nghiên cứu một số thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây lược vàng (callisia fragrans woods, commelinaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI --- PHẠM TOÀN THẮNG “NGHIÊN CỨU MỘT SỐ THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÂY LƯỢC VÀNG Callisia fragrans Woods, Commelin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI

-

PHẠM TOÀN THẮNG

“NGHIÊN CỨU MỘT SỐ THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH

SINH HỌC CÂY LƯỢC VÀNG

(Callisia fragrans Woods, Commelinaceae)”

LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Chuyên ngành: Kỹ Thuật Hóa học

NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC :

PGS.TS TRẦN THU HƯƠNG

Hà Nội – Năm 2014

LỜI CẢM ƠN

Luận văn này được hoàn thành tại bộ môn Hóa học Hữu cơ, Viện Kỹ thuật Hóa học, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời chân thành cảm ơn

PGS.TS Trần Thu Hương, người đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ em hoàn thành

luận văn

Em xin được cảm ơn đến các thầy, các cô trong bộ môn Hóa học Hữu cơ, Viện

Kỹ thuật Hóa học, đã tạo điều kiện giúp đỡ em trong suốt thời gian học tập và thực hiện luận văn tại bộ môn

Em xin gửi lời cảm ơn đến các cô chú, các anh chị trong Viện Hóa Sinh Biển, Viện Hàn Lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, đã tạo điều kiện giúp đỡ em trong quá trình học tập và thực hiện luận văn này

Hà Nội, tháng 3 năm 2014

Học viên

Phạm Toàn Thắng

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan luận văn này được hoàn thành là kết quả nghiên cứu của riêng tôi dưới sự hướng dẫn của PGS.TS Trần Thu Hương, Viện Kỹ thuật hóa học, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội Các số liệu, kết quả trong luận văn là hoàn toàn trung thực chưa từng được công bố trong bất kỳ công trình nào

Người cam đoan

PHẠM TOÀN THẮNG

MỤC LỤC

LỜI MỞ ĐẦU 1

Chương I: TỔNG QUAN 2

1.1 Đặc điểm thực vật họ Thài lài 2

1.2 Đặc điểm của chi Callissia, họ thài lài 2

1.3 Thực vật học và công dụng của cây Lược vàng 3

1.4 Điều kiện sinh thái và cách trồng 6

1.5 Một số bài thuốc từ cây Lược vàng 6

1.5.1 Các bài thuốc từ lá cây lược vàng 7

1.5.2 Các bài thuốc từ lá thân lược vàng 7

1.5.3 Một số chế phẩm từ cây Lược vàng 10

1.6 Một số nghiên cứu về thành phần hóa học cây lược vàng 11

1.7 Hoạt tính sinh học cây lược vàng 13

1.8 Giới thiệu một số nhóm chất thiên nhiên 19

Chương II: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29

2.1 Đối tượng nghiên cứu 29

2.2 Phương pháp nghiên cứu 29

2.2.1 Giới thiệu chung về phương pháp chiết 29

2.2.2 Các phương pháp phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất 29

2.2.3 Quá trình chiết thực vật 29

2.3 Phương pháp sắc ký 31

2.3.1 Đặc điểm chung của phương pháp sắc ký 31

2.3.2 Cơ sở của phương pháp sắc ký 31

2.3.3 Phân loại các phương pháp sắc ký 31

2.3.4 Các phương pháp hóa lý để xác định cấu trúc 34

Chương III: THỰC NGHIỆM 37

3.1 Nghiên cứu thành phần hóa học cây Lược vàng 37

3.1.1 Thu hái và xử lý mẫu 37

3.1.2 Tạo cặn chiết tổng và cặn chiết phân đoạn từ cây Lược vàng 37

3.1.3 Phân lập các hợp chất từ cặn chiết nước 37

3.1.4 Hằng số vật lý và dữ liệu phổ của các chất 40

3.2 Nghiên cứu hoạt tính sinh học 41

Chương IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43

4.1 Kết quả nghiên cứu thành phần hóa học cây Lược vàng 43

4.2 Xác định cấu trúc hóa học của hợp chất phân lập được 44

4.2.1 Hợp chất CF1 44

4.2.2 Hợp chất CF2 48

4.3.3 Kết quả nghiên cứu hoạt tính sinh học cây Lược vàng 54

Kết luận 61

Kiến nghị và đề xuất 62

Tài liệu tham khảo 63

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT

13C-NMR Phổ cộng hưởng từ cacbon 13 (Carbon-13 Nuclear Magnetic

Resonance Spectroscopy) DEPT Phổ DEPT ( Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer) ESI-MS Phổ khối lượng phun mù điện tử (Electron Spray Ionization Mass

Spectra)

1H-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (Proton Nuclear Magnetic

Resonance Spectroscopy) HPLC-MS Phổ sắc ký lỏng khối phổ

MS Phổ khối lượng (Mass Spectroscopy)

δ (ppm) Độ chuyển dịch hóa học (ppm)

DANH MỤC CÁC HÌNH, BẢNG, SƠ ĐỒ

Hình 18 Phổ khối lượng phu mù điện tử ESI - MS của CF2 49

Hình 29 Sự phát triển của khối u sơ cấp tại các vị trí tiêm tế bào 58

Bảng 2 Tác dụng giảm MDA của nước ép búp non Lược vàng tren

Bảng 5 Khối lượng và hiệu suốt thu hồi các phần chiết tách từ lá và

Bảng 6 Số chuột bị chết (con)trong thời gian thí nghiệm

trên tổng số 6 chuột bị gây u

57

Bảng 7 Thể tích khối u sơ cấp (mm3) tại các thời điểm (ngày) 57 Bảng 8 Ảnh hưởng của cao chiết nước từ Lược vàng Thanh Hoá

lên mô bệnh học chuột thí nghiệm

58

Bảng 9 Ảnh hưởng của cao chiết Lược vàng đến các chỉ tiêu huyết

I ẦU

V N d

y, y

, d

R y , V

N

y d ,

y y

H H H Q y y

, d y

y ,

d ,

L , L , Callisia fragrans (Lindl) Woods, T ) L y ặ ở N ơ

, x x T N Mỹ L d ữ d ỳ

d y y

ặ lavonoit N , L

q ơ ờ , ,

,

Mặ d y L d ở N V N

ữ y , , ễ , ổ , … t y , d d

y y Vì y, ơ ở d y L q ả

ữ d , x :

“Nghiên cứu một số thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây ƣợc vàng (Callisia fragrans wood, commelinaceae)” M :

- P x y L

- K ả y L

Chi Callisia ữ ặ : y ả , ễ,

y ẳ ặ ặ L x ặ x

ì x H ở ặ ở , ặ , ờ ơ Tổ ,

H x ặ , ờ T ặ , ờ ,

ì ũ - ặ , , ằ , ặ

ơ ẵ , , d , , ì , ặ ì ữ ẹ , ì , ặ , Q ả , ặ ,

ặ ặ , ì , d ì ,

ả , ì [1]

Hình 1: Thài lài tía Hình 2: Rau trai lá dài(Tradescantia

pendula (Schnizl.) D.R Hurnt) (Commelina longgifolia Lam)

Hình 3: Callisia Warszewicziana Hình 4: Callisia elegans

1.3 Thực vật học và công dụng của cây ƣợc vàng (Callisia fragrans)

x , ì , d - , - , é ơ ,

x , ì ở L

y ổ ì d ở ờ T , ờ ,

ì , é ơ ờ , ũ

ặ ơ H ặ x d - , ặ

x ở d - , ; - , x , ì , d 5- ; , ẵ , , ũ ổ , ì ẹ , d ; mm y , ặ ở ơ

y ả , ở T H , ờ y y L

ả N ở , L ằ ữ : “L ”, “ ”, “ y ”, “G ả ”,… ì ở

1.5 ột số bài thuốc từ cây ƣợc vàng

Ở V N , y

y L , ờ d d d N

ả d y T d y , L ữ : , , , R L

ữ , , d d y, , ờ , ,…

1.5.2 Các bài thuốc từ thân cây ƣợc vàng:

a Ngâm rƣợu cây ƣợc vàng:

+ S y x ì

- ữ , d ữ , d , ữ

c Cách xoa bóp:

V ơ , ổ ì d L

x

- , ả , ơ, , ơ , , …

S q , d ỷ , ở ơ

L d y d d ặ x ữ , ặ x ả

* +

y ơ y ặ ả ũ +

Ă y ơ ,

nh * ơ y ặ ả ũ +

d , ờ , y ơ ,

xơ ổ , , d , d ,

, d q ả y, d , ảy , ,

, ả

y y T ờ d

* N ơ ổ y ữ : - d y

- y ổ ữ ẹ ở

- –

* N : ơ + + + , ữ ũ , d , , , , ì , ả

, y , x , d , , é d w , d ả d ,

y ở ờ , y d y , ,

, , y , , ,

, , xơ ổ , ơ

L : y , , d

ì N ả d d

p * y + ơ

d ữ , ẹ , d , ơ y , y , d ơ , , xơ ổ , d ,

giang mai d :

U ả y

y L : , , , , y

d ơ : d y, ổ , x , , ổ q ,

, , ơ ơ , y , ữ

* L + – ơ ữ yễ y

ặ ả ũ ổ – y

d , A, , , ễ ỡ, ở d , é d , y d y ,

y ở ờ ổ ở , d y ,

y ở ờ ờ d d q , y ơ R , ả d g * L + ổ ơ yễ y

ặ ả ũ ổ – y

y ơ , d d , ở ờ d y, ỡ ở ờ é ì, ẹ ở ,

ở ờ , ì y ở , ễ ỡ, ,

ễ ỡ, , y , x R ễ ỡ,

ễ ỡ ả d ,

d

L : ả ả ,

* L + ơ yễ y

ả ũ ổ – 15

y y ơ , , y d y

, d ả , d

ả d - ẳ ,

ì , d , d y , ổ d

ờ , ả ả d y [8]

1.5.3 ột số chế phẩm từ cây ƣợc vàng: Ở N , d ỹ y

ờ '' '', ''

'' d ữ , ''F

creme'', sả '' w '' ữ ,

x , ổ ơ , '' ''

1.6 ột số nghiên cứu về thành phần hóa học của cây ƣợc vàng (Callisia

fragrans)

y y ,

N H

ả ờ ở y y L

q

V S - V H

N y L N

x x , x , x ,

x , ặ q N ữ y

d x , , , ữ ờ ,

ễ d N y ũ ằ y d é y % d é ,

, %, yd , % ơ N

carbohydrate x x samin K y ờ ơ galacturonic axit, galactose, arabinose, glucose, xylose, rhamnose, glucosamin

[34]

M V H , V Uz y d é x é

yd , yd ơ , d,

, y y d , x é d , , x

chlorophylls, glycolipid: sulfolipids, dilalactosyldiglycerides, sterolglycosid, d mono y d y d; phospholipid: phosphatidylinosit, phosphatidylcholines, phosphatidyl ethanolamin, phosphatidylglycerin, phosphatidic axit C Mỹ x ả glycolipit, phospholipit xit é ờ ũ x

xit , axit ữ ơ , d lorophyl

t ơ q L [13]

M ì ở Mỹ d q ả

y L , flavonit, steroit,

vitamin C, B2 (riboflavin), B3 (axit nicotinic), B5 (axit panto-

, , … T , t d

ơ ả N y L q

k y ở ,

d d

d , y L , ờ ũ

ẳ y L ả ữ q

k

Mặ d , ũ y

ơ ờ y L Quercetin

15H10O7, , , ảy o C Kaempferol 15H10O6 q xy ,

, , ảy -278o C [13, 30, 34] T H U Mỹ T A S y , q ả ổ y ễ , , q ả , d d

ữ y, , ờ , ả

ữ ở y

q y ặ , ữ y ơ ờ [13] Trong enzy e zy y , y q

ữ d d q , -dioxygenase, quercetin 3-O-methyltransferase, quercetin-3-sulfate 3'-sulfotransferase, quercetin-3-sulfate 4'-sulfotransferase, quercetin-3,3'-bissulfate 7-su T y , y ờ ,

ổ ở … ữ y y ằ , ữ ằ y L x q y ẳ , U LA U y , L A

y ằ , t ả ặ ổ T ờ ằ y L ũ t [33]

1.7 Hoạt tính sinh học của cây lƣợc vàng: d d L

Y I y , ả

XX, d GS S , ổ , y: T y L d d N , y , , ,… ữ y

d q ơ .[19]

H d : q

Q P_ x , d

d , ảy , , , ũ , ễ K

d , , , - ơ

y d ữ ễ , d , d

y ơ d ,

d d , ơ ữ

d d , ũ y , y [22]

ũ H U Mỹ T A S y ,

d ờ , , d ờ , d

th gi quan t m T d ch oxi h c c y v nghi n c

kh chi ti , theo TS Misin x th ph ch oxi h chi 73,2 v 119,3 mg/l trong d chi l v th n t ơi t ơng [25] TS Olennikov (2008b)

cũ gi khả n ng qué g t do DPPH c c d chi ph n o L

v K quả cho th y ch c d chi hexane kh ng c t d , c ph d

etylaxetat, butanol v cặ c t d r t (Bả 1)

Bảng 1 khả năng quét gốc tự do của dịch chiết ƣợc vàng

C ng b c nh nghi n c c c nh khoa h thu Vi Sinh h

Th nghi Nga cũ ch t t d h n malondialdehyde (MDA - sả

ph c qu trì peroxy - h lipid) c é b L v tr

v th c nghi (Bả 2)

Bảng 2 Tác dụng giảm D của nước ép búp non ược vàng trên chuột

Chuột đối chứng Nhóm kiểm soát Nhóm thử nghiệm

MDA trong huy

Ngo c nghi n c v t d d l , ch l nghi n c c m

nh nghi n c t ờ H Griffith, Ú ng tr n t ch Veterinary Dermatology v khả n ng g y vi m da ti x tr n ch th nghi c d chi

c y v Nghi n c n y ch minh d chi c y L v

c khả n ng g y vi m da ti x tr n ch th nghi [35]

V d y L ở N ,

ả V d – O ờ T

N , y L ỹ ì

y L d ữ ờ d d y, , , ả

q ả , ổ , d … L

ũ q ả , , ẹ ơ , , ơ y x ơ N ữ d , , é

L ũ d ả .[2],[27]

ơ d [ ], [19] N ữ , d ả , [22], [ ], zy x y

ơ Az ở , µ , µ [29], [7]

* Tác dụng chống viêm cấp:

Sterol , eukaryote V ổ T y y,

ờ N , ổ

q V d : ữ , x d x

ữ y d ũ ơ ỡ , zy ờ

S - ờ ặ ặ saponin steroit- ặ ả y ở

d d d d ặ , ở d z [33]

a Cấu tạo hóa học

x ydro phenandren: N ờ ặ ở d d ặ ờ ở

d z

H β-Cholestan- β-ol

 N : ergosterol, zymosterol, acosterol, feco-sterol

Progesteron α-OH-Progesteron Androstenedion

Testosteron Deoxycorticostero

O

HEA y HEA

K , Ở rau thai, estro d , d , ờ ì

ì ờ H y , ổ d y ẹ T

 Progesteron

O

OH O

ion Na+, Cl- ở x ; ở ; ả ơ , d ả ảy [18]



O

OH O

HO

Corticosteron

O

OH O

ả ơ ; ở , axit

 Aldosteron

O

O HO

* Một số Sterol quan trọng:

- y , (cholesterol), y , β-sitosterol, ergosterol, stigmasterol)

* Cholesterol

A B

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

11 12 13

14 15

16 17 18

19

HO

27 20

x d , d y

S d ì

ì y

N y y ờ d β- ũ xơ , , ặ ở

-S y ổ

d V z , diosgeny d ổ o d

* Thử định tính sterol:

- Phản ứng Liebermann-Burchardt:

T ả L - d trong cloroform d d d yd x rm ở 0 C,

T : Cho 0,01 d d N OH %

y H ặ ml CHCl3, y d H 3 L y

1 d d L - d yd axetic +1 ml CHCl3, , H2SO4 ặ S ờ

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 ối tượng nghiên cứu

2.2.2 Cơ sở của quá trình chiết pha lỏng

S d

Q ì d N : KA= CA/ CB

KA ằ

CA, CB A,

ẽ q ả q ì