Ảnh hưởng của Phytohormone tới sự phát triển chòi, rễ của phong lan Vanda (Vanda sp) in vitro và một số đặc điểm sinh lí của cây trước và sau giai đoạn ra ngôi

Header Page of 149 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI - TRẦN THỊ KIM NHUNG ẢNH HƯỞNG CỦA PHYTOHORMONE TỚI SỰ PHÁT SINH CHỒI, RỄ CỦA PHONG LAN VANDA (Vanda sp) in vitro VÀ MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH LÍ CỦA CÂY CON TRƯỚC VÀ SAU GIAI ĐOẠN RA NGÔI LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC HÀ NỘI, 2016 Footer Page of 149 Header Page of 149 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn “Ảnh hưởng phytohormone tới phát sinh chồi, rễ phong lan Vanda (Vanda sp) in vitro số đặc điểm sinh lí trước sau giai đoan ngôi” trung thực, đầy đủ, rõ nguồn gốc chưa sử dụng để bảo vệ học vị Các thông tin, tài liệu tham khảo sử dụng luận văn rõ nguồn gốc Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn Tôi xin chịu trách nhiệm trước Hội đồng bảo vệ luận văn, Khoa Sinh KTNN, Phòng Quản lý đào tạo sau đại học Nhà trường thông tin, số liệu đề tài Hà Nội, ngày 25 tháng 11 năm 2016 Tác giả luận văn Trần Thị Kim Nhung Footer Page of 149 Header Page of 149 ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn, cố gắng nỗ lực thân, nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ tổ chức, cá nhân trường Lời đầu tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến TS Cao Phi Bằng người thầy tận tình dìu dắt hướng dẫn chuyên môn cho thời gian tiến hành nghiên cứu đề tài khoa học Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu trường Đại Học Sư Phạm Hà Nội thầy cô giáo Khoa Sinh - KTNN trường Đại Học Sư Phạm Hà Nội 2, cán phòng sau đại học trường Đại Học Sư Phạm Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ suốt trình thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn lớp K18 – Sinh học thực nghiệm , sinh viên giúp đỡ nhiều trình thực đề tài hoàn thành đề tài Mặc dù cố gắng luận văn không tránh khỏi thiếu sót hạn chế Vì vậy, mong nhận quan tâm đóng góp ý kiến quý thầy cô bạn để đề tài hoàn thiện Một lần xin chân thành cảm ơn! Hà nội, ngày 25 tháng 11 năm 2016 Học viên Trần Thị kim Nhung Footer Page of 149 Header Page of 149 iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii PHẦN MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Những đóng góp đề tài PHẦN NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Tổng quan lan Vanda 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Đặc điểm sinh thái chế độ chăm sóc 1.1.3.1 Nhiệt độ, ẩm độ, tưới nước 1.1.3.2 Ánh sáng 1.1.3.3 Nhu cầu phân bón 1.1.3.4 Giá thể trồng lan 1.1.3.5 Thay chậu nhân giống 1.1.3.6 Sâu bệnh 1.2 Phương pháp nhân giống in vitro 1.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.2 Các giai đoạn nuôi cấy 1.2.2.1 Giai đoạn 1: Chọn lọc chuẩn bị mẹ Footer Page of 149 Header Page of 149 iv 1.2.2.2 Giai đoạn 2: Nuôi cấy khởi động 1.2.2.3 Giai đoạn 3: Nhân nhanh 1.2.2.4 Giai đoạn 4: Tạo hoàn chỉnh 10 1.2.2.5 Giai đoạn 5: Đưa mô vườn ươm 10 1.2.3 Các điều kiện nuôi cấy in vitro 11 1.2.4 Môi trường nuôi cấy in vitro 12 1.2.5 Chất điều hòa sinh trưởng 13 1.2.5.1.Auxin 13 1.2.5.2 Cytokinin 13 1.3 Các nghiên cứu nhân giống in vitro lan Vanda 14 1.3.1 Trên giới 14 1.3.2.Trong nước 17 1.4 Các nghiên cứu giai đoạn 18 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 21 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu 21 2.1.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 21 2.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng phytohormone tới phát sinh chồi rễ 21 2.3.2 Phương pháp xác định tiêu sinh lý 26 2.3.2.1 Xác định hàm lượng sắc tố quang hợp (diệp lục, carotenoid) 26 2.3.2.2 Xác định hoạt độ catalase 27 2.3.2.3 Xác định hoạt độperoxidase 28 2.3.3 Phương pháp xử lý số liệu 28 Footer Page of 149 Header Page of 149 v CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Ảnh hưởng hóa chất khử trùng đến tỷ lệ sống hạt lan 29 3.2 Ảnh hưởng kinetin BAP đến đường hướng phát sinh hình thái hạt nảy mầm 31 3.3 Ảnh hưởng kinetin BAP đến chiều cao chồi nảy mầm từ hạt 33 3.4 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến hệ số nhân chồi 34 3.5 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến chiều cao chồi trình nhân nhanh 36 3.6 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến động thái 37 3.7 Ảnh hưởng NAA IAA đến khả rễ 37 3.8 Huấn luyện giai đoạn 40 3.8.1 Ảnh hưởng chế độ huấn luyện ống nghiệm 40 3.8.2 Ảnh hưởng loại giá thể trồng đến lan 41 3.8.4 Ảnh hưởng chế độ che sáng đến sinh trưởng 42 3.9 Hàm lượng sắc tố quang hợp 43 3.10 Hoạt độ catalase 46 3.11 Hoạt độ peroxidase 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 Kết luận 49 Kiến nghị 49 NHỮNG CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC viii Footer Page of 149 Header Page of 149 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN Viết Đọc ADPG Axit 1,3 di photphoglixeric ATP Adenorin triphotphat BA 6-Benzyladenin BAP 6- Benzylaminopurine Car Carotenoit Chl Chlorophyl Chla Chlorophyla Chlb Chlorophylb IAA 3-indoleacetic acid IBA 3-indolebutiric acid MS Murashige Skoog NAA Napthaleneacetic acid NADPH Nicotinamide cidenin dinucleotide photphate hydro TDZ 1-phenyl-3-1,2,3-thiadiarol-5yl VW Vacin and Went 2,4 D 2,4- Dichloro phenoxy acetic acid Footer Page of 149 Header Page of 149 vii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hưởng hóa chất khử trùng đến khả nảy mầm hạt lan 29 Bảng 3.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến đường hướng phát sinh hình thái hạt lan Vanda 31 Bảng 3.3 Ảnh hưởng BAP đến nhân nhanh chồi lan Vanda 34 Bảng 3.4 Ảnh hưởng NAA IAA đến khả rễ 37 Bảng 3.5 Ảnh hưởng loại giá thể trồng đến động thái tăng trưởng lan 41 Bảng 3.6 Ảnh hưởng chế độ che sáng đến động thái rễ lan Vanda 42 Bảng 3.7 Hàm lượng sắc tố quang hợp mô phong lanVanda thời kì ex vitro 44 Footer Page of 149 Header Page of 149 viii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hoa lan Vanda Hình 3.1 Ảnh hưởng hóa chất khử trùng đến khả nảy mầm hạt lan 30 Hình 3.2 Sự nảy mầm hạt lan Vanda 30 Hình 3.3 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến đường hướng phát sinh hình thái hạt lan Vanda 32 Hình 3.4 Sự phát sinh hình thái hạt lan Vanda 33 Hình 3.5 Ảnh hưởng kinetin BAP đến chiều cao chồi phát sinh 34 Hình 3.6 Ảnh hưởng BAP đến hệ số nhân chồi lan Vanda 35 Hình 3.7 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến chiều cao chồi 36 Hình 3.8 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến động thái 37 Hình 3.9 Ảnh hưởng NAA IAA đến số rễ TB/cây 38 Hình 3.10 Ảnh hưởng NAA IAA đến chiều dài rễ 39 Hình 3.11 Sự hình thành rễ lan Vanda 39 Hình 3.12 Ảnh hưởng chế độ huấn luyện ống nghiệm đến tỷ lệ sống 40 Hình 3.13.Hàm lượng sắc tố quang hợp mô phong lanVanda thời kì ex vitro 44 Hình 3.14 Hoạt độ catalase phong lan Vanda thời kì ex vitro 46 Hình 3.15 Hoạt độ peroxidase phong lan Vanda thời kì ex vitro 48 Footer Page of 149 Header Page 10 of 149 PHẦN MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Trong năm gần kinh tế nước ta ngày phát triển, đời sống người dân không ngừng cải thiện nhu cầu chơi cảnh ý đến nhiều Nhu cầu sử dụng hoa nói chung hoa lan nói riêng tăng nhanh Hoa lan thực trở thành sản phẩm nông nghiệp có giá trị kinh tế cao, thúc đẩy ngành sản xuất kinh doanh phát triển mạnh mẽ: Thái Lan, Singapore, Malaysia, Indonesia Thái Lan có kim ngạch xuất hoa lan cắt cành năm 1987 21 triệu USD, năm 1990 26 triệu USD, năm 1991 30 triệu USD, Singapore thu lợi nhuận từ hoa cắt cành năm 10 triệu USD Phong lan Vanda (Vanda sp) thuộc họ phong lan (Orchidaceae) giống Vanda Lan Vanda loại lan phổ biến vùng nóng, phân bố rộng rãi khắp giới Trung quốc, Indonexia hay Bắc Châu Úc với gồm 45 loài biết 1000 loài lai tạo Lan Vanda số giống lan đẹp, phù hợp với mục tiêu trang trí, làm cảnh, nên nuôi trồng rộng rãi có giá trị kinh tế cao Choy [21] Để đáp ứng nhu cầu người với số lượng lớn, việc nhân giống loài lan công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật (in vitro) biện pháp cần tính đến Trên giới, có số công trình nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống số loài lan thuộc giống Vanda báo cáo [10; 18; 20; 29; 44] Tuy nhiên, Việt Nam chưa có công trình nghiên cứu cách có hệ thống phát sinh quan lan Vanda ảnh hưởng phytohormone công bố Bên cạnh đó, công nghệ nhân giống in vitro, giai đoạn (huấn luyện để chuyển từ giai đoạn ống nghiệm môi trường tự nhiên) đóng vai trò quan trọng Trong trình này, phải thích nghi với thay đổi môi trường sống từ Footer Page 10 of 149 Header Page 57 of 149 48 Đầu đài Ấn Độ [17] Tuy nhiên, động thái hoạt tính peroxidase phong lan Vanda khác với ascorbate peroxydase Cúc đồng tiền hoạt độ ascorbate peroxydase giảm ngày thứ 10 ngôi, ngày 20 hoạt độ ascorbate peroxydase tương đương với điều kiện in vitro, cuối thời kì (ngày 25) hoạt độ enzym lại giảm xuống so với điều kiện in vitro[13] Hình 3.15 Hoạt độ peroxidase phong lan Vanda thời kì ex vitro (Thanh sai số thể giá trị độ lệch chuẩn Các sai số đánh dấu với chữ không giống thể khác có ý nghĩa thống kê(p=0,05) kiểm định với test Duncan) Footer Page 57 of 149 Header Page 58 of 149 49 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận BAP 0,5-1,5 mg/l (cùng với NAA 0,1 mg/l) có ảnh hưởng tích cực đến phát sinh chồi trực tiếp từ hạt nảy mầm Hiệu ứng phát sinh chồi kinetin thấp so với BAP nồng độ nghiên cứu BAP 1,0mg/l (cùng với NAA 0,2 mg/l) có ảnh hưởng tích cực đến hệ số nhân chồi , chiều cao chồi động thái lan vanda in vitro NAA có tác động kích thích lan vanda rễ mạnh so với IAA nồng độ nghiên cứu Cây lan Vanda rễ mạnh nhấ môi trường bổ sung 0,5 1,0 mg/l NAA Hàm lượng sắc tố quang hợp lan vanda tăng lên trình Hoạt độ catalse peroxidase tăng mạnh thời điểm D14 so với thời điểm D0 Ở cuối trình ngôi, hoạt độ hai enzym thấp so với thời điểm D14 cao so với thời điểm trước Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện quy trình nghiên cứu nhân giống lan Vanda in vitro Đồng thời, mở rộng nghiên cứu tiêu sinh lí lan vanda trước sau giai đoạn ngôi, góp phần hoàn thiện kĩ thuật Footer Page 58 of 149 Header Page 59 of 149 50 NHỮNG CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Hà Thị Tâm Tiến, Trần Thị Kim Nhung, Phạm Thanh Loan, Trần Thị Thu, Cao Phi Bằng (2016) Nghiên cứu ảnh hưởng hóa chất khử trùng môi trường nuôi cấy nhân giống lan Vanda pumila phương pháp nuôi cấy tế bào, Tạp chí Khoa học & Công nghệ, Trường Đại học Hùng Vương, số (3): 35-39 Footer Page 59 of 149 Header Page 60 of 149 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt [1] Trần Hợp (1998) Phong lan Việt Nam NXB Nông nghiệp, TP Hồ Chí Minh [2] Nguyễn Như Khanh, Cao Phi Bằng (2013) Sinh lý học thực vật Hà Nội: NXB Giáo Dục [3] Nguyễn Hoàng Lộc (2011) Nuôi cấy mô tế bào thực vật-Các khái niệm ứng dụng: NXB Đại học Huế [4] Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong (2013) Phương pháp nghiên cứu Sinh lý học thực vật Hà Nội: NXB Đại học Quốc gia Hà Nội [5] Nguyễn Văn Song, Phan Hùng Vĩnh, Trương Thị Bích Phượng (2011) Nhân nhanh in vitro lan Kim điệp (Dendrobium chrysotosum) loài lan rừng có nguy tuyệt chủng Tạp chí khoa học Đại học Huế, 64, 127-136 [6] Nguyễn Thị Sơn, Nguyễn Thị Lí Anh, Vũ Ngọc Lan, Trần Thế Mai (2012) Nhân giống In vitro loài lan Dendrobium Fimbriatum Hook.(Hoàng thảo long nhãn) Tạp chí Khoa học Phát triển, Trường đại học Nông nghiệp Hà nội, 10(2), 263 – 271 [7] Nguyễn Quang Thạch, Phí Thị Cẩm Miện (2012) Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) in vitro bảo tồn nguồn dược liệu quý Tạp chí Khoa học Phát triển, 10(4), 597-603 [8] Nguyễn Thiện Tịch, Đoàn Thị Hoa, Trần Sĩ Dũng, Huỳnh Thị Ngọc Nhân (1996) Kĩ thuật nuôi trồng hoa lan Hà Nội: NXB Nông nghiệp Footer Page 60 of 149 Header Page 61 of 149 52 [9] Nguyễn Văn Uyển (1993) Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng Hà Nội: NXB Nông nghiệp Tài liệu tiếng nước [10] Alam, M F., Sinha, P., & Hakim, M L (2010) Micropropagation of Vanda teres (Roxb.) Lindle Methods Mol Biol, 589, 21-28 doi:10.1007/978-1-60327-114-1_3 [11] Aracama, C V., Kane, M E., Wilson, S B., & Philman, N L (2008) Comparative growth, morphology, and anatomy of easy-and difficult-toacclimatize sea oats (Uniola paniculata) genotypes during in vitro culture and ex vitro acclimatization Journal of the American Society for Horticultural Science, 133(6), 830-843 [12] Cassana, F., F., Falqueto, R., A., Braga, B., E J., A., M (2010) Chlorophyll a fluorescence of sweet potato plants cultivated in vitro and during ex vitro acclimatization Brazilian Journal of Plant Physiology doi:10.1590/s1677-04202010000300003 [13] Chakrabarty, D., & Datta, S K (2008) Micropropagation of gerbera: lipid peroxidation and antioxidant enzyme activities during acclimatization process Acta Physiologiae Plantarum, 30(3), 325-331 [14] David, D., Jawan, R., Marbawi, H., & Gansau, J A (2015) Organic Additives Improves the in vitro Growth of Native Orchid Vanda helvola Blume Notulae Scientia Biologicae, 7(2), 192 [15] Donnelly, D J., & Vidaver, W E (1984) Pigment content and gas exchange of red raspberry in vitro and ex vitro Journal of the American Society for Horticultural Science, 109(2), 177-181 [16] Díaz-Pérez, J C., Sutter, E G., & Shackel, K A (1995) Acclimatization and subsequent gas exchange, water relations, survival and growth of microcultured apple plantlets after transplanting them in Footer Page 61 of 149 Header Page 62 of 149 53 soil Physiologia Plantarum, 95(2), 225-232 doi:10.1111/j.13993054.1995.tb00831.x [17] Faisal, M., & Anis, M (2010) Effect of light irradiations on photosynthetic machinery and antioxidative enzymes during ex vitro acclimatization of Tylophora indica plantlets Journal of Plant Interactions, 5(1), 21-27 [18] Gantait, S., & Sinniah, U (2012) Rapid micropropagation of monopodial orchid hybrid (Aranda Wan Chark Kuan ‘Blue’ × Vanda coerulea Grifft ex Lindl.) through direct induction of protocorm-like bodies from leaf segments Plant Growth Regulation, 68(2), 129-140 doi:10.1007/s10725-012-9698-y [19] Gilly, C., Rohr, R., & Chamel, A (1997) Ultrastructure and Radiolabelling of Leaf Cuticles from Ivy (Hedera helixL.) Plantsin vitroand duringex vitroAcclimatization Annals of Botany, 80(2), 139-145 [20] Helena Mathews, V., & Rao, P S (1980) In vitro multiplication of Vanda hybrids through tissue culture technique Plant Science Letters, 17(3), 383-389 doi:http://dx.doi.org/10.1016/0304-4211(80)90171-6 [21] Hew, C S., Yam, T W., & Arditti, J (2002) Biology of Vanda Miss Joaquim: NUS Press [22] Hofman, P., Haisel, D., Komenda, J., Vágner, M., Tichá, I., Schäfer, C., & Čapková, V (2002) Impact of in vitro Cultivation Conditions on Stress Responses and on Changes in Thylakoid Membrane Proteins and Pigments of Tobacco during ex vitro Acclimation Biologia Plantarum, 45(2), 189-195 doi:10.1023/A:1015180219628 [23] Islam, M O., Akter, M., & Prodhan, A (2012) Effect of potato extract on in vitro seed germination and seedling growth of local Vanda Footer Page 62 of 149 Header Page 63 of 149 54 roxburgii orchid Journal of the Bangladesh Agricultural University, 9(2), 211-215 [24] Islam, M R., Kabir, K M R., Hossain, M S., Hossain, M F., & Khalil, M I (2014) Efficient in vitro Cultural Techniques for Seeds Germination of Vanda roxburghii World Journal of Agricultural Sciences, 10(4), 163-168 [25] Jahan, A A., & Anis, M (2014) Changes in Antioxidative Enzymatic Responses during Acclimatization of In vitro Raised Plantlets of Cardiospermum halicacabum L against Oxidative Stress J Plant Physiol Pathol 2, 4, [26] Jawan, R., Gansau, J A., & Abdullah, J O (2010) In vitro culture of Borneo’s endemic orchid, Vanda dearei Asian Pacific Journal of Molecular Biology and Biotechnology, 18(1), 201-205 [27] Jeon, M.-W., Ali, M B., Hahn, E.-J., & Paek, K.-Y (2006) Photosynthetic pigments, morphology and leaf gas exchange during ex vitro acclimatization of micropropagated CAM Doritaenopsis plantlets under relative humidity and air temperature Environmental and Experimental Botany, 55(1–2), 183-194 doi:http://dx.doi.org/10.1016/j.envexpbot.2004.10.014 [28] Kadleček, P., Tichá, I., Haisel, D., Čapková, V., & Schäfer, C (2001) Importance of in vitro pretreatment for ex vitro acclimatization and growth Plant Science, 161(4), 695-701 doi:http://dx.doi.org/10.1016/S0168-9452(01)00456-3 [29] Kaur, S., & Bhutani, K K (2010) In vitro propagation of Vanda testacea (Lindl.) Reichb f.–a rare orchid of high medicinal value Plant Tissue Culture and Biotechnology, 19(1), 1-7 Footer Page 63 of 149 Header Page 64 of 149 55 [30] Khan, P., Evers, D., & Hausman, J F (1999) Stomatal characteristics and water relations of in vitro grown Quercus robur NL 100 in relation to acclimatization Silvae genetica, 48(2), 83-86 [31] Khatun, H., Khatun, M M., Biswas, M S., Kabir, M R., & Al-Amin, M (2010) In vitro growth and development of Dendrobium hybrid orchid Bangladesh Journal of Agricultural Research, 35(3), 507-514 [32] Lang, N T., & Hang, N T (2006) Using biotechnological approaches for Vanda orchid improvement Omonrice, 14, 140-143 [33] Manners, V., Kumaria, S., & Tandon, P (2011) Propagation of Vanda coerulea via in vitro asymbiotic seed germination Seed Technology, 79-87 [34] Pospíšilová, J., Synková, H., Haisel, D., & Semoradova, S (2007) Acclimation of Plantlets to Ex vitro Conditions: Effects of Air Humidity, Irradiance, CO2 Concentration and Abscisic Acid (a Review) Acta Horticulturae, 748, 29 [35] Pospíšilová, J., Wilhelmová, N a., Synková, H., Čatský, J., Krebs, D., Tichá, I., Snopek, J (1998) Acclimation of tobacco plantlets to ex vitro conditions as affected by application of abscisic acid Journal of Experimental Botany, 49(322), 863-869 [36] Pospóšilová, J., Tichá, I., Kadleček, P., Haisel, D., & Plzáková, Š (1999) Acclimatization of Micropropagated Plants to Ex vitro Conditions Biologia Plantarum, 42(4), 481-497 doi:10.1023/A:1002688208758 [37] Prakash, B., Bais, R T., Singh, P., Khan, S., & Nagar, B M P (2013) Effect of Different pH on In vitro Seed Germination of Vanda tessellata (Roxb.) Hook Ex G an Endangered Medicinal Orchid Advances in Life Science and Technology, 8, 4-7 Footer Page 64 of 149 Header Page 65 of 149 56 [38] Rahman, M S., Hasan, M F., Das, R., Hossain, M S., & Rahman, M (2009) In vitro micropropagation of orchid (Vanda tessellata L.) from shoot tip explant Journal of Bio-science, 17, 139-144 [39] Rival, A., Beulé, T., Lavergne, D., Nato, A., Havaux, M., & Puard, M (1997) Development of photosynthetic characteristics in oil palm during in vitro micropropagation Journal of plant physiology, 150(5), 520-527 [40] Romano, A., & Martins-Loução, M A (2001, 2001) Water loss and morphological modifications in leaves during acclimatization of cork oak micropropagated plantlets [41] Sachin, B (2015) Impact of temperature and pH Variation on in-vitro Protocorm formation of Vanda tessellata (Roxb.) Hook ex G.Don an endangered medicinal Orchid Research Journal of Recent Sciences, 4(IYSC-2015), 10-13 [42] Sairam, R K., Deshmukh, P S., & Saxena, D C (1998) Role of antioxidant systems in wheat genotypes tolerance to water stress Biologia Plantarum, 41(3), 387-394 [43] Sciutti, R., & Morini, S (1995) Water loss and photosynthesis of plum plantlets is influenced by relative humidity during rooting in vitro Journal of Horticultural Science, 70(2), 221-228 [44] Sebastinraj, J., Britto, S J., Kumar, D V., Robinson, J P., & Thangavel, P (2014) Rapid Propagation of Vanda testacea (Lindl.) Rchb F.–A Highly Medicinal Value Epiphytic Orchid of India World Journal of Agricultural Sciences, 10(5), 223-230 [45] Siddique, I., & Anis, M (2008) An improved plant regeneration system and ex vitro acclimatization of Ocimum basilicum L Acta Physiologiae Plantarum, 30(4), 493-499 Footer Page 65 of 149 Header Page 66 of 149 57 [46] Sinha, P., & Roy, S K (2004) Regeneration of an indigenous orchid, Vanda teres (Roxb.) Lindl through in vitro culture Plant Tissue Cult, 14(1), 56-61 [47] Sutter, E G., Shackel, K., & Diaz, J C (1991) Acclimatization of tissue cultured plants doi:10.17660/ActaHortic.1992.314.13 [48] Van Huylenbroeck, J M., & De Riek, J (1995) Sugar and starch metabolism during ex vitro rooting and acclimatization of micropropagated Spathiphyllum ‘Petite’ plantlets Plant Science, 111(1), 19-25 [49] Wetzstein, H Y., & Sommer, H E (1982) Leaf anatomy of tissuecultured Liquidambar styraciflua (Hamamelidaceae) acclimatization American Journal of Botany, 1579-1586 Footer Page 66 of 149 during Header Page 67 of 149 viii PHỤ LỤC Phụ lục Thành phần môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) STT Thành phần Hàm lượng (mg/l) - Thành phần đa lượng MS NH4NO3 1650 KNO3 1900 MgSO4,7H2O 370,6 CaCl2,2H2O 439,8 KH2PO4 170 - Thành phần sắt MS Na2EDTA 37,26 FeSO4,7H2O 27,8 - Thành phần vi lượng MS MnSO4,2H2O 22,3 H3PO3 6,2 ZnSO4,7H2O 8,6 KI 0,83 Na2MoO4,2H2O 0,25 CuSO4,2H2O 0,025 CoCl2,2H2O 0,025 - Thành phần Vitamin MS Footer Page 67 of 149 Nicotinic acid 0,5 Pyridoxin – HCl 0,5 Thiamine – HCl 0,1 Glycine 2,0 Myo- inositol 100 Header Page 68 of 149 ix Phụ lục hình Hình P1 Chuẩn bị môi trường Hình P2 Thao tác cấy mẫu lan Vanda box cấy Footer Page 68 of 149 Header Page 69 of 149 x Hình P.3 Theo dõi phát triển chồi mẫu lan Vanda phòng nuôi Hình P.4 Theo dõi phát triển rễ Hình P.5 Theo dõi phát triển rễ mẫu lan Vanda phòng nuôi lan Vanda ex vitro Footer Page 69 of 149 Header Page 70 of 149 xi Hình P.6 Cây lan Vanda ex vitro tuần tuổi Hình P.7 Nghiền mẫu phân tích tiêu sinh lí Footer Page 70 of 149 Header Page 71 of 149 Hình P.8 Cân khối lượng mẫu Footer Page 71 of 149 xii Hình P.9 Xác định OD ... Ảnh hưởng phytohormone tới phát sinh chồi, rễ phong lan Vanda (Vanda sp) in vitro số đặc điểm sinh lí trước sau giai đoan ngôi Mục đích nghiên cứu - Đánh giá ảnh hưởng auxin cytokinin tới phát. .. phát sinh chồi rễ phong lan Vanda (Vanda sp) in vitro - Nghiên cứu số đặc điểm sinh lí lan Vanda in vitro trước sau giai đoan Nhiệm vụ nghiên cứu - Nghiên cứu ảnh hưởng số phytohormone (auxin,... CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn Ảnh hưởng phytohormone tới phát sinh chồi, rễ phong lan Vanda (Vanda sp) in vitro số đặc điểm sinh lí trước sau giai đoan ngôi trung