Khảo sát thành phần hóa học cao ete dầu hỏa của cây an điền nhám – Hedyotis rudis Pierre ex Pit., họ cà phê (Rubiaceae)

Ở Việt Nam và trên thế giới, cây An điền nhám – Hedyotis rudis Pierre ex Pit., họ Cà phê (Rubiaceae), vẫn chưa được nghiên cứu về mặt hóa học và dược tính. Từ phân đoạn cao ete dầu hỏa của cây Hedyotis rudis Pierre ex Pit.

KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO ETE DẦU HỎA CỦA CÂY AN ĐIỀN NHÁM – HEDYOTIS RUDIS PIERRE EX PIT., HỌ CÀ PHÊ (RUBIACEAE) MAI ANH HÙNG (*), TỪ ĐỨC DŨNG (**), NGUYỄN KIM PHI PHỤNG (***) TÓM TẮT Ở Việt Nam giới, An điền nhám – Hedyotis rudis Pierre ex Pit., họ Cà phê (Rubiaceae), chưa nghiên cứu mặt hóa học dược tính Từ phân đoạn cao ete dầu hỏa Hedyotis rudis Pierre ex Pit., cô lập hợp chất βsitosterol (1) hỗn hợp axit 3β-axetylursolic (2a) axit oleanolic (2b) Cấu trúc hợp chất khẳng định liệu phổ NMR so sánh với tài liệu tham khảo ABSTRACT Hedyotis rudis Pierre ex Pit has not been chemically and pharmaceutically studied in Vietnam and in the world yet From the petroleum ether residue of the whole plant Hedyotis rudis Pierre ex Pit., three compounds were isolated: β-sitosterol (1), the mixture of 3β-acetylursolic acid (2a) and oleanolic acid (2b) The structures of these compounds were determined through the interpretation of their NMR data and compared with references MỞ ĐẦU Chi Hedyotis (họ Cà phê Rubiaceae) có khoảng 160 lồi, phân bố chủ yếu Trung Hoa, Ấn Độ, Nhật Bản, Indonesia, Thái Lan Việt Nam Trong có nhiều lồi ngành y học cổ truyền Việt Nam Trung Hoa sử dụng để điều trị chứng bệnh bỏng, lỵ, rắn cắn, viêm ruột thừa, viêm gan, viêm amiđan đặc biệt có hoạt tính kháng nhiều dịng tế bào ung thư, ung thư phổi A549, ung thư buồng trứng SK-OV3, ung thư dày SNU-1, … [1,2] (*) ( CN, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh CN Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh ( ) *** PGS.TS Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh ** Tuy chưa có cơng trình cơng bố thành phần hóa học dược tính Hedyotis rudis Pierre ex Pit hy vọng Hedyotis rudis thừa hưởng đặc tính quí báu chi Bài nhằm giới thiệu hợp chất cô lập từ phân đoạn cao ete dầu hỏa Hedyotis rudis thu hái vùng núi Langbiang (huyện Lạc Dương, tỉnh Lâm Đồng) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Hợp chất (1): Hợp chất (1) cô lập từ phân đoạn cao ete dầu hỏa, có dạng bột màu trắng (kết tinh dung môi CHCl3) Phổ IR (KBr, vcm-1): 3431 (OH); 2028-2806 (CH); 1061 (C-O) Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3, ppm): 5,35 (dd; 2,5Hz; 2,5Hz; H-6); 3,52 (m; H-3) Phổ 13C-NMR (125MHz, CDCl3, ppm) cho thấy có 29 tín hiệu cacbon, xuất cặp tín hiệu đặc trưng vùng từ trường thấp 140,8 121,7 tín hiệu C-5 C6 khung stigmastan sterol Điều phù hợp với phổ 1H-NMR có độ dịch chuyển hóa học 5,35 (dd; 2,5Hz; 2,5Hz) tương ứng với H-6 So sánh liệu phổ 13C-NMR (1) với hợp chất -sitosterol [5] (bảng 1) cho thấy có tương hợp Do đề nghị cấu trúc hợp chất (1) cô lập -sitosterol 21 20 19 12 18 11 HO 10 23 16 14 29 24 17 13 28 22 25 27 26 15 (1) Bảng Số liệu phổ NMR (1) so với -sitosterol Vị trí C Hợp chất (1) (CDCl3) H ppm (J, Hz) 3,52 (m) 5,35 (dd; 2,5; 2,5) 10 C ppm -Sitosterol (CDCl3) C ppm 37,3 31,7 71,8 42,3 140,8 37,3 31,6 71,7 42,2 140,7 121,7 121,6 31,9 31,9 50,2 36,5 31,9 31,8 50,1 36,4 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 21,1 39,8 42,3 56,8 24,3 28,2 56,1 12,0 19,4 36,1 18,8 34,0 26,2 45,9 29,2 19,8 19,1 23,1 11,9 0,68 (s) 1,01 (s) 0,92 (d; 6,5) 0,82 (d; 5,5) 0,78 (d; 7,0) 0,85 (dd; 8,5; 7,5) 21,1 39,7 42,3 56,7 24,1 28,2 56,0 11,8 19,4 36,0 18,6 33,9 26,1 45,8 29,1 19,7 19,2 23,1 11,6 Hợp chất (2a) (2b): Các hợp chất (2a) (2b) cô lập dạng hỗn hợp (tỉ lệ 3:1), có dạng bột màu trắng (kết tinh CHCl3) Phổ EI-MS cho mũi M+ m/z = 498 Thư viện phổ máy đề nghị công thức phân tử C32H50O4 Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3, ppm): 5,28 (dd; 3,5Hz; 3,5Hz; H-12b); 5,24 (dd; 3,5Hz; 3,5Hz; H-12a); 4,51 (dd; 5,5Hz; 2,0Hz; H-3b); 4,49 (dd; 6,5Hz; 2,0Hz; H-3a); 2,82 (dd; 13,5Hz; 4,0Hz; H-18b); 2,19 (dd; 11,5Hz; H-18a); 2,04 (s; H-2’a) Phổ 13C-NMR kết hợp với DEPT-NMR (125MHz, CDCl3, ppm) cho thấy có xuất tín hiệu ngun tử cacbon vùng từ trường thấp 183,4 (–COOH); 170,9 (–COO–) Ngồi cịn có cặp tín hiệu 143,7 (>C=) 122,3 (–CH=), tín hiệu đặc trưng nối đơi >C=CH– hợp chất có khung olean-12-en Đồng thời cặp tín hiệu 138,1 (>C=) 125,8 (–CH=) đặc trưng nối đôi >C=CH– khung ursan-12-en 30 29 19 20 12 25 11 26 22 13 14 2' 1' H3C C O O 23 10 24 18 15 21 27 (2a) 17 16 COOH 28 Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất (2a) so sánh với axit 3β-axetylursolic (13C-NMR, 125MHz, Piriđin-d5) Vị trí C DEPT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1’ 2’ -CH2-CH2CH-OH >C< >CH-CH2-CH2>C< >CH>C< -CH2-CH= >C= >C< -CH2-CH2>C< >CH>CH>CH-CH2-CH2-CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -COOH -CH3 -CH3 -COO-CH3 Axit 3βaxetylursolic (Piriđin-d5) Hợp chất (2a) (CDCl3) H ppm (J, Hz) 4,49 (dd; 6,5; 2,0) 5,24 (dd; 3,5; 3,5) 2,19 (d; 11,5) 0,85 (s) 0,85 (s) 0,96 (s) 0,87 (s) 1,08 (s) 0,86 (d; 5,5) 0,94 (d; 5,0) 2,04 (s) C ppm 38,4 23,6 81,0 39,1 55,4 18,2 33,0 39,6 47,6 37,0 23,4 125,8 138,1 42,0 28,1 24,2 48,0 52,7 39,1 38,9 30,7 36,8 28,1 16,7 15,6 17,0 23,6 183,4 17,2 21,2 170,9 21,2 C ppm 38,4 24,1 80,9 38,0 55,7 18,6 33,5 40,0 47,9 37,2 23,7 125,6 139,4 42,6 28,8 25,0 48,2 53,6 39,6 39,6 31,2 37,6 28,3 17,1 15,7 17,5 24,1 180,1 17,7 21,6 170,7 21,3 So sánh tín hiệu phổ (2a,b) với phổ NMR axit 3β-axetylursolic [3] axit oleanolic [4] (bảng 3) kết hợp với tỉ lệ cường độ tích phân tín hiệu H-18a H18b (0,785 : 0,333) phổ 1H-NMR, cho phép kết luận hai hợp chất (2a) (2b) axit 3β-axetylursolic axit oleanolic với tỉ lệ : tương ứng hỗn hợp THỰC NGHIỆM 3.1 Nguyên liệu Cây tươi thu hái vùng núi Langbiang, thuộc huyện Lạc Dương, tỉnh Lâm Đồng vào tháng 07 năm 2008 Tên khoa học xác định Hedyotis rudis Pierre ex Pit dược sĩ Phan Đức Bình, Phó Tổng biên tập Bán nguyệt san Thuốc Sức Khỏe Cây lưu mẫu lưu giữ tiêu thực vật, kí hiệu mẫu số US-C016 Bộ mơn Hóa hữu cơ, Khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Tp.HCM 30 29 19 20 12 25 11 26 22 13 18 14 HO 23 10 24 21 15 17 16 COOH 28 27 (2b) Bảng Số liệu phổ NMR hợp chất (2b) so sánh với 13C-NMR (CDCl3, 125MHz) axit oleanolic Axit Hợp chất (2b) (CDCl3) oleanolic Vị (CDCl3) trí DEPT C  ppm (J, Hz)  ppm  ppm H 10 11 12 13 14 -CH2-CH2CH-OH >C< >CH-CH2-CH2>C< >CH>C< -CH2-CH= >C= >C< 4,51 (dd; 5,5; 2,0) 5,28 (dd; 3,5; 3,5) C C 38,2 27,8 81,0 38,9 55,4 18,3 32,7 39,4 47,7 37,1 23,5 122,6 143,7 41,7 38,5 27,1 78,7 38,7 55,2 18,3 32,6 39,3 47,6 37,0 23,1 122,1 143,4 41,6 15 -CH228,1 27,7 16 -CH223,6 23,4 17 >C< 46,6 46,6 18 >CH2,82 (dd; 13,5; 4,0) 41,2 41,3 19 -CH246,0 45,8 20 >C< 30,7 30,6 21 -CH233,9 33,8 22 -CH232,5 32,3 23 -CH3 1,08 (s) 28,1 28,1 24 -CH3 0,95 (s) 16,7 15,6 25 -CH3 0,76 (s) 15,4 15,3 26 -CH3 0,87 (s) 17,2 18,1 27 -CH3 1,14 (s) 25,9 26,0 28 -COOH 183,4 177,9 29 -CH3 0,91 (s) 33,1 33,1 30 -CH3 0,93 (s) 23,6 23,6 3.2 Chiết tách cô lập hợp chất Mẫu tươi (14,0kg) rửa sạch, sấy 65oC 48 xay nhuyễn thành dạng bột (2,0kg) Dịch chiết trình ngâm dầm mẫu với etanol 96o nhiệt độ phịng quay áp suất thấp để thu cao thơ etanol (100,0g) Tiến hành sắc kí cột silica gel pha thường dung môi ete dầu hỏa 60-90, benzen, clorofom, etyl axetat metanol để điều chế phân đoạn cao tương ứng Tiến hành sắc kí cột silica gel sắc kí điều chế nhiều lần cao ete dầu hỏa (9,5g), bước đầu giúp cô lập hợp chất (1) với hỗn hợp (2a) (2b) (khối lượng 2,8g 35,0mg tương ứng) Q trình chiết tách lập hợp chất khác cao ete dầu hỏa phân đoạn cao khác tiếp tục thực 3.3 Phổ nghiệm Phổ IR ghi máy FTIR-8400S Shimadzu Phịng thí nghiệm thuộc khoa Hóa học, trường Đại học Sư phạm Tp.HCM (280 An Dương Vương, Q5, Tp.HCM) Các phổ NMR (được ghi máy Brucker Avance 500 tần số 500MHz 125MHz cho H-NMR 13C-NMR tương ứng) EI-MS (được ghi máy 5989B-HP-MS-Engin) Phịng NMR, Viện Hóa học Khoa Học Cơng Nghệ Việt Nam (18 Hồng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội) KẾT LUẬN Từ phân đoạn cao ete dầu hỏa Hedyotis rudis Pierre ex Pit., bước đầu cô lập hợp chất β-sitosterol (1) hỗn hợp axit 3β-axetylursolic (2a) axit oleanolic (2b) theo tỉ lệ : tương ứng TÀI LIỆU THAM KHẢO Võ Văn Chi (1996), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y Học Tp HCM, tr 104 2 Kim Sung Hoon, Ahn Byung-Zun, Ryu Shiyong (1998), “Antitumor effects of ursolic acid isolated from Oldenlandia diffusa”, Phytotherapy research, 12 (8), pp 553-556 Alexandre T C Taketa, Eberhard Breitmaier and Eloir P Schenkel (2004), “Triterpenes and Triterpenoidal Glycosides from the Fruits of Ilex paraguariensis (Maté)”, J Braz Chem Soc., Vol 15, No 2, pp 205-211 F W E Wohrli, T Nishida (1979), Progress in the chemistry of organic natural products, Springer-Verlag/Wein, 36, pp 90-103 The Aldrich library of 13C- and 1H-NMR spectra (1993), pp 440-449, Aldrich Chemical Company Inc  ... bố thành phần hóa học dược tính Hedyotis rudis Pierre ex Pit hy vọng Hedyotis rudis thừa hưởng đặc tính quí báu chi Bài nhằm giới thiệu hợp chất cô lập từ phân đoạn cao ete dầu hỏa Hedyotis rudis. .. Tổng biên tập Bán nguyệt san Thuốc Sức Khỏe Cây lưu mẫu lưu giữ tiêu thực vật, kí hiệu mẫu số US-C016 Bộ mơn Hóa hữu cơ, Khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Tp.HCM 30... chất khác cao ete dầu hỏa phân đoạn cao khác tiếp tục thực 3.3 Phổ nghiệm Phổ IR ghi máy FTIR-8400S Shimadzu Phịng thí nghiệm thuộc khoa Hóa học, trường Đại học Sư phạm Tp.HCM (280 An Dương Vương,