươi Trong lá và trong hoa cũng thường chứa một lượng tinh dầu lớn, đặc biệt là trong lá chanh tươi tinh dầu chiếm 0,2- 0,3% và trong hoa bưởi tươi tinh dầu chiếm khoảng 0,2- 0,3% Bên cạnh đó một lượng vỏ có chứa nhiều tinh dầu

là nguồn nguyên liệu quan trọng cho việc sản xuất chất thơm cần được nghiên cứu và sử dụng [17, 56, 76, 83]

Các cấu tử chủ yếu trong tinh dầu vỏ quả của hầu hết các loài thuộc chi cam quýt

là các hợp chất thuộc nhóm terpene 80- 85%, tiếp đến là các dẫn xuất chứa oxy của terpene như alcohol, aldehyde, ketone, ester và acid Bên cạnh đó người ta thường gặp các hợp chất geranial, decanal, octanol, linalool và citronellol [1, 17, 33, 56, 67, 76, 79, 111] Tinh dầu trong lá của phần lớn các loài thuộc chi cam quýt cũng là nguồn nguyên liệu quan trọng trong công nghệ chế biến bánh kẹo và nước giải khát Tinh dầu trong lá của loài chanh Mỹ được trồng tại Italia chứa các cấu tử chính là limonene, linalool, geranial, neral, geraniol, sabinene và camphene [114]

Như vậy ngoài các hợp chất chính thuộc nhóm terpene, cùng với một số hợp chất khác thuộc nhóm sesquiterpene trong tinh dầu của các loài thuộc chi cam quýt, còn có một số hợp chất chứa oxy [114] Các hợp chất có chứa oxy dễ hòa tan trong nước và trong rượu có độ cồn thấp, đồng thời có mùi vị thơm mát, dịu hấp đẫn của loài hoa quả tươi, do đó được sử dụng nhiều trong các lĩnh vực thực phẩm, sản xuất nước hoa, kem đánh răng, xà phòng thơm và một số lĩnh vực khác

1.2.3 Tình hình nghiên cứu tinh dầu từ quả có múi

1.2.3.1 Nghiên cứu trên Thế giới

Nghiên cứu về khai thác và thu hồi tinh dầu: Hiện nay trên Thế giới cũng đã có

nhiều công trình đã nghiên cứu khai thác, thu hồi và ứng dụng tinh dầu từ vỏ, hoa và lá của quả có múi như: Verzare A và cộng sự [140] đã đưa ra công nghệ khai thác tinh dầu chanh cho hiệu suất cao Gianer R.S và cộng sự [58] nghiên cứu quá trình chưng cất tinh dầu vỏ quả cam và đã xác định được các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình chưng cất tinh dầu Các tác giả Budich M và cộng sự [38], Lee S.T và cộng sự [69] đã nghiên cứu trích

ly thu hồi chất thơm trong quả có múi bằng dung môi CO2 siêu tới hạn Kết quả cho thấy thu hồi được chất thơm với hiệu quả cao

Nghiên cứu về các cấu tử trong tinh dầu: Ngoài các công trình trên thì đến thời

điểm này còn nhiều công trình nghiên cứu tách chiết, phân tích các cấu tử trong tinh dầu

vỏ quả có múi như: Masada Y và cộng sự [76], Sawamura M [110], Shaw P.E và cộng sự [119], Sugisawa H và cộng sự [126], Njoroge S.M và cộng sự [95], Verzara A và cộng sự [137], Njoroge S.M và cộng sự [94], Njoroge S.M và cộng sự [96], Njoroge S.M và cộng

sự [97], Njoroge S.M và cộng sự [98] Minh Tu N.T và cộng sự (2002) đã xác định 45 cấu tử trong tinh dầu vỏ quả bưởi, bằng phương pháp GC /O các tác giả đã xác đi ̣nh được

nootkatone và trans-p-mentha-2,8-dien-1-ol là cấu tử tạo mùi đặc trưng của tinh dầu vỏ

quả bưởi ở Nhật Bản Đồng thời các tác giả cũng đã xác định được có 45 cấu tử trong

tinh dầu vỏ quả cam Các tác giả cho thấy sự có mặt δ-3-carene> 0,03% được sử dụng

làm chỉ thị để đánh giá cam ngọt hay cam đắng Bên cạnh đó các tác giả cũng đã xác định được 43 cấu tử trong tinh dầu vỏ quả quýt và 77 cấu tử trong tinh dầu vỏ quả chanh Trong 77 cấu tử đã xác định được trong vỏ quả chanh thì có tới 31 cấu tử không có trong tinh dầu vỏ bưởi, cam và quýt Các tác giả cũng cho biết trong tinh dầu vỏ bưởi monoterpene chiếm 98,5%, trong tinh dầu vỏ cam monoterpene chiếm 97,6%, trong tinh dầu vỏ quýt monoterpene chiếm 98,5%, trong tinh dầu vỏ chanh monoterpene chiếm 91,8% [80] Ngoài ra Minh Tu N.T và cộng sự 2002 đã xác định các cấu tử tạo hương đặc trưng trong tinh dầu vỏ quả cam, quýt sphaerocarpa Tanaka (Kabosu) khai thác bằng phương pháp ép lạnh [82] Tác giả Sugisawa H và cộng sự [127] đã nghiên cứu so sánh các cấu tử dễ bay hơi trong tinh dầu vỏ quả của bốn loài cam rốn, kết quả cho thấy các cấu tử trong tinh dầu của bốn loài cam này không có sự thay đổi nhiều Tác giả Sawamura M và cộng sự, nghiên cứu các cấu tử dễ bay hơi của tinh dầu vỏ cam ngọt Trung Quốc, kết quả nghiên cứu đã phân tích được 64 cấu tử trong tinh dầu và đã xác định được một số cấu tử thuộc nhóm aldehyde tạo mùi thơm đặc trưng cho tinh dầu cam [75] Mitiku S.B và cộng sự [84] xác

định được 41 cấu tử trong tinh dầu vỏ quả cam ngọt trồng tại Nhật Bản Minh Tu N.T và cộng sự đã xác định được các cấu tử tạo mùi thơm đặc trưng trong tinh dầu cam được thu hồi bằng phương pháp ép lạnh [81], Sawamura M đã nghiên cứu cấu tử dễ bay hơi trong tinh dầu vỏ cam, quýt và xác định được hơn 40 cấu tử trong đó có 20 cấu tử dễ bay hơi [108] Ahmed E.M và cộng sự đã nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố tới bản chất của các cấu tử trong tinh dầu vỏ quả cam [29] Mitiku S.B và cộng sự nghiên cứu sự phân

bố đồng phân quang học của của một số cấu tử trong tinh dầu vỏ quả có múi [84], Lota M.L và cộng sự cho thấy các cấu tử bị biến đổi trong quá trình sinh trưởng, phát triển của quả và lá [71] Ngoài ra Moshonas M.G cũng đã xác định được 6 cấu tử tạo hương đặc trưng cho tinh dầu vỏ quả bưởi [90]

Nghiên cứu về hoạt tính sinh học của tinh dầu: Trong thời gian vừa qua, trên Thế

giới có nhiều công trình nghiên cứu về hoạt tính sinh học của cây ăn quả có múi như: Eun-Jin và cộng sự đã cho thấy tinh dầu vỏ quả có múi có khả năng ức chế bệnh viêm da [55] Bên cạnh đó có một số công trình của Choi H.S và cộng sự [42], Baik J.S và cộng

sự [34], Verzera A và cộng sự [138], Belletti N và cộng sự [35], Caccioni D.R.L và cộng

sự [39], Caccioni D.R.L và cộng sự [40], Choi H.S và cộng sự [43], Bocco V và cộng sự [36], Dorman H.J.D và cộng sự [49], Jayaprakasha G.K và cộng sự [64], Ruffinengo S.R

và cộng sự [103], Yen G.C và cộng sự [148], Sandra R.F và cộng sự [105], Matook S.M

và cộng sự [69] đều cho rằng tinh dầu cây có múi có hoạt tính sinh học mạnh Matook S.M và cộng sự năm 2006 đã cho thấy tinh dầu trong flavedo có hoạt tính chống oxy hóa lớn hơn tinh dầu trong albedo [77] Tác giả Roger D và cộng sự đã nghiên cứu khả năng kháng khuẩn trong thực phẩm của tinh dầu vỏ quả có múi Kết quả cho thấy các thành

phần terpineol, d-limonene, geroniol có khả năng ức chế được 50- 60% các vi sinh vật Salmonella senftenber, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas species

trong thực phẩm [79] Các tác giả Salim U.R và cộng sự năm 2007 cũng nghiên cứu tác dụng ức chế vi sinh vật trong bánh mì của tinh dầu vỏ cam Kết quả cho thấy sau 48 giờ

đưa tinh dầu quả có múi vào thì các vi sinh vật Penicillium, Aspergillus flavus đều giảm

so với ban đầu là 2,7.102

xuống còn 1,2.102 [104] Amal A.M và cộng sự đã phân tích trong tinh dầu vỏ quả cam có 20 cấu tử Kết quả nghiên cứu cho thấy các cấu tử trong tinh dầu cam như limonene, linalool có khả năng ức chế các tế bào ung thư từ 81- 85% [30] Một

số kết quả nghiên cứu gần đây cho thấy một số cấu tử trong tinh dầu có khả năng ức chế

sự phát triển của vi sinh vật trên quả có múi sau thu hoạch, như Sharma N và cộng sự [117], Wuryatmo E và cộng sự [144] Năm 2008, Sandra R và cộng sự nghiên cứu xác định cấu tử và hoạt tính kháng khuẩn của tinh dầu vỏ quả có múi trên ấu trùng gây bệnh