khảo sát sơ bộ thành phần hóa học cây lược vàng callisia fragrans – họ thài lài – commelinaceae

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG KHẢO SÁT SƠ BỘ THÀNH PHẦN HĨA HỌC CÂY LƯỢC VÀNG CALLISIA FRAGRANS – HỌ THÀI LÀI – COMMELINACEAE S K C 0 9 MÃ SỐ: T2010 - 72 S KC 0 Tp Hồ Chí Minh, 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT TP.HCM 0O0 - BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG KHẢO SÁT SƠ BỘ THÀNH PHẦN HĨA HỌC CÂY LƯỢC VÀNG CALLISIA FRAGRANS – HỌ THÀI LÀI – COMMELINACEAE MÃ SỐ : T2010-72 CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI : NGUYỄN THỊ BẠCH LÊ Thành Phố Hồ Chí Minh – Năm 2011 MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU PHẦN : TỔNG QUAN 1.1.Giới thiệu lƣợc vàng 1.2.Những nghiên cứu lƣợc vàng 1.3 Tổng quan phƣơng pháp sắc ký 1.3.1.Sắc ký cột (column chromatography) 1.3.2.Sắc ký mỏng PHẦN : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 Hóa chất dụng cụ 2.2 Thu hái xử lý ngun liệu 2.3 Khảo sát sơ thành phần hóa học lƣợc vàng 2.4 Thử nghiệm hoạt tính sinh học 14 PHẦN : KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 16 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC TĨM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG Tên đề tài : KHẢO SÁT SƠ BỘ THÀNH PHẦN HĨA HỌC CÂY LƢỢC VÀNG CALLISIA FRAGRANS, HỌ THÀI LÀI – COMMELINACEAE Mã số đề tài : T2010 – 72 Chủ nhiệm đề tài : Nguyễn Thị Bạch Lê Tel : 0903753720 Email : ntble@hcmute.edu.vn Cơ quan chủ trì đề tài : Trƣờng Đại học Sƣ Phạm Kỹ thuật TP.HCM Thời gian thực : 6/2010 – 4/2011 Mục tiêu Khảo sát sơ thành phần hóa học lƣợc vàng Callisa Fragrans, Họ Thài Lài (Commelinaceae) Cụ thể : - Điều chế loại cao từ lƣợc vàng : cao ether dầu hỏa, cao acetat etyl, cao etanol - Khảo sát sơ thành phần hóa học loại cao thuốc thử biệt tính - Thử nghiệm hoạt tính sinh học cao Acetat etyl cao ether dầu hỏa Nội dung - Điều chế cao phƣơng pháp ngâm dầm với dung mơi có độ phân cực tăng dần : ether dầu hỏa, acetat etyl, etanol Thu hồi dung mơi máy quay chân khơng - Thử nghiệm cao với thuốc thử cho hợp chất steroid, flavonoid, Limonoid, Alkaloid… - Thử nghiệm cao Acetat etyl cao ether dầu hỏa chủng vi khuẩn nhƣ : Staphylococcus aureus, Salmonella enteritidis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacilus subtilis Kết đạt - Thu đƣợc loại cao: cao ether dầu hỏa, cao acetat etyl, cao etanol - Kết khảo sát sơ thành phần hóa học : Cao ether dầu hỏa chứa chất béo gồm dầu béo sáp Cao acetat etyl chứa sterol nhiều flavonoid Cao etanol chứa đƣờng khử, lƣợng nhỏ tanin, flavonoid amin - Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học cao acetat etyl : cao AcEt trích từ lược vàng có tác dụng diệt khuẩn vi khuẩn Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa Bacilus subtilis - Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học cao ether dầu hỏa : cao ehter dầu hỏa trích từ lược vàng có tác dụng diệt khuẩn yếu vi khuẩn Staphylococcus aureus Địa ứng dụng Kết nghiên cứu đƣợc chuyển tải báo chun ngành, nhằm cung cấp thơng tin thành phần hóa học lƣợc vàng Callisa fragans giúp nhà nghiên cứu lĩnh vực có định hƣớng nghiên cứu lƣợc vàng Và kết làm định hƣớng nghiên cứu cho đề tài trích ly lập chất có mặt khảo sát đƣợc INFORMATION ON RESEARCH RESULT General information Project title : CHEMICAL STUDY ON CALLISA FRAGANS – COMMELINACEAE Code number : T2010-72 Coordinator : NGUYỄN THỊ BẠCH LÊ Implementing institution : University of Technical Education, HCM city Duration : from Jun 2010 to Apr 2011 Objecttive(s) - Chemical study on Callisa fragans through out three liquids : petroleum ether, ethyl acetat, ethanol - Bioactive test on ethyl acetat extract Research result: - Extraction residue : petroleum ether, ethyl acetat, ethanol - Chemical study on these extract: Petroleum ether residue containing a large of lipid Ethyl acetat residue containing many flavonoids Ethanol residue containing saccharides, and flavonoids - Ethyl acetat ectract shows antimicrobial activitives on some bacteria lives : Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacilus subtilis Effects, transfer alternatives of research result and applicability The result of this research will be published on an article to send the knowledge of the Callisa fragans for the researchers who are working on the same field BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG MỞ ĐẦU Việt Nam nước có 12.000 loại cỏ, có nhiều dược liệu q Thêm vào đó, y học cổ truyền (YHCT) nước ta xếp vào tốp mạnh giới Tuy nhiên, so với nước có YHCT hàng đầu giới YHCT nước ta khoảng cách lớn Nếu khơng đầu tư phát triển cách tương xứng khoảng cách nới rộng, chí có nguy tụt hậu quan trọng khơng phát huy mạnh YHCT để chăm sóc bảo vệ sức khỏe người dân Do tơi chọn hướng nghiên cứu hóa dược để tìm hoạt chất có hoạt tính sinh học từ thuốc sử dụng dân gian nhằm cung cấp chứng khoa học việc sử dụng thuốc YHCT, đồng thời tìm mối liên hệ YHCT y học đại Cây lược vàng có tên khoa học Callisia Fragrans – họ Thài lài Commelinaceae Việc sử dụng Lược vàng làm thuốc cơng bố Nga theo viết tác giả Vladimir-Ogarkov đăng tạp chí sức khỏe đời sống Nga Cây Lược vàng dùng để chữa bệnh đường dày ruột, túi mật, lách bệnh hen phế quản, dị ứng ung thư Các chế phẩm thuốc từ Lược vàng có hiệu làm ngừng đau, trừ ngứa, làm liền sẹo, bỏng, chấn thương gãy xương Tính cấp thiết đề tài nghiên cứu Từ năm kỷ 20, số nhà khoa học Mỹ Canada phát hiện: lồi thuộc họ Commelinaceae (trong có lược vàng), chứa nhiều loại hoạt chất sinh học, có khả kiềm chế phát triển khối u Ở Nga, nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý lược vàng tiến hành Đại học Y khoa thành phố Irkyt, từ năm 80, kỷ trước, đạo GS Semenov, nhà khoa học tiếng Kết nghiên cứu nhiều năm Irkyt cho thấy: Trong lược vàng có số hoạt chất sinh học BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG thuộc nhóm flavonoid steroid thực vật Ngồi ra, có sắt, đồng, crơm ngun tố có tác dụng quan trọng hoạt động sống thể Hai chất thuộc nhóm flavonoid phát là: kercitin kempferol Lvercitin có hoạt tính giống vitamin P chất chống oxy hóa, có tác dụng lợi tiểu chống co giật Có thể sử dụng điều trị dị ứng, chảy máu nội tạng, viêm thận, viêm khớp, số bệnh tim mạch, mắt nhiễm trùng, Kempferol có tác dụng làm tăng độ bền mạch máu, an thần, chống viêm, lợi tiểu mạnh – giúp thể tiết chất độc hại ngồi Có thể sử dụng để chữa trị bệnh nhiễm khuẩn, bệnh dị ứng, rối loạn chức tiết nước tiểu Các steroid có thực vật gọi phytosterol Chúng có hoạt tính tương tự nội tiết tố sinh dục, có tác dụng diệt khuẩn, chống xơ vữa động mạch kiềm chế phát triển khối u Có thể ứng dụng điều trị số dạng ung thư, bệnh tuyến tiền liệt, bệnh nội tiết rối loạn chuyển hóa Ở Việt Nam, đặc biệt Thanh Hóa, nhiều người câu lạc Hàm Rồng sử dụng Lược vàng để chữa nhiều bệnh theo kinh nghiệm dân gian Nga như: viêm họng, viêm phế quản, tê liệt chân tay, đau lưng, khớp, bướu cổ di chứng não, tim mạch, huyết áp xơ vữa động mạch, u nang buồng trứng Tuy nhiên, việc chữa trị theo kinh nghiêm dân gian, chưa có nghiên cứu cụ thể để xác định thành phần hóa học chủ yếu dược tính lược vàng trồng Việt Nam Do đó, chúng tơi định chọn đề tài để khảo sát tồn diện lược vàng nhằm cung cấp chứng khoa học cho việc sử dụng cách hiệu , phục vụ tốt cho cộng đồng Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu lược vàng, thu hái xã Phước Thạnh, huyện Đất Đỏ, tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu - Phạm vi nghiên cứu : khảo sát thành phần hóa học tồn cây, thử nghiệm hoạt tính sinh học loại cao hợp chất ly trích BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG PHẦN TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu lược vàng[1] Cây lượt vàng (hay gọi ria vàng) có tên khoa học Callisa fragrans, họ Thài Lài (Commmelinaceae) Mơ tả : Cây thảo, sống lâu năm Thân đứng cao từ 15 – 40 cm, có thân bò ngang mặt dất Thân chia đốt có nhánh Đốt phía thân dài từ 1-2cm, nhánh dài tới 10cm Lá đơn , mọc so le, phiến thn hình giáo, dài 15-20cm, rộng 4-6cm, bề mặt nhẵn, mặt xanh đậm mặt dưới, mọng nước Bẹ ơm khít lấy thân Mép ngun , thường có màu vàng già Lá thường có màu tím có nhiều ánh sáng Gân song song Hoa hợp thành xim, xếp trục dài cong thành chùm Cụm hoa khơng cuống, gồm 6-12 bơng hoa Hoa màu trắng, có cuống, cuống hoa dài 1mm Lá bắc ngồi cụm hoa hình vỏ trấu, kích cỡ 1cm x 1cm, màu vàng Lá bắc hoa hình lòng thuyển, kích thước 1,5mm x 3mm, phần trắng, phần xanh, mép BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG ngun, có lơng mịn phía Tràng 3, hình trứng, kích thước 1mm x 2,5mm, màu trắng , mép ngun Nhị 6, rời, nhị dài khoảng 1,5mm, phần dính với cánh hoa, bao phấn hình hạt đậu, đính vào hai bên trung đới Bầu trên, ơ, cao khoảng 0,5mm, vòi nhụy hình trụ, dài khoảng 1,5mm, núm nhụy hình chổi Thành phẩn hóa học : lipid gồm triacylglycerid, sulfolipid, digalactosylglycerid Các acid béo : paraffinic, olefinic Các sắc tố: caroten, chlorofyl, phytosterol Các flavonoid : quercetin, kaempferol isoorientin (3’,4’,5’,7’-tetrahydroxyflavone-6-C-β-D-glucopyranosid) Các vitamin PP, B2 ngun tố vi lượng : Fe, Cr, Ni, Cu 1.2 Những nghiên cứu lược vàng[2,6,7] Các nhà khoa học Trường Đại Học Bách Khoa Hà Nội Viện Hóa học Hợp chất Thiên nhiên Viện Khoa học Cơng Nghệ Việt Nam phân lập thành cơng hợp chất flavon C-glucosid, isoorientin[2], ginsenoside L-tryptophan hợp chất có nhiều hoạt tính sinh học đáng ý lĩnh vực làm thuốc, thực phẩm chức Hợp chất isoorientin (3’,4’,5’,7’tetrahydoxyflavone-6-C-β-D-glucopyranosid) flavon có mặt số lồi thực vật bậc cao Nhiều nghiên cứu[6] cho thấy hợp chất thể nhiều hoạt tính sinh học có giá trị thử nghiệm in vitro in vivo, bao gồm hoạt tính chống oxi hóa, kháng viêm, kháng sinh, bảo vệ gan, hạ đường huyết Một nghiên cứu BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG với liều 15m/kg thể trọng làm giảm đáng kể lượng đường glucose máu vòng 5-15 ngày Tuy nhiên, nghiên cứu khác, isoorientin lại khơng tác dụng đến α-glucosidase, enzym đóng vai trò quan trọng q trình chuyển hóa glucose Hợp chất isoorientin thể hoạt tính kháng sinh yếu chủng vi khuẩn nấm với giá trị MIC khoảng 100-200 µg/mL Trong số nghiên cứu, dịch chiết mẫu thực vật chứa isoorientin ức chế mạnh phát triển chủng vi sinh vật kiểm định, phân lập ra, hoạt tính isoorientin lại có giá trị thấp dịch chiết ban đầu Ngồi hoạt tính sinh học kể trên, isoorientin thể nhiều tác dụng khác bảo vệ gan, thận, chống tụ máu, ức chế enzym acetylcholinesterase butyrylchlolinesterase vốn có liên quan đến bệnh thần kinh 1.3 Tổng quan phương pháp sắc ký 1.3.1 Sắc ký cột (column chromatography)[3,4] Sự sắc ký phương pháp vật lý để tách hỗn hợp nhiều loại hợp chất riêng thành loại đơn chất, dựa vào tính lực khác loại hợp chất hệ thống (hệ thống gồm pha : pha động pha tĩnh) Sắc ký cột hở tiến hành điều kiện áp suất khí Pha tĩnh thường hạt có kích thước tương đối lớn (50-150µm) nạp cột thủy tinh Mẫu chất cần phân tách đặt phần đầu cột, phía pha tĩnh (có lớp bơng thủy tinh che chở để lớp mặt khơng bị xáo trộn), bình chứa dung mơi giải ly đặt phía cao Dung mơi giải ly khỏi cột phần bên cột hứng vào lọ nhỏ đặt ống dẫn cột Trong sắc ký cột với pha tĩnh silica gel loại thường, hợp chất khơng phân cực giải ly khỏi cột trước, hợp chất phân cực giải ly sau Với hai phân tử khơng phân cực, phân tử có trọng lượng phân tử lớn có tính phân cực mạnh phân tử kia, bị pha tĩnh giữ lại cột nên di chuyển khỏi cột BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG chậm so với phân tử nhỏ có lại cột lâu so với vài phân tử có tính phân cực có trọng lượng phân tử nhỏ 1.3.2 Sắc ký mỏng[3] Sắc ký lớp mỏng gọi sắc ký phẳng (planar chromatography), dựa chủ yếu vào tượng hấp thu, đó, pha động dung mơi hỗn hợp dung mơi, di chuyển ngang qua pha tĩnh chất hấp thu trơ, ví dụ silica gel oxid alumin Pha tĩnh tráng thành lớp mỏng, đều, phủ lên phẳng kiếng, nhơm plastic Do chất hấp thu tráng thành lớp mỏng nên phương pháp gọi sắc ký lớp mỏng - Bình sắc ký : chậu, lọ, hũ, thủy tinh, hình dạng đa dạng, có nắp đậy - Pha tĩnh : lớp mỏng khoảng 0,25mm loại chất hấp thu tráng mỏng, đều, phủ lên phẳng - Mẫu cần phân tích: thường hỗn hợp gồm nhiều hợp chất với độ phân cực khác Sử dụng khoảng 1microlit dung dịch mẫu với nồng độ pha lỗng 2-5%, nhờ vi quản để chấm mẫu thành điểm gọn pha tĩnh vị trí phía cao chút so với mặt thống chất lỏng chứa bình - Pha động : dung mơi, hỗn hợp hai dung mơi di chuyển chậm dọc theo lớp mỏng lơi kéo mẫu chất theo Dung mơi di chuyển lên cao nhờ tính mao quản Mỗi thành phần chất mẫu di chuyển với vận tốc khác phía sau mực dung mơi Vận tốc di chuyển tùy thuộc vào lực tương tác tĩnh điện mà pha tĩnh muốn níu giữ mẫu chất lại pha tĩnh (hiện tượng hấp thu pha tĩnh) tùy thuộc vào độ hóa tan mẫu chất dung mơi Với chất hấp thu silics gel alumin, hợp chất phân cực di chuyển nhanh hợp chất phân cực di chuyển chậm BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG PHẦN THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 Hóa chất dụng cụ - Dung mơi : ether dầu hỏa (60-90oC), cloroform, acetat ethyl, metanol, dichlorometan, ethanol, isoamyl acol - Hóa chất : anhydric acetic, H2SO4 đậm đặc, HCl, vanilin, Mg, HgCl2, I2, KI - Silica gel 60 F254 RP-18 F254S dùng cho sắc ký mỏng - Dụng cụ : cân phân tích, tủ sấy, bếp cách thủy 2.2 Thu hái xử lý ngun liệu - Cây lược vàng thu hái vào tháng năm 2010 xã Phước Thạnh, huyện Đất Đỏ, tỉnh Bà Rịa Vũng Tàu Cây nhận danh dược sỹ Phan Đức Bình, Tạp chí dược liệu, xác nhận có tên khoa học Callisa fragrans, họ Thài Lài (Commmelinaceae) - Cây thu hái về, làm sạch, sấy khơ 60-80oC 2.3 Khảo sát sơ thành phần hóa học lược vàng Ly trích loại cao từ lược vàng dung môi có độ phân cực tăng dần : eter dầu hỏa, cloroform, acetat etyl, etanol phương pháp ngâm dầm , trình ly trích biểu sơ đồ Sơ đồ : Ly trích hoạt chất lược vàng với dung môi có độ phân cực khác BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG Bột lược vàng khô - Chiết với eter dầu hỏa - Thu hồi dung môi dung môi áp suất Cao eter dầu hỏa Bã - Đònh tính thành phần hóa học cao ether dầu - Chiết tiếp với acetat ethyl - Thu hồi dung môi dung môi áp suất Kết đònh tính Bã Cao acetat ethyl - Chiết tiếp với etanol - Thu hồi dung môi dung môi áp suất Cao etanol Bã - Đònh tính thành phần hóa học cao etyl acetat Kết đònh tính - Đònh tính thành phần hóa học cao cloroform Kết đònh tính BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG Dùng thuốc thử biệt tính để xác đònh thành phần hóa học loại cao từ lược vàng (bảng 1) Bảng : Thuốc thử biệt tính để xác đònh thành phần hóa học STT Hoạt chất Thuốc thử Kết xuất Sterol Liebermann-Burchard Màu xanh dương – cam, đỏ Triterpenoid Salkowski Màu xanh – lục Flavonoid, Benzopyron Shibata Vòng màu hồng chuyển sang tím Alcaloid, Hợp chất amin Bouchardat, Mayer Trầm nâu Trầm vàng nâu Đường khử Fehling Trầm đỏ Tanin Gelatin mặn Màu vàng nhạt để lâu hóa Arylphenol Dd FeCl3 1% nâu nước Dd chuyển màu xanh Thấm vào giấy lọc Vết dầu loang giấy Hợp chất aldehyd Chất béo lọc  Thuốc thử Liebermann Burchad - Anhydrid acetic : 20 ml - H2SO4 đậm đặc : ml - Mẫu cao : 0,1 g cao nhựa hòa tan 30 ml CHCl3  Thuốc thử Salkowski - Dd vanillin (0,02 mg/ml MeOH) : ml - H2SO4 98% : ml - MeOH : ml 10 BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG - Mẫu cao (0,24mg/ml CH2Cl2) : ml  Thuốc thử Shibata - Dd mẫu thử cho vào ống nghiệm : ml (5g cao nhựa hòa tan 100ml EtOH đun sôi 20 phút) - HCl đậm đặc thêm từ từ vào thành ống nghiệm : ml - Bột Mg cho vào ống nghiệm : mg (để yên đến hết sủi bọt) - Isoamil alcohol cho từ từ vào thành ống nghiệm vừa đủ để tạo màu  Thuốc thử Alcaloid - Điều chế mẫu thử : Trích 5g mẫu cao nhựa với dung dòch Prollius (etyl eter – CHCl3- EtOH 95o – NH4OH đậm đặc theo tỷ lệ : 25 : : : 1) nhiệt độ phòng, khuấy liên tục 24 Lọc lấy dòch, chiết cô cạn thu mẫu cao thử Hòa tan cao mẫu vừa đủ tan dung dòch HCl 1% 80oC giờ, lọc thu dung dòch mẫu thử  Thuốc thử Bouchardat - Dd mẫu thử : ml  - I2 : 2,5 g - KI : 5g - Nước cất : 10 ml Thuốc thử Mayer - Dd mẫu thử : ml - HgCl2 : 6,8 g - KI : 5g - Nước cất : 500 ml  Thuốc thử Fehling 11 BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG - CuSO4 : 34,64g hòa tan 500ml H2O - NaOH : 60g - Na, K tartrat : 173g (NaOH, Na, K tatrat hòa tan 500ml H2O) Trộn dung dòch với thể tích trước sử dụng - Mẫu thử : 20g cao nhựa 200ml H2O  Thuốc thử tanin - Điều chế mẫu thử : đun 2,5g mẫu cao nhựa với 50 ml nước cất 20 phút , lọc  Thuốc thử gelatin mặn: - Dd mẫu thử : 10 ml - Dd gelatin mặn : 0,5 ml (2g gelatin/100 ml dd NaCl bão hòa)  Thuốc thử FeCl3 - Dd mẫu thử : 10 ml - Dd FeCl3 1% nước : giọt Kết thử nghiệm trình bày bảng sau : 12 BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG Bảng : Kết xác đònh thành phần hóa học lược vàng Cao STT Thuốc thử/Hoạt chất eter dầu hỏa Cao Cao EtOAc EtOH Liebermann-Burchard/Sterol - ++ - Salkowski/ Triterpenoid - - - Shibata/Flavonoid, Benzopyron - +++ + Bouchardat/Alcaloid, HC amin - - - Mayer/Alcaloid, HC amin - - - Fehling/Đường khử, HC - - ++ aldehyd Gelatin mặn/Tanin, Arylphenol - - ++ Dd FeCl3 1%/Tanin, - - ++ ++ - - Arylphenol Giấy lọc/Chất béo Kết cho thấy : - Cao eter dầu hỏa chứa chất béo gồm dầu béo sáp - Cao etyl acetat chứa sterol nhiều flavonoid - Cao etanol chứa đường khử, lượng nhỏ tanin flavonoid 2.4.Thử nghiệm hoạt tính sinh học 13 BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG Dòch trích cao AcEt cao ether dầu hỏa đem thử nghiệm tác dụng số vi khuẩn sau : - Thử nghiệm tác dụng mẫu số vi khuẩn tạo mủ thể tạo viêm loét gây bệnh đường ruột kháng lại thuốc trụ sinh loại Staphylococcus aureus, Salmonella enteritidis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacilus subtilis Quá trình thử nghiệm thực phòng thí nghiệm Hóa – Lý – Vi Sinh, Viện Pasteur, Thành phố Hồ Chí Minh Phương pháp thử nghiệm : phương pháp khuếch tán đóa thạch đo đường kính vòng ức chế Vật liệu thử nghiệm : Đục lỗ thạch MH có đường kính 6mm Nồng độ vi khuẩn : 1,0 x106 cfu/ml Nồng độ thử nghiệm : pha loãng mẫu thử (Co , C1 , C2 , C3 , C4) Co : dòch trích nguyên chất, lượng dùng thử nghiệm 25l C1 : thể tích C0 + thể tích alcol 90o, lượng dùng thử nghiệm 25l C2 : thể tích C1 + thể tích alcol 90o, lượng dùng thử nghiệm 25l C3 : thể tích C2 + thể tích alcol 90o, lượng dùng thử nghiệm 25l C4 : thể tích C3 + thể tích alcol 90o, lượng dùng thử nghiệm 25l Chủng vi khuẩn thử nghiệm : nuôi cấy 24h môi trường Mueller Hinton Agar Kết thử nghiệm trình bày bảng 14 BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG Bảng : Kết thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn cao AcEt Vi khuẩn thử nghiệm E.coli S.aureus Salmonella P.aeruginosa B.subtilis Nồng độ (C) 06 Đường kính vòng vô khuẩn (mm) 06 06 06 10 06 08 10 Co 09 06 07 09 C1 08 06 06 08 C2 07 06 06 07 C3 06 06 06 06 06 C4 Bảng : Kết thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn cao Ether dầu hỏa Vi khuẩn thử nghiệm E.coli S.aureus Salmonella P.aeruginosa B.subtilis Nồng độ (C) 06 Đường kính vòng vô khuẩn (mm) 06 06 06 08 06 06 06 Co 07 06 06 06 C1 06 06 06 06 C2 06 06 06 06 C3 06 06 06 06 06 C4 Kết luận : - Cao Acetatetthyl trích từ lược vàng có tác dụng diệt khuẩn vi khuẩn Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa Bacilus subtilis với kích thước vòng kháng khuẩn - Cao Ether dầu hỏa trích từ lược vàng có tác dụng diệt khuẩn yếu vi khuẩn Staphylococcus aureus với kích thước vòng kháng khuẩn 15 BÁO CÁO ĐỀ TÀI NCKH CẤP TRƯỜNG PHẦN : KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 3.1 Kết luận Quá trình nghiên cứu lược vàng Callisa fragrans, họ Thài Lài (Commmelinaceae) thu hái xã Phước Thạnh, huyện Đất Đỏ, tỉnh Bà Ròa Vũng tàu có số kết sau : Điều chế loại cao : tươi, sau phơi khô điều chế thành loại cao phương pháp ngâm dầm với dung môi có độ phân cực khác Các loại cao thu cao eter dầu hỏa, cao etyl acetat cao etanol Khảo sát thành phần hóa học loại cao : cách sử dụng thuốc thử biệt tính, kết : - Cao eter dầu hỏa chứa chất béo gồm dầu béo sáp - Cao etyl acetat chứa sterol nhiều flavonoid - Cao etanol chứa đường khử, lượng nhỏ tanin Thử nghiệm hoạt tính sinh học lược vàng : - Cao acetatethyl trích từ lược vàng có tác dụng diệt khuẩn vi khuẩn Staphylococcus aureus, Salmonella enteritidis, Pseudomonas aeruginosa Bacilus subtilis 3.2 Kiến nghò Với kết thu được, nhận thấy cao acetatethyl trích từ lược vàng có mặt hợp chất flavonoid giống tài liệu nghiên cứu, cao acetat ethyl có hoạt tính kháng khuẩn tương đối mạnh với số chủng vi khuẩn, nên đề xuất nghiên cứu tiếp cao acetat ethyl cách trích ly phân lập hợp chất hữu có cao, thử nghiệm hoạt tính chất cô lập 16 Vi khuẩn thử nghiệm Đường kính vòng vơ khuẩn(mm) E.coli 6 6 S.aureaus S.enteritidis P.aeruginosa 10 6 6 6 B.subtilis 10 C0 C1 C2 C3 C4 Nồng độ (C) N0 : 010411-26820 Cao Ether Vi khuẩn thử nghiệm Đường kính vòng vơ khuẩn(mm) E.coli 6 6 S.aureaus S.enteritidis P.aeruginosa 6 6 6 6 6 6 B.subtilis 6 6 C0 C1 C2 C3 C4 Nồng độ (C) Cao Ether TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [1].Võ Văn Chi, Nguyễn Trương Thi.(2009) Cây lược vàng-Kinh nghiệm dân gian chữa bệnh gia đình Tạp Chí Cây Thuốc Q- số 144- 2009 [2.].Châu Văn Minh, Nguyễn Phương Thảo, Nguyễn Tiến Đạt, Phan Văn Kiệm, Trần Thu Hương, Lê Văn Sang, Lê Huyền Trâm, Ninh Khắ c Bản.(2009) Nghiên cứu bước đầu thành phần hố học hoạt tính sinh học Lược vàng Callisa fragrans, họ Thài Lài (Commmelinaceae) Tạp chí dược liệu, 34 [3].Nguyễn Kim Phi Phụng(2007) Phương pháp lập hợp chất hữu Nhà xuất ĐHQG TP.HCM, 2007 TÀI LIỆU TIẾNG ANH [4] A.Braithmaite, F.J Smith (1999) Chromatographic methods Kluwer Academic Publishers Boston-London, 1999 [5] Smith R.M ( 1996.)Supercritical fliud extraction of natural products LC-GC Int., [6] Hatori, O., Jegede-Fadunsin H.A (1986), “The antimalarial activity of isoorientin”, Fitoterapia, vol.57, 247-251 [7] Kupeli, Ishita C., Ranajit K (2004), “Biological activities and medicinal properties of Callisa fragrans-Commmelinaceae.”, Current Science, vol.32, NO.11