Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu xác định thành phần hóa học của bộ phận toàn thân trên mặt đất của cây lược vàng, và nghiên cứu áp dụng phương pháp sắc ký cột lặp lại, phổ cộng hưởng từ để xác định thành phần hóa học của cây lược vàng.
Trang 1Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011 Nghiên cứu Y học
KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY LƯỢC VÀNG
(CALLISIA FRAGRANS LINDL.)
Nguyễn Thị Ngọc Dung*, Vĩnh Định*
TÓM TẮT
Mục tiêu: xác định thành phần hóa học của bộ phận toàn thân trên mặt đất của cây Lược vàng
Phương pháp: Sắc ký cột lặp lại, phổ cộng hưởng từ
Kết quả: xác định lược vàng có các hợp chất: carotenoid, triterpenoid, flavonoid, polyphenol, acid hữu cơ,
chất khử Từ 3,6 kg bột dược liệu, chiết bằng cồn 96%, cô giảm áp, loại tạp, ly trích phân đoạn với các dung môi
có độ phân cực tăng dần lần lượt là ether ethylic, cloroform, ethyl acetat Bằng sắc ký cột lặp lại với chất hấp phụ silicagel, hệ dung môi CHCl 3 – MeOH tỉ lệ thay đổi thu được kết tinh LV-H2 (122,6 mg) màu trắng
Kết luận: bằng kỹ thuật đo phổ NMR 1 H và DEPT đã xác định LV-H2 là một triterpenoid thuộc nhóm
taraxeran có nhóm carboxyl ở C28 và nhiều nhóm hydroxyl
Từ khóa: Lược vàng, Callisia fragrans
ABSTRACT
STUDY ON CHEMICAL COMPONENTS OF LUOC VANG HERBS
(CALLISIA FRAGRANS LINDL.)
Nguyen Thi Ngoc Dung, Vinh Dinh
* Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No 1 - 2011: 391 - 394
Objectives: to determine the chemical components of the aerial part of Luoc vang (Callisia fragrans)
Methods: repat column chromatography was used to isolate compounds and NMR spectrometry was used
to identify the structure
Results: the aerial part of Luoc vang (Callisia fragrans) composes carotenoid, triterpenoid, flavonoid,
polyphenol, organic acid, reduct compounds One steroid compound was isolated From 3.6 kg of air-dried materials, EtOH extract is fractionated by silica gel repeated column chromatography as described in the
experimental, led to the isolation of LV-H2 (122,6 mg)
Conclusions: LV-H2 is determined as a pentacyclic triterpenoid that has a skeleton of olean or taraxeran by
spectrometry NMR 1 H và DEPT
Keywords: Luoc vang, Callisia fragrans
ĐẶT VẤN ĐỀ
Cuối những năm 90, cây Lược Vàng được
du nhập vào Việt Nam Từ năm 2005, cây Lược
Vàng thu hút sự quan tâm của mọi người do
tính chất “chữa bách bệnh” của nó Thực hư về
tin đồn này đến nay vẫn chưa rõ vì chưa có
nhiều tài liệu nghiên cứu về thành phần hóa
học, tác dụng sinh học của cây
Trong phạm vi đề tài “Khảo sát thành phần
hóa học của cây Lược Vàng (Callisia fragrans
(Lindl.) Woodson Commenilacea)”, đã nêu phương pháp để định danh, khảo sát một số nhóm hoạt chất của Lược Vàng
ĐỐI TƯỢNG – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
- Cây Lược Vàng trồng ở Phú Yên Lá và thân tươi đem phân cắt nhỏ, phơi râm, sau đó sấy ở 65
* Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh
Tác giả liên lạc: PGS TS Vĩnh Định ĐT: 0903639586; Email: npvdinh@yahoo.com
Trang 2Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011
Chuyên Đề Dược Khoa
392
oC, đo độ ẩm, xay đến độ mịn thích hợp
- Khảo sát vi học
- Phân tích sơ bộ thành phần hóa thực vật
- Chiết xuất nguyên liệu bằng cồn 96% theo
phương pháp ngấm kiệt cổ điển
- Chiết xuất các phân đoạn bằng dung môi:
sử dụng các dung môi có độ phân cực khác
nhau như ether ethylic, cloroform, ethyl acetat
để chiết xuất theo kỹ thuật phân bố lỏng – lỏng
- Tách các phân đoạn bằng sắc ký cột nhanh
và sắc ký cột cổ điển
- Phân lập các chất bằng sắc ký rây phân tử
- Tinh chế và kết tinh
- Xác định cấu trúc hợp chất phân lập bằng
kỹ thuật phổ nghiệm NMR 1H, 13C
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
Qua phân tích sơ bộ thành phần hóa thực
vật của cây Lược vàng(4) thấy có các hợp chất:
carotenoid, triterpenoid, flavonoid, polyphenol,
acid hữu cơ, chất khử
Từ 3,6 kg bột dược liệu, chiết bằng cồn 96%,
cô giảm áp, loại tạp, ly trích phân đoạn với các
dung môi có độ phân cực tăng dần lần lượt là
ether ethylic, cloroform, ethyl acetat Cô giảm áp
các phân đoạn để loại dung môi và thu được cắn
CHCl3 (ký hiệu là D2 - 1,64 g) và cắn EtOAc (ký
hiệu là D1 - 5,86 g)
Qua tham khảo và thăm dò dung môi khai
triển SKLM(2) với 18 hệ dung môi khác nhau
(phát hiện UV 254 và thuốc thử vanillin-sulfuric)
đã chọn được hệ CHCl3–MeOH (tỷ lệ thay đổi)
dùng cho sắc ký cột và hệ dung môi M1 =
EtOAc–MeOH–HCOOH–H2O (7 : 1 : 0,5 : 1)
dùng cho SKLM để kiểm tra các phân đoạn
Cắn D1 (5,86 g) được tách bằng phương
pháp sắc ký cột (SKC) với chất hấp phụ silicagel,
hệ dung môi CHCl3 – MeOH với tỉ lệ tăng dần
MeOH, thu được 25 phân đoạn, trong phân
đoạn 22 (P1 0,6446 g) được tách tiếp Phân đoạn
P1 được SKC với chất hấp phụ silicagel H và hệ
dung môi CHCl3 – MeOH với tỉ lệ tăng dần
MeOH, thu được 17 phân đoạn, trong đó phân
đoạn 5, 6 và 9 có kết tinh lần lượt là H3 màu vàng và LV-H2 (122,6 mg) màu trắng
Cắn D2 (1,643g) được tách bằng phương pháp SKC với chất hấp phụ silicagel, hệ dung môi CHCl3 – MeOH với tỉ lệ tăng dần MeOH thu được 10 phân đoạn, trong đó phân đoạn 10
(P2 0,079 g) được tách tiếp Phân đoạn P2 được
SKC với chất hấp phụ silicagel H và hệ dung môi CHCl3 – MeOH với tỉ lệ tăng dần MeOH, thu được 51 phân đoạn, trong đó phân đoạn
26-31 cho các vết giống nhau nên gộp thành phân
đoạn P3 và tiếp tục tách qua cột Sephadex Phân đoạn P3 sau khi SKC với Sephadex LH-20 và với
MeOH, thu được 34 phân đoạn, trong đó, phân
đoạn 3-8 được gộp thành phân đoạn P4 Phân đoạn P4 cho phản ứng dương tính với thuốc thử Liebermann- Burchard, sơ bộ nhận định P4 chứa
hợp chất nhóm triterpen
LV-H2 tan trong methanol, ethanol, aceton,
ít tan trong n- hexan, chloroform; cho phản ứng dương tính với thuốc thử Liebermann-
Burchard; LV-H2 cho 1 vết trên SKLM với 3 hệ
dung môi khác nhau và phát hiện bằng đèn UV
254 và thuốc thử Vanilin/Sulfuric Bằng kỹ thuật
đo phổ NMR 1H và DEPT đã xác định LV-H2 là
một triterpenoid 5 vòng
Theo hình 1, Phổ NMR 1H của LV-H2 (500 MHz, CD3OD): δ = 5,777 (1H ; s), 4,907 (3H; q; j =
5 Hz), 3,919 (1H, s), 3,80 (1H ; d; j = 12 Hz), 2,343 (1H; t; j = 9 Hz), 2,084 – 1,392 (12H; br m), 1,163 (9H; m), 0,930 (3H; s), 0,851 (3H; s)
Phổ NMR 13C của LV-H2 (125 MHz, CD3OD) cho 30 tín hiệu cộng hưởng gồm : 7 nhóm methyl (-CH3) (δ = 50,20; 45,25; 28,13; 27,37; 22,83; 19,46 et 16,49), 7 nhóm methylen (-CH2-) (δ
= 40,80; 35,74; 31,26; 30,93; 30,20; 25,74; 19,92), 9 nhóm methin (>CH-) (δ = 120,56; 76,86; 67,12; 66,94; 58,70; 51,50; 48,94; 33,51) và 8 nhóm carbon bậc 4 (>C<) (δ = 205,03; 166,49; 83,70; 76,40; 69,78; 50,30; 47,04; 37,70)
Trang 3Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011 Nghiên cứu Y học
Hình 1 Phổ 1 H-NMR (CD 3 OD, 500 MHz)(trên), 13 C-NMR (CD 3 OD, 125 MHz)(giữa) và DEPT (dưới) của LV-H2
Từ những dữ liệu phổ NMR 13C của các
triterpen đã công bố(1,3), sơ bộ nhận xét rằng
LV-H2 gồm 30 carbon thuộc họ triterpen 5 vòng có
khung taraxeran chứa 1 liên kết đôi (δ = 120,56,
166,49) ở C14-C15, 1 nhóm chức carboxyl (δ =
205,03) ở C28, 7 nhóm methyl và nhiều nhóm
hydroxyl (dựa vào δ của nhiều nhóm >CH- ở vùng trường thấp)
Sự dịch chuyển hóa học của carbon trong phổ NMR 13C của LV-H2 quan sát và đối chiếu
với phổ NMR 13C của 396 triterpen trong
"Review article No 98, 13C NMR spectra of
Trang 4Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011
Chuyên Đề Dược Khoa
394
pentacyclic triterpenoids" Phytochemistry, 37(6)
của Shashi B Mahato(1), chúng tôi chưa tìm thấy
sự tương đồng nào Cấu trúc của LV-H2 sẽ được
biện giải tiếp bằng các phổ NMR 2D (HMQC,
HMBC, NOESY) trong công trình tiếp theo
HO
COOH OH
OH
OH OH
Hình 2 Cấu trúc dự đoán của LV-H2 với khung
taraxeran
KẾT LUẬN
Qua kết quả nghiên cứu có thể thấy cây
Lược Vàng có chứa nhiều triterpen (phân đoạn
P1 với LV-H2 và phân đoạn P4) trong đó có 1
chất có cấu trúc triterpen 5 vòng, thuộc nhóm taraxeran chứa 1 liên kết đôi ở C14-C15, 1 nhóm chức carboxyl ở C28, 7 nhóm methyl và nhiều nhóm hydroxyl
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Mahato S B & Kundu A P (1994) Review article number 98,
13C NMR spectra of pentacyclic triterpenoids Phytochemistry, 37(6), 1517-1575
2 Nguyễn Minh Đức (2006) Sắc ký lỏng hiệu năng cao và một số ứng dụng vào nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu và hợp chất tự nhiên Nhà xuất bản Y Học: Thành phố Hồ Chí
Minh
3 Olennikov D N., Ibragimov T A & N., Z I (2008) Chemical
composition of Callisia fragrans juice I Phenolic compounds Chemistry of natural compounds, 44(6), 776-777
4 Trần Hùng (2008) Giáo trình phương pháp nghiên cứu dược liệu Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh