Slide thuyết trình trichoderma reesei tìm hiểu gen qui định enzyme cellulase và một số phương pháp nâng cao khả năng phân huy cellulose

Đề tài : Trichoderma reesei- tìm hiểu gen qui định enzyme cellulase số phương pháp nâng cao khả phân huy cellulose GVHD: ThS Hoàng Mỹ Dung SVTH: Nguyễn Thị Hương Nội dung Tổng quan Phương pháp tác động để nâng cao khả phân hủy cellulose I Giới thiệu nấm mốc Trichoderma reesei - TK 19, Elwyn T Reese Baarn, Delft, 1998 Giới: Fungi Ngành: Ascomycota Lớp: Ascomycetes • Nấm sợi, Bộ: Hypocreales • Sinh sản bào tử Họ: Hypocreaceae Giống: Trichoderma Loài: Trichoderma reesei Ứng dụng Trichoderma Trong lĩnh vực bảo vệ thực vật cải thiện suất trồng • • • Kháng sinh Cạnh tranh Ký sinh Xử lý phế phẩm nông nghiệp Sản xuất xăng sinh học Lĩnh vực khác II Khả phân hủy cellulose Trichoderma reesei Cellulose :CTCT (C6H10O5)n hay [C6H7O2(OH)3]n liên kết β-D-Glucose, thành phần vách tế bào thực vật Cellulase : • Trung tâm xúc tác • Vùng không xúc tác • Trung tâm tạo liên kết với cellulose Phân loại: • Endoglucanase: cellulose kết tinh + vô định hình  chuỗi đơn cellulose • Exoglucanase: chuỗi đơn cellulose + kết tinh  Tetrasaccharides, disaccharides • Cellobiase: Tetrasaccharides + disaccharides  Monosaccharide Cơ chế xúc tác cellulase Hệ gene qui định cellulase T.reesei Phần 2: Phương pháp tác động để nâng cao khả phân hủy cellulose Phương pháp cổ điển  môi trường  pH ,cơ chất  oxy hòa tan  sục khí / không sục khí Phương pháp đại:  Nâng cao khả sản xuất CBH  Nâng cao khả sản xuất EG Phương pháp cổ điển Ảnh hưởng thành phần môi trường: môi trường khác Môi trường A Môi trường B Môi trường C Môi trường D - 10 g/l cellulose, - 10 g/l glucose, -7.5 g/l cellulose, - 10 g/l glucose, 10 g/l nấm men, 5.1 g/l bã ngô( 0.3 g/l nấm men, 6.7 g/l đạm nấm 10 g/l glucose acid hóa 0.8 g/l peptone, men làm ẩm) g/l urea Ảnh hưởng pH chất môi trường nuôi cấy Ảnh hưởng áp suất Ảnh hưởng sục khí không sục khí Quá trình sục khí ( ) không sục khí ( ) Nâng cao khả sản xuất cellobiohydrolases ( CBH ) Tăng số gen cbh1 plasmid pALK496  T reesei ALKO2221 tăng số lượng gen cbh1 Kiểm tra tồn đoạn ADN cần chèn vào chủng biến đổi Southern Blot Kết Southern Blot chủng biến đổi Giếng 2: marker Giếng 3: ALKO2221, giếng 4: ALKO3760, giếng 5: ALKO3761, giếng 6: ALKO3862 Khả tổng hợp cellulase chủng Nâng cao khả sản xuất cellobiohydrolases ( CBH )  Sử dụng promoter mạnh cbh1 plasmid pALK546  T reesei ALKO2221 Kết quả: Kết Southern Blot chủng biến đổi Giếng 6: khối lượng phân tử marker Giếng 2: ALKO2221, giếng 3:ALKO3798, giếng 4: ALKO3799, giếng 5: ALKO3873 Sản lượng cellulase chủng biến đổi so với chủng chủ ALK02221 Kết quả: Southern blotting chủng ALKO3530 ALKO3574 Kết sản lượng cellulase chủng chủ VTT-79125 chủng đột biến Nâng cao khả sản xuất endoglucanases ( EG ) cách nhân biểu gen khác loài Chủng Melanocarpus albomyces có gen hiệu sản xuất cellulase :Cel7A, Cel45A, Cel7B Các plasmid sử dụng cho biến đổi T.reesei ALK3620 biểu gen cel45A, cel7A, cel7B M.albomyces Kết quả: Kiến nghị: - Tạo chủng đột biến - Khảo sát điều kiện tối ưu ... disaccharides  Monosaccharide Cơ chế xúc tác cellulase Hệ gene qui định cellulase T .reesei Phần 2: Phương pháp tác động để nâng cao khả phân hủy cellulose Phương pháp cổ điển  môi trường  pH ,cơ chất... trường  pH ,cơ chất  oxy hòa tan  sục khí / không sục khí Phương pháp đại:  Nâng cao khả sản xuất CBH  Nâng cao khả sản xuất EG Phương pháp cổ điển Ảnh hưởng thành phần môi trường: môi trường...Nội dung Tổng quan Phương pháp tác động để nâng cao khả phân hủy cellulose I Giới thiệu nấm mốc Trichoderma reesei - TK 19, Elwyn T Reese Baarn, Delft, 1998 Giới: