NGHIÊN CỨU XẠ KHUẨN THUỘC CHI STREPTOMYCES SINH CHẤT KHÁNG SINH CHỐNG NẤM GÂY BỆNH TRÊN CÂY CHÈ Ở THÁI NGUYÊN

Header Page of 16 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM    BÙI THỊ HÀ NGHIÊN CỨU XẠ KHUẨN THUỘC CHI STREPTOMYCES SINH CHẤT KHÁNG SINH CHỐNG NẤM GÂY BỆNH TRÊN CÂY CHÈ Ở THÁI NGUYÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN - 2008 Footer Page of 16 Header Page of 16 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM    BÙI THỊ HÀ NGHIÊN CỨU XẠ KHUẨN THUỘC CHI STREPTOMYCES SINH CHẤT KHÁNG SINH CHỐNG NẤM GÂY BỆNH TRÊN CÂY CHÈ Ở THÁI NGUYÊN Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60.42.30 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC TS VI THỊ ĐOAN CHÍNH THÁI NGUYÊN - 2008 Footer Page of 16 Header Page of 16 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cô giáo TS Vi Thị Đoan Chính tận tình giúp đỡ trình thực hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn ThS Nguyễn Phú Hùng cán môn Sinh học thuộc Khoa KHTN & XH - ĐHTN nhiệt tình giúp đỡ Xin chân thành cảm ơn PGS TS Ngô Đình Quang Bính cán phòng Di truyền vi sinh học - Viện Công nghệ sinh học thuộc Viện khoa học công nghệ Việt Nam Xin cảm ơn Ban lãnh đạo Trƣờng Đại học Y - Dƣợc Thái Nguyên, Khoa Sinh - KTNN, Khoa Sau Đại học - Trƣờng Đại học Sƣ phạm - ĐHTN tạo nhiều điều kiện để hoàn thành luận văn Xin cảm ơn Ban chủ nhiệm khoa KHCB, Bộ môn Hóa - sinh tạo điều kiện cho đƣợc học tập hoàn thành luận văn Tôi xin cảm ơn thầy cô, bạn bè đồng nghiệp động viên, tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình làm luận văn Lời cảm ơn sâu sắc xin dành cho gia đình ngƣời thân yêu Footer Page of 16 Header Page of 16 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố công trình khác Thái nguyên, ngày 15 tháng năm 2008 Tác giả Bùi Thị Hà Footer Page of 16 Header Page of 16 MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục Những chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình vẽ, đồ thị MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ XẠ KHUẨN 1.1.1 Phân bố xạ khuẩn tự nhiên 1.1.2 Đặc điểm hình thái xạ khuẩn 1.1.3 Sự hình thành bào tử xạ khuẩn .5 1.1.4 Cấu tạo xạ khuẩn 1.2 CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN LOẠI XẠ KHUẨN HIỆN ĐẠI 1.2.1 Đặc điểm hình thái tính chất nuôi cấy 1.2.2 Đặc điểm hóa phân loại (Chemotaxonomy) 1.2.3 Đặc điểm sinh lý - sinh hóa .10 1.2.4 Phân loại số (Numerical taxonomy) 10 1.2.5 Phân loại xạ khuẩn chi Streptomyces 11 1.3 CHẤT KHÁNG SINH TỪ XẠ KHUẨN .12 1.3.1 Lƣợc sử nghiên cứu chất kháng sinh 12 1.3.2 Sự hình thành chất kháng sinh xạ khuẩn 15 1.3.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến sinh tổng hợp chất kháng sinh 16 1.4 MỘT SỐ BỆNH HẠI CHÈ DO NẤM GÂY RA VÀ ỨNG DỤNG CỦA CKS TRONG BẢO VỆ THỰC VẬT 18 Footer Page of 16 Header Page of 16 1.4.1 Một số bệnh hại chè nấm 18 1.4.2 Các chất kháng sinh bảo vệ thực vật .21 Chƣơng - NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu hóa chất .24 2.1.1 Nguyên liệu 24 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị .24 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 27 2.2.1 Phƣơng pháp phân lập nấm gây bệnh từ mẫu chè 27 2.2.2 Phân lập tuyển chọn xạ khuẩn 28 2.2.2.1 Phân lập xạ khuẩn theo Vinogradski 28 2.2.2.2 Xác định hoạt tính kháng sinh 28 2.2.2.3.Tuyển chọn chủng xạ khuẩn sinh chất kháng sinh 29 2.2.3 Bảo quản giống 29 2.2.4 Nghiên cứu đặc điểm sinh học phân loại xạ khuẩn 30 2.2.4.1 Đặc điểm hình thái 30 2.2.4.2 Đặc điểm nuôi cấy 31 2.2.4.3 Đặc điểm sinh lý - sinh hóa 31 2.2.5 Lên men tạo kháng sinh .32 2.2.5.1 Lựa chọn môi trƣờng lên men thích hợp 32 2.2.5.2 Ảnh hƣởng nguồn cacbon 33 2.2.5.3 Ảnh hƣởng nguồn Nitơ 33 2.2.6 Các phƣơng pháp sinh học phân tử phân lập gen 16S - rRNA 33 2.2.6.1 Tách chiết DNA xạ khuẩn đệm CTAB 33 2.2.62 Khuếch đại gen 16S - rRNA phản ứng PCR 34 2.2.6.3 Phƣơng pháp điện di gel agarose 35 2.2.7 Phƣơng pháp xử lý số liệu 36 Chƣơng - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân lập khiết chủng nấm gây bệnh chè 37 Footer Page of 16 Header Page of 16 3.2 Phân lập tuyển chọn xạ khuẩn 38 3.2.1 Hoạt tính kháng nấm chủng xạ khuẩn 38 3.2.2 Tuyển chọn chủng xạ khuẩn có HTKN cao 41 3.3 Đặc điểm sinh học đặc điểm phân loại chủng XK Đ1 R2 42 3.3.1 Đặc điểm hình thái 42 3.3.2.Đặc điểm nuôi cấy 43 3.3.3 Đặc điểm sinh lý - sinh hóa .45 * Khả đồng hóa nguồn cacbon .45 * Nhiệt độ sinh trƣởng thích hợp 46 * Khả chịu muối 46 * Khả sinh enzym ngoại bào 47 3.3.4 Hoạt tính kháng sinh chủng R2 Đ1 48 3.3.5 Vị trí phân loại hai chủng xạ khuẩn R2 Đ1 50 3.4 Khả sinh tổng hợp CKS chủng xạ khuẩn lựa chọn 52 3.4.1 Lựa chọn môi trƣờng lên men thích hợp 52 3.4.2 Ảnh hƣởng nguồn cacbon 54 3.4.3 Ảnh hƣởng nguồn nitơ 56 3.5 Phân loại chủng xạ khuẩn theo phƣơng pháp sinh học phân tử 57 3.5.1 Kết tách chiết DNA tổng số chủng xạ khuẩn 57 3.5.2 Kết nhân gen 16S - rRNA phản ứng PCR 58 Chƣơng - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận .60 Kiến nghị nghiên cứu 61 CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 63 Footer Page of 16 Header Page of 16 NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN XK : Xạ khuẩn VSV : Vi sinh vật CKS : Chất kháng sinh HSCC : Hệ sợi chất HSKS : Hệ sợi khí sinh KTKS : Khuẩn ty khí sinh HTKS : Hoạt tính kháng sinh HTKN : Hoạt tính kháng nấm MT : Môi trƣờng KHVQH : Kính hiển vi quang học KHVĐT : Kính hiển vi điện tử DNA : Deoxyribonucleic Acid RNA : Ribonucleic Acid ISP : International Streptomyces Project TE : Tris - Ethylendiamin tetracetic acid SDS : Sodiumdodecyl sulfat TAE : Tris - Acetate - Ethylendiamin tetracetic acid PCR : Polymerase chain reaction (phản ứng chuỗi polymerase) Footer Page of 16 Header Page of 16 DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Đặc điểm số mẫu chè làm nguồn phân lập chủng nấm 37 Bảng 3.2 Xạ khuẩn có hoạt tính kháng nấm theo nhóm màu 39 Bảng 3.Tính đối kháng xạ khuẩn với chủng nấm gây bệnh chè .40 Bảng Hoạt tính kháng nấm chủng xạ khuẩn 41 Bảng 3.5 Đặc điểm nuôi cấy chủng R2 Đ1 .44 Bảng 3.6 Khả đồng hóa nguồn cacbon chủng xạ khuẩn Đ1 R2 45 Bảng 3.7 Nhiệt độ sinh trƣởng thích hợp chủng R2 Đ1 46 Bảng 3.8 Khả chịu muối chủng R2 Đ1 47 Bảng 3.9 Hoạt tính kháng sinh chủng R2 Đ1 với chủng nấm kiểm định .48 Bảng 3.10 So sánh đặc điểm phân loại chủng R2 với S misawaensis 50 Bảng 3.11 So sánh đặc điểm phân loại chủng Đ1 với A brunneofungu.52 Bảng 3.12: Hoạt tính kháng sinh chủng xạ khuẩn môi trƣờng lên men khác 53 Bảng 3.13 Ảnh hƣởng nguồn cacbon lên khả sinh tổng hợp CKS chủng R2 Đ1 55 Bảng 3.14 Ảnh hƣởng nguồn nitơ lên khả sinh tổng hợp CKS chủng R2 Đ1 .56 Footer Page of 16 Header Page 10 of 16 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang Hình 3.1 Ba chủng nấm phân lập từ mẫu chè bị bệnh 38 Hình Tỷ lệ chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng nấm theo nhóm màu .39 Hình 3.3 Tỷ lệ chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng nấm .40 Hình 3.4 Hoạt tính kháng nấm chủng xạ khuẩn lựa chọn 42 Hình 3.5 Cuống sinh bào tử bề mặt bào tử chủng R2 42 Hình 3.6 Cuống sinh bào tử bề mặt bào tử chủng Đ1 .43 Hình 3.7 Khả hình thành sắc tố melanin chủng 44 Hình 3.8 Hoạt tính enzym chủng xạ khuẩn .47 Hình 3.9 Hoạt tính kháng chủng nấm kiểm định chủng Đ1 R2 49 Hình 3.10: Ảnh hƣởng môi trƣờng đến khả tổng hợp CKS 54 Hình 3.11: Ảnh hƣởng nguồn cacbon đến khả tổng hợp CKS .55 Hình 3.12 : Ảnh hƣởng nguồn nitơ đến khả tổng hợp CKS 57 Hình 3.13 Ảnh điện di DNA tổng số chủng xạ khuẩn .58 Hình 3.14 Ảnh điện di sản phẩm PCR chủng xạ khuẩn nghiên cứu 59 Footer Page 10 of 16 Header Page 63 of 16 -53trưởng tốt vừa cho hiệu suất kháng sinh cao Để lựa chọn môi trường lên men đáp ứng hai điều kiện trên, sử dụng loại môi trường lên men sở là: A - 4H, A - 4, Gause - I, Gause - II ISP - Quá trình lên men tiến hành bình nón dung tích 250 ml có chứa 25ml môi trường Sau 120 nuôi lắc nhiệt độ 280C - 300C, thu dịch lên men, xác định HTKS phương pháp đục lỗ Kết thể bảng 3.12 hình 12 Bảng 3.12: Hoạt tính kháng sinh chủng xạ khuẩn môi trƣờng lên men khác Chủng XK Môi trƣờng R2 Đ1 Sinh khối (mg/ml) HTKS (D-d,mm) A - 4H 8,34 ± 0,12 22,33 ± 1,42 A-4 4,6 ± 0,15 19,52 ± 0,48 Gauze - I 5,51 ± 0,23 17,65 ± 0,58 Gauze - II 7,52 ± 0,21 13,93 ± 0,13 ISP - 3,19 ± 0,15 12,18 ± 0,15 A - 4H 9,24 ± 0,23 21,34 ± 0,21 A-4 4,43 ± 0,18 18,72 ± 0,17 Gauze - I 6,48 ± 0,33 16,23 ± 0,44 Gauze - II 7,25 ± 0,22 9,14 ± 0,34 ISP - 2,78 ± 0,26 7,25 ± 0,14 Footer Page 63bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 64 of 16 -54- Hình 3.10: Ảnh hƣởng môi trƣờng đến khả tổng hợp CKS Kết bảng 3.12 hình 3.10 cho thấy: Trong môi trường lên men chủng nghiên cứu cho sinh khối lớn môi trường A - 4H Với chủng R2 8,0 mg/ml, chủng Đ1 9,0 mg/ml Đồng thời dịch lên men môi trường A - 4H có hoạt tính kháng sinh mạnh (21mm) Từ kết chứng tỏ thành phần môi trường lên men có ảnh hưởng nhiều đến khả hình thành CKS xạ khuẩn nhiều nghiên cứu trước khẳng định [14],[17] Với mục đích lựa chọn môi trường lên men thích hợp cho trình sinh tổng hợp CKS, vào kết nhận thấy môi trường A - 4H thích hợp sử dụng cho nghiên cứu 3.4.2 Ảnh hƣởng nguồn cacbon Các hợp chất cacbon vừa nguồn dinh dưỡng lại vừa nguồn cung cấp lượng cho thể VSV nói chung xạ khuẩn nói riêng có khả sử dụng nhiều nguồn cacbon khác Để nghiên cứu ảnh hưởng nguồn cacbon lên khả sinh trưởng hình thành CKS, đồng thời xác định nguồn cacbon thích hợp cho chủng R2 Đ1, tiến hành khảo sát số nguồn cacbon thông thường sử dụng để lên men CKS Footer Page 64bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 65 of 16 -55Bảng 3.13 Ảnh hƣởng nguồn cacbon lên khả sinh tổng hợp CKS chủng R2 Đ1 Các Ký hiệu tiêu chủng Sinh R2 khối HTKS Nguồn cacbon Glucose Tinh bột Lactose Sacarose 17,44 ± 0,22 16,23 ± 0,42 13,58 ± 0,56 18,93 ± 0,57 Đ1 18,53 ± 0,45 15,75 ± 0,33 11,55 ± 0,15 17,26 ± 0,34 R2 15,24 ± 0,36 18,21 ± 0,32 20,23 ± 0,61 21,22 ± 0,78 Đ1 17,53 ± 0,16 16,82 ± 0,58 16,34 ± 0,74 18,29 ± 0,65 Kết trình bày bảng 3.13 cho thấy: chủng xạ khuẩn R2 Đ1 có khả sử dụng nguồn đường nghiên cứu Tuy nhiên ảnh hưởng nguồn cacbon lên sinh trưởng khả tạo kháng sinh chủng có khác Đối với chủng R2 nguồn cacbon sacarose cho sinh khối lớn HTKS mạnh Chủng Đ1 nguồn cacbon Glucose cho sinh khối lớn sacarose có HTKS mạnh Hình 3.11: Ảnh hƣởng nguồn cacbon đến khả tổng hợp CKS Footer Page 65bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 66 of 16 -563.4.3 Ảnh hƣởng nguồn nitơ Nitơ nguồn dinh dưỡng thiếu VSV nói chung xạ khuẩn nói riêng Trong môi trường lên men, nguồn nitơ có ảnh hưởng nhiều đến tổng hợp CKS xạ khuẩn [3] Nguồn nitơ sử dụng môi trường lên men xạ khuẩn dạng vô hữu Vì tiến hành khảo sát ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả sinh tổng hợp CKS chủng xạ khuẩn nghiên cứu Bảng 3.14 Ảnh hƣởng nguồn nitơ lên khả sinh tổng hợp CKS chủng R2 Đ1 Nguồn nitơ Nồng Sinh khối Hoạt tính kháng sinh độ (mg/ml) (D-d,mm) (%) R2 Đ1 Bột đậu tương 12,6 ± 0,25 11,2 ± 0,32 Cao nấm men 13,52 ± 0,23 13,28 ±0,17 19,78 ± 0,26 19,73 ±0,52 (NH4 )2SO4 9,73 ± 0,18 8,01 ± 0,22 KNO3 7,82 ± 0,52 8,56 ± 0,24 16,92 ±0,32 14,34±0,17 R2 Đ1 21,63 ± 0,58 20,32 ±0,15 17,65 ± 0,44 16,82 ±0,38 Nguồn nitơ hữu sử dụng cao nấm men bột đậu tương, nguồn nitơ vô nitrat kali (KNO3) muối sunfat amon ((NH4 )2SO4.) Các nguồn nitơ bổ sung vào môi trường A - 4H Quá trình lên men tiến hành bình nón 250 ml có chứa 25 ml môi trường Sau 120 nuôi lắc, thu dịch lên men xác định HTKS Kết trình bày bảng 3.14 hình 3.12 Footer Page 66bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 67 of 16 -57Từ kết cho thấy chủng xạ khuẩn nghiên cứu sinh trưởng tốt môi trường có nguồn nitơ hữu bột đậu tương cao nấm men Song chưa rõ có khác rõ rệt nguồn nitơ Hình 3.12 : Ảnh hƣởng nguồn nitơ đến khả tổng hợp CKS Cũng sinh trưởng, HTKS chủng nghiên cứu cao môi trường có bột đậu tương cao nấm men Các kết khẳng định ưu nguồn nitơ hữu lên khả sinh trưởng sinh tổng hợp CKS xạ khuẩn nói chung Điều giải thích nguồn nitơ hữu cơ, thành phần protein chứa chất cần thiết cho trình tổng hợp CKS Kết nghiên cứu phù hợp với số kết công bố trước [14] 3.5 Phân loại chủng xạ khuẩn theo phƣơng pháp sinh học phân tử 3.5.1 Kết tách chiết DNA tổng số chủng xạ khuẩn Trong nghiên cứu này, tiến hành tách chiết DNA từ chủng xạ khuẩn Đ1 R2 Trước tiến hành tách chiết DNA, chủng xạ khuẩn nuôi cấy môi trường tăng sinh để thu sinh khối tế bào DNA tách chiết theo phương pháp Ausubel cs có cải tiến [39] Footer Page 67bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 68 of 16 -58được trình bày Kết tách chiết kiểm tra cách điện di gel agarose 0,8% trình bày hình 3.13 Đ1 R2 Hình 3.13 Ảnh điện di DNA tổng số chủng xạ khuẩn Trên sở kết thu hình 3.13 cho thấy DNA tách từ chủng xạ khuẩn nêu Tương ứng với chủng, sản phẩm điện di có băng chứng tỏ DNA không bị đứt gãy trình tách chiết Hàm lượng DNA thu tương đối lớn có độ cao Như vậy, nói DNA thu trình tách chiết đạt yêu cầu đề Sản phẩm DNA đáp ứng tốt cho nghiên cứu khuếch đại gen 16S - rRNA phản ứng PCR 3.5.2 Kết nhân gen 16S - rRNA phản ứng PCR Để tạo tiền đề cho việc định loại chủng xạ khuẩn phân lập nêu trên, nghiên cứu tiến hành khuếch đại gen 16S - rRNA Đây gen thị dùng phổ biến định loại VSV Cặp mồi thiết kế để khuếch đại cho phản ứng PCR cho phép khuếch đại trình tự trọn vẹn gen 16S - rRNA, đảm bảo tốt cho nghiên cứu tách dòng Footer Page 68bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 69 of 16 -59xác định trình tự đầy đủ gen Kết khuếch đại gen trình bày hình 3.14 Hình 3.14 Ảnh điện di sản phẩm PCR chủng xạ khuẩn nghiên cứu M Maker ΦX174 cắt Hind III 3,4 chủng Đ1 5,6 Chủng R2 Dựa kết điện di hình 3.14 cho thấy chủng xạ khuẩn Đ1 R2 có nhân lên gen 16S - rRNA Sản phẩm PCR có độ đặc hiệu cao, sản phẩm phụ Mặt khác, dựa DNA maker chuẩn cho thấy sản phẩm PCR có kích thước khoảng 1,5 kb tương ứng với kích thước theo tính toán lý thuyết trình lựa chọn mồi Như kết luận đoạn DNA nhân lên gen 16S - rRNA Kết sở quan trọng để tiếp tục tách dòng xác định trình tự đầy đủ gen 16S chủng nghiên cứu Footer Page 69bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 70 of 16 -60Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Từ mẫu đất khác nhau, phân lập khiết 80 chủng xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces, số có 30 chủng có hoạt tính kháng nấm gây bệnh chè mức độ khác nhau, chiếm tỷ lệ 37,5% Trong số chủng có hoạt tính kháng nấm, nhóm trắng chiếm 36,7%, xám - 26,7%, xanh - 23,3%, hồng - 6,7%, nâu - 3,3%, lục - 3,3% Đã tuyển chọn chủng xạ khuẩn Đ1 R2 có hoạt tính mạnh số 30 chủng có hoạt tính kháng nấm, kháng chủng nấm gây bệnh chè CT - 2E CT - 5X, đồng thời có khả kháng nấm kiểm định Đã tiến hành xác định đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa, khuếch đại gen 16S - rRNA để nhận định: - Chủng R2 loài Streptomyces misawaensis - Chủng Đ1 loài Actinomyces brunneofungus Đã xác định số điều kiện lên men thích hợp cho sinh tổng hợp CKS chủng xạ khuẩn - Môi trường A - 4H thích hợp cho lên men tạo chất kháng sinh cho chủng xạ khuẩn Đ1 R2 - Nguồn cacbon thích hợp để tổng hợp CKS chủng R2 Sacarose chủng Đ1 glucose - Bột đậu tương cao nấm men nguồn nitơ hữu thích hợp cho lên men CKS chủng xạ khuẩn Footer Page 70bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 71 of 16 -614 KIẾN NGHỊ VỀ NHỮNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO Tiếp tục nghiên cứu để giải trình tự gene 16S hai chủng xạ khuẩn Đ1 R2 Tiếp tục nghiên cứu khả tổng hợp CKS hai chủng Đ1 R2 Tách chiết xác định chất hóa học CKS Tìm hiểu khả ứng dụng CKS thô cần khảo nghiệm diện rộng để đánh giá hiệu sử dụng công tác bảo vệ thực vật Footer Page 71bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 72 of 16 -62CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Bùi Thị Hà, Vi Thị Đoan Chính (2008), "Khả kháng nấm gây bệnh chè số chủng xạ khuẩn phân lập từ đất Thái Nguyên", Tạp chí khoa học công nghệ, số (46), tr 92 - 96 Footer Page 72bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 73 of 16 -63TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn (2006), Kỹ thuật trồng,chăm sóc chế biến chè, NXB Nông nghiệp, tr 72 - 77 Ngô Đình Quang Bính (2005), Vi sinh vật học công nghiệp, Viện sinh thái tài nguyên sinh vật, Trung tâm khoa học Tự nhiên công nghệ Quốc gia, Hà Nội, tr.53 - 71 Nguyễn Văn Cách (2004), Công nghệ lên men chất kháng sinh, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội Chi cục bảo vệ thực vật Phú Thọ, Sử dụng an toàn, hiệu thuốc bảo vệ thực vật chè, 07/2003, tr 24 - 30 Nguyễn Hoàng Chiến (2000), Nghiên cứu chủng xạ khuẩn Streptomyces V6 sinh chất kháng sinh chống vi khuẩn gây bệnh héo xanh cà chua, Luận văn thạc sĩ sinh học, Hà Nội Vi Thị Đoan Chính (2000), Nghiên cứu khả nâng cao hoạt tính kháng sinh chủng Streptomyces rimosus R77 Streptomyces hygroscopicus 5820 kỹ thuật dung hợp tế bào trần, Luận án TS sinh học, Viện công nghệ sinh học, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Phạm Thị Trân Châu (1978), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học - Tập III NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Đoàn Xuân Mượu, Nguyễn Phùng Tiến, Đặng Đức Trạch, Phạm Văn Ty (1972), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, Tập I, NXBKHKT Hà Nội, 328 - 345 Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty, Nguyễn Đình Quyến (1977), Vi sinh vật học - tập II, Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội Footer Page 73bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 74 of 16 -6410 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2002), Vi sinh vật học, Nhà xuất Giáo Dục, Hà Nội, tr 39 - 41 11 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Nữ Kim Thảo, Các nhóm vi khuẩn chủ yếu, Vietsciences, 15/02/2006 12 Nguyễn Thành Đạt (2000), Sinh học vi sinh vật, NXB Giáo dục 13 Nguyễn Thành Đạt, K.A Vinogradva V.A.Poltorac (1974), Tính biến dị bề mặt bào tử Xạ khuẩn sinh choromomycin, Act.A buraviensis, microbiologia, TXL III, N5, NXB Academia cccp 14 Bùi Thị Việt Hà (2006), "Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh thực vật Việt Nam", Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội 15 Đỗ Thu Hà (2004) Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm phân lập từ đất Quảng Nam-Đà Nẵng, Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội 16 Lê Gia Hy (1994), "Nghiên cứu Xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh đạo ôn thối cổ rễ phân lập Việt Nam", Luận án Tiến sĩ, Hà Nội 17 Lê Gia Hy, Nguyễn Quỳnh Châu, Phạm Kim Duy, "Ảnh hưởng canxi coban lên khả sinh tổng hợp clotetraxyclin vitamin B12 phương pháp lên men bề mặt", Tạp chí sinh học, số 4, 1992 18 Lê Gia Hy cộng (1992), "Tính đối kháng xạ khuẩn phân lập từ đất Việt Nam bệnh đạo ôn", Tạp chí Sinh học, tập 14, số 4, 11 - 12 19 Lê Mai Hương (1993), Nghiên cứu Xạ khuẩn sinh chất kháng sinh phân lập Hà Nội vùng phụ cận, luận án tiến sĩ, Hà Nội 20 Biền Văn Minh (2000), Nghiên cứu khả sinh chất kháng sinh số chủng xạ khuẩn phân lập từ đất Bình Trị Thiên, Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội Footer Page 74bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 75 of 16 -6521 Lương Đức Phẩm (1998), Công nghệ vi sinh vật, NXB Xây dựng, Hà Nội, tr.47-49 22 Lê Xuân Phương (2001), Vi sinh vật học công nghiệp, Nhà xuất xây dựng, Hà Nội, tr.47 - 49 TIẾNG ANH 23 Berdy,J (1974), "Recent development in antibiotic research and classification of antibiotic according to the chemical structure", Adv Appl.Microbiol, 18 309 - 406 24 Demain A.L.A (1974), "How antibiotic - producing microorganism avoid suicide" Annuals of the New York academy of science, 235, 601-602 25 Demain A.L.A - Fang (1995) "Emerging concept of secondary metabolism in actinomycetes", J Actinomycetologica, 9, 98 - 117 26 Furimai,T,K.Saitoh, M.Kakushima, S.Yamamuto, K.Suzuki, C.Ikeda,S Kobaru, M.Hatori and T.Oki, BSM - 181184, A new pradimicins deverative, J Antibiotics 1993, N046 (2), p - 265 - 274 27 Goldat S iu., 1958, Antibiotiki, N4, p.14-18 28 Hamada M., Okami Y 1968c In: Sazaki M., Hara T., Takeuchi T et al J Antibiot., A 21, p 37-44 29 Hopwood D.A and MJ Merrick, (1997), "Genetics of antibiotic production" , J Bacteriol, pp 596 - 636 30 Jongsik Chun, Seung B.K, youn Kyung Oh, Goodfellow M (1999), "Amycolatopsis thermoflava sp.nov, anovel soil actinomycete from Hainan Island, China", Int J, Syst Bacteriol - 49, 1369 - 1373 31 Martin, J F, A.L Demain, (1980), "Control of antibiotics synthesis", Microbiol Rev, 44 (2): 230 - 252 Footer Page 75bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 76 of 16 -6632 Miyadoh S (2001), Identification manual of Actinomycetes, Business Center for Academic Scieties Japan 33 Newman D.J, Cragg G.M, Snader K.M, (2003), Natural products as ourees of new drugs over the period", J Nat Prod, 66, 1022 - 1037 34 Porter N, (1995), "Culture conditional for antibiotic - producing icroorganisms", Methods in enzymol, XVIII, - 23 35 Robert D Nolan, Thomas C (1988), "Isolation and Screeming of Actinomycetes" In Actinomycetes in Biotechnology, Academic Press, london 36 Sezaki M, Miyadoh S, (2001), "Practically used Antibiotics and their related substances", In Indentification Manual of Actinomycetes, Japan 37 Shirling E.B, Gotilieb D (1966), " Methods for characterization of Streptomyces spectes", International Journal of Systematic Bacteriology, Vol 16, No 3, 313 - 340 38 Shirling E.B, Gotilieb D, "Cooperative deription of type cultures of Streptomyces" V.Additional descriptions, International journual of systematic Bacteriology Vol 22, 1972, p.265 - 394 39 Tobias Kieser, Mervyn Bibb, Mark J Buttner Keith F Chater, David A, Hopwood (2000), Practical Streptomyces genetics, The John Innes Foundation Norwich, p.170 - 171 40 Tong chai K, Phuripun.L, Charan, C (1995), Antibiotic Production of Actinomycetes in Forest Termite Soil, 20 - 40 41 Tresner H D, M C Davies, and E Jackus, (1961), "Electron icroscopy of Streptomyces spore morphology and its role in species ifferentiation" J Bacteriol 81, 70 - 80 42 Trerner, H.D, Buckus E.J (1963), "System of color wheels for Streptomyces taxonomy" Appl Microbiol, 11, 335 - 338 Footer Page 76bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 77 of 16 -6743 Waksman, S A (1961) The Actinomycetes Classification, identification and descriptions of genera and species, vol 2, The Williams & Wilkins Co., Baltimore, USA 44 Williams and Wilkin, Bergey's maunual of systematic Bacteriology, Vol 4, 1989, pp 2451 - 2492 45 Werner Braun (1976), Di truyền học vi khuẩn (Người dịch Lê Đình Lương), NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội 46 Weinberrg E.D (1973), Secondary metabolism Control by temperature and inorganic photphate, Ind Microbiol 15, - 14 47 Yoo JC, Kim JH, Ha JW, Park NS, Sohng JK, Production and biological activity of laidlomycin, anti - MRSA/ VRE antibiotic from streptomyces sp, CS684, J Microbiol, 2007/ 2, 45 (1): - 16 TIẾNG NGA 48 Н.А Красилников (1971) Лучитые Грибки Издательство «Наука», Москва 49 Г Ф Гаузе, Т.П.Преображенская, М А Свешникова, Л.П.Терехова,Т.С.Максимова,(1983),Определитель Актиномицетов Издательство «Наука», Москва 50 http://www.vietnamgateway.org Footer Page 77bởiofTrung 16.tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa http://www.lrc-tnu.edu.vn ... HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM    BÙI THỊ HÀ NGHIÊN CỨU XẠ KHUẨN THUỘC CHI STREPTOMYCES SINH CHẤT KHÁNG SINH CHỐNG NẤM GÂY BỆNH TRÊN CÂY CHÈ Ở THÁI NGUYÊN Chuyên ngành: Sinh. .. thác nguồn vi sinh vật vô phong phú Thái Nguyên Chúng thực đề tài: Nghiên cứu xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh chè Thái Nguyên Footer Page 11bởiofTrung 16.tâm... cứu - Các chủng xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm phân lập từ đất Thái Nguyên - Các chủng vi nấm gây bệnh chè Thái Nguyên * Nội dung nghiên cứu Phân lập chủng nấm gây bệnh chè để sử dụng